云南三个地区马铃薯内生真菌多样性研究.pdf

.():/.:./.田甲佳 刘贺 杨季婷 等.云南三个地区马铃薯内生真菌多样性研究.广西植物():.():.云南三个地区马铃薯内生真菌多样性研究田甲佳 刘 贺 杨季婷 王 毅 刘良燕(.云南农业大学 农学与生物技术学院 昆明 .云南省林业和草原科学院云南省森林植物培育与开发利用重点实验室 昆明 )摘 要:为研究云南马铃薯()内生真菌的多样性该文以采自云南省德宏芒市、大理喜洲和临沧双江 个地区的马铃薯植株为研究对象采用组织块分离法、尖端菌丝挑取法对马铃薯根、茎及块茎中的内生真菌进行分离纯化并采用形态学鉴定方法和 序列分析法对分离得到的内生真菌进行鉴定对内生真菌的定殖率、分离率及多样性指数进行计算和分析 结果表明:()共分离得到内生真菌 株其中从德宏芒市的样品中获得 株从大理喜洲的样品中获得 株从临沧双江的样品中获得 株()经鉴定分离得到的马铃薯内生真菌共涵盖 目 科 属大多为子囊菌门和担子菌门优势菌为镰刀菌属()和 青 霉 属()褶 皱 裸 孢 壳()、接 骨 木 镰 刀 菌()、毛韧革菌()、和 种真菌均为首次从马铃薯植株中分离得到()马铃薯块茎内生真菌的定殖率最高根部内生真菌定殖率最低内生真菌的分离率以马铃薯根部为最高而茎部最低不同组织中内生真菌的多样性指数趋势均为根块茎茎 从综合来看云南马铃薯植株中的内生真菌具有较高的多样性不同地区的马铃薯样品中内生真菌优势菌不同马铃薯根部具有最丰富的内生真菌种群和最高的分离率是最适合进行内生真菌分离的材料该研究结果为后期探究马铃薯内生真菌对病原菌的拮抗作用奠定了基础也为马铃薯内生真菌多样性研究提供了参考数据关键词:内生真菌 序列分析 定殖率 分离率 分离频率 香农多样性指数中图分类号:文献标识码:文章编号:()(.)收稿日期:基金项目:国家自然科学基金()云南省高层次人才培养计划“青年拔尖人才”专项()第一作者:田甲佳()硕士研究生研究方向为马铃薯内生真菌化学成分分析().通信作者:刘良燕博士副教授研究方向为马铃薯真菌病害生物防治().:.().:().().().:植物内生真菌是指在植物的整个或某一生长阶段内在健康植物组织或器官内寄居且进行繁殖同时不会引起寄主植物发生明显感染症状的真菌()此类真菌广泛存在于植物中与寄主植物进化过程时建立协同进化、互利共生的关系(孙建慧任静)隋丽等()的研究发现植物内生真菌能增强植物光合特性提高植物对营养元素的吸收率并能提高植物在逆境条件下的抗胁迫能力以及产生植物激素来调节植物生长 同种内生真菌在不同宿主植物中所表现的作用和产生的次生代谢产物截然不同近年来从植物内生真菌中分离出含有多种生物活性的天然代谢产物包括生物碱、黄酮、醌类、环肽、萜类、甾体等化合物 这些化学成分可以表现出抗菌、抗虫、抗病毒等多种生物活性(.易晓华张亮等赵鑫等李慧媛等)植物内生真菌及其代谢产物在医药领域和农业病虫害生物防治方面均显示出重要的应用价值 吴启婷等()从白术()中分离出 株拟茎点霉属(.)内生真菌对白术根腐病病原菌(、.、.)有较强拮抗作用陆洁淼等()从西红花()中筛选出 株内生真菌对尖孢镰刀菌()有显著的拮抗作用其中抑制效果最好的菌株经鉴定为栓菌属真菌变色栓菌()黄 婷 等()从 白 屈 菜()中 分 离 出 刺 盘 孢 属()和镰刀菌属()内生真菌发现 其 代 谢 产 物 对 苹 果 炭 疽 菌()、玉米弯孢()、水稻稻瘟菌()、烟草赤星菌()和白菜黑斑菌(.)均表现出抗菌活性 等()的研究发现植物内生真菌提取物 对马铃薯晚疫病具有超高的促生长、促产量和诱导的抗病活性 由此可见植物内生真菌是抗植物真菌病害的生物源农药资源库 然而目前对植物内生真菌的研究大多集中在药用植物的内生真菌上而对于农作物内生真菌的研究却较少马铃薯()是继玉米、水稻、广 西 植 物 卷小麦之后的第四大粮食作物(马雪等邬时民)其营养价值高、粮菜兼用并且马铃薯面粉储备时间长是国家粮食安全的重要保障云南是我国西南地区主要的马铃薯产地马铃薯产业已成为云南贫困地区农民脱贫致富的重要支柱产业(卢丽丽等)马铃薯产量及品质受真菌病害影响很大目前主要使用化学农药对真菌病害进行防治由于化学药剂会对环境及人畜健康造成极大威胁因此生物防治已成为马铃薯真菌病害防控的研究热点 有研究发现马铃薯内生菌对真菌病原体(尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、禾谷镰刀菌、灰葡萄孢菌等)、细菌病原体(疮痂链霉菌、黄单孢菌)和内生毒素龙葵碱等有抑制作用(.王剑峰艾洪莲等郑旭张家欣)本研究对云南省 个地区马铃薯的根、茎、块茎中内生真菌进行分离纯化通过观察其微观形态和分析其 序列鉴定真菌并在此基础上对内生真菌的组成及相关多样性指数进行分析和比较拟探讨:()马铃薯内生真菌种群的多样性()马铃薯不同组织部位内生真菌的分离率和定殖率()不同地区内生真菌的优势菌属及不同部位内生真菌的多样性指数 本研究旨在丰富马铃薯内生真菌种群为进一步深入研究这些内生真菌及代谢产物对马铃薯真菌病害的抑制作用提供物质基础材料与方法.材料.供试植物马铃薯健康植株于 年 月采自云南省德宏芒市、大理喜洲和临沧双江 在盛花期采集完整植株包括地上部分及地下部分选取地上部分的主茎(冠层以下 及露出土层外的上 )及地下部分根(须状根)和块茎主根长约 茎长 块茎大小为 采集完毕后立即带回实验室进行后续马铃薯内生真菌的分离.试验培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基():成品培养基 培养基:酵母麦芽浸粉肉汤 琼脂加蒸馏水至 下灭菌 .内生真菌的分离纯化消毒:将马铃薯根、茎、块茎表面杂物用自来水反复冲洗 次后用无菌水冲洗干净沥干水分 将材料用无菌刀切成小段置于 无菌离心管中依次用 乙醇、无菌水和 配置好的 浸泡 期间不断震荡用无菌水冲洗 次 将经消毒后的组织置于无菌滤纸上吸干表面多余水分后将根、茎、块茎切成 的小块 为检验消毒是否彻底依次设置 组对照:()吸取 最后一次清洗组织块的无菌水至新鲜无菌 培养皿上用无菌涂布器涂布均匀()使用按压法将消毒的组织块放至新鲜无菌 平板上稍加按压放置 后移去组织块每组处理设置 个平行 将以上 种不同方法处理的对照置于 培养箱中进行培养观察有无菌落长出以明确组织块消毒是否彻底分离纯化:将准备好的小组织块采用组织块接种法(韦艳梅等)等距离放在含有氨苄青霉素()和卡拉霉素()的 培养皿中每个培养皿放置 个组织块待培养皿做好标记后倒置放于 生化培养箱中培养培养 左右期间不定期观察组织下方或边缘处是否有菌落出现根据菌落生长形态、颜色和时间等采用尖端菌丝挑取法(吴小平等)及时将单个菌落的新鲜菌丝挑出转接到 培养皿中倒置于 生化培养箱中培养观察 反复多次转接培养以获得形态一致的单一菌落即为纯化好的内生真菌菌株 将其转接到 培养皿中标记名称及转接日期放置在 培养箱中培养 平板没有污染待长满培养皿后于 冰箱保存.内生真菌的鉴定.形态学鉴定挑取少量各菌种菌丝体置于载玻片上添加乳酸酚棉兰染色液使菌丝染色同时使用接种针将菌丝挑拨松散后从一侧缓慢盖上盖玻片并在蔡司显微镜下观察记录显微镜下各菌株菌丝的形态特征 根据传统的形态学鉴定方法结合真菌鉴定手册(魏景超)和真菌的形态和分类(戴芳澜)等参考资料对内生真菌菌株进行初步鉴定.分子生物学鉴定用改良的 法对马铃薯内生真菌菌株进行 提取(张妙彬等)参考易天凤等()的方法利用内生真菌通用引 期田甲佳等:云南三个地区马铃薯内生真菌多样性研究物()和()对 真 菌 的 序列进行扩增 反应体系为 包括模板 、引物 、反应扩增程序:预变性 变性 退火 延伸共 个循环 延伸 将琼脂糖电泳检测合格后的目的产物送至上海生工生物工程有限公司进行测序登录(:/./)将 测序结果上传至 核酸序列数据库与已知序列进行比对选择相似性高的序列进行分析 利用 .软件采用邻接法()构建系统进化树.内生真菌数据分析.定殖率()定殖率 在培养基中分离出的内生真菌组织块数/所有组织块数(.)内生真菌的定殖率反映了宿主植物不同组织部位中受内生真菌侵染的程度.分离率()分离率 培养基中分离的内生真菌总株数/总分离组织块数(康茜)内生真菌的分离率反映了宿主植物不同组织部位中内生真菌存在的丰度.分离频率()指某一指定类型真菌的菌株数量占分离培养的内生真菌菌株数量的百分率用于比较和判断优势菌群(柴新义等).香农多样性指数()反映了分离的内生真菌中的物种丰富度 香农多样性指数可用以下公式计算即式中:指某种植物或组织中内生真菌种类的总数表示植物组织中分离出来的某一种内生真菌的株数占分离得到的总菌株数的百分数(.)结果与分析.马铃薯内生真菌的分离.不同地区马铃薯内生真菌分离情况不同组织部位间马铃薯内生真菌的分离数量有一定差异性利用组织块分离法和尖端菌丝挑取法从云南省德宏芒市、大理喜洲、临沧双江 个地区马铃薯组织样品中共分离出 株内生真菌(表)其中从来自德宏芒市的马铃薯样品中分离出 株、从来自大理喜洲的马铃薯样品中分离出 株、从来自临沧双江的马铃薯样品中分离出 株 分 别 占 总 分 离 株 数 的.、.、.表 马铃薯内生真菌的分离情况 来源部位分离株数 总菌株数 占比()德宏芒市 根.茎块茎大理喜洲 根.茎块茎临沧双江 根.茎块茎.内生真菌定殖率和分离率分离得到的 株内生真菌中有 株来自根部、株来自茎部、株来自块茎(表)由表 可知根、茎、块茎中内生真菌的定殖率分别为.、.、.表明块茎中内生真菌定殖率最高 马铃薯根部、茎部和块茎中内生真菌的分离率分别为.、.、.表明根部分离率最高马铃薯组织中内生真菌总定殖率和总分离率分别为.和.马铃薯内生真菌的鉴定.内生真菌的分子生物学鉴定挑选出测序成功的 株不同种的内生真菌的 序列上传至 数据库中进行核酸序列 比对选择和广 西 植 物 卷表 马铃薯不同组织部位内生真菌的分离率和定殖率 项目根茎块茎总计组织块数 长菌块数 内生真菌数 定殖率 ().分离率 ().测序序列相关性比较高的序列进行分析表 结果表明这 种内生真菌大部分属于子囊菌门和担子菌门涵盖 个目 个属并且 序列和 相似性均在 以上 基于内生真菌 序列所得的 株菌株的系统进化树如图 所示.内生真菌的形态学鉴定通过形态学观察(菌落观察和显微镜下菌丝体观察)(图)及分子生物学技术()鉴定 株内生真菌多为子囊菌门和担子菌门包含 属 种(表)分别为构巢曲 霉()、褶 皱 裸 孢 壳()、局 限 青 霉()、长极链格孢()、尖孢镰刀菌()、接骨木镰 刀 菌()、哈 茨 木 霉()、()、()、毛韧革菌()、()、()、()和 ()分别将其命名为.内生真菌的组成分析通过形态学观察(菌落观察和显微镜下菌丝体观察)及分子生物学技术()鉴定 株马铃薯内生真菌包含 属 种(图)分别为曲霉属()、裸孢壳属()、青 霉 属()、链 格 孢 属()、镰 刀 菌 属()、木 霉 属()、须壳孢属()、小不 整 球 壳 属()、韧 革 菌 属()、刺盘孢属()、脆柄菇属()、附球菌属()和尾孢菌属()其中镰刀菌属真菌占.、青霉属占.、曲霉属占.不同地区内生真菌优势种群分析从不同地区、不同组织部位中分离得到的内生真菌在种类和数量上存在明显区别(图)德宏芒市的马铃薯样品中内生真菌优势属为青霉属和曲霉属分离频率为.和.分离于根部的内生真菌优势属为曲霉属 为.分离于茎部的内生真菌优势属为青霉属和链格孢属 均为.分离于块茎的内生真菌优势属为青霉属 为.(图:)大理喜洲的马铃薯样品中内生真菌优势属为裸孢壳属和刺盘孢属分离频率为.和.分离于根部的内生真菌优势属为裸孢壳属 为.分离于茎部的内生真菌优势属为附球菌属 为.分离于块茎的内生真菌优势属为刺盘孢属 为.(图:)临沧双江的马铃薯样品中内生真菌优势属为韧革菌属分离频率为.分离于根部的内生真菌优势属为韧革菌属 为.分离于 茎 部 的 内 生 真 菌 优 势 属 为 附 球 菌 属 为.分离于块茎的内生真菌优势属为小不整球壳属 为.(图:)此外研究还发现脆柄菇属内生真菌仅能从根部分离得到在根部的分离频率为.不同部位内生真菌的多样性指数分析马铃薯不同组织部位中的内生真菌多样性指数()各不相同且呈现出一定规律(表)由表 可知德宏芒市马铃薯样品各组织中内生真菌多样性指数表现为 根(.)块茎(.)茎(.)大理喜洲马铃薯样品各组织中内生真菌多样性指数大小表现为 根(.)块茎(.)茎(.)临沧双江马铃薯样品中各组织内生真菌多样性指数大小表现为 根(.)块茎(.)茎(.)由此可见马铃薯根部内生真菌的多样性指数高于茎部和块茎 期田甲佳等:云南三个地区马铃薯内生真菌多样性研究 节间数字代表 支持值 代表遗传距离 为本研究所分离的菌株 其余的序列均来自 数据库 .图 基于内生真菌 序列从马铃薯样品中分离出的 株菌株的系统进化树.讨论与结论受真菌生活环境的影响一些真菌的菌落形态特征十分相似采用传统形态学分类方法对内生真菌进行鉴定和分类存在很大难度要求鉴定者有相当丰富的经验 因此观察真菌的生长环境、对比真菌菌落菌丝形态以及将显微结构特点与现代分子生物学技术相结合的方法是更为准确可靠的鉴定手段 本研究从云南 个地区(德宏芒市、大理喜洲、临沧双江)的马铃薯根、茎和块茎中共分离到内生真菌 株使用传统分类学结合 序列分析的方法将其归为 属 种多为子囊菌门和担子菌门优势属为镰刀菌属和青霉属其他菌属分别为曲霉属、裸孢壳属、链格孢属、木霉属、须壳孢属、小不整球壳属、韧革菌属、刺盘孢属、脆柄菇属、附球菌属和尾孢菌属 艾红莲等()从马铃薯内生真菌中分离到链格孢属、镰广 西 植 物 卷表 株代表菌株的 序列 比对结果 分离菌株 最大相似菌株 登录号 .相似性()曲霉属 .裸孢壳属 .局限青霉 .长极链格孢 .尖孢镰刀菌 .接骨木镰刀菌.哈茨木霉 .毛韧革菌 .尾孢菌属 .表 马铃薯内生真菌菌落形态特征 分离菌株 主要菌落形态特征 主要菌丝形态特征 种属构巢曲霉 菌落圆形生长较快质地较硬浅绿色菌落表面为绒状 菌丝体较发达产生大量闭囊壳时会出现黄褐色 菌丝细长有分支分生孢子头部呈短柱型 子囊菌门散囊菌纲散囊菌目曲霉科曲霉属 褶皱裸孢壳 菌落圆形具有辐射状沟纹菌丝体密集菌落边缘整齐且呈暗草绿色质地紧密无外渗液体 子囊近球形菌丝细长有分支子囊孢子呈双凸镜状分生孢子不明显 子囊菌门散囊菌纲散囊菌目曲霉科裸孢壳属 局限青霉 菌落多圆形起初为白色生长后期变为青灰色菌丝体较发达呈绒状边缘部分整齐在菌落上有时出现白色小突起 菌丝分支多有隔有少量突起分生孢子梗直立 子囊菌门散囊菌纲散囊菌目曲霉科青霉属 长极链格孢 菌落不规则圆形菌丝发达生长迅速菌落为棉絮状边缘菌丝纤维丝状颜色为白色培养基呈红褐色 菌丝较为密集长絮状 子囊菌门座囊菌纲格孢菌目格孢菌科链格孢属 期田甲佳等:云南三个地区马铃薯内生真菌多样性研究续表 分离菌株 主要菌落形态特征 主要菌丝形态特征 种属尖孢镰刀菌 菌落圆形菌丝为白色絮状质地较紧密生长快速整体菌落颜色为淡红色或者紫色 菌丝分支多且细长小的分生孢子呈现卵圆形 子囊菌门粪壳菌纲肉座菌目丛赤壳科镰刀菌属 接骨木镰刀菌.菌落圆形菌丝生长迅速颜色为淡粉红色气生菌丝丛呈现卷毛状 菌丝具有分支分生孢子形状多样有纺锤形、披针形等 .子囊菌门粪壳菌纲肉座菌目丛赤壳科镰刀菌属 哈茨木霉 菌落圆形菌丝初期为白色后期为灰色向培养皿四周扩散生长待孢子生长后菌落变为绿色菌落边缘有白色条带 菌丝细长有大量分生孢子分生孢子单生 子囊菌门粪壳菌纲纲肉座菌目肉座菌科木霉属 菌落不规则圆形质地紧密没有外渗液菌丝暗灰色菌落边缘白色菌丝体为绒毡状 菌丝具有较多分支菌丝体上有明显疣突 子囊菌门座囊菌纲格孢菌目格孢菌科须壳孢属 菌落圆形生长较慢菌丝乳白色为绒毡状培养基上有外渗液培养基无可溶性色素 菌丝有分支分生孢子较多簇生或者单生 子囊菌门粪壳菌纲小丛壳目小不整球壳科小不整球壳属 毛韧革菌 菌落圆形菌丝白色至淡黄色生长较快气生菌丝绒毛状质地疏松 菌丝细长分支较多担孢子为圆柱形 担子菌门伞菌纲红菇目韧革菌科韧革菌属 菌落圆形菌丝绒毡或絮状菌落生长较慢质地较密无外渗液菌落白色 菌丝分支多有隔分生孢子排列较疏松无色 子囊菌门粪壳菌纲小丛壳目小丛壳科刺盘孢属 菌落圆形生长较慢菌丝短而密集带有浅黄色无外渗液质地较密菌丝绒毛状 菌丝分支多有隔在菌丝上有明显凸起菌丝体顶端钝圆 担子菌门伞菌纲伞菌目鬼伞科脆柄菇属 菌落圆形丝绒垫状菌丝生长旺盛菌丝初期为白色后期变为浅红至黄色培养基颜色变黄无外渗液出现 菌丝呈线形有隔菌丝上着生垫状孢子座 子囊菌门座囊菌纲格孢菌目亚隔孢壳科附球菌属 菌落圆形有裂痕生长缓慢质地较密无外渗液菌丝为白色培养基无色 菌丝密集有隔分生孢子圆柱形 子囊菌门、座囊菌纲、球腔菌目、球腔菌科、尾孢菌属 广 西 植 物 卷图 马铃薯内生真菌的菌落形态()和菌丝体形态().()()图 从马铃薯中分离出的内生真菌的组成比例.刀菌属和附球菌属 谢佳伟等()从云南的 株烟草中分离出内生真菌 株其中优势菌属也包含镰刀菌属李盼盼等()从湖北的健康烟草中共分离到 株内生真菌镰刀菌属为优势菌属说明镰刀菌属广泛存在于茄科植物中此外 本研究中分离鉴定的褶皱裸孢壳、接骨木镰 期田甲佳等:云南三个地区马铃薯内生真菌多样性研究图 德宏芒市()、大理喜洲()和临沧双江()马铃薯样品中各组织内生真菌的分离频率.()()()表 马铃薯不同部位内生真菌的香农多样性指数 ()来源根茎块茎德宏芒市.大理喜洲.临沧双江.刀菌、毛 韧 革 菌、和 种内生真菌均为首次从马铃薯植株中分离得到本研究采用组织块分离法共分离了 块马铃薯组织块长菌的组织块为 块总定殖率为对于马铃薯内生真菌总定殖率尚未见有学者报道而李晓娜等()对于橡胶树中内生真菌的研究显示总定殖率为.结果高于本研究这可能与材料本身的科属有关马铃薯为茄科一年生草本植物 橡胶树为大戟科多年生木本植物由于马铃薯生长周期较短外界的微生物侵染率低导致其定殖率较低而橡胶树生长周期长外界的微生物侵染率高因此它的定殖率高从不同组织的分离数量来看块茎定殖率最高说明马铃薯块茎中受内生真菌侵染度最高这可能与地下部分的微生物活动及养分有关联根部分离率最高说明马铃薯根部分离得到的内生真菌属丰度最高这可能与土壤中微生物含量和种类有关系 不同地区(来源)及不同组织中内生真菌多样性指数趋势均为 根块茎茎这可能是茎部采自马铃薯地上部分根部和块茎采自马铃薯地下部分而空气中内生真菌感染率要比土壤中内生真菌感染率低 李盼盼等()对湖北烟草不同组织中内生真菌多样性表现的研究结果为茎叶根与本结果相反说明不同地区不同物种植物中内生真菌的组织偏好性不一样本研究发现各组织中分布的内生真菌种类差别较大德宏芒市马铃薯样品中优势菌为青霉菌大理喜洲马铃薯样品中优势菌为翘孢霉菌临沧双江马铃薯样品中优势菌为韧革菌 此外一些常见的内生真菌(如链格孢属、镰刀菌属)在茎和根中均能分离得到而 仅能从根部分离到韧革菌属不能在茎中分离到 刘宏玉等()对 烟 草 的 研 究 发 现 叶 点 霉 属()只分布在其叶中而 不能从叶中分离得到说明内生真菌具有组织的专一性和特异性(.)本研究从云南省 个地区的马铃薯样品中分离得到 株内生真菌其中 种内生真菌为首次从马铃薯植株中分离得到丰富了马铃薯内生真菌种群为马铃薯内生真菌多样性的研究提供了准确的参考数据 后期将进一步进行内生真菌拮抗马铃薯病原真菌的活性筛选并对其次生代广 西 植 物 卷谢产物进行化学成分和抗菌活性研究期望获得结构新颖的高活性物质为马铃薯真菌病害的生物防治提供科学基础和依据参考文献:.()():.艾洪莲 杨曼思 何隽 等.马铃薯内生真菌的多样性及抑菌活性研究.中南民族大学学报(自然科学版)():.:.():.柴新义 钟媛媛.青檀果内生真菌菌群的组成及多样性.应用生态学报():.:.戴芳澜.真菌的形态和分类.北京:科学出版社.():.黄婷 解伟 刘小东 等.白屈菜内生真菌的分离鉴定及其代谢产物的抗真菌活性研究.中国中药杂志():.():.:.康茜.两株华南毛蕨内生真菌及苦玄参抗菌活性成分的研究.广州:广东药科大学.():.():.李慧媛 岳婧怡 王 举 涛 等.植 物 内 生 真 菌 次生代谢产物研究.天然产物研究与开发():.():.李盼盼 袁晓龙 李金海 等.湖北烟草内生真菌生物多样性和种群结构分析.微生物学报():.():.李 晓 娜 王 赟 李 增 平 等.橡胶树内生真菌分离方法研究.热带农业科学():.():.刘宏玉 金慧清 王佳莹 等.烟草内生真菌多样性和种群结构.菌物学报():.():.陆洁淼 张家豪 明乾良 等.西红花球茎腐烂病拮抗真菌的筛选、鉴定及抑菌机制.中草药():.():.卢丽丽 包丽仙 刘凌云 等.云南省马铃薯产业及贸易分析.作物研究():.():.马雪 刁小琴 关海宁 等.窖藏马铃薯酚类物质及相关酶活性的变化与自然休眠的关系.山西农业科学():.:.:.():.任静.药用植物内生真菌及其代谢产物研究进展.农业与技术():.():.():.隋丽 万婷玉 路杨 等.内生真菌对植物促生、抗逆作用研究进展.中国生物防治学报():.期田甲佳等:云南三个地区马铃薯内生真菌多样性研究 .:.孙建慧.五种植物内生真菌的分离纯化及生物活性研究.兰州:兰州理工大学.:.王剑峰.马铃薯内生菌的分离纯化及其对马铃薯生长发育的影响.兰州:兰州理工大学.:.魏景超.真菌鉴定手册.上海:上海科学技术出版社.():.韦艳梅 周雅琴 李力 等.白及内生真菌多样性研究.广西植物():.():.吴启婷任航洁 秦晔 等.白术内生真菌 对 种镰刀菌的拮抗作用及其 分子鉴定.浙江农业科学():.“”.():.邬时民.“地下苹果”土豆.农产品加工():.():.吴小平 王丽 谢宝贵 等.香菇菌株的脱毒研究.中国农学通报():.()():.谢 佳 伟 彭 小 祠 陈 小 巧 等.云烟 内生真菌多样性及其促生作用评估.云南农业大学学报(自然科学版)():.():.易天凤 吴友根 于靖 等.海南广藿香内生真菌分离鉴定及拮抗菌株筛选.热带作物学报():.():.易晓华.植物内生真菌次生代谢产物研究进展.中国农学通报():.:.张家欣.马铃薯内生菌的分离鉴定及 抗菌肽的筛选.武汉:华中农业大学.():.张亮 桑曼曼 郭小伟 等.杜仲内生真菌的多样性分析及其抗植物病原真菌的活性.生物资源():.():.张妙彬 潘丽晶 范干群 等.富含多糖的转基因石斛基因组 提取方法.分子植物育种():.()():.赵鑫 赵丽丽 王普昶 等.内生真菌和丛枝菌根真菌提高植物逆境适应性研究进展.云南大学学报(自然科学版)():.():.:.郑旭.马铃薯内生菌的分离鉴定及抑龙葵碱功能研究.北京:中国农业科学院.(责任编辑 蒋巧媛 王登惠)广 西 植 物 卷