外周血淋巴细胞亚型在Luminal型乳腺癌中的诊断价值研究.pdf

外周血淋巴细胞亚型在L u m i n a l型乳腺癌中的诊断价值研究吕淑贞,吴敏,袁可玉,李艳萍(首都医科大学附属北京世纪坛医院乳腺外科,北京 )D O I:/b j m y i s s n 收稿日期:;修回日期:基金项目:首都医科大学附属北京世纪坛医院实验室开放课题肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室项目(编号:K F )作者简介:吕淑贞().T e l:;吴敏,T e l:;袁可玉,T e l:通讯作者:李艳萍(),主任医师,硕士生导师.T e l:;E m a i l:l y p b j s j t hc n摘要:目的探讨外周血淋巴细胞亚群在L u m i n a l型乳腺癌中的诊断价值.方法对纳入研究的 例女性L u m i n a l型乳腺癌患者和 例乳腺良性疾病患者,采集新鲜血,然后通过C y t o m i c sF C 流式细胞仪(B e c k m a n C o u l t e r)检测外周血淋巴细胞,并通过多色流式细胞仪进行聚类.通过受试者操作曲线评估淋巴细胞亚型在L u m i n a l型乳腺癌中的诊断性能.结果与乳腺良性疾病(例)相比,L u m i n a l乳腺癌(例)C D 淋巴细胞亚型数显着升高(P),而C D C D (P)和D C(P)L u m i n a l乳腺癌淋巴细胞亚型显着降低.C D C D C D D C 淋巴细胞亚型组合诊断的AU C最高,为 (C I ,P).结论C D 、C D C D 和D C 联合可能有助于提高L u m i n a l型乳腺癌的诊断.关键词:乳腺癌;L u m i n a l;淋巴细胞亚群;诊断中图分类号:R 文献标识码:AT h eV a l u eo fP e r i p h e r a lB l o o dL y m p h o c y t eS u b t y p e s i nD i a g n o s i n gL u m i n a lB r e a s tC a n c e rL YUS h u z h e n,WU M i n,YUANK eyu,L IY a npi ng(D epa r t m e n to fB r e a s tS u rge ry,B e iji ngS h iji t a nH o spi t a l,C api t a lM e d i c a lU n i v e r s i ty,B e iji ng ,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v eT h i ss t u dya i m e dt oe xpl o r et h ed i agn o s t i cv a l u eo fpe r iph e r a lb l o o dlymph o cyt e si nd i agn o s i ngL u m i n a lB C s M e t h o d s c a s e so ff e m a l epa t i e n t sw i t hL u m i n a lB C sa n d c a s e so ff e m a l epa t i e n t sw i t hb e n ignb r e a s td i s e a s ew e r ee n r o l l e da n dt h ef r e s ha n t i c o agu l a n tb l o o dw e r ec o l l e c t e df o rt h es t u dy T h espe c i m e n s w e r et h e nd e t e c t e dbyCyt o m i c sF C f l o w cyt o m e t e r(B e c k m a n C o u l t e r)t od i s t i ngu i s hpe r iph e r a lb l o o dlymph o cyt e s,c l u s t e r e dbym u l t i c o l o rf l o wcyt o m e t ry T h er e c e i v e rope r a t i ngc u r v ew a sd r a w nt oe v a l u a t e t h ed i agn o s t i cpe r f o r m a n c e R e s u l t sC o mpa r e dw i t h t h a t o fb e n ignb r e a s t d i s e a s e(c a s e s),t h epe r c e n t ageo fC D lymph o cyt e s u b ty pew a s s ign i f i c a n t lyh igh e r i nL u m i n a lB C(c a s e s)(P ),w h i l e t h epe r c e n t age s o fC D C D (P )a n dD C(P )lymph o cyt e s u b ty pe sw e r es ign i f i c a n t lyl o w e ri nL u m i n a lB C A U Co ft h ec o m b i n e do fC D C D C D D C lymph o cyt es u b ty pew a s upt o (C I ,P )C o n c l u s i o nT h ec o m b i n a t i o no fC D ,C D C D a n dD C c o u l db e s u i t a b l e f o rd i agn o s i ngL u m i n a lB CK e yw o r d s:B r e a s t c a n c e r;L u m i n a l;Lymph o cyt es u b s e t;D i agn o s i s乳腺癌(b r e a s tc a n c e r,B C)的发病率在全球范围内呈上升趋势,尤其是在发展中国家.据报道,与乳腺癌相关的死亡在女性肿瘤相关死亡中排名第一.虽然乳腺癌主要发生在绝经后妇女中,但 岁以下年轻女性的乳腺癌发病率正在增加.乳腺癌的发生风险与不良生活方式(如吸烟、饮酒等)、肥胖、B R C AL a b e l e dI mm u n o a s s a y s&C l i nM e d,M a r ,V o l ,N o 基因突变、内源性激素水平变化、良性乳腺疾病和高乳腺密度密切相关.乳腺癌本质上是一种异质性疾病,根据免疫组化可分为种分子亚型,即L u m i n a lA型(e s t r o g e nr e c e p t o r,E R阳性和/或p r o g e s t e r o n er e c e p t o r,P R阳性,h u m a ne p i d e r m a lg r o w t hf a c t o rr e c e p t o r,H E R 阴性,K i 低表达),L u m i n a lB型(E R阳性和/或P R阳性,H E R 阳性或K i 高表达)、HE R 过表达型(E R阴性、P R阴性、HE R 阳性)、三阴型乳腺癌(E R阴性、P R阴性、HE R 阴性).乳腺癌以上亚型之间的临床特征和治疗方法差异巨大.其中L u m i n a l型A和B亚型亦称为激素受体(h o r m o n a lr e c e p t o r,HR)阳性乳腺癌.尽管越来越多的研究对HR阳性乳腺癌的致癌作用进行了探索 ,但HR阳性乳腺癌的机制和发展仍不清楚.此外,HR阳性乳腺癌的临床和生物学特征与其他乳腺癌亚型有显着差异.目前,乳腺癌的诊断主要依赖于体格检查、乳腺超声、影像学检查、组织活检等方法.且这些方法对于具有一定大小及有症状的乳房肿块诊断意义较大.尽管循环肿瘤细胞、循环肿瘤D NA和播散性肿瘤细胞等多种标志物被认为与乳腺癌相关,但目前仍缺乏预测乳腺癌生存和诊断的特异性生物标志物 .因此,为探索乳腺癌有价值的生物标志物而付出的努力越来越多.乳腺癌根治性手术、放疗、辅助内分泌治疗和化疗是降低HR阳性乳腺癌复发和延长预后的主要手段.以往的研究表明,免疫细胞可能通过趋化因子或细胞因子参与乳腺癌的增殖和转移 .三阴性乳腺癌的肿瘤浸润淋巴细胞水平显着高于HR阳性乳腺癌,且其免疫治疗相关疗效较好 .而调节性T淋巴细胞可促进E R阴性乳腺癌脑转移的发生.外周血淋巴细胞亚群在不同分子亚型乳腺癌中的水平差异已有报道,研究多关注于外周血淋巴细胞亚群与乳腺癌临床病理间关系、疗效评价及其预 后 的 判 断 .但 外 周 血 淋 巴 细 胞 亚 群 在L u m i n a l型乳腺癌中的诊断价值尚不清楚.本研究的主要目的是探讨外周血淋巴细胞亚群在HR阳性乳腺癌中的诊断价值.材料和方法研究对象 年月至 年 月在北京世纪坛医院 例接受过乳腺手术的女性患者纳入本研究.纳入标准:年龄在 岁之间,诊断为乳腺浸润性导管癌或乳腺良性疾病的患者.排除标准:有其他癌症病史的患者、妊娠期患者、感染性疾病患者、发热患者.本研究经北京世纪坛医院伦理审查委员会批准,所有入组患者均获得知情同意并签字.免疫组织化学本研究中的乳腺癌亚型是根据免疫组织化学结果定义的.应用荧光原位杂交方法确认HE R 受体的状态.流式细胞仪分析用C y t o m i c sF C 流式细胞仪(B e c k m a n C o u l t e r)检测新鲜抗凝血液,以区分外周血淋巴细胞,通过多色流式细胞仪聚集,包括T细胞、B细胞、N K细胞、T r e g细胞和树突状细胞.C y t o S T A T t e t r aC H R OM EC D F I T C/C D R D/C D E C D/C D P C(,B e c k m a n C o u l t e r)单克隆抗体是用于区分C D、C D C D 和C D C D 淋巴细胞.C y t o S T ATt e t r aC H R OM EC D F I T C/C D R D/C D E C D/C D P C(,B e c k m a n C o u l t e r)单克隆抗体用于区分C D C D C D 、C D C D C D 和C D 淋巴细胞.C D()F I T C/C D k(I L T )P E/C D P C(A ,B e c k m a n C o u l t e r)和C D()F I T C/C D k(I L T )P E/C D P C(A ,B e c k m a n C o u l t e r)单克隆抗体区分不同的树突细胞亚型.最终通过C X P分析软件(B e c k m a n C o u l t e r)获得各种淋巴细胞亚群的数值,用于后续数据分析.统计学处理在本研究中,S t u d e n tt检验和M a n n W h i t n e y秩和检验分别用于分析正态或非正态分布数据(S P S S ).正态计量资料采用均值标准差(xs)形式表达,独立样本采用t检验进行差异分析;非正态计量资料用中位数(四分位数)M(P,P)表示,使用非参数检验(U检验)进行差异分析.计数资料使用卡方检验进行差异性分析.受试者操作曲线评估淋巴细胞亚型在L u m i n a l型乳腺癌中的独立或组合诊断性能,其中组合诊断公式采用L o g i s t i c二元回归计算.检验水准 .结果外周血淋巴细胞与乳腺癌临床特征的关系本研究共纳入 例患者,其中良性乳腺疾病(b e n i g nb r e a s td i s e a s e,B B D)例,L u m i n a l型乳腺癌 例,三阴性乳腺癌 例,HE R 过表达 例.L u m i n a l乳 腺 癌 中,l u m i n a lA亚 型 例,标记免疫分析与临床 年月第 卷第期L u m i n a lB亚型 例.外周血淋巴细胞亚型数与L u m i n a l乳腺癌临床特征的关系如表所示.有淋巴细胞浸润的L u m i n a l型乳腺癌中C D C D 淋巴细胞亚型数显着高于无淋巴细胞浸润的L u m i n a l型乳腺癌(P).此外,与腋窝淋巴结转移的L u m i n a l型 乳 腺 癌 相 比,无 腋 窝 淋 巴 结 转 移 的L u m i n a l型乳腺癌中D C 淋巴细胞亚型的数量显着增加(P).然而,肿瘤大小与外周淋巴细胞亚型数量之间没有显着相关性.外周淋巴细胞亚型数量与L u m i n a l型乳腺癌有无血管瘤栓无关.表外周血中淋巴细胞亚群与L u m i n a l型乳腺癌病理特点相关性指标淋巴细胞浸润性否是P值肿瘤大小(c m)P值癌栓否是P值腋窝淋巴转移否是P值例数 C D C D C D C D C D C D C D()C D C D()C D C D C D C D C D C D C D D C D C 注:P 乳腺良恶性疾病外周血淋巴细胞的差异与乳腺良性疾病相比,C D C D、C D C D 和D C 的数量在所有乳腺癌中显着增加(P值分别为、),其余淋巴细胞亚型差异均无统计学意义(表).与乳腺良性疾病相比,L u m i n a l乳腺癌中C D 淋巴细胞亚型数量显着升高(P)(图),而C D C D (P)和D C(P)淋巴细胞亚型在L u m i n a l乳腺癌中显着降低(表、图),其余淋巴细胞亚型在两组之间亦差异均无统计学意义.此外,分析结果还表明,在淋巴细胞亚型在L u m i n a lA和L u m i n a lB乳腺癌之间差异亦无统计学意义(表).图 AB显示C D 淋巴细胞亚群数目在L u m i n a l型乳腺癌中的高低现象;图 CD显示C D C D 淋巴细胞亚群数目在L u m i n a l型乳腺癌中的高低现象.表乳腺癌与乳腺良性疾病中外周血中淋巴细胞亚群比较指标B B D乳腺癌 P值B B DL u m i n a l乳腺癌 P值L u m i n a lAL u m i n a lB P值C D C D C D C D C D C D C D()C D C D()C D C D C D C D C D C D C D D C D C 注:P.B B D,乳腺良性疾病L a b e l e dI mm u n o a s s a y s&C l i nM e d,M a r ,V o l ,N o 注:P;n sP 图比较L u m i n a l型乳腺癌与乳腺良性疾病的外周血淋巴细胞亚型标记免疫分析与临床 年月第 卷第期(续图)注:AC D 水平高;BC D 水平低;CC D C D 水平高;DC D C D 水平低图L u m i n a l型乳腺癌中C D 、C D C D 的流式细胞图L u m i n a l乳腺癌外周血淋巴细胞的诊断价值本研究还通过曲线下面积(a r e au n d e rc u r v e,AU C)探讨外周血淋巴细胞亚型在区分L u m i n a l乳腺癌和良性乳腺疾病中的价值(表,图 AB).结果表明,大多数单个淋巴细胞亚型的AU C小于,表明单个淋巴细胞亚型对L u m i n a l乳腺癌和乳腺良性疾病分类价值不高,仅C D C D 、D C 淋巴细胞亚型在独立诊断L u m i n a l型乳腺癌时A U C分别为 (C I ,P )、(C I ,P ).而C D C D C D D C 淋巴细胞亚型组合的AU C高达 (C I ),P ).因此,C D C D C D D C 淋巴细胞亚型的组合可能是L u m i n a l乳腺癌的潜在诊断指标.表外周血中淋巴细胞亚群在L u m i n a l型乳腺癌中的诊断价值指标截断值灵敏度()特异性()约登指数AU C(C I)P值C D ()C D C D ()C D C D ()C D C D()()C D C D()()C D ()C D C D ()C D C D ()C D C D ()D C ()D C ()C D C D C D D C ()注:P 图外周血淋巴细胞亚型在L u m i n a l型乳腺癌中的诊断价值L a b e l e dI mm u n o a s s a y s&C l i nM e d,M a r ,V o l ,N o 讨论本研究探讨了L u m i n a l乳腺癌外周血淋巴细胞亚型的诊断价值.L u m i n a l乳腺癌中仅发现外周血C D 、C D C D 和D C 淋巴细胞亚型出现有显著改变.同时,C D 、C D C D 和D C 淋巴细胞亚型的组合在诊断L u m i n a l乳腺癌方面价值较高.乳腺癌是全球女性发病率最 高的肿瘤,其 中L u m i n a l型是最常见的分子分型.当前乳腺癌的诊断主要依赖于超声检查、乳腺X线检查和穿刺活检等.然而,乳腺癌的诊断仍缺乏有效的血清学标志物.因此,已经进行了大量研究 ,旨在寻找一些用于乳腺癌诊断的生物标志物.免疫系统的变化,尤其是C D 和C D 细胞的变化,可能与各种肿瘤的发生发展密切相关.随着流式细胞术技术的发展和进步,淋巴细胞亚群检测越来越多地被研究并应用于疾病的诊断、预测和监测.例如,YANG等 发现外周血C D 和C D 水平较高的HE R 阳性转移性乳腺癌患者其生存结果较差,而外周血C D 和C D 水平较低的HE R 阳性转移性乳腺癌可能获益于抗HE R 治疗.WU等 发现C D 和C D 与宫颈癌患者的复发密切相关.R A D等 发现乳腺癌和正常人的T细胞亚群无显著差异,但他们认为局部免疫系统,如转移性淋巴结和肿瘤组织,可能受到肿瘤细胞的影 响.VA L D S F E R R A D A等 发 现,在 接 受新辅助化疗的HE R 阳性乳腺癌中,外周血中经典单核细胞数量和白细胞介素 水平之间存在正相关,并发现外周血中较高的经典单核细胞数量与较低的病理完全反应率有关.然而,以往的研究主要集中在评估免疫细胞在乳腺癌中的治疗效果或预后效果 .因此,本研究旨在评估免疫细胞在HR乳腺癌中的诊断性能.本研究发现C D 、C D C D 和D C 细胞的百分比在本研究中L u m i n a l型乳腺癌和乳腺良性疾病患者之间存在显着差异.C D 是一种在B细胞和滤泡细胞上表达的膜蛋白.L u m i n a l乳腺癌中C D 的百分比显着高于乳腺良性疾病.然而,一项前瞻性随机试验报道,乳腺 癌 辅 助 化 疗 后C D B细 胞 的 绝 对 数 量 减少.C D C D 代表活化的幼稚细胞毒性T细胞.与健康志愿者相比,据报道转移性乳腺癌中外周血C D C D 细胞显着降低,与本研究结果相似.外周血C D C D T细胞水平升高可能预示晚期非小细胞肺癌预后良好.然而,外周血C D C D T细胞水平升高与乳腺癌的无进展生存期缩短有关.总之,本研究探讨了L u m i n a l型乳腺癌中的外周血淋巴细胞亚型的诊断价值.结果发现C D 、C D C D 和D C 联合可能适用于L u m i n a l型乳腺癌的诊断.然而,在本研究中,我们主要包括了L u m i n a l型乳腺癌,而HE R 过表达型和三阴性乳腺癌的数量不够.因此,需要更多的病例纳入以便进一步研究.同时,本研究未考虑L u m i n a l型乳腺癌中外周血淋巴细胞亚型与预后的相关性.此外,外周血淋巴细胞亚型对新辅助/辅助治疗有效的预测价值仍有待进一步研究.参考文献AHMA DA B r e a s tc a n c e rs t a t i s t i c s:r e c e n tt r e n d sJ A d vE x pM e dB i o l,:WA GN E RT M U,M S L I N G E R R A,MUHR D,e t a l B R C A r e l a t e db r e a s tc a n c e ri n A u s t r i a nb r e a s ta n do v a r i a nc a n c e rf a m i l i e s:S p e c i f i c B R C A m u t a t i o n sa n d p a t h o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c sJ I n t JC a n c e r,():V I C T O R I AL,G R E E NB r e a s tc a n c e rr i s k a s s e s s m e n ta n dm a n a g e m e n to f t h eh i g h r i s kp a t i e n tJ O b s t e tG y n e c o lC l i nN o r t hAm,():S I B Y L L EL,P H I L I PP,MON I C AM,e t a l B r e a s t c a n c e rJL a n c e t(L o n d o n),():国家肿瘤质控中心乳腺癌专家委员会中国乳腺癌规范诊疗质量控制指标(版)J中华肿瘤杂志,():C A S C E T TAKP,G E RMA I ND,T I E R S T E NA C 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n c e r s(B a s e l),():WANGL,S I MON SDL,L U X,e ta l B r e a s tc a n c e ri n d u c e ss y s t e m i ci mm u n ec h a n g e so nc y t o k i n es i g n a l i n gi np e r i p h e r a lb l o o dm o n o c y t e sa n dl y m p h o c y t e sJ E B i o M e d i c i n e,:P E D R O S AR,K R O SJM,S C H R I J V E R B,e t a l T h e I F N p a t h w a ym e d i a t e sb r a i nm e t a s t a s i sf o r m a t i o no fb r e a s tc a n c e rJN e u r o O n c o l o g y,(S u p p l):i i i 郑建伟,曹李,康春博 T淋巴细胞亚群在早期三阴性乳腺癌新辅助化疗疗效预测中的应用 J癌症进展,():刘刚,薛孝斌,任冬莉外周血T淋巴细胞亚群变化对乳腺癌新辅助化疗疗效的预 测价值 J海南医学,():冀为,周岩,牛瑞芳外周血T淋巴细胞亚群与不同分子分型乳腺癌患者无病生存的相关性研究 J中国肿瘤临床,():郝华,庞卫乾,樊倩倩,等乳腺癌患者初治时外周血淋巴细胞亚群检测的临床意义 J临床医药文献电子杂志,():S C HR D E R W,V E R I NG A,S T E GM L L E R M,e t a l L y m p h o c y t e s u b s e t s i np a t i e n t sw i t ho v a r i a na n db r e a s t c a n c e rJE u r JG y n a e c o l o gO n c o l,():NA I T OY,S A I T OK,S H I I B A K,e t a l C D T c e l l si n f i l t r a t e dw i t h i nc a n c e rc e l ln e s t sa sap r o g n o s t i cf a c t o ri nh u m a nc o l o r e c t a lc a n c e rJC a n c e r R e s,():G I R O L AMO W D,C O R ONA T OS,P O R T I AN S KYE,e ta l P r o f i l e o fi mm u n e c e l l si n l y m p h n o d e s d r a i n i n g h u m a nm a l i g n a n t t u m o r sJ M e d i c i n a,():Y A N GJ,X UJ,EY,e ta l P r e d i c t i v ea n dp r o g n o s t i cv a l u eo fc i r c u l a t i n gb l o o d l y m p h o c y t e s u b s e t s i nm e t a s t a t i c b r e a s t c a n c e rJC a n c e rM e d,():WUY,Y ES,GO S WAM IS,e ta l C l i n i c a ls i g n i f i c a n c eo fp e r i p h e r a lb l o o da n d t u m o r t i s s u e l y m p h o c y t e s u b s e t s i nc e r v i c a lc a n c e rp a t i e n t sJ BMCC a n c e r,():R A DFR,A J D A R YS,OMR A N I P O U R R,e ta l C o m p a r a t i v ea n a l y s i so fC D a n dC D Tc e l l s i nt u m o r t i s s u e s,l y m p hn o d e sa n d t h ep e r i p h e r a l b l o o df r o mp a t i e n t sw i t hb r e a s tc a n c e rJ I r a nB i o m e dJ,():VA L D S F E R R A D AJ,MUO Z DUR AN GON,P R E Z S E P U L V E D A A,e ta l P e r i p h e r a lb l o o dc l a s s i c a lm o n o c y t e sa n d p l a s m a i n t e r l e u k i n a r e a s s o c i a t e d t o n e o a d j u v a n tc h e m o t h e r a p yr e s p o n s ei nb r e a s tc a n c e rp a t i e n t sJ F r o n tI mm u n o l,:WAN G M,P AN GZ,WAN G Y,e ta l A ni mm u n em o d e l t op r e d i c tp r o g n o s i so f b r e a s t c a n c e rp a t i e n t s r e c e i v i n gn e o a d j u v a n tc h e m o t h e r a p yb a s e d o ns u p p o r tv e c t o r m a c h i n eJF r o n tO n c o l,:WAN GJ,B R OWN E L,S L A P E T OVAI,e ta l M u l t i p l e x e di mm u n o f l u o r e s c e n c ei d e n t i f i e sh i g hs t r o m a lC D ()P D L()m a c r o p h a g e sa sap r e d i c t o ro f i m p r o v e ds u r v i v a l i nt r i p l en e g a t i v eb r e a s t c a n c e rJ S c iR e p,():YAN GJ,XUJ,Y I N G E,e ta l P r e d i c t i v ea n d p r o g n o s t i cv a l u eo fc i r c u l a t i n g b l o o dl y m p