肌红蛋白测试标准操作流程.doc

肌红蛋白测试标准操作流程
一 实验组成
1 实验仪器及器具：
Mini VIDAS全自动分析仪一台、洁净工作台、低速离心机、20~200µl加样器
2 试剂盒组成：

MYO试剂条说明：试剂条上有 10 个孔，用贴有标签的铝箔密封

二 实验原理
一步免疫分析夹心方法（sandwich）和最后荧光检测（ELFA）
样品被吸取到含有用碱性磷酸酶（共扼物）标记的抗肌红蛋白抗体的孔中。 样品/共扼物混合物在运行中进出固相包被针SPR数次。该操作使抗原结合到固定在固相包被针 SPR内壁的免疫球蛋白上，并结合到共扼物上，以形成“夹心”。没有结合的组分在冲洗步骤中清除。 在最后检测步骤中，将底物（磷酸4 甲基-伞形烷）循环进出固相包被针 SPR。共扼物酶催化本底物水解成荧光产物（4-甲基伞形酮） 。该产物的荧光在 450nm下测量。荧光强度与样品中出现的抗原的浓度成正比。分析结束的时候，由VIDAS根据储存在存储器中的校正曲线，自动计算结果，然后打印输出

三 标本
1 检测样本：
150µl血清或血浆 (肝素锂)
由于EDTA或柠檬酸钠引起所测量的数值的下降，所以不可使用在EDTA或柠檬酸钠上采集的血浆
2 影响因素
没有发现下列因素对分析有显著影响：
（1）溶血 (用血红蛋白形成尖峰样品（spiking）之后：0到 292 µmol/l 或 0 到 470 mg/dl)
（2）脂血症(在用脂质形成尖峰样品（spiking）之后：0到 30 g/ml，等价于在三酸甘油酯中)
（3）胆血症(在用胆红素形成尖峰样品（spiking）之后：0到 540µmol/l)
（4）肝素（最高达 50IU/ml）
但无论如何,建议不要使用明显溶血、脂血症、胆血症的样本，如可能的话，重新收集样本。

四 操作程序
1 标准曲线条码(MLE)输入
在每使用新一批试剂前，必须用每一试剂盒中都有的MLE卡（规格单）将规格（或工厂主校正曲线数据）输入仪器。步骤如下：
（1）按Master Lot Menu
（2）放入MLE卡片
（3）按Read Master Lot
（4）按A或B
读取完成后，仪器会自动打印相应信息

2 校准曲线
当新一批试剂开启时，在主批次数据 (MLE卡片)输入后，应用试剂盒中的两种校准液执行校准，然后每 14 天应重新校正一次。
（1）按说明书溶解标准品S1和质控品C1
（2）按Status Screen ，选择A或B
（3）键盘输入位置1，按 S，再键入1，回车（自动跳到下一位置）
（4）按s，键入1，回车
（5）重复以上步骤输入C1后，回车
（6）屏幕显示S1，S1， C1
（7）在机器中放入相应试剂条和SPR，并且加入上述校准品
（8）开始测试
测试大约需要20min，结束后机器将自动计算结果并打印

3 标本测试
（1）按Status Screen， 选择A或B
（2）键盘输入位置1，按sample id，再键入标本编号，回车（自动跳到下一位置）
（3）重复以上步骤
（4）输入完成后，按返回键
（5）屏幕显示已输入的标号
（6）在机器中放入相应试剂条和SPR，并且加入对于待测标本
（7）开始测试
测试大约需要20min，结束后机器将自动计算结果并打印

五 结果判读
1 性能
检测范围 5-1000 mg/l
检测下限 < 5 mg/l
日内重复性 在183mg/l，CV 1.6%，
在346ug/l，CV3.2%，
在728mg/l，CV 3.0%
日间重复性 在183mg/l，CV 3.3%
在346ug/l, CV3.8%,
在728mg/l，CV 4.4%

2 结果解释
期望值：10-46.0 mg/l
根据对197个无心脏病历史的病人进行的评估，95%在10-46.0 mg/l。