西洋参破壁饮片_粗粉与传统饮片中人参皂苷的体外溶出度比较_徐浩淇.pdf

2015 年 7 月第 40 卷第 13 期Vol.40，No 13July，2015制剂与炮制西洋参破壁饮片、粗粉与传统饮片中人参皂苷的体外溶出度比较徐浩淇1，2，陈莎2，章军2，杨世林1，成金乐3，彭丽华3，刘安2*(1.贵州大学 药学院，贵州 贵阳 550025;2.中国中医科学院 中药研究所，北京 100700;3.国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室，广东 中山 528473)摘要 比较西洋参破壁饮片、粗粉与传统饮片中人参皂苷在水中和模拟胃液中溶出度，研究粉体粒径对西洋参溶出度的影响。采用高效液相色谱法测定西洋参破壁饮片、粗粉和传统饮片中 5 种人参皂苷成分在不同时间点的溶出量，绘制溶出曲线，比较不同形态西洋参皂苷成分的溶出特征。结果表明，在以水为溶出介质的实验中，西洋参破壁饮片中人参皂苷较粗粉、传统饮片具有更快的溶出速度，5 min 时溶出度就达到了总质量分数的 90%，溶出量比饮片高出 14%，比粗粉高出 8%;在以模拟胃液为溶出介质的实验中，西洋参破壁饮片中人参皂苷比提取物中人参皂苷溶出速度上稍慢，但最大溶出量比传统饮片提取物高出 5%，比粗粉高出 14%。该文首次通过体外溶出度研究证明，西洋参破壁饮片化后能够改善其有效成分的溶出效率。关键词 西洋参;破壁饮片;粗粉;传统饮片;溶出度;人参皂苷Dissolution difference of ginsenosides from ultrafine granular powder andcommon powder traditional pieces of Panacis Quinquefolii adix in vitroXU Hao-qi1，2，CHEN Sha2，ZHANG Jun2，YANG Shi-lin1，CHENG Jin-le3，PENG Li-hua3，LIU An2*(1.College of Pharmacy，Guizhou University，Guiyang 550025，China;2.Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China;3.Key Laboratory of Ultrafine Granular Powder of Herbal Medicine，Technology and Application，the State Adiministration ofTraditional Chinese Medicine，Zhongshan 528473，China)Abstract The dissolution of Panacis Quinquefolii adix ultrafine granular powder and common powder，traditional pieces in waterand simulated gastric juice in vitro was compared，and the effect of particles size of Panacis Quinquefolii adix on the dissolution wasstudied.HPLC method was used for determination of five ginsenosides including g1，e，b1，c and d from ultrafine granularpowder and common powder，traditional pieces of Panacis Quinquefolii adix at different points in time，furthermore，the dissolutioncurves of Panacis Quinquefolii adix ultrafine granular powder and common powder，traditional pieces were obtained.The dissolutioncharacteristics of the three Panacis Quinquefolii adix forms were also compared in this study.According to the results，the dissolutionrates of ginsenosides from ultrafine granular powder exceeded 90%of the total content with 5 min，significantly higher than that of theother two forms in water in vitro.At the same time，the dissolved amount of the ultrafine granular powder was fourteen percent higher thanthat of the traditional pieces and eight percent higher than that of the common powder.Under the condition of simulated gastric juice invitro，the dissolution rates of ginsenosides from ultrafine granular powder were little lower than that of the other two，but the maximum dis-solved amount of the former was fourteen percent higher than that of the common powder and five percent higher than that of the extracts.Therefore the conclusion is that micronization of Panacis Quinquefolii adix contributed to dissolution of effective components.Key words Panacis Quinquefolii adix;ultrafine granular powder;common powder;traditonal pieces;dissolution rate;ginsenosidesdoi:10 4268/cjcmm20151317 收稿日期 2015-01-31 通信作者*刘安，研究员，硕士生导师，主要从事中药化学研究，Tel:[phone]，E-mail: 作者简介徐浩淇，硕士研究生，Tel:[phone]，E-mail:6752徐浩淇等:西洋参破壁饮片、粗粉与传统饮片中人参皂苷的体外溶出度比较西洋参作为保健品，正在逐渐走入普通百姓家。为了使药材中有效成分能最快地和最大限度地溶出，许多专家提出了微米中药的新概念1，就是运用现代科学技术将西洋参进行“微粉化”加工，通过降低药材粒径，有效地提高生物利用率。有文献报道2，西洋参经破壁粉碎后，人参皂苷溶出速率和溶出率均大幅提高，说明西洋参经粉碎后入药效果明显优于普通粗粉和传统饮片3-6。胃是药物吸收的第一个器官，因而以水为媒介的溶出度研究并不能很好的表征药物的实际吸收情况。就我们所知，目前在模拟胃液下研究微粉化饮片溶出度的报道很少。本文将对西洋参破壁饮片、粗粉和传统饮片在水中与模拟胃液中皂苷类成分溶出度进行比较，为西洋参破壁粉碎后的优越性提供参考。1材料LC-20A 型高效液相色谱仪(日本岛津公司);西洋参破壁饮片(200 目，中山市中智药业集团有限公司，批号 0213111101)，粗粉(24 目，中山市中智药业集团有限公司，批号 0213111101)，传统饮片(中山市中智药业集团有限公司，批号 0213111101)经中国中医科学院中药研究所程明副研究员鉴定为五加科植物西洋参 Panax quinquefolium L.的干燥根;对照品人参皂苷 e(中国食品药品检定研究院，纯度 88.8%，批号 110754-200822);对照品人参皂苷 g1，人参皂苷 b1，人参皂苷 c，人参皂苷 d(中国固体制剂制造技术国家工程研究中心，纯度分别为 94%，98%，98%，94.4%，批号分别为 1270-090207，1264-091128，17-130901，01-130912);溶出试验仪(日本富山产业株式会社);BS224S 型1/10万电子分析天平(德国 Sartorius 公司);胃蛋白酶(北京索莱宝科技有限公司);盐酸为分析纯(国药集团化学试剂有限公司);乙腈为色谱纯(美国 Fish-er 公司);磷酸为分析纯(国药集团化学试剂有限公司);水为纯净水(娃哈哈公司)。2方法2.1HPLC 分析条件Thermo BDS HYPESIL C18色谱柱(4.6 mm 150 mm，5 m);流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱(0 25 min，19%20%A;25 60min，20%40%A;60 65 min，40%43%A);流速 1.0 mLmin1;检测波长 203 nm;柱温 40。2.2对照品溶液的制备精密称取人参皂苷 g1，人参皂苷 c，人参皂苷d 对照品 8.40，10.18，9.01 mg，加入甲醇，配制成每 1 mL 含人参皂苷 g10.063 mg，人参皂苷 c0.079 mg，人参皂苷 d 0.068 mg 的混合对照品溶液 A。再分别精密称取人参皂苷 e，人参皂苷 b1对照品 9.60，8.02 mg，加入甲醇配制成每 1 mL 含人参皂苷 e 0.042 mg、人参皂苷 b10.078 mg 的混合对照品溶液 B。2.3西洋参破壁饮片、粗粉与传统饮片中人参皂苷溶出总量测定分别精密称取西洋参破壁饮片、粗粉和传统饮片 5.0 g，各平行 3 份，置于圆底烧瓶中，加入 30 倍量 100 热水，充分摇匀，于 100 水浴中提取 40min 后，3 500 rmin1离心15 min，取上清。残渣加30 倍量 100 热水充分摇匀，于 100 水浴中提取30 min 后，3 500 rmin1离心 15 min，取上清。合并 2 次上清液，以 0.45 m 微孔滤膜过滤，取续滤液，HPLC 检测。2.4西洋参破壁饮片、粗粉与传统饮片以水为溶出介质的溶出度测定分别精密称取西洋参破壁饮片、粗粉和传统饮片 5.0 g，各平行 3 份，置于溶出杯中，采用桨法7，各溶出杯同步加入 500 mL 水，转速 100 rmin1，温度(37 0.5)，于0，5，10，15，20，25，30，60，90，180 min 依次取溶液2 mL，并补充同温度溶出介质2mL，取出溶液后立即过 0.45 m 微孔滤膜，采用HPLC 测定其含量，计算累积溶出率，绘制溶出曲线。2.5西洋参破壁饮片与粗粉、传统饮片(提取物)以模拟胃液为溶出介质的溶出度测定2.5.1模拟胃液的制备8 取 5.0 g 胃蛋白酶溶于 400 mL 水中，加稀盐酸调节 pH 至 1.2，摇匀后，加水稀释成 500 mL，即得。2.5.2提取物的制备精密称取西洋参传统饮片5.0 g，置于圆底烧瓶中，加入 350 mL 水，浸泡 0.5h。煮沸，冷凝回流提取 2 次，第 1 次 40 min，第 2 次30 min，合并 2 次滤液，浓缩滤液，真空干燥，得传统饮片提取物 2.66 g。2.5.3溶出度测定分别精密称取 5.0 g 西洋参破壁饮片、5.0 g 粗粉和 2.66 g 传统饮片提取物(相当于传统饮片5.0 g)各平行3 份，置于溶出杯中，采77522015 年 7 月第 40 卷第 13 期Vol.40，No 13July，2015用桨法，各溶出杯同步加入 500 mL 模拟胃液，转速100 rmin1，温度(37 0.5)，于 0，5，10，15，20，30，40，50，60，80，100，120 min 取溶液 2 mL，并补充同温度新鲜溶出介质 2 mL，取出溶液后立即过0.45 m 微孔滤膜，取续滤液，采用 HPLC 测定其含量，计算累积溶出率，绘制溶出曲线。2.6数据分析采用 SPSS 20.0 统计软件进行数据分析。所有数据以 珋x s 表示。组间比较采用单因素方差分析，P 0.05 认为有显著性差异，P 0.01 认为具有极显著性差异。3结果3.1HPLC 条件优化本文在文献 9的基础上，对 HPLC 各项参数进行优化调整，使得目标成分色谱峰之间有良好的分离度。分别用对照品和样品溶出液进行分析验证，比对目标成分的色谱保留时间，结果峰 1，2，3，4，5 分别为人参皂苷 g1，c，d，e，b1，结果见图 1。A.混合对照品溶液 A;B.混合对照品溶液 B;C.供试品溶液;1.人参皂苷 g1;2.人参皂苷 c;3.人参皂苷 d;4.人参皂苷 e;5.人参皂苷 b1。图 1对照品溶液和西洋参溶出液 HPLC 图Fig.1HPLC chromatograms at 203 nm of the Panacis Quin-quefolii adix standard and the test solution3.2方法学验证3.2.1线性关系分别准确吸取混合对照品 A 溶液 1，2，4，8，10 L，混合对照品 B 溶液 1，4，10，20，40 L 进样，以进样量(g)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，分别绘制标准曲线，计算得各对照品的回归方程和线性范围，见表 1。5 种人参皂苷对照品浓度和响应峰面积有良好的线性相关性，对照品回归方程的相关系数 r0.999 5。表 15 个对照品的线性关系Table 1Linearity in the determination of five standards成分回归方程线性范围/grg1Y=4 654.2+308 844X0.063 2 0.631 70.999 5eY=1 269.3+550 117X0.042 6 1.7050.999 9b1Y=1 237.6+216 317X0.078 6 3.143 80.999 9cY=3 199.6+222 698X0.079 8 0.798 10.999 7dY=305.9 302 244X0.068 0.680 40.999 83.2.2精密度试验按 2.1 项下的 HPLC 条件，于不同时间精密吸取 2.2 项下的对照品溶液，重复进样 5 次，结果见表 2，5 种人参皂苷对照品峰面积SD5.0%，表明仪器精密度良好。表 2精密度和稳定性考察Table 2The results of precision and stability%成分精密度稳定性g10.591.9e0.540.82b10.841.9c0.921.9d0.511.63.2.3稳定性试验分别吸取同一份供试品溶液20 L，分别于0，1，2，4，8，12，24 h 进样测定，记录人参皂苷峰面积，结果见表 2，5 种人参皂苷对照品峰面积 SD 5.0%，表明供试品溶液放置 24 h稳定。3.3西洋参破壁饮片与粗粉、传统饮片溶出总量的比较用100 热水浸泡提取时，西洋参破壁饮片、粗粉和传统饮片中 g1，c，d 没有显著性差异，质量分数分别在 963.6 1 004.4，1 686.9 1 716.9，1 317.2 1 375.6 gg1，但是破壁饮片中 e(4 755.1 gg1)，b1(10 495.2 gg1)的含量极显著高于其他 2 种形态(P 0.01)，结果见图2，表 3。3.4以水为溶出介质的西洋参破壁饮片、粗粉和传统饮片的溶出度比较3.4.1溶出速度的比较综合 5 种人参皂苷成分变化趋势，西洋参破壁饮片的溶出速度比粗粉、传统饮片都快，5 min 即达到了平衡浓度，而粗粉和传统饮片则分别需要 20，60 min。传统饮片相比粗粉尤其是破壁饮片需要更多的时间，见图 3。这充分说8752徐浩淇等:西洋参破壁饮片、粗粉与传统饮片中人参皂苷的体外溶出度比较1)P 0 01。图 2西洋参破壁饮片与粗粉、传统饮片的溶出总量比较Fig.2Dissolved amount of ultrafine granular powder and com-mon powder，traditional pieces of Panacis Quinquefolii adix表 3西洋参破壁饮片与粗粉、传统饮片中人参皂苷 e 和人参皂苷 b1溶出量比较(珋x s，n=3)Table 3The dissolution comparison of e and b1from ultra-fine granular powder and common powder，traditional pieces ofPanacis Quinquefolii adix(珋x s，n=3)gg1西洋参eb1破壁饮片4 755.1 2.210 495.2 91.3粗粉4 559.5 29.61)10 237.3 22.41)传统饮片4 394.1 16.91)10 139.6 79.61)注:与破壁饮片比较1)P 0.01。明有效成分的溶出速率与粒径大小相关，体现了破壁饮片溶出快的特点。a.人参皂苷 g1;b.人参皂苷 e;c.人参皂苷 b1;d.人参皂苷 c;e.人参皂苷 d(图 4 同)。图 3西洋参破壁饮片与粗粉、传统饮片的溶出曲线(珋x s，n=3)Fig.3Dissolution curve of ultrafine granular powder and common powder，traditional pieces of Panacis Quinquefolii adix(珋x s，n=3)3.4.2溶出量的比较破壁饮片溶出量高于粗粉和传统饮片，在达到溶出饱和时，破壁饮片溶出率为90%，而粗粉则只有 83%，传统饮片则有 79%，粗粉和传统饮片溶出量上差距不大，但都明显低于破壁饮片。破壁饮片能够增加有效成分的溶出率，饱和时含量比传统饮片高出 14%，比粗粉高出 8%，见图3。这充分说明破壁饮片的粒径小、比表面积大等因素使得有效成分溶出度提高。3.5以模拟胃液为溶出介质的西洋参破壁饮片、粗粉和传统饮片的溶出度比较由于人参皂苷类成分在酸性环境下会发生降解10-12，导致其含量先增加后降低。为了更好的比较成分溶出情况，本研究计算了曲线下面积，对模拟胃液下 3 种组分溶出含量进行综合比较13，结果见表 4。破壁饮片、粗粉和传统饮片提取物都在 20 min左右全达到最大溶出度，由于传统饮片是以提取物的形式进行溶出度测量，因而溶出速度显著的快，达峰时间为 0;破壁饮片次之，达峰时间为 10.3 min;粗粉最慢，达峰时间为 18.3 min。在溶出度最大时，破壁饮片达到了 73.3%，分别比粗粉和传统饮片提取物高出 14.0%，5.4%。而比较曲线下面积值得97522015 年 7 月第 40 卷第 13 期Vol.40，No 13July，2015表 4人参皂苷在模拟胃液中参数比较(珋x s，n=3)Table 4The comparison of parameters of ginsenosides in Panacis Quinquefolii adix(珋x s，n=3)成分形态最大溶出量/g达峰时间/min曲线下面积g1破壁饮片4 655.4 184.511.7 2.9267 571.8 7 832.7粗粉3 670.5 113.82)23.3 5.82)268 604.8 6 183.4传统饮提物3 943.5 15.32)02)159 620.9 1 993.82)e破壁饮片14 619.5 436.68.3 2.9388 485.9 11 632.2粗粉11 638.0 377.92)16.7 2.92)368 887.9 12 199.2传统饮提物11 832.3 392.02)02)301 256.0 5 785.02)b1破壁饮片35 639.4 1 162.48.3 2.91 605 816.9 44 173.6粗粉29 704.8 1 842.82)16.7 2.92)1 554 680.3 45 916.5传统饮提物27 430.9 1 663.42)02)824 516.8 14 429.92)c破壁饮片7 183.9 614.711.7 2.9443 713.2 13 675.8粗粉5 452.6 199.52)16.7 2.91)441 126.8 5 058.1传统饮提物5 465.4 369.12)02)339 761.1 6 646.22)d破壁饮片4 092.5 641.611.7 2.9113 185.1 1 503.9粗粉2 963.7 229.52)18.3 2.91)143 868.7 2 440.22)传统饮提物3 265.4 56.22)02)66 160.9 1 232.52)注:与破壁饮片比较1)P 0.05;2)P 0.01。到，破壁饮片分别比粗粉和饮片提取物高出 1.5%，66.7%，见图 4。图 4西洋参破壁饮片与粗粉、传统饮片(提取物)的溶出曲线(珋x s，n=3)Fig.4Dissolution curve of ultrafine granular powder and common powder，traditional pieces of Panacis Quinquefolium adix(珋x s，n=3)4讨论西洋参破壁粉碎后，人参皂苷在水中的溶出量高于粗粉和传统饮片中的溶出量，说明破壁粉碎有利于提高西洋参中有效成分的溶出量。本实验还首次阐述了破壁饮片、粗粉与传统饮片提取物在胃中的吸收差异，根据了 5 种人参皂苷的溶出情况，系统的对比了成分的溶出速率和溶出量，为了解西洋参破壁饮片在胃中的吸收提供了参考。破壁饮片能够加快药材中有效成分溶出，其达到最大溶出度比传统饮片快了 6 倍，比粗粉快了 4倍;破壁饮片能够增加有效成分的溶出率，其质量分数比传统饮片高出 14%，比粗粉高出 8%。同时由于本研究中所有西洋参饮片厚度较薄，本身就具有很好的溶出特征，因而可以推测对于厚度较厚的饮片，破壁饮片在溶出速率和溶出量方面具备更好的优越性。西洋参破壁饮片在模拟胃液中，虽然溶出速度上较提取物稍慢，但其在最大溶出量和利用率方面，0852徐浩淇等:西洋参破壁饮片、粗粉与传统饮片中人参皂苷的体外溶出度比较破壁饮片都高于粗粉以及传统饮片提取物。这可能是因为破壁饮片粒径小、溶出量大，溶出充分。而最大溶出量的大小只能反映溶出速度快慢，当达到溶出饱和之后，人参皂苷的降解速度会逐渐加快，溶出速度逐渐减慢，为了综合评价溶出和降解过程，本文比较了三者的曲线下面积值，在 2 h 考察时间内，破壁饮片与粗粉曲线下面积值差不多，但都远大于传统饮片提取物的面积值，原因可能是破壁饮片和粗粉中含有植物纤维，能够减缓成分的降解速度。但在人参皂苷 d 比较中，粗粉的曲线下面积反而大于了破壁饮片的曲线下面积，这可能是因为粗粉的粒径较大，导致人参皂苷 d 溶出速率较破壁饮片中慢，当达到溶出最大值后，粗粉中人参皂苷 d 的降解速率相对破壁饮片中人参皂苷 d 的降解速率也慢，使得 2 h 的考察时间内曲线下面积值出现了大于破壁饮片中的现象;还有可能是实验中操作带来的误差，但 2 种可能性都没有影响整个破壁饮片和粗粉的综合比较。西洋参破壁饮片与粗粉、传统饮片中人参皂苷总量除人参皂苷 e、人参皂苷 b1有显著差异外，其余 3 种人参皂苷无明显差异。在选择药材溶出总量的溶剂体积时，本实验结合文献，考察了 15，30，45 倍量水，最终选择 30 倍量水适宜。而提取物的制备，是参考西洋参传统饮片提取物制备方法得到。破壁粉碎技术的兴起，为中药剂型的改革提供了技术支持。西洋参破壁粉碎后入药，其溶出速度快，释放量大，用小于处方的药量即可获得原处方的疗效，既增强了药物疗效又节约了时间和成本，并且破壁饮片相对于粗粉和传统饮片(提取物)来说，可以直接嚼服，简单方便，且不用消耗能源，值得大量推广。参考文献1陆付耳.专家学者畅谈微米中药政治企业共商研发大计N.科技日报，2000-02-15(3).2翟旭峰，张晨，郭晓蕾.西洋参破壁饮片与细粉中人参皂苷人参 b1的溶出度比较研究 J.中药材，2009，32(2):290.3刘莉，程龙琼，周世玉.西洋参中人参皂苷 g1人参皂苷 e和人参皂苷 b1的含量测定J.医药导报，2011，30(9):1208.4蔡璐，梁少瑜，戴开金，等.人参破壁饮片与细粉的体外溶出度比较 J.南方医科大学报，2013，33(10):1547.5熊慧，郭舟，赵静文，等.栀子破壁饮片与细粉中栀子苷的体外溶出度比较J.中国实验方剂学杂志，2013，19(21):53.6李越峰，徐富菊，张泽国，等.当归破壁饮片碎与当归饮片质量比较研究 J.中国临床药理学杂志，2014，30(12):1124.7王明芝，娄子恒，杜跃中，等.西洋参破壁饮片中人参皂苷的含量测定 J.人参研究，2006，18(4):19.8中国药典.一部 S.2010:附录 72.9中国药典.一部 S.2010:122.10宋磊，张春娜，郭圣荣，等.人参皂苷 b1在胃液和肠液 pH下的稳定性考察 J.中国临床药学杂志，2004，12(4):211.11范利荣，史海明，李晓波，等.人参皂苷的体外模拟代谢及转化研究进展 J.中国中药杂志，2011，36(15):2021.12陈木洲，刘延辉，黄姬，等.酸碱度对人参皂苷提取率及稳定性影响分析 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