通络糖泰方治疗糖尿病周围神.的网络药理学和分子对接分析_李周泉.pdf

目的：利用网络药理学筛选通络糖泰方（TLTT）治疗糖尿病周围神经病变（DPN）的活性成分，预测作用靶点及信号通路，探讨其作用机制。方法方法：采用中药系统药理学分析平台（TCMSP）收集 TLTT 的主要化学成分及作用靶点；利用基因卡片（Genecards）数据库检索与 DPN相关的蛋白；利用 STRING 数据库和网络可视化软件 Cytoscape3.9.1 构建蛋白-蛋白互作（PPI）网络；通过京都基因与基因组百科全书（KEGG）和分子对接技术对靶点进行通路富集分析及成分-靶点对接。将 30 只 SD 大鼠随机分为对照组、弥可保组和 TLTT 组，每组 10 只，给予弥可保和 TLTT 灌胃制备含药血清；复苏 1株 RSC96雪旺细胞，设置对照组、高糖模型组、弥可保组和 TLTT 组，采用细胞计数检测法观察各组细胞存活率，Western blotting 法检测各组细胞中丝氨酸/苏氨酸激酶 1（AKT1）和抑癌基因 TP53蛋白表达水平。结果结果：TLTT 治疗 DPN 的有效化合物成分 95个，463个靶点，DPN 相关蛋白 1 187 个，137 个药物-疾病共同靶点；基因本体论（GO）分析中生物过程、细胞组成和分子功能分别得到 5 505个、466个和 791个结果；KEGG 分析得到 253个结果，提示 TLTT 可能通过调节磷脂酰肌醇 3激酶/蛋白激酶 B（PI3K-Akt）信号通路、液体剪切应力和动脉粥样硬化、晚期糖基化终末产物及其受体（AGE-RAGE）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信号通路发挥治疗作用；分子对接分析，TLTT 通过槲皮素、豆甾醇、-谷甾醇、山柰酚和常春藤皂苷元等核心成分，作用于 AKT1、TP53、肿瘤坏死因子（TNF）和表皮生长因子受体（EGFR）等核心靶点。CCK-8法检测，与对照组比较，高糖模型组细胞存活率明显降低（P0.05）；与高糖模型组比较，TLTT 组细胞存活率明显升高（P0.05）。Western blotting法，与对照组比较，高糖模型组细胞中 AKT1蛋白表达水平明显降低（P0.05），TP53 蛋白表达水平明显升高（P0.05）；与高糖模型组比较，TLTT 组细胞中 AKT1 蛋白表达水平明显升高（P0.05），TP53 蛋白表达水平明显降低（P0.05）。结论结论：TLTT 的主要活性成分槲皮素等可能通过靶向 PI3K-Akt等信号通路，促进雪旺细胞存活，升高 AKT1蛋白和降低 TP53蛋白表达水平，进而发挥治疗 DPN的作用。关键词 通络糖泰方；糖尿病周围神经病变；网络药理学；分子对接；雪旺细胞中图分类号 R285.5文献标志码 A文章编号 1671587X(2023)02034110收稿日期 20220522基金项目 四川省科技厅科研基金项目（2020YJ0440）；成都中医药大学附属医院科技发展基金资助项目（20YY14）作者简介 李周泉（1996），男，四川省成都市人，在读硕士研究生，主要从事中医药防治内分泌代谢疾病基础方面的研究。通信作者 殷丽平，副教授，副主任医师，硕士研究生导师（E-mail：）341第 49 卷 第 2 期 2023 年 3 月吉林大学学报（医学版）Network pharmacology and molecular docking analysis on mechanism of Tongluo Tangtai Power in treatment of diabetic peripheral neuropathyLI Zhouquan1,LI Hui1,TANG Ying1,YANG Lijun1,JIANG Yinghong1,YIN Lipin1,2（1.Department of Internal Medicine of Traditional Chinese Medicine，School of Clinical Medical Sciences，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610075，China；2.Department of Endocrinology，Affiliated Hospital，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610075，China）ABSTRACT Objective：To screen the active components of Tongluo Tangtai Power（TLTT）in the treatment of diabetic peripheral neuropathy（DPN），predict the action targets and signaling pathways by network pharmacology，and to explore its mechanism.Methods：The Traditional Chinese Medicine System Pharmacological Analysis Platform（TCMSP）was used to collect the main chemical components and action targets of TLTT；Genecard Database was used to retrieve the proteins associated with DPN；the protein-protein interaction（PPI）network was constructed by STRING Database and network visualization software Cytoscape3.9.1；pathway enrichment analysis and composition-target docking were analyzed by the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）and molecular docking technique.Thirty SD rats were divided into control group，mecobalamin group，and TLTT group，and there were 10 rats in each group.The rats were given mecobalamin and TLTT by gavage to make the drug-containing serum；one stain of RSC96 Schwann cells was resuscitated；control group，high glucose model group，mecobalamin group，and TLTT group were set up；then cell counting method was used to detect the survival rates of Schwann cells in various groups；Western blotting method was used to detect the expression levels of serine/threonine kinase 1（AKT1）and tumor suppressor gene TP53 proteins in the cells in various groups.Results：There were 95 active compound components and 463 targets in TLTT for the treatment of DPN，1 187 DPN-related proteins，and 137 drug-disease common targets.The Geno Ontology（GO）analysis，including biological processes，cell composition，and molecular function）results obtained 5 505，466，and 791 results；the KEGG analysis obtained 253 results，suggesting that TLTT may played a therapeutic role by regulating the phosphatidyl inositol 3 kinase/protein kinase B（PI3K-Akt）signaling pathway，liquid shear stress and atherosclerosis，advanced glycosylation end products and their receptors（AGE-RAGE），mitosolysis-activated protein kinase（MAPK）singling pathways and so on；the molecular docking results showed that TLTT acted on AKT1，TP53，tumor necrosis factor（TNF），epidermal growth factor receptor（EGFR），and other core targets by some core components such as quercetin，sterol，beta-sitosterol，kaempferol，ivy saponin，and so on.The CCK-8 results showed that compared with control group，the survival rate of the cells in high glucose model group was significantly decreased（P0.05）；compared with high glucose model group，the viability of the cells in TLTT group was significantly increased（P0.05）.The Western blotting results showed that compared with control group，the expression level of AKT1 the cells in high glucose model group was significantly decreased（P0.05），and the expression level of TP53 protein was significantly increased（P0.05）；compared with high glucose model group，the expression level of AKT1 protein in the cells in TLTT group was significantly increased（P0.05），and the expression level of TP53 protein was significantly decreased（P0.05）.Conclusion：The main active components of TLTT，such as quercetin，may promote the survival of the Schwann cells，increase the expression level of AKT1 protein and decrease the expression level of TP53 342李周泉，等.通络糖泰方治疗糖尿病周围神经病变作用机制的网络药理学和分子对接分析protein by targeting PI3K-Akt and other signaling pathways，so as to play a role in the treatment of DPN.KEYWORDS Tongluo Tangtai Power；Diabetic peripheral neuropathy；Network pharmacology；Molecular docking；Schwann cell糖 尿 病 周 围 神 经 病 变（diabetic peripheral neuropathy，DPN）是糖尿病常见的慢性并发症，60%90%的糖尿病患者会在 10 年后出现不同程度的神经功能损害，其中半数为 DPN1，与创伤性 相 关 的 截 肢 患 者 比 较，其 5 年 生 存 率 低 于50%2，现已成为患者非创伤性截肢最主要的危险因 素，严 重 影 响 患 者 的 生 活 质 量3。目 前 关 于DPN 的发生机制尚未完全清楚，可采用控制血糖、饮食及生活方式干预、手术及对症治疗和病因治疗等方法治疗 DPN4-6。针对 DPN 中涉及的潜在分子和细胞机制的诸多治疗，包括醛糖还原酶抑制剂、苯酞胺和蛋白激酶 C抑制剂等，虽然已在临床应用40 余年，但因其皆为针对 DPN 单一发病机制的治疗，疗效有限7-9。中医药治疗 DPN 具有整体调节、毒副作用小和临床效果好等特点。通络糖泰方（Tongluo Tangtai Power，TLTT）由黄芪、当归、地骨皮、水蛭、蚕沙、川牛膝、玄参、白芥子和赤芍等药物组成，是本院内分泌科谢春光教授的临床经验方，主要用于治疗 DPN。中药具有多成分、多靶点和多通路的特点，网络药理学10是探索药物成分与靶点相互作用的新兴研究方法。本研究通过探讨 TLTT 的主要活性化合物及其作用靶点，借助网络药理学的方法从系统生物整体的角度阐明TLTT 治疗 DPN 的作用机制，为 TLTT 的进一步应用提供科学依据。1 材料与方法 1.1TLTT有效成分筛选有效成分筛选在 中 药 系 统 药 理 学 数 据 库 与 分 析 平 台（https：/tcmsp- 以口服生物利用度（oral bioavailability，OB）30%、类 药 性（drug-likeness，DL）0.18为筛选条件，筛选 TLTT 有效成分。1.2靶点预测靶点预测在 TCMSP 数据库中将成分 Mol ID 号输入相关靶点信息栏进行预测，再通过蛋白质序列数据库（https：/www.uniprot.org/）进行核对。1.3疾病靶点搜集疾病靶点搜集在基因卡片数据库（https：/www.genecards.org/）中以“diabetic peripheral neuropathies”为检索词，搜集疾病靶点。1.4核心靶点筛选及构建蛋白核心靶点筛选及构建蛋白-蛋白互作蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）网络网络将成分靶点与疾病靶点交集得到的数据，输入 STRING 数据库（https：/string-db.org/），物种选择“人类”，置信度调整为“较高”，隐藏无联动靶点，在线导入 Cytoscape 3.9.1软件进行分析，在软件工具箱中选择“统计信息生成模式”，根据度值筛选出核心靶点。1.5TLTT-活性化合物活性化合物-核心靶点网络构建核心靶点网络构建将以上数据导入 Cytoscape 3.9.1 软件，构建中药-活性成分-核心靶点的网络。1.6基因本体分析及基因组通路富集基因本体分析及基因组通路富集将交集靶点导入基因富集分析库（https：/metascape.org/）中，物种选择“人类”，选择基因本体论（Gene Ontology，GO）模式，完成生物过程（biological process，BP）、细 胞 组 分（cellular component，CC）和分子功能（molecular function，MF）3 个层面的富集分析，在京都基因与基因组百 科 全 书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）（https：/www.kegg.jp/）进行富集分析，将数据表格保存，结果以柱状图和气泡图的形式输出。1.7分子对接分子对接从 蛋 白 质 结 构 数 据 库（http：/www.rcsb.org/）中获取靶点的蛋白结构，使用分子对接软件将核心靶点与活性成分进行对接验证。1.8核心靶点的验证核心靶点的验证1.8.1实验动物、细胞、试剂和主要仪器30 只SPF 级 SD 大鼠（成都森威实验动物有限公司，动物生产与使用许可证号：2021DL-020）。大鼠雪旺细胞（上海赛佰康生物技术股份有限公司，货号：RSC96）。TLTT 由黄芪、当归、地骨皮、水蛭、蚕沙、川牛膝、玄参、白芥子和赤芍等药物组成，由成都中医药大学附属医院制剂科制作，1 g 浸膏相当于生药 4.3 g，批号：20201108。弥可保（甲钴胺片）购自卫材（中国）药业有限公司（批准文号：国药准字 H20143107）。Cell Counting Kit 8 检测盒（型号：ab228554），重组 Anti-丝氨酸/苏氨酸激酶 1（serine/threonine kinase 1，AKT1）抗体343第 49 卷 第 2 期 2023 年 3 月吉林大学学报（医学版）（型号：ab81283），重组 Anti-TP53 抗体（型号：ab241566）（英国 Abcam 公司），辣根过氧化物酶标记兔二抗（型号：A0208）和极超敏 ECL化学发光试剂盒（型号：P0018FS）（南京碧云天生物公司）。荧光显微镜（型号：Leica DM IL LED，德国徕卡公司），多功能酶联免疫分析仪（型号：BK-EL10C，山东博科生物产业有限公司），化学发光成像仪（型号：MiniChem，广州合众生物有限公司）1.8.2含药血清制备大鼠适应期结束，将其随机分为对照组、弥可保组和 TLTT 组，每组 10只，TLTT 组大鼠按人体等效剂量灌胃，每日 2次，连续给药 3 d；对照组和弥可保组大鼠采用同等剂量的生理盐水和弥可保溶液灌胃。末次灌胃 2 h 后，各组大鼠在药物麻醉后于腹主动脉取血，离心得到血清并将其置于无菌离心管。经灭活和灭菌处理后封口膜密封，标记后冻存备用。1.8.3实验建模将雪旺细胞培养至第 3 代后接种于 6孔细胞培养板和 96孔细胞培养板进行分组干预：10%弥可保组大鼠血清+50 mmol L1葡萄糖培养基（弥可保组），10%TLTT 组 大 鼠 血 清+50 mmol L1葡萄糖培养基（TLTT 组），10%对照组大鼠血清+5.6 mmol L1葡萄糖培养基（对照组），10%对照组大鼠血清+50 mmol L1葡萄糖培养基（高糖模型组）。1.8.4实验方法CCK-8 法检测雪旺细胞存活率：在 96 孔细胞培养板上培养各组细胞并更换含药血清进行干预，48 h后每孔滴加 CCK-8试剂，继续放在孵育箱等待 1 h，最后应用多功能酶联免疫分析仪测定吸光度（A）值，计算各组细胞存活率。Western blotting法检测关键靶点 AKT1和抑癌基因 TP53 蛋白表达水平：将 6 孔细胞培养板中培养状态良好的各组雪旺细胞中加入裂解液，收集上清液采用 BCA 法进行蛋白定量后，经电泳后切取目的条带转印至 PVDF膜上，隔夜进行一抗和二抗孵育，再采用 ECL 法显色，将 ECL 的 AB 混合液体滴在 PVDF膜上，将膜放置于化学发光成像仪中，在电脑上操作扫描，采用 Image J 软件分析计算条带灰度值，计算目的蛋白表达水平。目的蛋白表达水平=目的蛋白条带灰度值/内参蛋白条带灰度值，每个实验重复 3次。1.8.5 统计学分析 采用 SPSS 26.0 统计软件进行统计学分析。各组细胞存活率符合正态分布，以xs表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，方差齐时采用多重比较法（Turkey），方差不齐时采用 Dunnett T3检验。以 P0.05为差异有统计学意义。2 结 果 2.1TLTT的活性成分及靶点预测的活性成分及靶点预测TLTT 中共检索出 95 种活性成分，463 个靶点，再将预测出的靶点蛋白名称转换为基因名称。2.2TLTT有效成分及靶点网络构建有效成分及靶点网络构建将 检 索 的 TLTT 有 效 成 分 与 靶 蛋 白 导 入 Cytoscape 3.9.1 软件构建“成分-靶点”网络，得到 479 个节点和 1 256 条相互作用关系，其中药物间共有成分 8个，记为 A、B、C、D、E、F、G 和H，见图 1。2.3TLTT与与 DPN共同作用靶点共同作用靶点从基因卡片数据库中获得 1 187个 DPN 的相关靶点。将 463 个 TLTT 的共有作用靶点与 1 187 个DPN 相 关 靶 点 输 入 Bioinformatics&Evolutionary Genomics 平 台，在 线 获 取 交 集 韦 恩 图，得 到TLTT与 DPN共同作用靶点 137个。见图 2。2.4TLTT 治疗治疗 DPN 潜在靶点的潜在靶点的 PPI网络图构建网络图构建及核心靶点图及核心靶点图利用 STRING数据库构建 PPI网络图，见图 3。通过 Cytoscape 软件对网络节点的拓扑参数（度值和中介中心性）进行分析筛选，即度值16.4，中介中心性3.07103。经 筛 选 得 到 核 心 靶 点图图 1药物成分的靶点网络药物成分的靶点网络Fig.1Target networks of drug components344李周泉，等.通络糖泰方治疗糖尿病周围神经病变作用机制的网络药理学和分子对接分析26个，包括 AKT1、TP53、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、表 皮 生 长 因 子 受 体（epidermal growth factor receptor，EGFR）和血管内 皮 生 长 因 子 A（vascular endothelial growth factor-A，VEGFA）等。见图4。2.5药物药物-成分成分-疾病疾病-靶点图靶点图合并成分-靶点网络和 PPI 图，得到重叠部分即为药物-成分-疾病-靶点图（图 5），可观察到前10种作用最明显的活性成分，具体见表 1。2.6GO 富集分析和富集分析和 KEGG 通路富集分析结果通路富集分析结果将 治 疗 靶 点 导 入 Metascape 软 件 和 KEGG Pathway 数据库分别进行 GO 三层面分析和 KEGG 通路富集分析。结果显示：TLTT 主要通过调控细胞对无机物的反应、对激素刺激的反应、正向调节细胞迁移、调节激酶活性和对细胞外刺激的反应等生物学过程，以及癌症通路、脂质和动脉粥样硬化、磷 脂 酰 肌 醇 3 激 酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋 白 激 酶 B（protein kinase B，Akt）信号通路、晚期糖基化终末产物-糖基化终末产 物 受 体 信 号 通 路 和 丝 裂 原 活 化 蛋 白 激 酶（mitosolysis-activated protein kinase，MAPK）等信号通路发挥治疗 DPN的作用。见图 6和 7。2.7分子对接结果分子对接结果根据表 1 所示槲皮素、-谷甾醇、豆甾醇、7-O-methylisomucronulatol、常春藤皂苷元、山柰酚、柳杉酚、刺芒柄花素、异鼠李素和黄芩素前图图 2药物和疾病靶点交集图药物和疾病靶点交集图Fig.2Intersection graphs of drugs and disease targets图图 3药物与疾病共同靶点药物与疾病共同靶点 PPI 网络图网络图Fig.3 PPI network diagram of common targets of drugs and diseases图图 4药物与疾病共同靶点蛋白频数图药物与疾病共同靶点蛋白频数图Fig.4 Frequency graph of common target proteins of drugs and diseases图图 5药物药物-成分成分-疾病疾病-靶点图靶点图Fig.5Diagram of drug-ingredient-disease-target345第 49 卷 第 2 期 2023 年 3 月吉林大学学报（医学版）10 个化合物分别与前 5 个核心靶点进行分子对接，见图 8，结合能均小于6.5 kcal mol1，表明药物成分与靶蛋白结合稳定，对接活性较强。其中图9A为MOL008583 与 TP53、图9B 为 MOL000449 与EGFR、图9C 为 MOL005460 与 IL-6、图9D 为MOL008583与AKT1、图9E为MOL000098与TNF、图 9F 为 MOL000296 与 AKT1。其中 MOL000296与AKT1结合力最强，为10.3 kcal mol 1，见图9F。图 9图左为整体视图，右为局部视图，图中浅橙色 stick 为小分子，浅青色 cartoon 为蛋白，灰色虚线表示疏水作用，图中可见其主要与蛋白周围K268、W80、L264、V270、T82、I84、Y272 和R273氨基酸残基发生疏水作用。2.8细胞实验结果细胞实验结果2.8.1各组雪旺细胞存活率与对照组比较，高糖模型组雪旺细胞存活率明显降低（P0.05）；与高糖模型组比较，TLTT 组雪旺细胞存活率明显升高（P0.05）。见表 2。2.8.2各组雪旺细胞中 AKT1 和 TP53 蛋白表达水平与对照组比较，高糖模型组 AKT1蛋白表达水平明显降低（P0.05），TP53 蛋白表达水平明显升高（P0.05）；与高糖模型组比较，TLTT 组AKT1 蛋白表达水平明显升高（P0.05），TP53 蛋白表达水平明显降低（P0.05）。见图 10。3 讨 论 DPN 是糖尿病常见并发症之一，主要累及感觉神经和运动神经，产生感觉及运动障碍，主要表现为双侧肢体疼痛、麻木和感觉异常等，严重者最终选择截肢12。2021 年 12 月 6 日，国际糖尿病联盟（international diabetes federation，IDF）官网发布了 2021 年全球糖尿病地图，数据显示：20112021 年间中国糖尿病患者由 0.9 亿增加至 1.4 亿例，增幅达 56%，其中约 7 283 万例糖尿病患者尚未被确诊，另有约 1.7亿成人伴有糖耐量受损，约2 700 万名成人伴有空腹血糖受损。由于糖尿病的发病率迅速上升且病程逐步延长，糖尿病慢性并发症的发病率逐年升高13。DPN 不仅危害人们的健表表 1药物主要活性成分药物主要活性成分TabTab.1 1Main active ingredients of drugsMain active ingredients of drugsMolecular numberMOL000098MOL008583MOL000449MOL000378MOL000296MOL000422MOL002222MOL000392MOL000354MOL002714CompoundQuercetin-sitosterolStigmasterol7-O-methylisomucronulatolHederageninKaempferolSugiolFormononetinIsorhamnetinBaicaleinDegree464233127 91 74 64 53 40 38 38Medical herbRadix cyathulae，Astragalus membranaceusCortex lycii，Radix paeoniae rubra，Angelica sinensis，Scrophulariae，Radix cyathulaeAngelica sinensi，Radix paeoniae rubra，Cortex lyciiAstragalus membranaceusAstragalus membranaceu，Cortex lyciiAstragalus membranaceusCortex lyci，ScrophulariaeAstragalus membranaceusAstragalus membranaceusRadix paeoniae rubra图图 6潜在靶点的潜在靶点的 KEGG富集分析图富集分析图Fig.6KEGG enrichment analysis diagram of potential targets346李周泉，等.通络糖泰方治疗糖尿病周围神经病变作用机制的网络药理学和分子对接分析康，还给社会经济带来沉重的负担，美国 2001 年数 据 调 查 显 示 其 1 年 内DPN 直 接 医 疗 费 用 为 1 760 亿美元，高达 27%的糖尿病直接医疗费用归因于 DPN 14，给社会医疗体系和经济发展增添较大负担。因此，DPN 的防治工作意义重大。目前DPN 的治疗手段以控制血糖、饮食及生活方式干预、手术及对症治疗和病因治疗为主。强化血糖控制对 1型糖尿病周围神经病变患者有明显益处，但对 于 2 型 糖 尿 病 周 围 神 经 病 变 患 者 效 果 并 不 明显15-16。饮食及生活方式干预可有效预防 DPN，在糖耐量异常（impaired glucose tolerance，IGT）受试者中可增加表皮内神经纤维密度，改善神经性疼痛，但多数患者依从性较差，难以坚持17。手术松解腓总神经、腓深神经和胫神经对改善患者生活质量、降低糖尿病足及截肢发生率有所帮助，但并不是所有 DPN 患者均适用，对于肢端对称性感觉障碍和血糖波动引起的急性痛性糖尿病神经病变手术治疗不能获益，且该方法为有创操作，故未能被推荐于临床应用18。对症止痛药和抗抑郁药物对 DPN 患者的临床症状有益，但此类药物不良反应较大，并且不会延缓神经病变的发展19。虽然 DPN 在中医学没有具体的病名，但根据DPN 临床表现，通常将其归属于中医学“痿证”“血痹”等范畴20，其病机主要与病程日久所致阴阳气血亏虚、血行瘀滞和脉络痹阻等有关，临床可将 DPN 分为气虚血瘀和阳虚寒凝等证型21，与西图图 7潜在靶点的潜在靶点的 GO 富集分析图富集分析图Fig.7GO enrichment analysis diagram of potential targets图图 8分子对接结合能热图分子对接结合能热图Fig.8Heat map of molecular docking binding energy347第 49 卷 第 2 期 2023 年 3 月吉林大学学报（医学版）医的单一效果比较，中药具有整体调节、多靶点和多途径等特点，采用中医药治疗 DPN 疗效显著。本院谢春光教授总结前人经验并经过长期临床工作反复实践调整，研制出了具有益气活血、养阴润燥、开玄通络、祛瘀止痛和标本兼治的 TLTT。该方组方包含生黄芪、水蛭、当归、玄参、川牛膝、地骨皮、赤芍和蚕砂等药物，作为临床制剂使用近30 年，前期临床研究显示出稳定的疗效。既往研究22证实：TLTT 可以降低患者血糖，调节血脂异常，改善感觉、运动神经传导速度和改善糖尿病患者感觉障碍和痛觉过敏等症状，能够改善 DPN炎症状态。同时，还可以改善 DPN 大鼠糖脂代谢、神经传导速度和降低血清炎症因子水平，能一定程度 下 调 c-Jun 氨 基 末 端 激 酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）和 磷 酸 化 JNK（phosphorylated JNK，p-JNK）mRNA，抑制 JNK 信号通路的激活，改 善 高 糖 诱 导 的 雪 旺 细 胞 凋 亡 从 而 治 疗DPN23-25。A：MOL008583 and TP53；B：MOL000449 and EGFR；C：MOL005460 and IL-6；D：MOL008583 and AKT1；E：MOL000098 and TNF；F：MOL000296 and AKT1.图图 9核心成分和核心靶点分子对接结合能最佳结果示意图核心成分和核心靶点分子对接结合能最佳结果示意图Fig.9Schematic diagram of optimal binding energy results of core components and core target molecules表表 2各组雪旺细胞活性和存活率各组雪旺细胞活性和存活率TabTab.2 2 Activities and survival rates of Schwann cells in Activities and survival rates of Schwann cells in various various groupsgroups （n=10,xs）GroupControlHigh glucose modelTLTTMKBActivity0.990.020.660.02*0.820.010.740.03Survival rate(/%)100.000.00 67.230.04 83.010.02 74.920.01*P0.05 vs control group；P0.05 vs high glucose model group.*P0.05 vs control group；P0.05 vs high glucose model group.图图 10各组雪旺细胞中各组雪旺细胞中 AKT1 和和 TP53 蛋白表达电泳蛋白表达电泳图图(A)和直条图和直条图(B)Fig.10 Electrophoregram(A)and histogram(B)of expressions of AKT1 and TP53 proteins in Schwann cells in various groups348李周泉，等.通络糖泰方治疗糖尿病周围神经病变作用机制的网络药理学和分子对接分析本研究采用网络药理学预测 TLTT 治疗 DPN的可能作用机制，结果显示：槲皮素、-谷甾醇、豆甾醇、山奈酚、常春藤皂苷元、芒柄花素和异鼠李素是 TLTT 治疗 DPN 的主要化合物。现代研究26-27结果表明：谷甾醇和豆甾醇等植物类甾醇具有降低胆固醇、抗糖尿病及镇痛作用，能延缓2 型糖尿病的发病进程。槲皮素是一种具有降血脂、抗糖尿病并 发症 作用 的黄 酮类 化合 物，研究28显示：在糖尿病大鼠模型实验中，槲皮素对糖尿病周围神经病变具有较强的治疗作用。山奈酚作为一种类黄酮化合物，具有改善胰岛素抵抗和保护胰岛 细胞功能的作用，山奈酚通过不同干预途径均对糖尿病并发症有一定的保护作用29。常春藤皂苷元是一种五环三萜类化合物，其质量分数达70%以上的续断皂苷元可明显抑制-糖苷酶活性30。芒柄花素属于异黄酮类化合物，长期使用芒柄花素能改善高血糖，增加神经组织中 Sirtuin蛋白和神经生长因子的表达，从而减轻热痛觉，提高神经传导速度，进而