腐烂茎线虫分子鉴定及在不同寄主上繁殖力分析.pdf

DOI：10.11689/sc.2022092101毛彦芝，朱梓绮，王文重，等.腐烂茎线虫分子鉴定及在不同寄主上繁殖力分析J.土壤与作物，2023，12（3）：336 342.MAO Y Z，ZHU Z Q，WANG W Z，et al.Molecular identification of Ditylenchus destructor and fertility analysis on different hostsJ.Soilsand Crops，2023，12（3）：336 342.腐烂茎线虫分子鉴定及在不同寄主上繁殖力分析毛彦芝1，朱梓绮2，王文重1，李庆全1，董学志1，魏琪1，郭梅1，闵凡祥1，杨帅1（1.黑龙江省农业科学院经济作物研究所/黑龙江省马铃薯生物学与品质改良重点实验室,黑龙江 哈尔滨 150086；2.黑龙江大学,黑龙江 哈尔滨 150086）摘要：腐烂茎线虫危害马铃薯在我国多地已有发生，为了明确腐烂茎线虫的生物型及在不同寄主上的繁殖能力，本研究采用贝曼漏斗法对线虫进行分离，根据国标 GB/T 29577-2013 描述方法对分离到线虫群体进行分子鉴定。从 NCBI 选取马铃薯和甘薯的腐烂茎线虫 ITS 序列，进行系统发育分析，利用胡萝卜愈伤组织进行培养，用玉米、马铃薯、高粱、大豆和小麦测定腐烂茎线虫在不同寄主上的繁殖能力。结果显示：分离到的线虫为腐烂茎线虫 B 型，来自甘薯和马铃薯寄主腐烂茎线虫明显分为 2 支，推断腐烂茎线虫的进化受寄主的影响。该线虫群体在参试寄主上都能生长，在小麦上繁殖系数最低，其次为大豆。种植小麦和大豆可能对腐烂茎线虫有抑制作用。关键词：腐烂茎线虫；扩繁；寄主中图分类号：S432.6文献标识码：AMolecular identification of Ditylenchus destructor and fertility analysison different hostsMAO Yanzhi1，ZHU Ziqi2，WANG Wenzhong1，LI Qingquan1，DONG Xuezhi1，WEI Qi1，GUO Mei1，MIN Fanxiang1，YANG Shuai1（1.Institute of Industrial Crops of Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences/Heilongjiang Provincial Key Laboratory ofPotato Biology and Quality Improvement,Harbin 150086,China；2.Heilongjiang University,Harbin 150086,China）Abstract：The damage of Ditylenchus destructor to potato has occurred in many places in China.In order to identify the biotype ofD.destructor and its reproductive capacity on different hosts,the nematodes were isolated by Baermann funnel method and identi-fied by molecular method according to the description of GB/T 29577-2013.The ITS sequences of D.destructor from potato andsweet potato were selected from NCBI for phylogenetic analysis.D.destructor was cultured with carrot callus and then inoculatedinto the roots of corn,potato,sorghum,soybean and wheat to determine its reproductive capacity.The results showed that the isolatedD.destructor was type B.The genetic evolution analysis showed that D.destructor from sweet potato and potato hosts wasobviously divided into two branches.It would be inferred that the evolution of D.destructor was affected by the host.D.destructorreproduced on all the tested hosts.The reproduction coefficient of D.destructor on wheat was the lowest,followed by soybean.Planting wheat and soybean may have inhibitory effect on D.destructor.Key words：Ditylenchus destructor；multiplication；host 腐烂茎线虫（Ditylenchus destructor）1937 年传入我国，首先在甘薯中发现，陆续在我国的河南省、河北省、山东省、江苏省、安徽省、吉林省、内蒙古自治区等多个省（市）危害甘薯1，又称甘薯茎线虫。收稿日期：2022 09 21；修回日期：2023 01 31.基金项目：黑龙江省博士后科研启动金项目（LBH-Q21175）；黑龙江省农业科学院基金培育项目（2019JJPY015）；国家马铃薯产业技术体系（CARS-09-P04）.第一作者及通信作者简介：毛彦芝（1979），女，博士，副研究员，主要从事马铃薯线虫病害研究.E-mail：.土壤与作物 2023 年 9 月 第 12 卷 第 3 期Soils and Crops,Sep.2023,12（3）：336 342一般导致甘薯减产 30%50%，严重时绝收2，是世界上广泛分布的检疫性线虫。除了侵染甘薯外，也是马铃薯上毁灭性的线虫病害之一，2006 年刘先宝等3在国内首次报道腐烂茎线虫侵染马铃薯。截止到2021 年 4 月 15 日全国农业植物检疫性有害生物分布行政区名录记载我国目前有 10 个省（区、市），包括 73 个县（市、区、旗）有腐烂茎线虫的分布。腐烂茎线虫为迁移性植物内寄生线虫4，寄生是两种生物在一起生活，其中一方受益，另一方受害，后者为前者提供营养物质和居住场所5，称为寄主或者宿主。腐烂茎线虫寄主广泛，除了可以侵染植物寄主外，还可以取食真菌的菌丝体。目前报道的腐烂茎线虫的作物寄主和杂草寄主超过 100 种。主要的作物寄主包括甘薯、马铃薯、玉米、大蒜、当归、胡萝卜、甜菜和西洋参等6 8。掌握寄主对线虫的反应有利于制定轮作制度，适合的下茬作物可将线虫控制在经济阈值以下。但是，国内对腐烂茎线虫寄主的研究较少。1990 年，Basson 等9对腐烂茎线虫寄主植物进行了评价，将 3 500 条腐烂茎线虫接种寄主，培养 6 周后线虫数量各异。腐烂茎线虫能侵染多种作物的根部，从根中收集的线虫数量也可以看出玉米和高粱不能选为下茬作物来抑制腐烂茎线虫，腐烂茎线虫在紫花苜蓿上生长发育较差。我国对腐烂茎线虫的寄主研究较少，还未找到合适的轮作作物进行防控，目前主要依靠药剂防治腐烂茎线虫。2021 年全国农业植物检疫性有害生物分布行政区名录记载我国东北三省都有腐烂茎线虫的分布。我国东北地区，玉米和大豆是主要的旱作作物，能否通过马铃薯与玉米或者大豆等作物轮作减少腐烂茎线虫的发生，尚未见报道。因此，本研究通过室内接种试验，测定腐烂茎线虫在几种常见的大田作物上的适应性，以期为通过轮作措施抑制腐烂茎线虫病害提供参考。1材料方法 1.1腐烂茎线虫的采集及线虫的收集培养从黑龙江省绥化市北林区（12654 2.16E，4640 38.72N）马铃薯田采集疑似被腐烂茎线虫侵染的块茎，块茎表面有开裂，部分发病块茎表面皮下可见褐色的病变（图 1），由于受到细菌侵染，块茎开始腐烂。从病变部位收集线虫，在显微镜下挑取腐烂茎线虫约 1 000 条，1.5 mL 离心管中放入 1.5 mL 硫酸链霉素（0.006 mgmL1），灭菌 6 h，弃掉上层灭菌液后，在超净工作台内加入无菌水 1.5 mL，用力摇晃约3 min，在离心机上 4 000 rpm 离心 2 min 后，弃掉上层液，反复冲洗 3 次，灭菌的线虫准备接种10。开裂Cracking图 1腐烂茎线虫侵染马铃薯块茎发病症状Fig.1Symptom of potato tubers infected by Ditylenchus destructor 1.2腐烂茎线虫的分子鉴定线虫 DNA 的提取，参照王江岭等11方法进行线虫 DNA 的提取，挑取的单条线虫放入载玻片上，用超纯水清洗，在显微镜下将线虫切成 2 3 段，挑取小段放入灭菌的 PCR 管中，含 8 uL dd H2O 和 1uL 10 PCRBuffer（Mg2+free）PCR 管在液氮中放置 1 min，85 加热 2 min，向 PCR 管中再加入 1 mgmL1蛋白酶 K 1 uL，在 PCR 仪上 56 加热 15 min，95 加热 10 min，得到 DNA 提取液，20 冰箱保存或者直接进行 PCR 扩增。PCR 扩增方法，参照 GB/T 29577-201312进行 PCR 扩增，通用引物，（rDNA1：5-TTGATTACGTC-第 3 期毛彦芝等：腐烂茎线虫分子鉴定及在不同寄主上繁殖力分析337 CCTGCCCTTT-3；rDNA2：5-TTTCACTCGCCGTTACTAAGG-3）。反应条件：95 预变性，4 min；94 变性 45 s，50 退火 30 s，72 延伸 2 min，共 35 个循环，72 保温 10 min，于 4 保存。参照国标 GB/T 29577-201312 B 型腐烂茎线虫特异性引物进行 PCR 扩增：DdL1：5-TTGT-GTTTGCTGGTGCGCTTGT-3；DdL2：5-GAGTGAGAGCGATGTCAACATTG-3。反应条件：94 预变性 2 min；94 变性 30 s，55 退火 30 s；72 延伸 45 s，共 35 个循环；72 保温 8 min，于 4 保存。扩增后的产物通过 1%的琼脂糖电泳进行检测。将通用引物的 PCR 产物进行纯化，送上海生工进行双向测序。1.3甘薯与马铃薯来源的腐烂茎线虫基因序列比较分析方法用批量下载工具 Batch Entrez 从 NCBI 网站下载腐烂茎线虫的序列。用 MEGAX 软件里的 MUS-CLE 功能进行多重序列比对，用 PhyloSuite 软件中的 trimAl 功能对序列进行剪切，DAMBE 软件进行序列的替换饱和检测，ModelFinder 功能进行适合模型选择，采用 Mrbayes3.04 重建系统发育分析，以DQ151458（Ditylenchus myceliophagus）、AM232236（Ditylenchus myceliophagus）为外群序列，建立 4 个马尔可夫链，以随机树为起始树，共运行 2 000 000 代，每 100 代抽样 1 次,舍弃 25%老化样本后，根据剩余的样本构建一致树，并计算后验概率，后验概率显示在分支上。1.4腐烂茎线虫的培养从市场上购买新鲜的带土的胡萝卜，在实验室内将胡萝卜用肥皂水洗净，用 5%（v/v）的次氯酸钠浸泡 30 min，用灭菌刀切掉外皮，转移到灭菌的超净工作台中，放入 95%的酒精中浸泡 10 min，用无菌水洗 5 次，将洗过的胡萝卜在酒精灯上灼烧，去掉表面的水分，在灭菌的滤纸上用灭菌刀去掉外皮，切成4 5 mm 厚的片，胡萝卜片放入干燥灭菌的培养皿中，用封口膜封口。放在 25，黑暗条件下培养 4 周，愈伤组织形成即可接种灭菌的腐烂茎线虫13。1.5腐烂茎线虫接种不同寄主繁殖系数比较分析方法供试材料：玉米（克玉 15）、大豆（克山 1 号）、高粱（绥杂 7），小麦（克春 9），马铃薯（尤金）。试验材料由克山分院大豆研究室、杂粮研究室、玉米研究室和小麦研究室提供。培养介质：草炭土和土壤比例为 13，高压灭菌后装到 16 cm 14 cm 营养钵中备用。种植方法：在种植前进行种子发芽，挑选芽势一致、没有明显病虫害的种子进行种植，马铃薯也提前在散射光照下，发芽后种植，培养 3 周进行接种，接种后 6 周收集根中线虫和土壤中线虫，进行线虫数量统计，每个寄主种植 3 盆，实验重复两次。将线虫悬浮液调到 250 条(500 uL)1，接种时在营养钵周围用1 mL 的枪头均匀扎 4 个孔，每个孔接种 250 条线虫。繁殖系数计算方法：采用浅盘法收集植株根部和土壤中的线虫，记为线虫的总量（Pf），最初的接种量记为 Pi，繁殖系数（Reproduction factor,RF）RF=Pf/Pi。2结果与分析 2.1腐烂茎线虫的分子鉴定用植物线虫的通用引物扩增，5 份样品都扩增出约 1 100 bp 大小的条带（图 2A）。对 5 份样品又进行了特异性引物检测，扩增出 400 500 bp 大小的条带（图 2B），可见分离到的线虫为腐烂茎线虫的B 型。2.2不同寄主腐烂茎线虫 rDNA-ITS 序列比较分析从 NCBI 下载来自马铃薯和甘薯寄主不同地点的腐烂茎线虫序列和外群序列共 80 条序列，序列中 76 条寄主的序列来自文献 14，3 条序列（MK979365、MN173004、MN173005）为作者从辽宁省分离到的马338土 壤 与 作 物第 12 卷铃薯寄主的腐烂茎线虫 rDNA-ITS 序列15，序列 MH992393 为从黑龙江省马铃薯寄主分离的腐烂茎线虫序列16。本研究分离的线虫测序后提交到 NCBI，得到序列号为 ON965286、ON965286 和 ON965288。系统发育分析结果可以看出进化树明显为两个分支，分支 I 共有 41 条序列，其中 4 条序列来自甘薯，其余 37 条序列均来自马铃薯。分支 II 中共有 39 条序列，其中 1 条序列寄主为马铃薯，其余 38 条序列均来自甘薯（图 3）。本研究分离的腐烂茎线虫与辽宁省和黑龙江省的分离物亲缘关系较近。2.3胡萝卜培养基培养结果图 4 为胡萝卜培养基培养线虫的结果（图 A 和图 B 为普通相机拍摄），A 图为在黑暗条件下培养 4 周的胡萝卜培养基，图 B 为接种腐烂茎线虫后在黑暗条件下培养 4 周的腐烂茎线虫。圈内白色部分为集中生长的腐烂茎线虫，图 C 为培养的腐烂茎线虫和卵。2.4不同寄主接种腐烂茎线虫结果分析从表 1 可以看出，腐烂茎线虫接种不同寄主后，在寄主上都能生存，两次实验重复的结果基本一致。从繁殖系数上可以看出，马铃薯腐烂茎线虫适合的寄主是马铃薯和玉米，接种培养后线虫繁殖系数最高的为马铃薯寄主，其次为玉米寄主，高粱也为腐烂茎线虫较为理想的寄主，从两次接种每个寄主的平均繁殖系数可以看出在大豆和小麦上腐烂茎线虫也可以生存，但繁殖系数较低。3讨论本研究从黑龙江省绥化市新华乡兴发村采集的马铃薯块茎样品，与张淑玲等17报道腐烂茎线虫来自同一地块。目前，黑龙江省种植马铃薯的前茬作物基本为玉米，已有腐烂茎线虫侵染玉米的报道6，但是，腐烂茎线虫在玉米寄主上繁殖情况未见详细研究报道。本研究结果可见，腐烂茎线虫在玉米上能够正常繁殖，且繁殖系数接近马铃薯寄主，少见腐烂茎线虫在大豆和小麦寄主上生长发育研究。本研究对大豆、小麦进行腐烂茎线虫接种结果表明，大豆和小麦寄主上腐烂茎线虫的繁殖系数相对马铃薯、玉米偏低，但是其依旧能存活。Basson 等9对 13 种腐烂茎线虫寄主研究发现，所有测试作物中大豆和小麦不是其理想寄主，与本研究结果基本一致。结合本研究的结果可以推断参试的大田作物不能有效抑制腐烂茎线虫的生长和繁殖，今后应该开展腐烂茎线虫在不同基因型的大豆或者小麦寄主上生长发育研究，筛选对腐烂茎线虫有明显抑制作用的品种。环境和气候条件是影响生物遗传多样性的重要因素18。有研究表明，腐烂茎线虫种群分化现象严重，不同地理种群，不同寄主种群的线虫寄主范围和毒性存在很大差异 17。Subbotin 等14用来自不同寄主、不同国家的 78 条腐烂茎线虫 ITS 序列进行了比较分析，发现 ITS 的序列和长度不同，群体间差异明显，可以将腐烂茎线虫划分为 7 个单元型，分为 A 型和 B-G 型 两 个大分支，其中 A、D 和 F 型仅在中国发现，A、B、C 和 E 型来自寄主马铃薯和甘薯，F 型只来自甘薯，G 型只来自马铃薯。前人研究表明，腐烂茎线虫种群主要可以分为两种类型，第一种类型主要分布在欧洲和北美洲，主要危害马铃薯，第二种类型广泛分布在 500 bpM 1 2 3 4 5 6BM1 2 3 4 5 6A1 000 bp注：M 为 marker;1.泳道为清水对照，2.泳道为阳性样品，3、4、5、6 泳道为检测样品。Note:M,marker;1.water cnotrol;2.positive sample,3,4,5 and 6 are test samples.图 2特异性引物和通用引物 18S/28S 对茎属线虫 PCR 扩增产物Fig.2PCR amplification products of Ditylenchus Genus with specific primers and universal primers 18S/28S第 3 期毛彦芝等：腐烂茎线虫分子鉴定及在不同寄主上繁殖力分析339 中国，主要危害甘薯19。本研究采用的贝叶斯方法分析，再次证实腐烂茎线虫的分型与寄主有关，来自马铃薯和甘薯寄主的腐烂茎线虫从构建的进化树上可以明显分开，属于两种单元型。由于环境条件和种植作物布局对腐烂茎线虫有影响，今后的研究中应该考虑不同地理来源和不同寄主的腐烂茎线虫生物学差异。AF363110_1_USA_potatoHQ235695_1_Iran_Qorveh_potatoAM232233_1_China_Yishui_sweet_potatoAY987007_1_Russia_Moscow_potatoDQ471334_1_China_sweet_potatoEF062572_1_China_potatoEF062573_1_China_potatoEF062574_1_China_potatoEF208212_1_China_Yishui_sweet_potatoEF208213_1_China_sweet_potatoFJ911551_1_China_Zhangjiakou_potatoGQ469490_1_Czech_Republic_potatoGQ469491_1_Czech_Republic_potatoGQ469492_1_Poland_ potatoHQ235675_1_Usa_Wisconsin_potatoHQ235676_1_Usa_Wisconsin_potatoHQ235678_1_Russia_Jaroslavl_potatoHQ235679_1_Russia_Jaroslavl_potatoHQ235680_1_Russia_Jaroslavl_potatoHQ235681_1_Russia_Nizhnii_Novgorod_potatoHQ235682_1_Russia_Nizhnii_Novgorod_potatoHQ235683_1_Russia_Moscow_potatoHQ235684_1_Russia_Nizhnii_Novgorod_potatoHQ235685_1_Russia_Jaroslavl_potatoHQ235686_1_Russia_Moscow_potatoHQ235687_1_Iran_Daryon_potatoHQ235688_1_Iran_Daryon_potatoHQ235689_1_Iran_Qorveh_potatoHQ235690_1_Iran_Damavand_potatoHQ235691_1_Russia_Moscow_potatoHQ235692_1_Iran_Ardabil_potatoHQ235693_1_Russia_Nizhnii_Novgorod_potatoHQ235694_1_Iran_Ardabil_potatoHQ235696_1_Iran_Damavand_potatoMH992393_1_China_potatoMK979365_1_China_Liaoning_potatoMN173004_1_China_Liaoning_potatoMN173005_1_China_Liaoning_potatoON965286_1_China_potatoON965287_1_China_potatoON965288_1_China_potatoAM232227_1_China_Ganyu_sweet_potatoAM232228_1_China_Sixian_sweet_potatoAM232229_1_China_Yingshang_sweet_potatoAM232230_1_China_Langfang_sweet_potatoAM232231_1_China_Linfen_sweet_potatoDQ471336_1_China_sweet_potatoEF062575_1_China_potatoEF088929_1_China_sweet_potatoEF088930_1_China_sweet_potatoEF088932_1_China_swee_potatoEF088933_1_China_sweet_potatoEF088934_1_China_sweet_potatoEF088935_1_China_sweet_potatoEF088936_1_China_sweet_potatoEF088937_1_China_sweet_potatoEF088938_1_China_sweet_potatoEF210364_1_China_Daxing_sweet_potatoEF210365_1_China_Taihe_sweet_potatoEF210366_1_China_Xinyi_sweet_potatoEF210367_1_China_Zhuozhou_sweet_potatoEF210368_1_China_Luanxian_sweet_potatoEF210369_1_China_Lulong_sweet_potatoEF210370_1_Chian_Luoyang_sweet_potatoEF210371_1_China_Sixian_sweet_potatoEF210372_1_China_Miyun_sweet_potatoEF210373_1_China_Changli_sweet_potatoEF210374_1_China_Jinan_sweet_potatoEF397002_1_China_Hebei_sweet_potatoEF417997_1_China_Yixian_sweet_potatoEF417998_1_ China_Daxing_sweet_potatoEF418000_1_China_Miyun_sweet_potatoEF418001_1_China_Pingyin_sweet_potatoEF418002_1_China_Sixian_sweet_potatoEF418003_1_China_Yixian_sweet_potatoEU499915_1_China_Baicheng_Jilin_sweet_potatoHQ235697_1_China_Luoyang_sweet_potatoMW648334_1_China_sweet_potatoMW648337_1_China_sweet_potatoMW648339_1_China_sweet_potatoHQ235677_1_China_Weifang_sweet_potatoDQ151458_1_Ditylenchus_myceliophagus_AM232236_1_Ditylenchus_myceliophagus_0.840.991110.002III注：浅色部分序列主要来自马铃薯寄主；深色部分序列主要来自甘薯寄主；标注为本研究提交的线虫序列；分支节点上的数值为后验概率。Note：Sequences from potato host are with shallow color;Sequences from sweet potato host are with deep color;means nematodesequences from this study;the numbers on the branches were posterior probability.图 3甘薯田和马铃薯寄主腐烂茎线虫 rDNA-ITS 序列遗传进化分析Fig.3Genetic evolution analysis of Ditylenchus destructor rDNA-ITS sequences of sweet potato and potato hosts340土 壤 与 作 物第 12 卷 4结论采集到的马铃薯块茎为腐烂茎线虫为害，根据国标 GB/T 29577-2013 鉴定为 B 型，通过对 ITS 序列进化分析推断腐烂茎线虫的进化受寄主影响，分离到的腐烂茎线虫种群在黑龙江省的大田作物大豆、小麦、玉米和高粱寄主上都能存活，且在玉米和高粱上的繁殖系数与马铃薯寄主的相近，通过本次试验证明马铃薯与玉米轮作控制腐烂茎线虫没有明显效果。参考文献 (References)：黄文坤，何旭峰，丁中，等.马铃薯腐烂茎线虫的遗传变异及其与生态因子的相关性J.农业生物技术学报，2012，20（1）：6269.HUANG W K，HE X F，DING Z，et al.Genetic variation of Ditylenchus destructor and its association with ecological factorsJ.Journal ofAgricultural Biotechnology，2012，20（1）：6269.1 朱秀珍，田希武，王随保，等.甘薯茎线虫病发病规律及综合防治J.山西农业科学，2004，32（3）：5457.ZHU X Z，TIAN X W，WANG S B，et al.The infection law and IPM of Ditylenchus destructor thorneJ.Journal of Shanxi AgriculturalSciences，2004，32（3）：5457.2 刘先宝，葛建军，谭志琼，等.马铃薯腐烂茎线虫在国内危害马铃薯的首次报道J.植物保护，2006，32（6）：157158.LIU X B，GE J J，TAN Z Q，et al.First report on potato rot caused by Ditylenchus destructorJ.Plant Protection，2006，32（6）：157158.3 刘先宝.马铃薯腐烂茎线虫的鉴定及分子检测 D.海口:华南热带农业大学,2006.LIU X B.Identification and molecular detection of potato rot stem nematode D.Haikou:South China University of Tropical Agriculture,2006.4 赵琴平，董惠芬，蒋明森.关于寄生虫病防治研究的几点思考J.中国血吸虫病防治杂志，2013，25（6）：564569+589.ZHAO Q P，DONG H F，JIANG M S.Views for research development of control of parasitic diseasesJ.Chinese Journal of Schistosomiasis5 表 1不同寄主上腐烂茎线虫繁殖系数比较分析Table 1Comparison of reproduction factor(RF)of Ditylenchus destructor on different hosts不同寄主Hosts第一次接种First inoculation第二次接种Second inoculation繁殖系数平均值Reproduction factoraverage线虫数量（根+土）Nematode number(Root+Soil)繁殖系数Reproduction factor线虫数量（根+土）Nematode number(Root+Soil)繁殖系数Reproduction factor玉米Maize1 303 a1.30 a1 272 ab1.27 ab1.29马铃薯Potato1 296 a1.30 a1 549 a1.55 a1.43高粱Sorghum1 284 ab1.28 ab1 117 ab1.12 ab1.20大豆Soybean1 070 bc1.07 bc941 b0.94 b1.01小麦Wheat659 c0.66 c1 270 ab1.27 ab0.97注：每次均接种线虫1 000条。繁殖系数为收获时土壤中和根中线虫的总数/初始接种线虫数量。Note:1 000 nematodes were inoculated each time.Reproduction factor(RF)means nematode number in soil and root at harvest/nematodenumber firstly inoculated in crops.ABC100 m图 4腐烂茎线虫的培养Fig.4Culture of Ditylenchus destructor第 3 期毛彦芝等：腐烂茎线虫分子鉴定及在不同寄主上繁殖力分析341 Control，2013，25（6）：564569+589.PAN F J，LI F，MAO Y Z，et al.First detection of Ditylenchus destructor parasitizing maize in northeast ChinaJ.Life，2021，11（12）：1303.6 ZHAO H，LIANG C，ZHANG Y，et al.Research advances of biology in Ditylenchus destructor Thorne,1945J.Biotechnology Bulletin，2021，37（7）：45.7 ZHANG G Z，ZHANG H.First report of root rot of American ginseng(Panax quinquefolium)caused by Ditylenchus destructor in ChinaJ.Plant Disease，2007，91（4）：459459.8 BASSON S，DE WAELE D，MEYER A J.An evaluation of crop plants as hosts for Ditylenchus destructor isolated from peanutJ.Nemat-ropica，1990，20（1）：2329.9 MWAURA P，NIERE B，VIDAL S.Resistance and tolerance of potato varieties to potato rot nematode(Ditylenchus destructor)and stemnematode(Ditylenchus dipsaci)J.Annals of Applied Biology，2015，166（2）：257270.10 王江岭，张建成，顾建锋.单条线虫DNA提取方法J.植物检疫，2011，25（2）：3235.WANG J L，ZHANG J C，GU J F.Method of extract DNA from a single nematodeJ.Plant Quarantine，2011，25（2）：3235.11 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.腐烂茎线虫检疫鉴定方法：GB/T29577-2013S/OL.(2013-12-06)2022-08-11.https:/ Administration of Quality Supervision,Inspection and Quarantine of the Peoples Republic of China,Standardization Administra-tion of the Peoples Republic of China.Detection and identification of Ditylenchus destructor Thorne:GB/T29577-2013S/OL.(2013-12-06)2022-08-11.https:/ TAN J A C H，JONES M G K，FOSU-NYARKO J.Gene silencing in root lesion nematodes(Pratylenchus spp.)significantly reduces repro-duction in a plant hostJ.Experimental Parasitology，2013，133（2）：166178.13 SUBBOTIN S A，DEIMI A M，ZHENG J W，et al.Length variation and repetitive sequences of Internal Transcribed Spacer of ribosomalRNA gene,diagnostics and relationships of populations of potato rot nematode,Ditylenchus destructor Thorne,1945 (Tylenchida:Anguinidae)J.Nematology，2011，13（7）：773785.14 MAO Y Z，YANG G B，KONG D W，et al.First report of potato Tuber rot caused by Ditylenchus destructor in Liaoning,ChinaJ.PlantDisease，2020，104（2）：596.15 张淑玲，李惠霞，徐鹏刚，等.黑龙江腐烂茎线虫群体的分离和鉴定J.植物病理学报，2019，49（6）：756762.ZHANG S L，LI H X，XU P G，et al.Isolation and identification of rotting stem nematode population in Heilongjiang ProvinceJ.ActaPhytopathologica Sinica，2019，49（6）：756762.16 张淑玲.定西地区腐烂茎线虫群体多样性及室内毒力测定 D.兰州:甘肃农业大学,2018.ZHANG S L.Populat