血小板计数减低1288例标本的复检、分析与纠正_翟鸿烨.pdf

DOI:10.13276/j.issn.2097-1656.2023.03.011临床医学血小板计数减低 1 288 例标本的复检、分析与纠正翟鸿烨，袁晖，刘茜，郭维，杨肖飞，王婕妤，黄婧，张利军(空军军医大学唐都医院检验科，陕西 西安 710038)基金项目:国家自然科学基金面上项目(81670792，82070298)作者简介:翟鸿烨，本科，主管技师，从事临床血液学检验研究，Tel:[phone]，E-mail:243094661 通信作者:黄婧，Tel:[phone]，E-mail:afmu ;张利军，Tel:[phone]，E-mail:2385498552 网络首发:https:/ 目的以推片复检方式对实验室血小板(PLT)计数降低假阳性案例进行分类、鉴别，并探索相关技术调整和纠正，为患者提供更为准确的检测结果。方法选取唐都医院 2021 年 1 月至 12 月的血常规标本进行分析，对仪器检测 PLT 80 109/L 和 80 109/LPLT 100 109/L 合并仪器提示 PLT 凝集的标本进行推片复检，在显微镜下观察 PLT 的形态及分布情况。对 190 例 PLT 计数假性降低标本采用 PLT-I、PLT-F 及仪器旁采集无抗凝剂管等方法进行了进一步对比实验和分析。结果2021 年 1 月至 12 月的血常规标本中，推片复检的标本1 288 例，其中 PLT 真性减低的标本 1 098 例，占比 85.25%;观察到 PLT 聚集的标本 72 例(采集不当的标本2 例，证实为抗凝剂依赖性 PLT 假性减低的标本70 例，包含 PLT 卫星现象1 例)，占比5.59%;查见大 PLT 的标本118 例，占比9.16%。各类 PLT 计数降低标本的对比和处理结果与人工镜检结果相符。结论血细胞分析仪检测 PLT 计数受到多种因素的影响而出现假性降低，应严格执行实验室复检规则，采用适当技术和方法予以处理和纠正，并持续改进，以保证检验结果的准确性。关键词 血小板计数;假性血小板减少;血涂片复检 中图分类号 446.11 文献标志码 Aeexamination，analysis and correction of 1 288 cases with decreased platelet countZHAI Hongye，YUAN Hui，LIU Qian，GUO Wei，YANG Xiaofei，WANG Jieyu，HUANG Jing，ZHANG LijunDepartment of Clinical Laboratory，Tangdu Hospital，Air Force Medical University，Xian 710038，China Abstract ObjectiveTo classify and identify the false-positive cases of decreased platelet(PLT)count in laboratoryby means of blood smear review，and to explore relevant technical adjustment and correction，so as to provide more accuratetest results for patients.MethodsThe routine blood samples from Tangdu Hospital from January to December 2021 wereselected for analysis.The samples with PLT 80 109/L and 80 109/LPLT 100 109/L combined with instrumentindicating PLT agglutination were reexamined by blood smear，and the morphology and distribution of PLT were observedunder microscope.A total of 190 samples with false decreased PLT count were analyzed by PLT-I，PLT-F and non-anticoagulant tube.esultsAmong the routine blood samples from January to December 2021，1 288 routine bloodsamples were reexamined by blood smear，among which 1 098 cases had decreased PLT authenticity，accounting for85.25%.PLT aggregation was observed in 72 cases(2 cases were improperly collected，70 cases were confirmed to beanticoagulant dependent pseudothrombocytopenia，including 1 case of PLT satellite phenomenon)，accounting for 5.59%.Large PLT was found in 118 cases，accounting for 9.16%.The comparison and treatment results of various types ofspecimens with decreased PLT count were consistent with the results of manual microscopic examination.ConclusionThefalse reduction of PLT count detected by blood cell analyzer is affected by many factors.The rules of laboratoryreexamination should be strictly implemented，appropriate techniques and methods should be adopted to deal with andcorrect，and continuous improvement should be made to ensure the accuracy of the test results.Key words platelet count;pseudothrombocytopenia;blood smear review252http:J Air Force Med UnivVol.44 No.32023在临床中，当患者血小板(platelet，PLT)计数20 109/L 时，则需要对患者进行 PLT 输注，然而现阶段受各种因素的影响如输血价格过高、患者家庭经济承受能力有限等，欧美等国家相继提出将 PLT 输血阈值从20 109/L 降低至10 109/L，甚至更低1 2。因此，为患者提供更为准确的 PLT 检测结果显得尤为重要。临床检验工作发现，由各种因素导致的假性PLT 降低并不罕见。包括大 PLT 及乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid，EDTA)依赖性假性 PLT减少导致的实验室检验结果失真并影响临床诊治已经得到广泛关注。如何对这些 PLT 假性降低进行对比、辨别和纠正成为提高 PLT 检验质量的关键。因此，结合实验室仪器设备、技术条件和环境，利用推片复检及相关实验技术方法对 PLT 假性降低案例进行对比、分析和筛选，研究其失真原因并探讨纠正方案对提高临床检验质量具有重要作用和意义。1资料与方法1.1一般资料选取唐都医院2021 年1 月至12 月 EDTA-k2 抗凝、触发 PLT 相关复检规则并进行推片复检的血常规标本1 288 例(其中传染科728 例，血液科325 例，肿瘤科125 例，风湿免疫科 52 例，重症监护室 22 例，心内科 20 例，肾内科 12 例，儿科 4 例)，在显微镜下确认复核 PLT 计数并观察 PLT 形态及分布情况。PLT 减低推片复检标准:PLT 80 109/L;80 109/LPLT 100 109/L 合并仪器报警提示 PLT 凝集。推片复检所用仪器为日本 Sysmex XN-9000 全自动血细胞分析仪、原装配套的室内质控品及试剂、日本 SysmexSP-10 推片机和日本尼康 E100 显微镜。1.2检测方法1.2.1全自动血细胞分析仪阻抗法PLT 计数记为PLT-I，依据该技术特点，主要用于检测和筛查 PLT 形态正常并散在分布，真性 PLT 减少的案例。1.2.2全自动血细胞分析仪核酸荧光染色法PLT 计数记为 PLT-F，核酸荧光染色法可对大 PLT 及 PLT 计数假性减低案例进行检测和筛查。1.2.3PLT 计数人工镜检法用 SYSMEX SP-10 推染片装置制成血涂片，血涂片要求厚薄适中、头体尾分明，血膜边缘整齐，油镜下观察红细胞与 PLT 的数量及形态(有无红细胞碎片、小红细胞、红细胞大小不一、PLT 聚集、大 PLT、巨大 PLT 等)，并估计 PLT数量(体尾交界处红细胞分布均匀的血膜部位平均每油镜视野的 PLT 数乘以 10 大约相当于每升血液的PLT 数)。1.2.4无抗凝剂管 PLT 计数对 70 例 PLT 凝集案例，为了减少抗凝剂对 PLT 检测的干扰作用，实验中采用仪器旁采集无抗凝剂管并立即上机检测的方法，并立即涂片染色在显微镜下确认无 PLT 聚集状态，以得到正确检测数据，纠正 PLT 计数假性降低的偏差。2结果2.1推片复检结果2021 年1 月至12 月的血常规标本中，PLT 减低推片复检的标本共有1 288 例，其中PLT 真性减低的标本1 098 例，占比 85.25%;查见 PLT 聚集的标本 72 例 采集不当 2 例，EDTA 依赖性假性 PLT 减少(EDTA-dependent pseudothrombocytopenia，EDTA-PTCP)70 例并包含 PLT 卫星现象 1 例，占比 5.59%;查见大PLT 的标本 118 例，占比 9.16%。2.2PLT 计数复检对比结果分析与处理1 098 例标本推片复检后 PLT 形态正常并散在分布，PLT-I 检测结果与人工镜检法结果符合，以 PLT-I的检测结果作为最终报告结果(图 1A)。118 例标本推片复检后查见大 PLT，PLT 形态有所差异，PLT-F检测结果与人工镜检法结果符合，使用 PLT-F 检测结果作为最终报告结果(图 1B)。72 例标本中查见 PLT聚集现象，其中有 2 例重新采集后 PLT 计数正常且稳定，重新推片后也未查见 PLT 聚集现象，是采血不畅导致的 PLT 聚集现象(图 1C)。剩余的 70 例重新采集后仍有 PLT 聚集现象并包含 PLT 卫星现象 1 例(图 1D)。对这 70 例标本进行仪器旁采集无抗凝剂管、EDTA 抗凝管、枸橼酸钠抗凝管、肝素抗凝管检测，以无抗凝剂管检测管检测 PLT 计数作为报告结果，对其他 3 种抗凝管分别制备血涂片进行观察、鉴别和相应的处理，显微镜下观察血涂片上 PLT 的分布情况，70 例标本中，EDTA 抗凝管均存在 PLT 聚集现象，枸橼酸钠抗凝管有 12 例存在 PLT 聚集现象，肝素抗凝管仅有 5 例存在 PLT 聚集现象。3讨论全自动血细胞分析仪不断地更新换代，检测速度更快、准确性更高，为临床工作带来了许多便捷之处，但 PLT 因体积小、无色、极易产生黏附，对其进行准确计数较为困难，因此还需要检验人员对一些特殊情况进行甄别，以得出更为准确的检测结果。352空军军医大学学报2023 年 3 月第 44 卷第 3 期http:A:正常 PLT 分布及形态;B:大 PLT 形态;C:PLT 聚集;D:PLT 卫星现象。图 1PLT 形态在 1 288 例 PLT 计数降低标本中，推片复检后PLT 真性减低 1 098 例(85.25%)，假性减低 190 例(14.75%)，其中 118 例是由于出现了大 PLT 而导致PLT 计数假性减低。大 PLT 多出现在白血病、肿瘤以及肝病患者血液中3。目前，临床血液分析仪检测PLT 大多数采用 PLT-I 原理，即根据血细胞相对非导电的性质，悬浮于电解质溶液中的 PLT 颗粒在通过计数小孔时引起电阻的变化，以此为基础对 PLT 进行计数。该方法具有快速、重复性好的特点，但易受细胞碎片及小红细胞的干扰，导致 PLT 计数假性增高。PLT-F 是对 PLT 核酸成分进行荧光染色，采用流式细胞术检测前向散射光和侧向荧光强度，分别检测细胞大小和细胞内容物及颗粒，根据检测数据绘制出二维散点图进行计数，对非 PLT 颗粒具有较强的抗干扰能力，可较好地区分 PLT、红细胞、白细胞和碎片各组分，准确对 PLT 进行计数4。血细胞分析仪认为体积为(2 30)1015L 的颗粒是 PLT，没有把大 PLT 计数在内，从而引起PLT 计数的假性减少。这种影响因素可用血细胞分析仪的荧光 PLT 通道即 PLT-F 通道排除。剩余的假性减低的 72 例 PLT 标本中，2 例是由于采血不畅的原因导致 PLT 假性减低，这类标本重新采集后即可解决，另外 70 例均是由 EDTA 抗凝剂引起的，即 EDTA-PTCP。EDTA 由于其对血细胞形态影响较小，适用于血液学检查，尤其是 PLT 计数，被国际血液学标准化委员会推荐为血细胞计数的一种抗凝剂，然而 EDTA 偶尔能引起 PLT 聚集而使血液分析仪不能正确辨别，使 PLT 测得值显著低于真实值5。其发生率虽不高，但在临床上极易引起误诊，干扰正确治疗，给患者造成经济损失和心理上的创伤。EDTA-PTCP的发生机制目前还不甚明确，目前普遍认为可能与EDTA 诱导 PLT 膜糖蛋白 GPb/a 复合物中隐藏抗原的暴露或对其进行修饰，导致自身抗体的产生有关。此外，抗磷脂抗体的产生以及药物等因素也被认为可能与 EDTA-PTCP 的发生有关6。PLT 卫星现象，即 PLT 黏附围绕于中性粒细胞(或偶尔黏附于单核细胞)的现象。是因为 EDTA 和免疫球蛋白相互作用，非特异性结合 PLT，被抗体包被的 PLT 与中性粒细胞结合导致 PLT 计数假性减少。此时 PLT 和中性粒细胞形态和功能均正常。这种现象目前有以下几种解决方法:更换抗凝剂法(枸橼酸钠或肝素)。既往很多报道都显示这种方法能有效解决 EDTA 依赖性的假性PLT 减少，但在实践中我们发现枸橼酸钠和肝素同样也会引起 PLT 聚集导致 PLT 假性减少。阿米卡星法。梁枫等7 认为阿米卡星可以有效解聚 EDTA-PTCP样本，这种方法可以避免患者二次采血，是它的优点，但此种方法目前在实践上对加入阿米卡星的时间和用量并没有标准化，并且也不能保证能解聚所有的EDTA 引起的 PLT 聚集，因此在临床上较少使用。预稀释法。XN-9000 血细胞分析仪的预稀释模式的作用原理是稀释液在检测过程中为血细胞提供稳定的溶液环境，稀释血液样本，形成鞘流，并提供电导环境。同时其能够结合阻抗法、比色法、激光散射法及荧光染色的流式细胞技术进行细胞分类计数。稀释液因其本身不含任何抗凝剂，可以排除抗凝剂对 PLT 的干扰8。此种方法可有效解决 EDTA 引起的 PLT 聚集，但需要患者重新采集末梢血，在临床实践中比较繁琐，适用性不强。PLT 手工计数法。这种方法也可有效解决抗凝剂导致的假性 PLT 减少的问题，但其操作步骤繁琐，对人员要求高，因此在临床上也不常使用。以上 4 种方法都各有其优缺点，目前我们实验室采用的是在仪器旁重新采集不加任何抗凝剂的静脉血立即上机检测，此方法操作简便，并且能有效排除抗凝剂的干扰，保证检测结果的准确性。近年来用流式细胞术定量检测 PLT 数量已有报道。王建中等9 用 3 种流式检测方式测定 PLT 浓度，用绝对计数管检测 PLT 效果最优，但是易受红细胞碎片干扰。黎庆梅等10 通过实验表明，用流式方法检测109/L 1011/L PLT，其检测能力优于电阻抗法。朱捷等11 用流式细胞术检测细胞培养上清液中的 PLT，同时探索了该检测方法在检测极低 PLT 浓度时的正确度和精密度，具一定的创新性。就目前国内外的研究来看，(下转第 261 页)452http:J Air Force Med UnivVol.44 No.32023综上所述，甘草泻心汤治疗 BD 的机制可能是通过槲皮素、山柰酚、黄芩素和柚皮素等活性成分作用于 STAT3、TNF、IL-6、IL-1 等靶点，来调节细胞因子产生、氧化应激、炎症生成等过程，并且与 Th17细胞分化、IL-17、TNF 等信号通路有关。【参考文献】1何庭艳，杨军.白塞病诊治进展J 中国实用儿科杂志，2020，35(4):284288.2侯学敏.自拟狐惑方治疗白塞氏病(脾虚血瘀、湿热内蕴型)的临床研究D.河南中医学院，2015.3GECO A，DE VIGILIO A，ALLI M，et al.Behcets disease:new insights into pathophysiology，clinical features and treatmentoptions J Autoimmun ev，2018，17(6):567575.4SUN M，YANG P，YANG Y，et al.Upregulated IAK1 and IAK4promoting the production of IFN-and IL-17 in Behcets diseaseJ Int Ophthalmol，2018，38(5):19471953.5CHI W，ZHU X，YANG P，et al.Upregulated IL-23 and IL-17 inBehet patients with active uveitisJ Invest Ophthalmol Vis Sci，2008，49(7):30583064.6陈永，王慧，管剑龙.甘草泻心汤治疗白塞病的近 10 年研究概览J 时珍国医国药，2018，29(2):412414.7向泽栋，李震，张兵，等.基于网络药理学和分子对接技术探讨经典名方泻白散治疗肺炎的潜在作用机制J 世界科学技术 中医药现代化，2021，23(6):18121820.8姚运秀，贺桢翔，刘晓凤，等.基于网络药理学和分子对接技术的抗病毒颗粒治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在物质基础研究J 中草药，2020，51(6):13861396.9WANG Y，BYANT S H，CHENG T，et al.PubChem BioAssay:2017 update J Nucleic Acids es，2017，45(1):955963.10 徐森楠，庄莉，翟园园，等.基于网络药理学研究二至丸防治骨质疏松症的物质基础与作用机制 J 中国药学杂志，2018，53(22):19131920.11 张励，庄曾渊.庄曾渊应用清热法治疗白塞氏病经验J中国中医眼科杂志，2010，20(6):334336.12 ZHOU Z Y，CHEN S L，SHEN N，et al.Cytokines andBehcetsdisease J Autoimmun ev，2012，11(10):699704.13 SI T L，LIU Q，EN Y F，et al.Enhanced anti-inflammatory effectsof DHA and quercetin in lipopolysaccharide-induced AW264.7macrophages by inhibiting NF-kappaB and MAPK activation J MolMed ep，2016，14(1):499508.14 LIN F，LUO X，TSUN A，et al.Kaempferol enhances the suppressivefunction of Treg cells by inhibiting FOXP3 phosphorylationJ IntImmunopharmacol，2015，28(2):859865.15 曾文峰，张发云，杜刚军，等.柚皮素:新一代免疫调节剂J 生物化学与生物物理进展，2018，45(9):915925.16 柯杨，程韵枫.STAT3 蛋白调节 Th17 细胞的分化及其与自身免疫相关性血液疾病的关系 J 中国临床医学，2016，23(5):662666.17 AKMAN-DEMI G，TUZUN E，ICOZ S，et al.Interleukin-6 inneuro-Behets disease:association with disease subsets and long-term outcomeJ Cytokine，2008，44(3):373376.18 EMMI G，SILVESTI E，BELLA C D，et al.Cytotoxic Th1 andTh17 cells infiltrate the intestinal mucosa of Behcet patients andexhibit high levels of TNF-in early phases of the diseaseJMedicine(Baltimore)，2016，95(49):e5516.19 林玮，张文.贝赫切特综合征病因和发病机制J 中华临床免疫和变态反应杂志，2015，9(1):6772.20 NANKE Y，YAGO T，KOTAKE S.The role of Th17 cells in thepathogenesis of Behcets disease J J Clin Med，2017，6(7):74.21 丁立珉，孙万邦.细胞因子在类风湿关节炎发病机制中作用的研究进展J 中国当代医药，2012，19(7):1214.22 ATALAY A，AIKAN S，OZTUK O，et al.The IL-8 genepolymorphisms in Beh ets disease observed in Denizli Province ofturkeyJ Immunol Invest，2016，45(4):298311.(2021-11-19 收稿;2022-05-05 修回)(编辑:刘佳倩)(上接第 254 页)更可靠、稳定的 PLT 检测新技术仍需深入研究和开发。依据我院实验室现有技术和条件，在研究成果基础上开展特色性 PLT 计数检测及假性 PLT 减少的监控和纠正实属必要。因此，用 PLT-I、PLT-F 及仪器旁采集无抗凝剂管等方法分别处理和纠正真性 PLT 降低、大 PLT 性 PLT 降低及抗凝剂导致的 PLT 降低作为目前实用的技术和方法不失为最佳选择。同时，还要进一步深入研究和探讨新技术、新方法，将 PLT 实验室检测的准确性提高到新的水平。【参考文献】1WADA A，TAKAGI Y，KONO M，et al.Accuracy of a new plateletcount system(PLT-F)depends on the staining property of itsreagents J PLoS One，2015，10(10):e0141311.2徐卫益，陈保德.阻抗法与镜检法检测低值血小板比较分析及对临床血小板输血判断的影响J 实验与检验医学，2011，29(4):363365.3孙育.96 例血细胞分析仪检测血小板计数假性减少原因分析与纠正 J 医学综述，2013，19(21):40214023.4张泽.MCV 对不同方法血小板计数结果的影响 J 检验医学与临床，2021，18(1):9092.5黄小红.EDTA 依赖性血小板假性减少的分析与处理J实验与检验医学，2018，36(1):4648.6欧洋华，江咏梅，张鸽.乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症发病机制的研究进展 J 医学综述，2014，20(11):19421944.7梁枫，孙奋勇.EDTA-K2 在血液分析仪血小板检测中的应用及阿米卡星对 EDTA-K2 相关的假性血小板减少症的纠正作用J 第二军医大学学报，2017，38(3):389392.8林佩宜，杨静，林艳芬，等.纠正 EDTA 依赖性假性血小板减少的方法学比较和分析J.中华临床实验室管理电子杂志，2021，9(1):4249.9王建中，屈晨雪.三种流式细胞术计数血小板方法的比较研究 J 中华检验医学杂志，2003，26(1):812.10 黎庆梅，梁彩云，江雪霞，等.应用流式细胞术进行血小板计数的探讨J 实用医技杂志，2019，26(4):416417.11 朱捷，方佩琪，潘柏申，等.基于流式细胞术的低值血小板检测方法的性能评价 J 临床检验杂志，2022，40(2):9295.(2022-10-12 收稿;2022-10-27 修回)(编辑:袁天峰)162空军军医大学学报2023 年 3 月第 44 卷第 3 期http: