放射化学纯度分析的通用方法、应用发展及相关问题浅析.pdf

第 卷 第期 年月同位素J o u r n a l o f I s o t o p e sV o l N o A u g 放射化学纯度分析的通用方法、应用发展及相关问题浅析姚晶璟,杨维芳,范明暄,陆洁,(放射性药物教育部重点实验室 北京师范大学 化学学院,北京 ;北京师宏药业有限公司,北京 )摘要:建立准确、快捷、方便的放射化学纯度分析方法是放射性创新药物临床转化及开发过程中所面对和攻克的首要问题.本研究对放射化学纯度分析技术的发展现况进行概述,同时,基于现行 中国药典的相关指导原则,对放射化学纯度分析方法开发及验证所需关注的专属性、准确度和精密度、线性、范围以及耐用性等问题进行探讨.关键词:放射性药物;放射化学纯度;色谱法;验证中图分类号:T L ;R 文献标志码:A文章编号:()收稿日期:;修回日期:基金项目:国家自然科学基金资助项目()通信作者:陆洁d o i:/t w s G e n e r a lM e t h o d s,A p p l i c a t i o nD e v e l o p m e n t a n dR e l a t e dP r o b l e m so fR a d i o c h e m i c a lP u r i t yA n a l y s i sYAOJ i n g j i n g,YANG W e i f a n g,F AN M i n g x u a n,L UJ i e,(K e yL a b o r a t o r yo fR a d i o p h a r m a c e u t i c a l s(B e i j i n gN o r m a lU n i v e r s i t y),M i n i s t r yo fE d u c a t i o n,C o l l e g e o fC h e m i s t r yB e i j i n gN o r m a lU n i v e r s i t y,B e i j i n g ,C h i n a;B e i j i n gS h i h o n gP h a r m a c e u t i c a lR e s e a r c hC e n t e r,B e i j i n g ,C h i n a)A b s t r a c t:I nr e c e n ty e a r s,t h ed e v e l o p m e n to fi n n o v a t i v er a d i o p h a r m a c e u t i c a l sh a sb e c o m ea“h o ts p o t”I nt h e s ed e v e l o p m e n tp r o c e s s e s,i ti sc r u c i a lf o rr e s e a r c h e r st oc r e a t e ar a d i o c h e m i c a l p u r i t ya n a l y s i sm e t h o dw h i c h i s a c c u r a t e,f a s t,a n dc o n v e n i e n t I nt h i sm i n i r e v i e w,t h ed e v e l o p m e n tt r e n do fr a d i o c h e m i c a lp u r i t ya n a l y s i st e c h n o l o g yi ss u mm a r i z e d I na d d i t i o n,b a s e do nt h eg u i d e l i n e s i n c l u d e di nt h eC h P ,t h i sm i n i r e v i e wa l s od i s c u s s e s t h ek e yi s s u e s i nt h ed e v e l o p m e n ta n dv a l i d a t i o no fr a d i o c h e m i c a lp u r i t ya n a l y s i sm e t h o d s,s u c ha ss p e c i f i c i t y,a c c u r a c ya n dp r e c i s i o n,l i n e a r i t y,r a n g e,a n dd u r a b i l i t y K e yw o r d s:r a d i o p h a r m a c e u t i c a l s;r a d i o c h e m i c a l p u r i t y;c h r o m a t o g r a p h y;v a l i d a t i o n放射性药物是指含有一种放射性核素、供医学诊断和治疗用的药物.随着精准医学以及分子影像技术的迅速发展,放射性药物已经成为全球新药研发的热点领域.近五年来,美国F D A批准的放射性药物共有 种,其中正电子核素药物种,单光子核素药物种,治疗性核素药物种,约占 年以来获批放射性药物总数的 .在我国,各类放射性创新药物的开发、临床转化研究以及相应的临床应用研究也进入了飞速发展的阶段.放射化学纯度(r a d i o c h e m i c a lp u r i t y,R C P,以下简称放化纯度)是放射性药物质量控制的关键项目,其高低与放射性在靶器官及本底组织中的浓聚情况相关,直接影响诊疗效果.放化纯度在定义上是指某放射性核素在规定化学形式中的放射性活度(A)占总放射性活度的百分比,由于放射性核素具有一定的半衰期,尤其是用于正电子发射计算机断层扫描(p o s i t r o ne m i s s i o nc o m p u t e dt o m o g r a p h y,P E T)显像的放射性核素,其半衰期都相对较短,例如 G a,半衰期只有 m i n;而在实际生产及研发过程中,放化纯度是放射性药物在临用前必须完成的放行检查项目,这一要求在我国的现行药典相关指导原则中也已明确规定.因此,建立准确、快捷、方便的放化纯度分析方法成为放射性创新药物临床转化及开发过程中研究者所需面对和攻克的首要问题.本研 究 以 中 国 药 典 年 版(C h P )为主要参考,对比 欧洲药典 版(E P )和 美国药典 版(U S P N F )收录的有关放化纯度的测定方法及I CH相关指导原则,从放化纯度分析方法的发展角度,对放射性新药研发过程所涉及的放化纯度分析方法开发原则及方法验证注意事项进行探讨.放化纯度分析通用方法及其进展从 中国药典 年版(C h P )、欧洲药典 版(E P )和 美国药典 版(U S P N F )收载的各放射性药品的放化纯度检测方法归纳汇总可知,目前放射性药物的放化纯分析采用的通用方法主要为电泳法和色谱法 ,其中色谱法包含纸色谱法(P C)、薄层色谱法(T L C)、高效液相色谱法(H P L C)等.这些通用分析技术的原理以及在放射性药品质量控制中的应用情况已被详细概述.总体而言,随着分析技术及分析仪器设备的不断发展,放化纯度分析方法也随之改进,并呈现出以下特点.色谱法成为放化纯度分析方法的首选在放化纯度分析通用方法中,电泳法是一种利用外加电场,使供试品中各电荷组分(带有不同量电荷的阳离子或阴离子)以不同的迁移速度向对应的电极移动实现分离,通过适宜的放射性检测方法记录或计算,达到放化纯度测定的分析方法.尽管电泳法在蛋白、核苷酸等生物活性大分子的检测分析中具有独特的优势和较高的准确度,但对于大多数放射性药物,特别是小分子放射性探针而言,其操作相对复杂且耗时.因此,近年来获批上市及进入临床的放射性新药均将色谱分析法作为分析方法的首选.对于某些已获批上市的放射性药品,为更便于对即时标记放射性制剂的质量控制,有些放化纯度分析方法也由原来的“电泳法”变更为“色谱法”.例如锝 mT c 依替菲宁注射液,其在C h P 收录的放化纯度分析方法为电泳法,而C h P 收录的方法则更新为薄层色谱法.多种色谱分析方法的协同应用对于C h P 、E P 和U S P N F 收载的放射性药品而言,纸色谱法及薄层色谱法是应用最多的放化纯度分析方法.随着人们对放射性制剂杂质的持续关注和不断认识,以及高效液相色谱法的发展和普及,多种色谱分析方 法 的 协 同 应 用 成 为 一 种 趋 势.在C h P 通则 放射性药品检定法中,对应纸色谱法及薄层色谱法涉及两种放化纯度的分析计算方法.方法一:将供试品溶液点于色谱纸或薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,用合适的仪器测量色谱纸或者薄层板上的放射性分布,计算Rf,按照公式()计算放化纯度.放化纯度()规定化学形式的放射性净计数率放射性净计数率总和 ()基于该方法的色谱体系,则需要将放射性药物(规定化学形式的放射性组分)与其他放射性杂质组分(含已知及未知杂质)完全分开.例如C h P 收载的锝 mT c 甲氧异腈注射液(mT c S e s t a m i b i,mT c M I B I),采用的乙腈/聚第期姚晶璟等:放射化学纯度分析的通用方法、应用发展及相关问题浅析酰胺薄层层析体系.该层析体系下,锝 mT c甲氧异腈的Rf(比移值)约为 ,可与高锝 mT c 酸盐、胶体锝 mT c 及其他水溶性放射性杂质(Rf分别为 、)“完美”分离.但在放化纯度分析方法的开发过程中,研究者很难找到这种“完美”的色谱体系,实现规定化学形式的放射性药物组分与所有杂质的分离.因此,采用“方法二”进行放化纯度的分析和计算.方法二:将供试品溶液点于色谱纸或薄层板上,按各品种项下规定的多分离系统实验,用合适的仪器测定每一系统色谱纸或者薄层板上的放射性分布,若放射性药品A内含放射性杂质B和C,用分离系统一能将B与(AC)分离;用分离系统二将C与(AB)分离,放射性药品A的放化纯度可按公式()计算.B的含量()B峰的放射性净计数率系统一放射性净计数率总和 ()C的含量()C峰的放射性净计数率系统二放射性净计数率总和 ()根据公式()和公式(),放射性药物A组分的放化纯度可按照公式()计算:A的放化纯度()B的含量()C的含量()()该公式还可衍生为:放化纯度()(B)T ()式中,B为纸色谱法或薄层色谱法测得的杂质B的百分含量;T为H P L C分析中含有放射性药物A组分的峰面积百分比.基于公式()和公式(),在放化纯度分析方法开发过程中,研究者可将研究目标由“放射性药物组分(A)”变为各“放射性杂质组分”,通过对制剂中某一单一杂质的有效分离,以获得可靠的放化纯度分析方法.以 mT c标记的放射性药品为例,由于其普遍采用氯化亚锡为还原剂,所以从其制备工艺分析该类放射性药品制剂中通常含有未还原的高锝 酸 根(mT c O)及 其 还 原 水 解 锝 胶 体(mT c OnHO)两种杂质.研究者在放化纯度分析方法开发过程中,所获得的某一色谱体系可能无法实现对药物组分A与其中某一杂质B(mT c O或 mT c OnHO)的分离,但如果研究者在此基础上,继续开发对应该杂质B的分离色谱体系,即可通过上述公式计算得到制剂的放化纯度.在我国,C h P 收载的多个 mT c标记的放射性药品都采用了“双色谱体系”进行放射化学纯度的测定,其对应的色谱体系及杂质的Rf列于表.欧洲药典中收载的 mT c S e s t a m i b i放化纯测定也采取了H P L C/T L C的“双色谱体系”.另外,T a s d e l e n等还报道了T L C和H P L C联合分析影响 mT c S e s t a m i b i放化纯度的因素,并且采用双T L C展开体系分析了放射化学杂质.高效液相色谱法的广泛使用近年来,随着P E T分子靶向探针的发展,配备放射性检测器的高效液相色谱法(R a d i o H P L C)在 F、G a、C u、L u标记的小分子类或多肽类放射性新药探针的鉴别、放射化学纯度分析及放射性杂质(有关物质)的质量控制中得到广泛使用.表为近期获批的部分放射性药物品种的放化纯度检测方法及标准概况.如果不考虑场地、设备及经济因素,相比与纸色 谱、薄 层 色 谱 等 其 他 色 谱 方 法,R a d i o H P L C在专属性、杂质分离度等方面具有显著的优势.此外,随着基于不同分离原理的商业化色 谱 柱 的 发 展,例 如:分 配 色 谱(p a r t i t i o nc h r o m a t o g r a p h y)、吸附色谱(a d s o r p t i o nc h r o m a t o g r a p h y)、离子交换色谱(i o ne x c h a n g ec h r o m a t o g r a p h y,I E C)和分子排阻色谱(s i z ee x c l u s i o nc h r o m a t o g r a p h y,S E C)柱 等,使 得R a d i o H P L C的适用范围非常广泛.研究者可依据目标物质分子的结构特点、理化性质等,选择适宜类型的色谱柱,开发出可靠的放化纯度H P L C分析方法.尽管R a d i o H P L C具有上述优势,但有研究结果表明,对于某些已上市的放射性品种,T L C与H P L C在进行放化纯度的检验分析时仍具有相似的准确度和精密度.由于放射性药物的特殊性,放化纯度的色谱分析方法是基于所有放射性组分具有相同的检测响应这一假设下,采用面积归一化的数据分 析方式.在I CH Q A“新原料药中的杂质”同 位 素第 卷表采用多种色谱分析方法协同测定 mT c标记的放射性药品放射化学纯度T a b l eD e t e r m i n a t i o no f r a d i o c h e m i c a l p u r i t yo f mT c l a b e l e dr a d i o p h a r m a c e u t i c a l sb ym u l t i p l ec h r o m a t o g r a p h i ca n a l y s i sm e t h o d s mT c标记的放射性药品药物组分A杂质 mT c O(杂质B)杂质 mT c OnHO(杂质C)收录药典适用公式 mT c MD PRf (甲醇P C,主峰含杂质 mT c OnHO)Rf (N a C l溶液/P C)C h P 公式()mT c D T P ARf (丙酮/T L C)Rf (N a C l溶液/T L C)C h P 公式()mT c P Y PRf (甲醇丙酮(,V/V)/T L C)Rf (N a C l溶液/T L C)C h P 公式()mT c S e s t a m i b iH P L C:色谱柱:C ,mm m m,等度洗脱(m L/m i n):甲醇 m o l/L硫 酸 铵乙 腈(,V/V/V)Rf (乙腈 m o l/L醋酸 g/L氯化钠(,V/V/V)/P C)E P 公式()表近期获批的部分放射性药物品种的放化纯度检测方法及标准概况T a b l eO v e r v i e wo f r a d i o c h e m i c a l p u r i t yd e t e c t i o nm e t h o d sa n ds t a n d a r d so f s o m e r e c e n t l ya p p r o v e dr a d i o p h a r m a c e u t i c a l s序号放射性核素品名放化纯度分析方法放化纯度收录药典/参考文献 G a G a D O T A T O C色谱柱:C ,mm mm梯度洗脱(m L/m i n):m i n A(A T F A水,B T F A乙腈)E P F F F l u o r o e s t r a d i o l色谱柱:C ,mm mm等度洗脱(m L/m i n):A,B(A 水,B 乙醇)F F F l o r t a u c i p i r色谱柱:C ,mm mm等度洗脱(m L/m i n):A,B(A mm o l/LN aH P O(p H ),B 乙醇)F F F l o r b e t a b e n色谱柱:C ,mm mm等度洗脱(m L/m i n):A,B(A m o l/L甲酸铵,B 乙腈)C u C u D O T A T A T E色谱柱:C ,mm mm梯度洗脱(m L/m i n):m i n B(A 乙腈,B 水)L u L u P S MA H P L C:色谱柱:C ,mm mm梯度洗脱(m L/m i n):m i n A(A T F A水,B T F A乙腈)P C:Rf (乙腈水(,V/V)第期姚晶璟等:放射化学纯度分析的通用方法、应用发展及相关问题浅析中明确规定,这一假设需要在分析方法学中予以解释和说明.但事实上,许多放射性已知杂质在H P L C分析方法中很难满足这一假设.例如,还原水解锝胶体(mT c OnHO)在大多数H P L C色谱体系里都无法检测;微量的 F也会因为其高亲核性及其与金属(色谱柱的不锈钢系统)的强吸附作用在多数H P L C色谱体系中表现出极差的重复性和回收率.建立单一R a d i o H P L C进行最终产物的放射化学分析时,要求制备工艺中能够有充分的证据证明最终制剂不含上述特定杂质,例如,锝 mT c配套药盒中不采用氯化亚锡为还原剂以避免产生还原水解锝胶体;F标记药物制备过程中有明确的 F去除步骤等;在后继的稳定性考察中,有充分的研究数据证明不会产生相应的降解杂质.放化纯度色谱分析方法的验证采用色谱法进行放化纯度分析时,无论是T L C还是H P L C均应通过相应的分析方法验证(a n a l y t i c a lm e t h o dv a l i d a t i o n),以证明分析方法的适用性.研究者在进行放化纯度分析方法研究时,可主要参考的通则和指导原则列于表.表C h P 中放化纯度色谱分析方法研究可参考的通则及指导原则T a b l eG e n e r a l r u l e sa n dg u i d e l i n e s f o r t h e s t u d yo f r a d i o c h e m i c a l p u r i t yc h r o m a t o g r a p h y i nC h P 序号通则或指导原则参考文献通则 放射性药品检定法C h P 四部P 通则 色谱法C h P 四部P 指导原则 分析方法验证指导原则C h P 四部P 对于常规的色谱纯度分析方法,其验证项目一般包括:专属性、准确度、精密度(包括重复性、中间精密度和重现性)、检测限、定量限、线性、范围和耐用性.对于放射性创新药物,其放化纯度分析方法的建立和开发过程伴随着该药物制备工艺的不断优化,所以放化纯度分析方法的建立中可能很难做到“一步到位”.研究者可依据研究阶段、以及该研究阶段下对应的关键质量控制目标,参照上述通则和指导原则,选择合理的验证项目.例如,在研究的最初阶段,目标产物的标记率可能是研究的关注点,此时的放化纯度分析方法可能仅需进行以放射性原料为杂质的专属性和精密度(重复性)验证即可满足要求;但随着研究过程中对放射性有关物质、降解杂质的不断研究和理解,此时可能需要对专属性重新进行验证,或者采用新的色谱体系进行补充,以满足在此期间对工艺放射性杂质、稳定性,考察降解杂质以及生物转化代谢产物的分析要求.当工艺稳定后,在进行最终制剂的质量标准和分析方法确定时,则需依据工艺累积数据,综合分析后选择适宜的放化纯度测定方法,并在此基础上完成全部规定的方法验证项目.专属性专属性是指在其他成分(如杂质)可能存在下,采用的分析方法能正确测定出待测物质的能力.对于放射性创新药物放化纯度分析方法,专属性是其最重要的一项验证指标.在进行放化纯度色谱分析方法专属性研究时,可将放射性制剂依据产品特性大致分为两类.一类是具有明确的化学结构的放射性创新药物,例如 F、G a标记的小分子或多肽类探针,该类探针已经通过其稳定的 F或n a tG a对照品进行结构确认.此时,专属性需进行放射性制剂与其稳定对照品的保留时间(tR)或比移值(Rf)的对比研究.另一类放射性创新药物不具有明确的化学结构、或其化学结构无法确认.例如放射性标记的修饰蛋白、单抗类大分子,mT c HYN I C标记混配络合物等.此时,采用常规的系统适用性试验即可完成专属性的验证.无论是上述哪一类放射性药物,其放化纯度色谱方法的系统适用性研究中,R a d i o H P L C方法中待测物质色谱峰与相邻杂质色谱峰之间的分离度(R)通常应不小于 ;R a d i o T L C方法中,放射性主峰与相邻杂质峰的分离度(R),依公式()计算,应大于 .同 位 素第 卷R(dd)/(WW)()式中,d为相邻两峰中后一峰与原点的距离;d为相邻两峰中前一峰与原点的距离;W及W为相邻两峰各自的峰宽.由于放射性药物的特殊性,在进行系统适用性研究时,选定的放射性杂质可能很难确定其结构.因此,虽然I CH Q B“新药制剂中的杂质”指导原则中明确该原则不适用于放射性药物,但其有关杂质谱、降解产物及其分析方法的基本原则和研究方法对放射性新药的开发仍然具有参考意义.通过对放射性制剂,从初始配体(或标记前体)合成、到最终标记反应的全过程分析,研究者可在已有经验、研究基础或文献的基础上,通过杂质谱分析,推测可能的放射性杂质来源、组成或结构.这些推测可通过合理的实验设计予以直接或间接地证明,例如:对制备得到的可能杂质、未纯化的粗产品、置于相对强烈条件(光、热、酸/碱)下的样品进行色谱分析,并与最终制剂的色谱图进行比较.这类具有可重复性的设计甚至可以作为最终的色谱分析系统适用性对照品,例如欧洲药典中所收载的 mT c S e s t a m i b i的放化纯度测定使用的系统适用性对照品(图):S e s t a m i b i l a b e l l i n gk i tC R S,其为一种 mT c标记配套药盒,需通过与 mT c S e s t a m i b i相同的加热标记获得供试品,其供试品中含有工艺降解杂质C.杂质C的来源为其配体甲氧异丁异腈结构中甲氧基被热/酸消除后产生,其推测结构如图()所示,与主成分 mT c S e s t a m i b i高度相似.准确度准确度是指用所建立方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度,一般用回收率()表示.对于放化纯度而言,其色谱分析方法是基于所有放射性组分具有相同的检测响应这一假设下,采用面积归一化的数据分析方式完成.由于放射性检测设备对放射性组分的检测响应(计数或计数率)仅与其指定核素的放射性活度相关、而与其化学结构或其他物理特性均无关,完全满足上述假设要求,所以单独的回收率验证研究并不适用于放化纯度分析方法学.事实上,放化纯度分析方法准确度在通常情况下并不需要独立地进行验证,它是可以由所测定的精密度、线性和专属性推算出来.精密度精密度是指在规定的测定条件下,同一份均匀供试品,经多次取样测定所得结果之间的接近程度,一般通过重复性研究完成该项验证,用报告偏差、标准偏差或相对标准偏差(R S D)的方式表示.在进行放化纯度分析方法的精密度(重复性)研究时,应当首先确定该方法的专图 mT c S e s t a m i b i的放化纯度系统适用性色谱图及其主峰相邻杂质C的推测结构F i g R a d i o c h e m i c a l p u r i t y s y s t e ms u i t a b i l i t yc h r o m a t o g r a mf o r mT c S e s t a m i b i a n dt h ep r e s u m e ds t r u c t u r eo f t h em a i np e a ka d j a c e n t i m p u r i t yC第期姚晶璟等:放射化学纯度分析的通用方法、应用发展及相关问题浅析属性符合要求;其次应注意其进行放化纯度分析的样本计数(或计数率)应在规定或仪器自身的线性范围内.C h P 四部 锝 mT c放射性药品质量控制指导原则在其“放射化学纯度”章节中推荐了对放化纯度分析方法的验证方案设计原则:“批以上供试品,每批样品不少于个时间点(即制备后时刻、有效期中间点和末期点)的严格验证”.该设计原则充分考虑了放射性制剂批次多、批量小、有效期短的特点,该原则也同样适用于其他放射性核素标记的放射性制剂.上述原则至少涉及份样品,研究者可依据实际情况设计同一分析人员(同一样品,n)的重复性;不同时间、不同分析人员、不同设备等的中间精密度考察项目.对于大多数放射性药物,T L C薄层色谱分析方法,其精密度R S D的可接受限度参考C h P 通则 色谱法,一般可定为不大于 .而对于H P L C分析方法,由于待测放射性组分的化学量一般远低于 (p p m),所以其精密度R S D可定为 或适当放宽.线性和范围线性和范围在放化纯度方法学中很容易被忽略.因为,放化纯度分析是建立在对示踪剂量的放射性物质高灵敏探测基础上.单纯地从仪器的信噪比看(例如S/N,或),达到放化纯度检测限或定量限的供试品放射性活度(或计数率)极低;从原理上,放射性组分的活度(单位时间内的衰变数)与仪器测定的计数率(单位 时 间 的 放 射 性 计 数)也 必 然 程 线 性相关.但事实上,由于放射性衰变的统计学规律,以及检测仪器的分辨率和死时间,“线性和范围”在放化纯度方法学中仍然是不可忽视的重要问题.()分析样本的点样量(或进样量)放射性计数低限 放射性衰变的统计学规律在进行放化纯度分析时,因为放射性衰变的统计学规律,所以分析样本的点样量(或进样量)放射性计数应该不低于某个设定的限度,以保证测定结果的准确性.为便于理解,可将放射性衰变的统计学规律设定为符合高斯分布,则此时对某一放射性样本测定结果(计数:N)的相对标准误差可简化为:R S D/N;即放射性计数越大,相对标准误差越小,测量的准确度就越高.例如,设定R S D的可接受标准为 区间时,则此时要求放射性样本测量计数的低限为:.()分析样本的点样量(或进样量)放射性计数率上限 仪器的分辨时间.对于放射性计数仪器,其进入探测器的粒子以脉冲信号达到仪器的触发阈而能正常计数所需的时间称为分辨时间().分辨时间()一般由两部分组成:一是仪器正在响应脉冲信号的这段时间,在此期间无法对新进入探测器的粒子进行计数,称为仪器的死时间(D);二是仪器恢复计数的时间,称为恢复时间(R).对于灵敏度足够高的放射性计数仪器,D,所以,常常也用“死时间”近似地作为仪器的分辨时间.由于“死时间”的存在,所有的放射性计数仪器都存在对粒子的“漏记”.若单位时间内实际进入探测器的粒子为n,计数仪器记录的计数率n,则为其漏记损失的粒子计数率nnn.n与n在数值上,因“死时间”D,存在式()关系:nnn()则有:nnn.对于放射性计数仪器,其的数值一般在 s之间或者更小.由此可见,当样本计数率测量值n很小时,仪器的死时间对其测量的准确性影响不大;但当样本计数率测量值n较大时,漏计损失非常明显,造成放化纯度的测量结果偏低.基于上述原因,中国药典 在其 版修订时,在所有采用纸色谱或薄层色谱法的锝 mT c 标记放射性药品的“放射化学纯度”检查项描述中,在“取本品适量”后又增加了“约 m i n”的备注.但在实际工作中,因为放射性制剂的放射性浓度规格不同、所用的检测仪器也不同,很难满足上述“约 m i n”的要求.所以,研究者可将其作为一个普适性的参考下限值;对于样品分析用量(放射性活度同 位 素第 卷或计数)的上限,可通过对检测仪器的确认过程中的“线性”研究结果来确定一个适宜范围.通常情况下,该“范围”内的线性的相关系数R应不低于 .对于H P L C配备的在线放射性检测器,同样存在样品进样量上限的问题.当进样的放射性量非常大时,会出现色谱峰平头、甚至“倒峰”的情形.但由于该类放射性在线检测器一般存在多个量程档位,且待测组分在色谱柱中的保留及吸附情况与待测组分的化学结构相关,所以,不能像“井型”探头类或“扫描”类计数器设备通过设备确认结果来确定样品进样量上限,而需要根据实际情况,通过单独的验证研究来确定适宜的量程档位和放射性进样活度范围.耐用性耐用性是指在测定条件有小的变动时,测定结果不受影响的承受程度,为所建立的方法用于常规检验提供依据.C h P 四部 锝 mT c放射性药品质量控制指导原则 在其“放射化学纯度”中推荐的对放化纯度分析方法的验证方案设计原则就充分考虑了“被测溶液的稳定性”,这一典型的变动因素,规定验证考察的时间点为制备后时刻、有效期中间点和末期点.在放射性新药的实际临床转化过程中,由于放射性药物即时标记的特点,放化纯度耐用性所面临的最常见变动因素是检测设备的不同.例如,对某一薄层色谱(R a d i o T L C)放化纯度分析方法,所采用的展开剂及薄层层析体系、以及Rf判别及数据处理方式相同;但在不同临床机构和核药房企业,所采用的测量仪器及方式往往不同:有可能是“井型”探头类的计数器设备、采用将层析条分段后测量的方式;也有可能是“平面扫描”式的放射性扫描类设备,直接对层析条的放射性分布情况进行扫描和记录.这时,就应当进行必要的耐受性验证,以确保方法的可靠性.如最终的放化纯度分析方法采用R a d i o H P L C,其耐用性验证则需考虑液相色谱法中的典型变动因素,例如:流动相的组成和p H、不同品牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等.总结与展望虽然相对于E P 和U S P N F ,我国目前载入药典C h P 的放射性药品品种相对较少,且收载的放化纯度测定方法主要以纸色谱法和薄层色谱法为主.但随着我国近年来在放射性创新药物研发领域的飞速发展,其相应的放化纯度分析技术也得以迅速提升.总的来说,对于放射性创新药物,其可靠的放化纯度质量控制方法是其临床转化能否成功的重要保障.它应该同时满足以下基本要求:()具有对放射性工艺杂质和降解杂质的识别和检测能力;()经过充分的方法学研究,确认其具有较高的精密度和良好的耐受性;()简便、快捷,具有良好的普适性和可操作性.在放射性创新药物的研发过程中,应当将放化纯度分析方法作为一个需持续改进的研究工具,协助研究者对创新药物的自身特性(例如:相容性、稳定性和相关放射性降解杂质)、处方、制备工艺(例如:放射性工艺杂质)的不断理解和优化;最终实现放射性创新药物的工艺稳定、质量可控和安全有效.参考文献:国家药 典 委 员 会中 华 人 民 共 和 国 药 典 四 部M北京:中国医药科技出版社,:国家药 典 委 员 会中 华 人 民 共 和 国 药 典 四 部M北 京:中 国 医 药 科 技 出 版 社,:国家药 典 委 员 会中 华 人 民 共 和 国 药 典 二 部M北京:中 国医 药 科技 出版 社,:E u r o p e a nD i r e c t o r a t ef o rt h e Q u a l i t yo f M e d i c i n e s&H e a l t h C a r e E u r o p e a n p h a r m a c o p o e i a M L o n d o n:E u r o p e a nD i r e c t o r a t ef o r t h eQ u a n l i t yo fM e d i c i n e&H e a l t h C a r e,张云,杨柳,姜华放射性药品的放化纯度分析方法概述J同位素,():Z h a n gY u n,Y a n gL i u,J i a n gH u a AR e v i e wo nr a d i o c h e m i c a lp u r i t ya n a l y s i s m e t h o d so fr a d i o p h a r m a c e u t i c a l sJ J o u r n a lo fI s o t o p e s,():(i nC h i n e s e)国家药 典 委 员 会中 华 人 民 共 和 国 药 典 二 部M北京:中国医药科技出版社,:国家药 典 委 员 会中 华 人 民 共 和 国 药 典 二 部M北京:中 国医 药 科技 出版 社,:第期姚晶璟等:放射化学纯度分析的通用方法、应用发展及相关问题浅析 T a s d e l e n BHP L Ci n v e s t i g a t i o no ft h er a d i o c h e m i c a l p u r i t yo f mT c M I B IJ J o u r n a l o fR a d i o a n a l y t i c a la n dN u c l e a rC h e m i s t r y,():D i x i tM,S h i J,W e iL,e ta l S y n t h e s i so f c l i n i c a l g r a d e F f l u o r o e s t r a d i o la sas u r r o g a t eP E Tb i o m a r k e r f o r t h e e v a l u a t i o no f e s t r o g e nr e c e p t o r t a r g e t i n g t h e r a p e u t i cd r u gJ I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o fM o l e c u l a r I m a g i n g,:M o s s i n eA V,B r o o k sAF,H e n d e r s o nBD,e ta l A nu p d a t e dr a d i o s y n t h e s i so f FAV f o rt a uP E Ti m a g i n gJE J NMM IR a d i o p h a r m a c ya n dC h e m i s t r y,():W a n gH,G u oX,J i a n gS,e t a l A u t o m a t e ds y n t h e s i so f FF l o r b e t a b e na sA l z h e i m e r sd i s e a s ei m a g i n ga g e n tb a s e do nas y n t h e s i sm o d u l es y s t e mJA p p l i e dR a d i a t i o na n dI s o t o p e s,():T o n e rY C,G h o t b iA A,N a i d uS,e ta l S y s t e m a t i c a l l ye v a l u a t i n gD O TA TA T Ea n dF D Ga sP E Ti mm u n o i m a g i n gt r a c e r so fc a r d i o v a s c u l a ri n f l a mm a t i o nJS c i e n t i f i cR e p o r t s,():G u l e r i aM,Am i r d h a n a y a g a m