中国一先天性静止性夜盲家系5个已知突变位点的排除.pdf

收稿日期:2 0 0 3-1 0-1 4修回日期:2 0 0 4-1 2-2 5作者简介:庄树林(1 9 7 6-),男,博士,主要从事分子模拟、分子生物学的研究.通讯作者:胡松年(1 9 6 9-),男,教授,主要从事基因组学、分子生物学的研究;E-ma i l:h u s n g e n o mi c s.o r g.c nh t t p:www.j o u r n a l s.z j u.e d u.c n/me d中国一先天性静止性夜盲家系5个已知突变位点的排除庄树林1,2,邹建卫3,彭春龙2,刘晓玲4,陈士翰5,黄方亮2,胡松年2,俞庆森1,3(1.浙江大学化学系,浙江 杭州3 1 0 0 2 7;2.杭州华大基因研发中心,浙江 杭州3 1 0 0 0 8;3.浙江大学宁波理工学院分子设计与营养工程重点实验室,浙江 宁波3 1 5 1 0 0;4.温州医学院 附属眼视光医院,浙江 温州3 2 5 0 0 3;5.华盛顿州立大学(西雅图)医学院儿科遗传组,华盛顿9 8 1 0 5)摘要目的:检测中国一常染色体显性先天性静止性夜盲(AD C S NB)大家系相关基因的致病性突变位点及此病临床表型特征。方法:从该家系1 6名患者和1 4名正常成员的外周静脉血提取基因组D NA。根据已报道的与AD C S NB有关的3个基因的5个位点的杂合错义突变设计引物,利用聚合酶链反应扩增5个位点所在的外显子,扩增产物纯化后用Me g a B AC E 1 0 0 0全自动毛细管测序仪测序。利用罗兰视觉电生理检查仪进行全视野视网膜电流图检查。结果:患者暗适应a波正常,b波明显降低。1 6名患者和1 4名正常成员在已报道的5个位点均未检测到突变。结论:该家系符合AD C S NB特征,但分子缺陷未涉及这5个位点的点突变或缺失,这显示AD C S NB可能具有遗传异质性。关键词夜盲/先天性;夜盲/遗传学;染色体异常;点突变;聚合酶链反应中图分类号 R7 7 4文献标识码 A文章编号 1 0 0 8-9 2 9 2(2 0 0 5)0 3-0 2 5 5-0 5E x c l u s i o no ft h ea s s o c i a t i o no ff i v ek n o w nmu t a t i o n sw i t hc o n g e n i t a l s t a t i o n a r yn y c t a l o p i ai nal a r g eC h i n e s ef a mi l yZ HUANGS h u-l i n,Z OU J i a n-we i,P E NGC h u n-l o n g,e t a l(C h e mi s t r yDe p a r t me n t,Z h e j i a n gUn i v e r s i t y,Ha n g z h o u3 1 0 0 2 7,C h i n a)A b s t r a c t O b j e c t i v e:T od e t e c t g e n emu t a t i o n sa s s o c i a t e dwi t ha u t o s o ma l d o mi n a n t c o n g e n i t a l s t a t i o n a r yn i g h tb l i n d n e s s(AD C S NB)i nal a r g eC h i n e s ef a mi l y.Me t h o d s:G e n o mi cD NAswe r ee x t r a c t e df r o m p e r i p h e r a l b l o o ds a mp l e so f 1 6a f f e c t e da n d1 4u n a f f e c t e df a mi l yme mb e r s.Ac c o r d i n gt o5mi s s e n s emu t a t i o n si n3g e n e sr e p o r t e dp r e v i o u s l y,4p a i r so fp r i me r swe r ed e s i g n e da n dc o r r e s p o n d i n ge x o n sc o n t a i n i n gt h ef i v emu t a t i o ns i t e swe r ea mp l i f i e db yp o l y me r a s ec h a i nr e a c t i o n.Amp l i f i e dp r o d u c t swe r ep u r i f i e da n ds e q u e n c e db yMe g a B AC E 1 0 0 0c a p i l l a r ya r r a ye l e c t r o p h o r e s i sD NA s e q u e n c e r.F u l lf i e l d e l e c t r o r e t i n o g r a m(E R G,I S C E V)o fp a t i e n t swa sr e c o r d e da n da n a l y z e db yR o l a n dC o n s u l tS y s t e m.R e s u l t s:D a r k-a d a p t e dE R G s h o we da-wa v ewa sn o r ma l,b u tb-wa v eo f t h ep a t i e n t swa sma r k e d l yd e c r e a s e d.No n eo f t h ef i v emi s s e n s emu t a t i o n swe r ed e t e c t e di n1 6a f f e c t e da n d1 4u n a f f e c t e df a mi l yme mb e r s.C o n c l u s i o n:T h emo l e c u l a rp a t h o g e n e s i so f AD C S NBi nt h i sf a mi l yd o e sn o ti n v o l v ep o i n t mu t a t i o n so rd e l e t i o n so f t h e s ef i v es i t e s,wh i c hi n d i c a t e st h eh e t e r o g e n e i t yo f AD C S NB.Ke yw o r d s Ni g h tb l i n d n e s s/c o n g e n;Ni g h tb l i n d n e s s/g e n e t;C h r o mo s o mea b n o r ma l i t i e s;P o i n tmu t a t i o n;P o l y me r a s ec h a i nr e a c t i o nJZ h e j i a n gUn i v(Me d i c a l S c i),2 0 0 5,3 4(3):2 5 5-2 5 9.先天性静止性夜盲(c o n g e n i t a l s t a t i o n a r yn i g h t b l i n d n e s s,C S NB)是一类主要损坏视网膜杆体系统功能的遗传性视网膜疾病。患者出生后即出现非进行性夜盲,白天视力一般正常 1 4。该病有常染色体显性遗传(a u t o s o ma l第3 4卷第3期2 0 0 5年浙 江 大 学 学 报(医 学 版)J OUR NALOFZ HE J I ANGUNI VE R S I T Y(ME D I C ALS C I E NC E S)Vo l 3 4 No32 0 0 5d o mi n a n t,AD)、常染色体隐性遗传(a u t o s o ma lr e c e s s i v e,AR)和 性 连 锁 隐 性 遗 传(x-l i n k e dr e c e s s i v e,X L)3种类型。自1 9 9 3年首次发现导致常染色体显性先天性静止性夜盲(a u t o s o ma ld o mi n a n tc o n g e n i t a ls t a t i o n a r y n i g h tb l i n d-n e s s,AD C S NB)的基因突变以来,截止2 0 0 4年2月已发现3个基因的5种杂合错义突变与AD C S NB有关 5。其中在视紫红质(r h o d o p s i n,R HO)基 因 中 存 在Al a 2 9 2 G l u、G l y 9 0 As p、T h r 9 4 I l e3种突变 6 9,在磷酸二脂酶亚单位(p h o s p h o d i e s t e r a s es u b u n i t,P D E 6 B)基因中发生Hi s 2 5 8 As n突变 1 0,在鸟嘌呤核苷酸结合蛋 白转 导 活 性 肽1(g u a n i n en u c l e o t i d eb i n d i n gp r o t e i n,t r a n s d u c i n ga c t i v i t yp o l y p e p-t i d e 1,G NAT1)基因中存在G l y 3 8 As p突变 1 1。由于AD C S NB存在明显的遗传异质性和等位基因异质性,本研究检测了中国一AD C S NB家系1 6名患者和1 4名正常成员的AD C S NB相关基因的突变位点,以研究国人AD C S NB发生的分子遗传学机制。1材料与方法1.1样本来源AD C S NB家系由陈士翰于1 9 8 2年报道,当时为中国最大的AD C S NB家系 1 2,目前该家系已经发展到1 2代(图1)。从该家系第、_ 代中取1 6名患者和1 4名正常成员为检测对象,采取血样前对家系成员进行详细调查并对患者进行传统全视野视网膜电流图(E R G)检查。1.a主要仪器及试剂罗兰视觉电生理检查仪(德国R o l a n dC o n s u l t公司),be g a B AC E 1 0 0 0全自动毛细管测序仪(Ame r s h a m P h a r ma c i a公司),P T C-1 0 0热循环仪(bc公司),D dd-6 B型双稳定时电泳仪(北京市六一仪器厂),bi l l i-e纯 水 仪(bi l l i p o r e公 司),D dE n a mi c T b E TT e r mi n a t o r测序试剂盒(Ame r s h a m P h a r ma c i aB i o t e c h公司),D NA T a f聚合酶(北京华大基因研 究中心),血细胞基因组D NA纯化试剂盒和D NA清洁试剂盒(杭州维特洁生化技术有限公司),P C R引物(上海鼎安生物科技有限公司)。1.g方法1.g.1 E R G检查h双眼暗适应3 0mi n,瞳孔完全散大。将记录电极(角膜电极)放置角膜上,参考电极和接地电极分别放置太阳穴和前额上(I S C E i标准),记录该家系患者及正常对照的视网膜电流图。在单次白色弱闪光刺激(j2 5d B,k i xo na n db a c k g r o u n do k k)下,记录暗适应的视杆细胞E R G反应l在单次白色强闪光刺激(0d B,k i xo na n db a c k g r o u n do k k)下,记录最大视杆细胞和视锥细胞E R G反应。明适应E R G记录前,先适应背景光1 0mi n。利用单次白色强闪光刺激,记录单次强闪光刺激和3 0Hm闪烁光刺激的E R G。1.g.a D NA提取及定量h取家系1 6名患者和1 4名正常成员外周静脉血4 0 0n l,利用血细胞基因组D NA纯化试剂盒提取白细胞D NA,用0.8 o琼脂糖凝胶电泳定量后加bi l l i-e水稀释到5 0n g p n l。1.g.g P C R复合扩增h P C R反应用9 6孔微量板在P T C-1 0 0热循环仪上进行,反应总体系3 0n l,其中模板D NA 1n l,1mmo l p Ld NT P2n l,2 5mmo lp L bg2 q3n l,1 0 r b u k k e r3n l,D NAT a f聚合酶2s,5n mo l p L引物2n l。热循环条件h 9 4 t预变性5mi n,9 4 t变性1mi n,6 2 t复性1mi n,u 2 t延伸1mi n,共计3 4个循环,最后u 2 t延伸8mi n(表1)。扩增产物利用D NA清洁试剂盒纯化,用2 o琼脂糖凝胶电泳定量后加bi l l i-e水稀释到3 0n g p n l,j2 0 t保存。1.g.v测序反应h反应总体系1 0n l,其中1n mo l p L引物2n l,P C R纯化产物2n l,E T试剂2n l,测序反应缓冲液(5 r)2n l,加bi l l i-e水补足至1 0n l。热循环条件h 9 6 t预变性2mi n,9 4 t变性1 0s,5 0 t复性1 0s,6 0 t延伸4mi n,共计3 5个循环。反应产物利用u 0 o乙醇沉淀法纯 化,置通风厨干燥,溶解在8n l上样缓冲液中,用be g a B AC E 1 0 0 0全自动毛细管测序仪进行测序。a结果a.1 E R G患者X I-1 u、X-4、X-3的眼底无色素变化,视神经、视网膜和脉络膜血管未见异常。患者X I-1 u的暗适应视杆细胞E R G(图2-A),其暗适应b波的幅值分别为u 6n i(左眼)和5 9n i(右眼),正常为2 u un i,该家系成员正w652w浙江大学学报(医学版)第3 4卷图1中国一先天性静止性夜盲家系图谱F i g.1 P e d i g r e eo f aC h i n e s ef a mi l ywi t hAD C S NB表1 5个位点的引物序列及P C R反应条件T a b l e1 P r i me rs e q u e n c eo f f i v el o c i a n dP C Rc o n d i t i o nL o c u sF o r wa r dp r i me rR e v e r s ep r i me rP r o d u c ts i z e(b p)An n e a l i n gt e mp e r a t u r e()G l y 9 0T h r 9 4 5 -C T T C T AC G T G C C C T T C T C C A-3 5 -G AG G G C T T T G G AT AAC AT T G-3 4 7 16 2Al a 2 9 25 -T C AT C AT G G T C AT C G C T T T C-3 5 -AG T G AG C AT C T G AG C C AC C T-3 4 2 26 2Hi s 2 5 85 -T G AG T T AAAC C C C T G C T G C T-3 5 -T G G AG T T G G AG T C AG G G AAA-3 4 4 96 2G l y 3 85 -AAAC T C G AG G C AC T C T T C C A-3 5 -C G T T G G C T T C C T T T C T T C AC-3 4 0 66 2常为1 9 7 3 6 8 V;患者暗适应最大视杆细胞和视锥细胞E R G(图2-B),其a波幅值为1 9 7 V,接近正常眼;患者b波明显低于正常眼,b波幅值为1 9 7 V(左眼)和2 3 4 V(右眼),正常为4 1 6 V,该家系成员正常为2 2 0 5 7 8 V,b/a比为1.1。明适应E R G、3 0Hz闪烁频率及震荡电位趋于正常范围。患者X-4暗适应b波的幅值分别为9 2 V(左眼)和9 7 V(右眼)。患者暗适应最大视杆细胞和视锥细胞E R Ga波幅值为2 2 3 V,接近正 常眼;患者b波幅值为2 2 2 V(左眼)和2 3 5 V(右眼),明显低于正常眼,b/a比为1.0 8。明适应E R G、3 0Hz闪烁频率及震荡电位趋于正常范围。患者X-3暗适应b波的幅值分别为6 8.2 V(左眼)和6 5.8 V(右眼)。患者暗适应最大视杆细胞和视锥细胞E R Ga波幅值为1 7 4 V,接近正常眼;b波幅值为2 8 3 V(左眼)和2 5 9 V(右眼),明显低于正常眼,b/a比为1.3 8。明图2患者X I-1 7暗适应E R G图F i g.2 E R Gg r a p ho f o n ep a t i e n t X I-1 7A:D a r k-a d a p t e d r o d-e l e c t o r e t i n o g r a m(E R G)r e s p o n s e s;B:D a r k-a d a p t e dMa x-E R Gr e s p o n s e s适应E R G、3 0Hz闪烁频率及震荡电位趋于正常范围。2.2 D NA测序1 6名患者和1 4名正常成员的测序结果(图3)与NC B I(美国国立生物技术信息中心)中的序列一致。在R HO基因编码区752第3期庄树林,等.中国一先天性静止性夜盲家系5个已知突变位点的排除内的第9 0和第9 4及第2 9 2密码子的第2位碱基,在P D E 6 B基因编码区内的第2 5 8密码子和G NAT1基因编码区内的第3 8密码子的第1位碱基均未检测出点突变或缺失。图3下划线标志患者X I-1 7的5个正常位点F i g.3 S e q u e n c e ss h o wt h ef i v en o r ma l s i t e s(u n d e r l i n e d)o f t h ep a t i e n t X I-1 73讨论虽然C S NB与视网膜色素变性(r e t i n i t i sp i g me n t o s a,R P)、眼 底 白 点 症(f u n d u sa l b i p u n c t a t u s,F A)和 小 口 氏 病(o g u c h i sd i s e a s e)都具有夜盲症状,但C S NB患者无眼底变化并且症状不随时间变化。本组患者在有记忆时就发现有夜盲症状,而且症状不随时间变化,患者白天视力正常,两眼视力无明显差别,眼底检查无异常。通过系谱分析、家系调查,结合患者病史及对患者进行眼底和视网膜电流图检查,确定患者为AD C S NB 1 2。该家系患者暗适应弱闪光的E R Gb波振幅大为减少,只有正常的2 0%3 0%;强闪光的E R Gb波振幅只有正常的4 0%5 0%,而且波形异常,但a波正常。这提示患者视网膜外层的p h o t o n细胞、中层的双极细胞或mu l l e r细胞不正常,而视杆细胞尚有一些功能。该家系3患者的E R G波形极具 相似性,与国内费一坚报告的AD C S NB的E R G情况不完全一致,后者同一家系患者的E R G有无波形者,a、b波均降低型和b波降低型等几种 1,1 3;与其它遗传方式的C S NB也无法 进行比较。因此,该家系暂定为不完全型C S NB(i n c o mp l e t eC S NB)。R HO基因全长67 0 6b p,定位于3 q 2 1-q 2 4,其编码的R HO蛋白有3 4 8个氨基酸。1 9 9 0年D r y j a首次发现R HO存在基因突变,到目前已发现1 2 9种R HO基因突变,其中1 9种为多态性,1 0 6种与R P有关,1种与白点状视网膜变性(r e t i n i t i sp u n c t a t aa l b e s c e n s,R P A)有关,3种与AD C S NB有关 1 4。D r y j a等发现一AD C S NB患者R HO基因编码区存在Al a 2 9 2 G l u错义突变,第2 9 2密码子第2位碱基C突变为A,导致其编码的丙氨酸突变为谷氨酸 7。S i e v i n g等发现,美国密歇根州AD C S NB家系患者R HO基因编码区存在G l y 9 0 As p 5错义突变,第9 0密码子第2位碱基G突变为A,导致其编码的甘氨酸突变为天冬氨酸 8,1 5。a l-J a n d a l等发现,爱尔兰AD C S NB家系患者R HO基因编码区存在T h r 9 4 I l e错义突变,第9 4密码子第2位碱基C突变为T,导致其编码的苏氨酸突变为异亮氨酸 9。P D E 6 B基 因 全 长4 51 7 0b p,定 位 于4 p 1 6.3,其 编 码 的P D E 6 B有8 5 4个 氨 基 酸。1 9 9 3年,Mc L a u g h l i n首次发现P D E 6 B存在基因突变,到目前已发现5 5种P D E 6 B基因突变,其中2 7种为多态性,2 7种与视网膜色素变性有关,1种与AD C S NB有关 1 6。G a l等发现丹麦R a mb u s c h家系患者P D E 6 B基因编码区存在Hi s 2 5 8 As n错义突变,第2 5 8密码子第1位碱基C突变为A,导致其编码的组氨酸突变为天冬酰氨 1 0。G NAT1基因全长49 0 7b p,定位于3 p 2 1,其编码的G NAT1蛋白有3 5 0个氨基酸。D r y j a等发现,法国No u g a r e t家族患者G NAT1基因存在G l y 3 8 As p错义突变,第3 8密码子第1位碱基G突变为A,导致其编码的甘氨酸突变为天冬氨酸 1 1。到目前仅在G NAT1基因发现这一例突变 1 7。费一坚等对国内一AD C S NB家系1 5名患者和5名正常成员的R HO第5外显子片段进行限制性片段长度多态性分析,结果显示R HO第5外显子片段无明显缺失,R HO编码区内第3 1 4和第3 4 7位密码子的第1位碱基和第3 4 8位密码子的第1位碱基均未发现突变或缺失 1 8。852浙江大学学报(医学版)第3 4卷研究患者的E R G提示,患者视网膜不正常层次可能位于中层的双极细胞或mu l l e r细胞,但不能排除外层视杆细胞本身的异常。从D NA分 子水平检测光电转换过程中R HO、P D E 6 B以及G NAT1基因中的这5个位点,未发现患者光感受器异常。在本研究检测的家系AD C S NB患者中并未发现这5个突变位点存在基因突变,说明这5个错义突变不是导致该家系AD C S NB的原因。该 家系的基因突变可能存在于其它基因或这3个基因的其它位点,这表明了AD C S NB的遗传异质性。致谢:感谢陈士芬女士和陈尚腾先生提供家系资料,同时对该家系成员无偿提供血样以及陈士芬女士负责收集血样并安排家系成员进行眼科检查表示衷心感谢。R e f e r e n c e s:1 F E I Yi-j i a n,L UO C h e n g-r e n,Z HOU J i u-mo,e t a l(费一坚,罗 成 仁,周 久 模,等).F a mi l y i n v e s t i g a t i o n a n dc l i n i c a l g e n e t i c a n a l y s i s o f a l a r g e p e d i g r e e wi t hc o n g e n i t a l s t a t i o n a r yb l i n d n e s s J .C h i n e s ej o u r n a lo fo p h t h a l mo-l o g y(中 华 眼 科 杂 志),1 9 9 2,2 8(3):1 6 2-1 6 5.(i nC h i n e s e)2 S I D I KI SS,HAMI L T ONR,D UT T ONGN.F e a r o f t h ed a r ki nc h i l d r e n:i ss t a t i o n a r yn i g h t b l i n d n e s st h ec a u s e?J .B MJ,2 0 0 3,3 2 6:2 1 1-2 1 2.3 B AR NE SCS,AL E X AND E RK R,F I S HMAN G A.Ad i s t i n c t i v ef o r m o f c o n g e n i t a l s t a t i o n a r yn i g h t b l i n d n e s swi t hc o n eo n-p a t h wa yd y s f u n c t i o n J .O p h t h a l mo l o g y,2 0 0 2,1 0 9:5 7 5-5 8 3.4 YI NWe i-j i n g,Z HAOZ h a o-x i a,S UNG u i-x i a n g,e t a l(尹卫 靖,赵 朝 霞,孙 桂 香,等).Mu l t i f o c a le l e c t r o r e t i n o-g r a p h y i n p a t i e n t s wi t h c o n g e n i t a ls t a t i o n a r y n i g h tb l i n d n e s s J .C h i n e s eO p h t h a l mi cR e s e a r c h(眼 科 研究),2 0 0 2,2 0(3):2 3 8-2 4 1.(i nC h i n e s e)5 Z HUANG S h u-l i n,HU S o n g-n i a n,Z OU J i a n-we i,e ta l(庄 树 林,胡 松 年,邹 建 卫,等).P r o g r e s so fmo l e c u l a rg e n e t i c si n a u t o s o ma ld o mi n a n tc o n g e n i t a ls t a t i o n a r yn i g h t b l i n d n e s s J .S e c t i o no f G e n e t i c s F o r e i g nMe d i c a lS c i e n c e s(国外医学遗传学分册),2 0 0 4,2 7(1):4 3-4 5.(i nC h i n e s e)6 J I N S,C OR NWAL L M C,OP R I AN D D.Op s i na c t i v a t i o na sac a u s eo fc o n g e n i t a l n i g h tb l i n d n e s s J .N a t N e u r o s c i,2 0 0 3,6(7):7 3 1-7 3 5.7 D R YJ A T P,B E R S ON E L,R AO V R,e ta l.He t e r o z y g o u smi s s e n s emu t a t i o ni nt h er h o d o p s i ng e n ea sac a u s eo f c o n g e n i t a l s t a t i o n a r yn i g h t b l i n d n e s s J .N a t u r eG e n e t,1 9 9 3,4:2 8 0-2 8 3.8 S I E VI NG PA,R I C HAR D SJE,NAAR E ND OR FF,e ta l.D a r k-l i g h t:mo d e l f o r n i g h t b l i n d n e s s f r o mt h e h u ma nG l y-9 0 As pmu t a t i o n J .P r o cN a t lA c a dS c i,1 9 9 5,9 2:8 8 0-8 8 4.9 a l-J AND AL N,F AR R AR G J,KI ANG A S,e ta l.An o v e l mu t a t i o nwi t h i nt h er h o d o p s i ng e n e(T h r-9 4-I l e)c a u s i n ga u t o s o ma l d o mi n a n tc o n g e n i t a l s t a t i o n a r yn i g h tb l i n d n e s s J .Hu m Mu t a t,1 9 9 9,1 3:7 5-8 1.1 0 G ALA,OR T H U,B AE HRW,e ta l.He t e r o z y g o u smu t a t i o ni nt h er o dc G MPp h o s p h o d i e s t e r a s e-s u b u n i tg e n ei na u t o s o ma l d o mi n a n t s t a t i o n a r yn i g h t b l i n d n e s s J .N a t u r eG e n e t,1 9 9 4,7:6 4-6 8.1 1 D R YJ A T,HAHN L,R E B OULT,e ta l.Mi s s e n s emu t a t i o ni nt h eg e n ee n c o d i n gt h es u b u n i to fr o dt r a n s d u c i n i n t h e No u g a r e t f o r mo f c o n g e n i t a ls t a t i o n a r yn i g h t b l i n d n e s s J .N a t u r eG e n e t,1 9 9 6,1 3:3 5 8-3 6 0.1 2 C HE N S h i-h a n(陈 士 翰).E s s e n t i a ln i g h tb l i n d n e s s:r e p o r t o f o n e p e d i g r e e J .R e c e n t A d v a n c e s i nO p h t h a l mo l o g y(眼科新进展),1 9 8 2,2(1):4 0-4 3.(i nC h i n e s e)1 3 F E IYi-j i a n,Z E NG L i-f e n g,L UO C h e n g-r e n(费一坚,曾 丽 芳,罗 成 仁).An a l y s i s o ff u l l-f i e l d s c o t o p i ce l e c t r o r e t i n o g r a m(E R G)i n a l a r g e f a mi l y wi t ha u t o s o ma l d o mi n a n t c o n g e n i t a l s t a t i o n a r y n i g h tb l i n d n e s s J .C h i n e s eO p h t h a l mi cR e s e a r c h(眼 科 研究),1 9 9 1,9(4):2 2 2-2 2 5.(i nC h i n e s e)1 4 R e t i n aI n t e r n a t i o n a l sS c i e n t i f i cNe ws l e t t e r.Ht t p:www.r e t i n a-i n t e r n a t i o n a l D B/OL.c o m/s c i-n e ws/r h o mu t.h t m.1 5 S I E VI NGPA,R I C HAR D SJ E,B I NG HAM EL,e t a l.D o mi n a n tc o n g e n i t a lc o mp l e t en y c t a l o p i aa n dG l y 9 0 As pr h o d o p s i nmu t a t i o n J .I n v e s tO p h t h a l mo lV i s S c i,1 9 9 2,3 2:9 2 7.1 6 R e t i n aI n t e r n a t i o n a l sS c i e n t i f i cNe ws l e t t e r.Ht t p:www.r e t i n a-i n t e r n a t i o n a l D B/OL.o r g/s c i-n e ws/p d e mu t.h t m.1 7 R e t i n aI n t e r n a t i o n a l sS c i e n t i f i cNe ws l e t t e r.Ht t p:www.r e t i n a-i n t e r n a t i o n a l D B/OL.o r g/s c i-n e ws/g n t mu t.h t m.1 8 F E I Yi-j i a n,L UO C h e n g-r e n,HUANGYo n g-z h i(费一坚,罗 成 仁,黄 永 志).Mo l e c u l a rg e n e t i cs t u d y o fa u t o s o ma l d o mi n a n t c o n g e n i t a l s t a t i o n a r y n i g h tb l i n d n e s s-a n a l y s i so f t h er h o d o p s i ng e n eb yP C R J .C h i n e s ej o u r n a l o fo c u l a rf u n d u sd i s e a s e s(中华眼底病杂志),1 9 9 3,9(2):6 6-6 9.(i nC h i n e s e)责任编辑黄晓花952第3期庄树林,等.中国一先天性静止性夜盲家系5个已知突变位点的排除