葛根素基于IL-33_ST2通路对PE大鼠胎盘组织损伤的作用.pdf

h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t葛根素基于I L-3 3/S T 2通路对P E大鼠胎盘组织损伤的作用李格琳1,臧密密2,付雪莲31.沧州市人民医院产科,沧州 0 6 1 0 0 0;2.沧州市人民医院妊娠糖尿病科,沧州 0 6 1 0 0 0;3.沧州市人民医院妇产科,沧州 0 6 1 0 0 0摘要:目的 探讨葛根素对子痫前期(p r e e c l a m p s i a,P E)大鼠胎盘组织损伤的影响及其可能的作用机制。方法 将5 0只W i s t a r孕鼠随机分为对照组、模型组、葛根素低剂量、葛根素高剂量组及阿司匹林组,每组1 0只。除对照组外,剩余组孕鼠均于妊娠第1 3天(e n c y e s i s d a y 1 3,E d 1 3)E d 2 1连续皮下注射亚硝基左旋精氨酸甲酯(i n t r o s o L a r g i n i n e m e t h y l e s t e r,L-N AM E)5 0 m gk g-1,以构建P E大鼠模型,对照组皮下注射等量生理盐水;葛根素低剂量、高剂量组及阿司匹林组均于E d 1 5E d 2 1给药治疗,灌服给药量分别为4 0、8 0、2 m gk g-1d-1,对照组及模型组大鼠灌服等体积生理盐水;均每日1次。检测E d 1 5、E d 2 1大鼠尾动脉血压;B r a d f o r d法检测2 4 h尿蛋白含量;酶联免疫吸附试验(e n z y m e l i n k e d i mm u n o s o r b e n t a s s a y,E L I S A)检测肿瘤坏死因子-(t u m o r n e c r o s i s f a c t o r-,T N F-)、干扰素-(i n t e r f e r o n-,I F N-)、白细胞介素-4(i n t e r l e u k i n 4,I L-4)、白细胞介素-1 0(i n t e r l e u k i n 1 0,I L-1 0)、白细胞介素-3 3(i n t e r l e u k i n 3 3,I L-3 3)及可溶性生长刺激表达基因2蛋白(s o l u b l e g r o w t h s t i m u l a t i n g e x p r e s s i o n g e n e 2 p r o-t e i n,s S T 2)水平;记录各组大鼠仔鼠数量及仔鼠存活率;分离胎盘组织并称定质量;HE染色检测胎盘组织病理学变化、胎盘滋养层细胞凋亡指数;蛋白质印迹法(W e s t e r n b l o t t i n g)检测各组大鼠胎盘组织中I L-3 3、跨膜型生长刺激表达基因2蛋白(t r a n s m e m-b r a n e g r o w t h s t i m u l a t i o n e x p r e s s i o n g e n e 2 p r o t e i n,S T 2 L)的相对表达情况。结果 成功构建P E大鼠模型;与对照组比较,模型组尾动脉血压及2 4 h尿蛋白含量升高,孕有仔鼠数量及仔鼠存活率降低,胎盘组织质量减轻,结构紊乱,毛细血管减少,细胞间隙变大,排列疏松,有明显炎性浸润及严重细胞凋亡,血清TN F-、I F N-及s S T 2水平升高,I L-4、I L-1 0及I L-3 3水平降低,胎盘组织中I L-3 3蛋白相对表达水平降低,S T 2 L蛋白相对表达水平升高(P0.0 5);与模型组比较,3个给药组尾动脉血压及2 4 h尿蛋白含量降低,仔鼠数量及存活率升高,胎盘组织结构病理变化及细胞凋亡情况好转,血清T N F-、I F N-及s S T 2水平降低,I L-4、I L-1 0及I L-3 3水平升高,胎盘组织中I L-3 3蛋白相对表达水平升高,S T 2 L蛋白相对表达水平降低(P0.0 5);对胎盘组织损伤的改善效果为葛根素低剂量、葛根素高剂量组、阿司匹林组依次增强(P0.0 5)。结论 葛根素能改善P E大鼠胎盘组织损伤,其作用机制可能与降低诱饵受体s S T 2水平、促进I L-3 3与S T 2 L结合进而调节免疫失衡有关。关键词:葛根素;子痫前期;胎盘组织;白细胞介素3 3/生长刺激表达基因2蛋白通路D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 4-2 4 0 7.2 0 2 3.0 5.0 1 3中图分类号:R 9 6 5 文献标志码:A 文章编号:1 0 0 4-2 4 0 7(2 0 2 3)0 5-0 0 7 1-0 7E f f e c t o f p u e r a r i n o n p l a c e n t a l t i s s u e i n j u r y i n P E r a t s b a s e d o n I L-3 3/S T 2 p a t h w a yL I G e l i n1,Z AN G M i m i2,F U X u e l i a n31.D e p a r t m e n t o f O b s t e t r i c s,C a n g z h o u P e o p l e,s H o s p i t a l,C a n g z h o u 0 6 1 0 0 0,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f G e s t a t i o n a l D i a b e t e s,C a n g z h o u P e o p l e s H o s p i t a l,C a n g z h o u 0 6 1 0 0 0,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o f O b s t e t r i c s a n d G y n e c o l o g y,C a n g z h o u P e o p l e,s H o s p i-t a l,C a n g z h o u 0 6 1 0 0 0,C h i n aA b s t r a c t:OO bb jj ee cc tt ii vv ee T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o f p u e r a r i n o n p l a c e n t a l t i s s u e i n j u r y i n p r e e c l a m p s i a(P E)r a t s a n d i t s p o s s i b l e m e-c h a n i s m.MM ee tt hh oo dd ss F i f t y W i s t a r p r e g n a n t r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o c o n t r o l g r o u p,m o d e l g r o u p,p u e r a r i n l o w-d o s e g r o u p,p u e r a r i n h i g h-d o s e g r o u p a n d a s p i r i n g r o u p,w i t h 1 0 r a t s i n e a c h g r o u p.E x c e p t f o r t h e c o n t r o l g r o u p,P E r a t m o d e l w a s e s t a b-l i s h e d b y c o n t i n u o u s s u b c u t a n e o u s i n j e c t i o n o f 5 0 m gk g-1 i n t r o s o L a r g i n i n e m e t h y l e s t e r(L-NAME)f r o m t h e 1 3 t h d a y o f g e s t a-t i o n(E d 1 3)t o 2 1 s t d a y o f g e s t a t i o n(E d 2 1),a n d n o r m a l s a l i n e w a s i n j e c t e d s u b c u t a n e o u s l y o n c e a d a y i n t h e c o n t r o l g r o u p.T h e p u e r a r i n l o w-d o s e g r o u p,p u e r a r i n h i g h-d o s e g r o u p a n d a s p i r i n g r o u p w e r e a d m i n i s t r a t e d w i t h 4 0 m gk g-1d-1,8 0 m gk g-1d-1 a n d 2 m gk g-1d-1,r e s p e c t i v e l y,f r o m E d 1 5 t o E d 2 1.T h e c o n t r o l g r o u p a n d m o d e l g r o u p w e r e a d m i n i s t r a t e d w i t h e q u a l v o l u m e o f n o r-m a l s a l i n e,o n c e a d a y.T h e c a u d a l a r t e r i a l b l o o d p r e s s u r e o f E d 1 5 a n d E d 2 1 r a t s w a s d e t e c t e d.B r a d f o r d m e t h o d w a s u s e d t o d e-t e c t t h e 2 4 h o u r s u r i n a r y p r o t e i n c o n t e n t.T h e s e r u m l e v e l s o f t u m o r n e c r o s i s f a c t o r-(T N F-),i n t e r f e r o n-(I F N-),i n t e r l e u-k i n 4(I L-4),i n t e r l e u k i n 1 0(I L-1 0),i n t e r l e u k i n 3 3(I L-3 3)a n d s o l u b l e g r o w t h s t i m u l a t i n g e x p r e s s i o n g e n e 2 p r o t e i n(s S T 2)w e r e d e t e r m i n e d b y e n z y m e-l i n k e d i mm u n o s o r b e n t a s s a y(E L I S A).T h e n u m b e r a n d s u r v i v a l r a t e o f p u p s i n e a c h g r o u p w e r e r e-c o r d e d.T h e p l a c e n t a l t i s s u e w a s s e p a r a t e d a n d w e i g h e d.T h e h i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f p l a c e n t a w e r e d e t e c t e d b y HE s t a i n i n g.基金项目:河北省2 0 2 1年度医学科学研究课题计划项目(编号:2 0 2 1 0 5 9 8)T h e a p o p t o s i s i n d e x o f p l a c e n t a l t r o p h o b l a s t c e l l s w a s d e t e c t e d b y TUN E L s t a i n i n g.T h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n o f I L-3 3 a n d t r a n s-m e m b r a n e g r o w t h s t i m u l a t i o n e x p r e s s i o n g e n e 2 p r o t e i n(S T 2 L)i n p l a c e n t a l t i s s u e s o f r a t s w e r e d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t t i n g.RR ee ss uu ll tt ss T h e P E r a t m o d e l w a s s u c c e s s f u l l y c o n s t r u c t e d.C o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p,t h e t a i l a r t e r i a l b l o o d p r e s s u r e,t h e 2 4 17西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e th o u r s u r i n e p r o t e i n i n c r e a s e d,t h e n u m b e r a n d s u r v i v a l r a t e o f o f f s p r i n g,t h e p l a c e n t a l t i s s u e w e i g h t,t h e s t r u c t u r e d i s o r d e r,a n d t h e c a p i l l a r i e s o f t h e m o d e l g r o u p s d e c r e a s e d;t h e c e l l s p a c e e n l a r g e d.T h e l o o s e r a r r a n g e m e n t,m o r e o b v i o u s i n f l a mm a t o r y i n f i l-t r a t i o n,m o r e s e v e r e a p o p t o s i s,a n d h i g h e r s e r u m TN F-,I F N-a n d s S T 2 l e v e l s w e r e o b s e r v e d.M e a n w h i l e,t h e l e v e l s I L-4,I L-1 0 a n d I L-3 3 d e c r e a s e d,t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l o f I L-3 3 p r o t e i n i n p l a c e n t a d e c r e a s e d,b u t t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l o f S T 2 L p r o t e i n i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e t a i l a r t e r y b l o o d p r e s s u r e,t h e 2 4 h o u r s u r i n a r y p r o t e i n c o n t e n t d e c r e a s e d,t h e n u m b e r a n d s u r v i v a l r a t e o f o f f s p r i n g,t h e p a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f p l a c e n t a l t i s s u e s t r u c t u r e a n d c e l l a p o p-t o s i s o f t h e 3 a d m i n i s t r a t i o n g r o u p s i n c r e a s e d.T h e l e v e l s o f T N F-,I F N-,s S T 2,I L-4,I L-1 0 a n d I L-3 3 i n c r e a s e d.T h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l o f I L-3 3 p r o t e i n i n p l a c e n t a i n c r e a s e d,w h i l e t h a t o f S T 2 L p r o t e i n d e c r e a s e d(P0.0 5).T h e i m p r o v e m e n t e f f e c t o f p u e r a r i n o n p l a c e n t a l t i s s u e i n j u r y w a s e n h a n c e d i n l o w-d o s e g r o u p,p u e r a r i n h i g h-d o s e g r o u p a n d a s p i r i n g r o u p(P0.0 5).CC oo nn cc ll uu ss ii oo nn P u e r a r i n c a n i m p r o v e t h e p l a c e n t a l t i s s u e i n j u r y i n P E r a t s.I t s m e c h a n i s m m a y b e r e l a t e d t o r e d u c i n g t h e l e v e l o f b a i t r e c e p t o r S T 2,p r o m o t i n g t h e b i n d i n g o f I L-3 3 a n d S T 2 L,a n d r e g u l a t i n g i mm u n e i m b a l a n c e.K e y w o r d s:p u e r a r i n;p r e e c l a m p s i a;p l a c e n t a l t i s s u e;i n t e r l e u k i n 3 3/g r o w t h s t i m u l a t i o n e x p r e s s i o n g e n e 2 p r o t e i n p a t h w a y 子痫前期(p r e e c l a m p s i a,P E)是一种妊娠特异性综合征,其进展与胎盘灌注不足及由缺氧导致的胎盘功能不全有关,表现为血压异常升高、局部水肿和蛋白尿等,是导致早产儿、孕产妇和围产儿发病及死亡的主要原因1-2。P E病理机制复杂,潜在病因包括内皮功能障碍3、氧化应激4、免疫失衡及炎症反应5等。白细胞介素-3 3(i n t e r l e u k i n-3 3,I L-3 3)在主动或被动损伤中作为警报细胞因子或内源性信号被细胞释放,与其受体即生长刺激表达基因2蛋白(g r o w t h s t i m u l a t i n g e x p r e s s i o n g e n e 2 p r o t e i n,S T 2)及白细胞介素-1(i n t e r l e u k i n-1,I L-1)受体辅助蛋白组成的二聚体结合进而参与P E多种病理过程6。葛根素可改善P E大鼠氧化应激过度激活及免疫失衡7,提示其具有预防和治疗P E的潜力,本实验拟构建P E大鼠模型,探讨葛根素对P E大鼠胎盘损伤影响,以期阐明其可能的作用机制并为P E治疗提供参考。1 仪器与材料1.1 仪器B P-9 8 A/B鼠尾无创血压仪(北京软隆生物技术有限公司);M u l t i s k a n F C多功能酶标仪(美国赛默飞世尔科技有限公司);F l u o r C h e m M化学发光凝胶成像系统(美国P r o t e i n S i m p l e公司)。1.2 试药葛根素(质量分数9 8%,云南力莲生物有限公司);阿司匹林(拜耳医药保健有限公司);亚硝基左旋精氨酸甲酯(n i t r o s o L-a r g i n i n e m e t h y l e s t e r,L-N AM E,美国S i g m a公司);肿瘤坏死因子-(t u m o r n e c r o s i s f a c t o r-,T N F-)、白细胞介素-4(i n t e r l e u k i n 4,I L-4)及白细胞介素-1 0(i n t e r l e u k i n-1 0,I L-1 0),均购自武汉艾美捷科技有限公司;干扰素-(i n t e r f e r o n-,I F N-,上海远慕生物科技有限公司);可溶性生长刺激表达基因2蛋白(s o l u-b l e g r o w t h s t i m u l a t i n g e x p r e s s i o n g e n e 2 p r o t e i n,s S T 2)酶联免疫吸附试验(e n z y m e-l i n k e d i mm u n o s o r b e n t a s-s a y,E L I S A)试剂盒购自上海酶研生物科技有限公司;I L-3 3 E L I S A试剂盒、兔抗I L-3 3单克隆抗体、兔抗生长刺激表达基因2蛋白(g r o w t h s t i m u l a t i n g g e n e 2 p r o t e i n,S T 2)多克隆抗体,均购自美国A b c a m公司。1.3 实验动物S P F级雌性、雄性7周龄W i s t a r大鼠各6 0只,体质量为(2 0 01 0)g,由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供,许可证号为S C X K(鲁)2 0 1 9-0 0 0 3。2 方法2.1 造模、分组及给药可育雌性及雄性W i s t a r大鼠于恒温(2 2 2 4),相对湿度为5 0%6 0%环境下普通饲养,1 2 h光-暗交替,适应1周后,将雌性及雄性大鼠按照11比例合笼交配,每日阴道涂片,见有精子即记录为妊娠第0天(e n c y e s i s d a y 0,E d 0)8。剔除未妊娠大鼠7只及孕鼠3只,剩余孕鼠随机分为对照组、模型组、葛根素低剂量组、葛根素高剂量组及阿司匹林组,每组1 0只。除对照组外,其余组孕鼠均于E d 1 3E d 2 1皮下注射5 0 m gk g-1L-NAME以诱导P E模型,对照组皮下注射等量生理盐水,且葛根素低剂量、高剂量组9及阿司匹林组1 0孕鼠均于E d 1 5E d 2 1治疗,分别按照4 0、8 0、2 m gk g-1灌服给药,对照组及模型组孕鼠灌服等体积生理盐水,每日1次。2.2 样品采集与处理于E d 1 5、E d 2 1用无创血压仪检测各组大鼠尾动脉血压;于E d 2 0将孕鼠分别置于单独的代谢笼中,收集2 4 h尿液样本用于检测孕鼠2 4 h尿蛋白;腹腔注射戊巴比妥钠(8 0 m gk g-1)麻醉各组孕鼠,心脏取血,4 静置过夜,收集血清,以1 5 0 0 rm i n-1、4 离心1 0 m i n,取上清用于E L I S A检测;记录各组大鼠孕有仔鼠数量及存活率;大鼠及仔鼠均实施安乐死,取胎盘组织称质量,并分别保存于4 0 gL-1多聚甲醛和液氮中,用于组织病理学染色、L DH活性及蛋27西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t白质印迹法(W e s t e r n b l o t t i n g)检测。2.3 B r a d f o r d法定量大鼠2 4 h尿蛋白设置对照孔及样本孔:蛋白对照品稀释至0.5 gL-1,吸取不同体积对照品置于标准孔内,用磷酸盐缓冲溶液补足至2 0 L,于反应孔内加入稀释2 0倍的尿液样本2 0 L,于对照孔及样本孔内均加入2 0 0 L考马斯亮蓝G 2 5 0染色液,混匀,室温静置5 m i n,于5 7 0 n m波长处测定各孔吸光度(A)值,绘制标准曲线并计算尿液样本2 4 h尿蛋白含量。2.4 HE染色观察胎盘组织病理学变化胎盘组织经4 0 gL-1多聚甲醛固定2 4 h,常规石蜡包埋,制备成5 m石蜡切片,二甲苯脱蜡至水,苏木素染核5 m i n,体积分数1%盐酸乙醇分化1 0 s,氨水返蓝3 s,水洗,伊红染液染核3 0 s,水洗,脱水透明,晾干后用中性树胶封片,镜下观察并采集图片。2.5 TUN E L染色检测胎盘滋养层细胞凋亡指数用二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化、无D N a s e蛋白酶K溶液处理2 0 m i n,5 0 L T U N E L反应液反应1 h,过氧化物酶封闭,与底物二氨基联苯胺混合液反应显色,苏木精复染,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。见细胞质或细胞核中有棕色颗粒,即呈染色阳性。细胞凋亡指数=(T U N E L阳性细胞数/细胞总数)1 0 0%。2.6 E L I S A检测大鼠血清中相关因子水平设置对照品孔和样本孔,分别滴加5 0 L不同质量浓度对照品及1 0倍稀释的待测样品,加酶标工作液温育1 h,洗板,依次加底物A、B避光孵育1 5 m i n,滴加终止液终止反应,于4 5 0 n m波长处测定各孔A值,以对照品质量浓度作横坐标、对应A值作纵坐标,绘制出对照品线性回归曲线,计算各组大鼠血清中T N F-、I F N-、I L-4、I L-1 0、I L-3 3及s S T 2的水平。2.7 I L-3 3、S T 2 L蛋白相对表达水平取液氮保存的各组大鼠胎盘组织,研钵碾碎,用预冷的R I P A裂解液裂解,匀浆后离心,取上清,测定蛋白质量浓度并加热变性蛋白,S D S-P AG E凝胶电泳(压缩胶6 0 V 2 5 m i n,分离胶1 2 0 V 6 2 m i n),转膜(2 0 0 mA,1 1 0 m i n),5 0 m gm L-1脱脂乳(1T B S T稀释)室温封闭P V D F膜2 h;后加一抗(11 0 0 0稀释)4 孵育过夜;次日洗膜,换液6次,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔I g G二抗(18 0 0 0稀释)室温孵育2 h,洗膜,换液6次,E C L反应显影,于化学发光凝胶成像系统中观察并记录。I m a g e J软件分析条带灰度值,以目的蛋白I L-3 3、S T 2 L与内参-a c t i n灰度值的比值表示蛋白的相对表达水平。2.8 统计学方法用S P S S 2 1.0软件进行数据统计学处理,计量结果以xs表示,多组间比较用单因素方差分析,进一步两组间比较用L S D-t检验。P0.0 5),E d 2 1尾动脉血压比较差异具有统计学意义(P0.0 5)。与对照组比较,模型组大鼠E d 2 1尾动脉血压升高(P0.0 5);与模型组比较,3个给药组大鼠E d 2 1尾动脉血压降低(P0.0 5);与葛根素低剂量组比较,葛根素高剂量组、阿司匹林组大鼠E d 2 1尾动脉血压降低(P0.0 5),阿司匹林组最低(P0.0 5)。见表1。表1 大鼠E d 1 5、E d 2 1尾动脉血压 (xs,n=1 0)T a b.1 B l o o d p r e s s u r e o f E d 1 5 a n d E d 2 1 c a u d a l a r t e r i e s o f r a t s(xs,n=1 0)项目E d 1 5/mmH gE d 2 1/mmH g对照组1 0 8.7 01.7 91 1 1.9 02.2 1模型组1 1 0.3 01.8 51 4 5.5 02.8 7a葛根素低剂量组1 0 9.5 02.5 41 3 6.0 02.8 3b葛根素高剂量组1 0 9.4 02.7 31 2 5.1 02.9 5b c阿司匹林组1 0 9.0 01.6 11 1 6.2 02.0 9b c dF0.7 9 42 8 1.9 7 4P0.5 3 60.0 0 1 注:与对照组比较,aP 0.0 5;与模型组比较,bP 0.0 5;与葛根素低剂量组比较,cP 0.0 5;与葛根素高剂量组比较,dP 0.0 5。3.2 大鼠2 4 h尿蛋白含量尿蛋白定量结果显示,各组大鼠2 4 h尿蛋白含量比较差异具有统计学意义(P0.0 5)。与对照组比较,模型组大鼠2 4 h尿蛋白含量增加(P0.0 5);与模型组比较,3个给药组大鼠2 4 h尿蛋白含量减少(P0.0 5);与葛根素低剂量组比较,葛根素高剂量组、阿 司 匹 林 组 大 鼠2 4 h尿 蛋 白 含 量 减 少(P0.0 5),阿司匹林组含量最少(P0.0 5)。见表2。表2 大鼠2 4 h尿蛋白含量(xs,n=1 0)T a b.2 2 4 h o u r s u r i n a r y p r o t e i n c o n t e n t i n r a t s(xs,n=1 0)项目2 4 h尿蛋白含量/(m gd-1)对照组2 0.0 82.5 5模型组4 7.1 82.8 9a葛根素低剂量组4 1.9 73.0 5b葛根素高剂量组3 3.0 01.9 4b c阿司匹林组2 4.3 72.3 9b c dF1 9 4.1 6 5P0.0 0 1 注:与对照组比较,aP 0.0 5;与模型组比较,bP 0.0 5;与葛根素低剂量组比较,cP 0.0 5;与葛根素高剂量组比较,dP 0.0 5。37西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t3.3 大鼠孕有仔鼠的数量及存活率各组大鼠孕有仔鼠的数量及仔鼠存活率比较差异具有统计学意义(P0.0 5)。与对照组比较,模型组大 鼠 孕 有 仔 鼠 的 数 量 及 仔 鼠 存 活 率 降 低(P0.0 5);与模型组比较,3个给药组大鼠孕有仔鼠的数量及仔鼠存活率升高(P0.0 5);与葛根素低剂量组比较,葛根素高剂量组、阿司匹林组大鼠孕有仔鼠的数量及仔鼠存活率升高(P0.0 5),阿司匹林组最高(P0.0 5)。见表3。表3 大鼠孕有仔鼠的数量及仔鼠的存活率(xs,n=1 0)T a b.3 N u m b e r o f p r e g n a n t o f f s p r i n g a n d s u r v i v a l r a t e o f o f f-s p r i n g(xs,n=1 0)项目仔鼠数量/个仔鼠存活率对照组6.5 00.9 29 4.6 4%6.5 9%模型组2.2 00.6 0a6.6 7%1 3.3 3%a葛根素低剂量组3.6 00.6 6b5 0.6 7%2 2.2 6%b葛根素高剂量组4.7 01.0 0b c6 9.8 3%9.4 1%b c阿司匹林组5.6 00.8 0b c d8 2.0 7%1 5.1 8%b c dF4 3.2 2 15 6.8 7 2P0.0 0 10.0 0 1 注:与对照组比较,aP 0.0 5;与模型组比较,bP 0.0 5;与葛根素低剂量组比较,cP 0.0 5;与葛根素高剂量组比较,dP 0.0 5。3.4 大鼠胎盘组织的质量结果显示,各组大鼠胎盘组织质量比较差异具有统计学意义(P0.0 5)。与对照组比较,模型组大鼠胎盘组织质量减轻(P0.0 5);与模型组比较,3个给药组大鼠胎盘组织质量增加(P0.0 5);与葛根素低剂量组比较,葛根素高剂量组、阿司匹林组大鼠胎盘组织质量增加(P0.0 5),阿司匹林组质量增加更明显(P0.0 5)。见表4。表4 大鼠胎盘组织的质量(xs,n=1 0)T a b.4 T h e w e i g h t o f r a t p l a c e n t a l t i s s u e(xs,n=1 0)项目胎盘组织质量/g对照组0.6 60.0 3模型组0.4 20.0 2a葛根素低剂量组0.4 60.0 2b葛根素高剂量组0.5 40.0 3b c阿司匹林组0.6 10.0 2b c dF1 7 1.6 6 7P0.0 0 1 注:与对照组比较,aP 0.0 5;与模型组比较,bP 0.0 5;与葛根素低剂量组比较,cP 0.0 5;与葛根素高剂量组比较,dP 0.0 5。3.5 孕鼠胎盘组织的病理变化情况HE染色结果显示,对照组大鼠胎盘组织未见炎性浸润,细胞排列有序,结构完整、规则,毛细血管分布均匀;与对照组比较,模型组大鼠胎盘组织结构紊乱,毛细血管减少,细胞间隙变大,排列疏松,见明显炎性浸润;与模型组比较,3个给药组大鼠胎盘组织病理情况均改善。见图1。3.6 孕鼠胎盘滋养层细胞的凋亡情况TUN E L染色结果显示,4组大鼠胎盘滋养层细胞凋亡指数比较差异具有统计学意义(P0.0 5)。与模型组比较,3个给药组大鼠胎盘滋养层细胞凋亡指数降低(P0.0 5);与葛根素低剂量组比较,葛根素高剂量组及阿司匹林组大鼠胎盘滋养层细胞凋亡指数降 低(P0.0 5),阿 司 匹 林 组 降 低 更 多(P0.0 5)。见表5、图2。注:A.对照组;B.模型组;C.葛根素低剂量组;D.葛根素高剂量;E.阿司匹林组。图1 各组大鼠胎盘组织H E染色结果(2 0 0)F i g.1 HE s t a i n i n g r e s u l t s o f p l a c e n t a l t i s s u e o f r a t s i n e a c h g r o u p(2 0 0)表5 大鼠胎盘滋养层细胞的凋亡情况(xs,n=1 0)T a b.5 T h e a p o p t o s i s o f r a t p l a c e n t a l t r o p h o b l a s t c e l l s(xs,n=1 0)项目细胞凋亡指数模型组2 8.7 2%2.4 3%葛根素低剂量组2 1.7 0%2.9 1%a葛根素高剂量组1 3.4 7%2.4 8%a b阿司匹林组7.9 8%1.1 9%a b cF1 5 1.6 4 5P0.0 0 1 注:与对照组比较,aP 0.0 5;与模型组比较,bP 0.0 5;与葛根素低剂量组比较,cP 0.0 5;与葛根素高剂量组比较,dP 0.0 5。3.7 大鼠的血清诸项指标水平E L I S A结果显示,各组大鼠血清T N F-、I F N-、I L-4、I L-1 0、I L-3 3及s S T 2水平比较差异具有统计学意义(P0.0 5)。与对照组比较,模型组大鼠血清T N F-、I F N-及s S T 2水 平 升 高,I L-4、I L-1 0及I L-3 3水平降低(P0.0 5);与模型组比较,3个给药组大鼠血清T N F-、I F