食品免疫学6抗原和抗体的制备.pdf

第六章第六章单克隆抗体的单克隆抗体的制备和应用制备和应用第六章第六章单克隆抗体的单克隆抗体的制备和应用制备和应用Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.本章内容本章内容第一节第一节 单克隆抗体的概念和基本原理单克隆抗体的概念和基本原理第二节第二节 单克隆抗体制备的主要步骤单克隆抗体制备的主要步骤第一节第一节 单克隆抗体的概念和基本原理单克隆抗体的概念和基本原理第二节第二节 单克隆抗体制备的主要步骤单克隆抗体制备的主要步骤Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Niels K.JerneGeorges J.F.KhlerCsar MilsteinGenerated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.克隆克隆（Clone）又名无性繁殖系，指由一个祖先细胞经分化、增殖所产生的遗传性状完全相同的细胞群）又名无性繁殖系，指由一个祖先细胞经分化、增殖所产生的遗传性状完全相同的细胞群Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.多克隆抗体（多克隆抗体（Polyclonal antibody,pAb）用包含多种抗原决定基的抗原物质免疫动物，从而刺激多个用包含多种抗原决定基的抗原物质免疫动物，从而刺激多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体的总和，称为多克隆抗体细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体的总和，称为多克隆抗体单克隆抗体（单克隆抗体（Monoclonal Antibody,mAb）由一个杂交瘤细胞克隆所产生的，针对单一抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体由一个杂交瘤细胞克隆所产生的，针对单一抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.单克隆抗体的优点单克隆抗体的优点单克隆抗体的优点单克隆抗体的优点单特异性和均一性单特异性和均一性无限供应无限供应用混合的抗原制备出识别一个抗原决定簇的抗体用混合的抗原制备出识别一个抗原决定簇的抗体Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.B B淋巴细胞杂交瘤技术的基本原理淋巴细胞杂交瘤技术的基本原理淋巴细胞杂交瘤技术的基本原理淋巴细胞杂交瘤技术的基本原理B细胞骨髓瘤细胞细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.杂交细胞（杂交细胞（hybrid cell）在外界某些条件干预下（如在外界某些条件干预下（如PEG、电穿孔），当两个细胞紧密地接触的时候、电穿孔），当两个细胞紧密地接触的时候,其细胞膜可能发生融合，产生具有原来两个细胞染色体其细胞膜可能发生融合，产生具有原来两个细胞染色体/基因的单个细胞，称为基因的单个细胞，称为杂交细胞杂交细胞Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.杂交瘤细胞（杂交瘤细胞（Hybridomas）若用一种肿瘤细胞与另一种体细胞（如淋巴细胞）融合，所形成的杂交细胞称为杂交瘤细胞，简称若用一种肿瘤细胞与另一种体细胞（如淋巴细胞）融合，所形成的杂交细胞称为杂交瘤细胞，简称杂交瘤杂交瘤。其既具有肿瘤细胞无限增殖的能力，也具有淋巴细胞的一些特性。其既具有肿瘤细胞无限增殖的能力，也具有淋巴细胞的一些特性B淋巴细胞杂交瘤淋巴细胞杂交瘤骨髓瘤细胞与免疫骨髓瘤细胞与免疫B细胞融合所产生的杂交瘤细胞细胞融合所产生的杂交瘤细胞Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.抗原制备抗原制备免疫动物免疫动物骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备细胞融合细胞融合杂交瘤细胞的选择培养杂交瘤细胞的选择培养杂交瘤细胞的筛选及克隆化杂交瘤细胞的筛选及克隆化单克隆抗体的鉴定单克隆抗体的鉴定单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备第二节第二节 单克隆抗体制备的主要步骤单克隆抗体制备的主要步骤第二节第二节 单克隆抗体制备的主要步骤单克隆抗体制备的主要步骤Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.一、抗一、抗 原原一、抗一、抗 原原细胞、细菌和病毒等，一般具有较强的免疫原性，可不加佐剂。例如，直接腹腔注射细胞、细菌和病毒等，一般具有较强的免疫原性，可不加佐剂。例如，直接腹腔注射12107个细胞。个细胞。颗粒性抗原：颗粒性抗原：可溶性抗原的来源主要是天然纯化，或者用目的基因在原核或真核细胞内表达。可溶性抗原需与弗氏完全或不完全佐剂混匀，进行免疫。可溶性抗原的来源主要是天然纯化，或者用目的基因在原核或真核细胞内表达。可溶性抗原需与弗氏完全或不完全佐剂混匀，进行免疫。可溶性抗原：可溶性抗原：Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.B B淋巴细胞在目的抗原刺激下增殖、分化，淋巴细胞在目的抗原刺激下增殖、分化，形成能分泌特异性抗体的形成能分泌特异性抗体的淋巴细胞在目的抗原刺激下增殖、分化，淋巴细胞在目的抗原刺激下增殖、分化，形成能分泌特异性抗体的形成能分泌特异性抗体的B B淋巴细胞，有利于细淋巴细胞，有利于细胞融合形成分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。多次胞融合形成分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。多次免疫可通过抗体亲和力成熟机制，使免疫可通过抗体亲和力成熟机制，使淋巴细胞，有利于细淋巴细胞，有利于细胞融合形成分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。多次胞融合形成分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。多次免疫可通过抗体亲和力成熟机制，使免疫可通过抗体亲和力成熟机制，使B B细胞分泌细胞分泌高亲和力抗体，由此形成的杂交瘤往往可分泌高高亲和力抗体，由此形成的杂交瘤往往可分泌高亲和力抗体，有更高的应用价值。亲和力抗体，有更高的应用价值。细胞分泌细胞分泌高亲和力抗体，由此形成的杂交瘤往往可分泌高高亲和力抗体，由此形成的杂交瘤往往可分泌高亲和力抗体，有更高的应用价值。亲和力抗体，有更高的应用价值。二、免疫动物二、免疫动物二、免疫动物二、免疫动物免疫目的：免疫目的：Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.采用与骨髓瘤供体同一品系的动物免疫动物品系（脾细胞供体）和骨髓瘤细胞在种系发生上距离越远则产生的杂交瘤越不稳定，获得的杂交瘤不能在该品系小鼠体内诱生腹水。采用与骨髓瘤供体同一品系的动物免疫动物品系（脾细胞供体）和骨髓瘤细胞在种系发生上距离越远则产生的杂交瘤越不稳定，获得的杂交瘤不能在该品系小鼠体内诱生腹水。动物的选择：动物的选择：动物对抗原刺激易产生免疫应答反应动物对抗原刺激易产生免疫应答反应8 12周龄雌性小鼠（最常用周龄雌性小鼠（最常用BALB/c）Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.第一次免疫：可溶性抗原加弗氏完全佐剂第二次免疫：可溶性抗原加弗氏不完全佐剂第三次免疫：可溶性抗原加生理盐水第一次免疫：可溶性抗原加弗氏完全佐剂第二次免疫：可溶性抗原加弗氏不完全佐剂第三次免疫：可溶性抗原加生理盐水小鼠背部皮下注射小鼠背部皮下注射小鼠背部皮下注射小鼠背部皮下注射4周后周后3周后周后小鼠腹腔注射小鼠腹腔注射10天后检测血清效价天后检测血清效价加强免疫：可溶性抗原加生理盐水加强免疫：可溶性抗原加生理盐水小鼠腹腔注射小鼠腹腔注射细胞融合细胞融合3天后天后免疫程序：免疫程序：Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.脾（脾（spleen）抗原抗原脾（脾（spleen）Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.所选择的骨髓瘤细胞应与提供免疫脾细胞的动物品系相同所选择的骨髓瘤细胞应与提供免疫脾细胞的动物品系相同三、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备三、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备三、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备三、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备骨髓瘤细胞系的选择要点：骨髓瘤细胞系的选择要点：自身不产生免疫球蛋白的重链与轻链自身不产生免疫球蛋白的重链与轻链对氨基碟呤敏感对氨基碟呤敏感与免疫脾细胞融合后产生稳定分泌与免疫脾细胞融合后产生稳定分泌Ig杂交瘤细胞杂交瘤细胞Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.饲养细胞的作用：饲养细胞的作用：饲养细胞的作用：饲养细胞的作用：小鼠腹腔巨噬细胞小鼠腹腔巨噬细胞小鼠腹腔巨噬细胞小鼠腹腔巨噬细胞小鼠脾细胞小鼠脾细胞小鼠脾细胞小鼠脾细胞饲养细胞（饲养细胞（feeder cell）：）：增加细胞密度增加细胞密度，满足新生的杂交瘤细胞对满足新生的杂交瘤细胞对细胞密度的要求细胞密度的要求增加细胞密度增加细胞密度，满足新生的杂交瘤细胞对满足新生的杂交瘤细胞对细胞密度的要求细胞密度的要求吞噬清除死亡的细胞吞噬清除死亡的细胞吞噬清除死亡的细胞吞噬清除死亡的细胞分泌生长刺激因子促进杂交瘤细胞的生长分泌生长刺激因子促进杂交瘤细胞的生长分泌生长刺激因子促进杂交瘤细胞的生长分泌生长刺激因子促进杂交瘤细胞的生长饲养细胞的种类和制备方法：饲养细胞的种类和制备方法：饲养细胞的种类和制备方法：饲养细胞的种类和制备方法：Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.四、细胞融合四、细胞融合四、细胞融合四、细胞融合融合前的准备工作融合前的准备工作准备准备准备准备HATHAT、HTHT培养液、融合剂培养液、融合剂培养液、融合剂培养液、融合剂PEGPEG准备饲养细胞准备饲养细胞准备饲养细胞准备饲养细胞准备骨髓瘤细胞准备骨髓瘤细胞准备骨髓瘤细胞准备骨髓瘤细胞准备免疫脾细胞准备免疫脾细胞准备免疫脾细胞准备免疫脾细胞Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.拉颈处死小鼠拉颈处死小鼠无菌操作取出脾脏无菌操作取出脾脏清洗、研磨清洗、研磨收集细胞收集细胞离心洗涤离心洗涤细胞计数细胞计数脾细胞的准备脾细胞的准备Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.收集细胞收集细胞离心洗涤离心洗涤活细胞计数活细胞计数调整细胞浓度调整细胞浓度骨髓瘤细胞的准备骨髓瘤细胞的准备Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.细胞融合细胞融合骨髓瘤细胞与脾细胞按一定比例混合骨髓瘤细胞与脾细胞按一定比例混合1:10或或1:5加入促融剂加入促融剂PEGPEGGenerated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.在聚乙二醇作用下在聚乙二醇作用下B淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.五、杂交瘤细胞的选择性培养五、杂交瘤细胞的选择性培养五、杂交瘤细胞的选择性培养五、杂交瘤细胞的选择性培养HATHAT选择性培养的原理：选择性培养的原理：选择性培养的原理：选择性培养的原理：细胞的细胞的细胞的细胞的DNADNA生物合成有主要途径和补偿途径。生物合成有主要途径和补偿途径。当有氨基碟呤存在时，能够阻断当有氨基碟呤存在时，能够阻断生物合成有主要途径和补偿途径。生物合成有主要途径和补偿途径。当有氨基碟呤存在时，能够阻断当有氨基碟呤存在时，能够阻断DNADNA合成的主要途合成的主要途径，需通过补偿途径合成径，需通过补偿途径合成合成的主要途合成的主要途径，需通过补偿途径合成径，需通过补偿途径合成DNADNA，这时就需要次黄嘌，这时就需要次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（，这时就需要次黄嘌，这时就需要次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRTHGPRT）利用次黄嘌呤）利用次黄嘌呤合成合成）利用次黄嘌呤）利用次黄嘌呤合成合成DNADNA，或胸腺嘧啶核苷激酶（，或胸腺嘧啶核苷激酶（，或胸腺嘧啶核苷激酶（，或胸腺嘧啶核苷激酶（TKTK）利用胸腺嘧）利用胸腺嘧啶核苷合成啶核苷合成）利用胸腺嘧）利用胸腺嘧啶核苷合成啶核苷合成DNADNA。Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.用于杂交瘤融合的骨髓细胞缺乏用于杂交瘤融合的骨髓细胞缺乏HGPRT和和TK，在，在HAT培养液中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏培养液中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT和和TK，不能利用补救途径合成，不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的而死亡。未融合的B淋巴细胞虽具有淋巴细胞虽具有HGPRT和和TK，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有骨髓瘤细胞与免疫，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有骨髓瘤细胞与免疫B细胞融合的杂交瘤既有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又从免疫细胞融合的杂交瘤既有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又从免疫B细胞得到细胞得到HGPRT和和TK 的基因产物，因此，能够克服氨基碟呤的阻断作用，通过次黄嘌呤的补偿途径合成的基因产物，因此，能够克服氨基碟呤的阻断作用，通过次黄嘌呤的补偿途径合成DNA，而在，而在HAT选择培养液中生长繁殖。选择培养液中生长繁殖。Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.融合后融合后34天后，可见外形似骨髓瘤细胞，浑圆透亮的克隆。融合后第天后，可见外形似骨髓瘤细胞，浑圆透亮的克隆。融合后第79天取培养上清，检测特异性抗体。天取培养上清，检测特异性抗体。细胞生长情况细胞生长情况Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.六、杂交瘤细胞的筛选及克隆化六、杂交瘤细胞的筛选及克隆化六、杂交瘤细胞的筛选及克隆化六、杂交瘤细胞的筛选及克隆化杂交瘤分泌单克隆抗体的检测方法杂交瘤分泌单克隆抗体的检测方法免疫酶技术免疫酶技术间接间接ELISA包被抗原、培养上清、酶标抗体、加底物显色包被抗原、培养上清、酶标抗体、加底物显色阴性对照：阴性对照：骨髓瘤细胞培养上清骨髓瘤细胞培养上清阳性对照：阳性对照：免疫鼠血清免疫鼠血清免疫荧光技术免疫荧光技术间接免疫荧光（或酶）测定法：靶细胞铺片、固定细胞、加待测样品、加荧光标记抗体（或加酶标抗体和显色底物）、镜检间接免疫荧光（或酶）测定法：靶细胞铺片、固定细胞、加待测样品、加荧光标记抗体（或加酶标抗体和显色底物）、镜检活细胞免疫荧光技术：流式细胞术分析活细胞免疫荧光技术：流式细胞术分析Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.杂交瘤细胞的克隆化杂交瘤细胞的克隆化在在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。克隆化培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。克隆化即把培养孔中的细胞从单个细胞进行培养繁殖，使之成为单克隆，其分泌的抗体达到均一性。即把培养孔中的细胞从单个细胞进行培养繁殖，使之成为单克隆，其分泌的抗体达到均一性。Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.有限稀释法有限稀释法Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.软琼脂培养法软琼脂培养法以适当浓度杂交瘤细胞加入软琼脂培养以适当浓度杂交瘤细胞加入软琼脂培养基中基中，形成由一个细胞增殖而成的细胞集落形成由一个细胞增殖而成的细胞集落。软琼脂培养法软琼脂培养法以适当浓度杂交瘤细胞加入软琼脂培养以适当浓度杂交瘤细胞加入软琼脂培养基中基中，形成由一个细胞增殖而成的细胞集落形成由一个细胞增殖而成的细胞集落。Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.杂交瘤细胞的克隆化筛选：杂交瘤细胞的克隆化筛选：杂交瘤细胞的克隆化筛选：杂交瘤细胞的克隆化筛选：Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.免疫球蛋白类别及亚类的鉴定免疫球蛋白类别及亚类的鉴定七、单克隆抗体的鉴定七、单克隆抗体的鉴定七、单克隆抗体的鉴定七、单克隆抗体的鉴定小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞，其分泌的特异性小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞，其分泌的特异性McAb的本质仍是小鼠的不同类型及其亚类的免疫球蛋白（的本质仍是小鼠的不同类型及其亚类的免疫球蛋白（Ig），其中以），其中以IgG（IgG1、IgG2a、IgG2b和和IgG3等亚类）最常見，其次为等亚类）最常見，其次为IgM。Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.抗体亲和力是指抗体与抗原或半抗原结合的强度，其高低主要是由抗体分子结合表位部位和抗原决定簇之间的互补程度决定。抗体亲和力是指抗体与抗原或半抗原结合的强度，其高低主要是由抗体分子结合表位部位和抗原决定簇之间的互补程度决定。特异性 是否与其他抗原有交叉反应特异性 是否与其他抗原有交叉反应敏感性 对腹水和培养上清进行效价测定敏感性 对腹水和培养上清进行效价测定亲和力测定亲和力测定Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.八、单克隆抗体的制备八、单克隆抗体的制备八、单克隆抗体的制备八、单克隆抗体的制备动物体内诱生法动物体内诱生法取取Balb/c小鼠小鼠,首先腹腔注射首先腹腔注射0.5ml液体石腊或降植烷进行预处理。液体石腊或降植烷进行预处理。12周后周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.约约12周周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.将杂交瘤细胞置于培养瓶（或灌）中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体。收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体，不含无关将杂交瘤细胞置于培养瓶（或灌）中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体。收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体，不含无关Ig，但成本髙。，但成本髙。体外培养法体外培养法Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.我国单克隆抗体的发展历史和前景我国单克隆抗体的发展历史和前景我国单克隆抗体的发展历史和前景我国单克隆抗体的发展历史和前景早期研究阶段早期研究阶段全军单克隆抗体研究协作组（单克隆抗体通迅）全军单克隆抗体研究协作组（单克隆抗体通迅）应用和市场化应用和市场化HLDAHCDM功能基因组研究中的重要地位功能基因组研究中的重要地位国家重大科技项目（国家重大科技项目（973、863等）主要研究内容之一等）主要研究内容之一Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用基础理论研究（生命科学）基础理论研究（生命科学）发病机理的研究发病机理的研究疾病的预防（紧急预防）疾病的预防（紧急预防）疾病的诊断（传染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病、过敏性疾病、免疫缺陷病）疾病的诊断（传染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病、过敏性疾病、免疫缺陷病）疾病的治疗（治疗性抗体）疾病的治疗（治疗性抗体）一项重要的生物技术和一类生物高科技产品一项重要的生物技术和一类生物高科技产品Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.单克隆抗体在生命科学和医学中的广泛应用单克隆抗体在生命科学和医学中的广泛应用单克隆抗体在生命科学和医学中的广泛应用单克隆抗体在生命科学和医学中的广泛应用从医学到生命科学的各个领域从医学到生命科学的各个领域从基础研究到临床应用从基础研究到临床应用从诊断到预防和治疗从诊断到预防和治疗从医学到生命科学的各个领域从医学到生命科学的各个领域从基础研究到临床应用从基础研究到临床应用从诊断到预防和治疗从诊断到预防和治疗 MHCMHC 细胞表面分子细胞表面分子细胞表面分子细胞表面分子 血型血型血型血型 肿瘤相关抗原和分子肿瘤相关抗原和分子肿瘤相关抗原和分子肿瘤相关抗原和分子 抗抗抗抗IgIg的同种异型的同种异型的同种异型的同种异型 激素、细胞因子和血浆成分激素、细胞因子和血浆成分激素、细胞因子和血浆成分激素、细胞因子和血浆成分 纯化干扰素纯化干扰素纯化干扰素纯化干扰素 病原生物病原生物病原生物病原生物Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.传染性疾病传染性疾病HIV:急性感染期和晚期急性感染期和晚期:核心抗原核心抗原p24升高升高;检测抗检测抗HIV抗体初筛抗体初筛;免疫印迹进一步确认免疫印迹进一步确认;CD4+T 细胞细胞200/l病情严重病情严重HAV、HBV、HCV:抗体抗体HFRS:免疫荧光，免疫荧光，ELISA（特异性（特异性IgM）肿瘤肿瘤多种肿瘤的标志物直肠结肠癌多种肿瘤的标志物直肠结肠癌:CEA前列腺癌前列腺癌:PSA原发性肝癌原发性肝癌:AFP淋巴瘤和白血病淋巴瘤和白血病:CD分子分子自身免疫性和过敏性疾病自身免疫性和过敏性疾病自身抗体（抗核抗体、类风湿因子）放射免疫测定法（自身抗体（抗核抗体、类风湿因子）放射免疫测定法（RIA）检测特异性）检测特异性IgE甲状腺素、胰岛素、生长激素甲状腺素、胰岛素、生长激素其他其他血型检测：凝集反应（直接和间接）早孕血型检测：凝集反应（直接和间接）早孕:人绒毛膜促性腺激素（人绒毛膜促性腺激素（hCG）男性不育）男性不育:抗精子抗体抗精子抗体单克隆抗体在临床诊断中应用单克隆抗体在临床诊断中应用单克隆抗体在临床诊断中应用单克隆抗体在临床诊断中应用Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Fabmurine antibodychimeric mouse antibody FvdAbengineeredbispecific AbScFvHumanizedF(ab?)2HumanizedantibodyScFv-toxinintrabodyGenerated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Number of therapeutic mAbs entering clinical study per yearGenerated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Therapeutic categories for mAbs in clinical studyGenerated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.通用名批准时间类型识别抗原适应症通用名批准时间类型识别抗原适应症Muromonab-CD31986mouseCD3急性肾移植移植排斥急性肾移植移植排斥Daclizumab;Basiliximab1997;1998humanized/chimericIL-2R(CD25)急性肾移植移植排斥急性肾移植移植排斥Rituximab;Tositumomab;Ibritumomab1997;2002;2003mouse/chimericCD20B细胞细胞-非何杰金氏淋巴瘤、类风湿性关节炎非何杰金氏淋巴瘤、类风湿性关节炎Alemtuzumab2001humanizedCD52慢性慢性B淋巴细胞性白血病淋巴细胞性白血病Gemtuzumab ozogamicin2000chimericCD33急性粒细胞性白血病急性粒细胞性白血病Edrecolomab*1995mouseEP-CAM结、直肠癌结、直肠癌Trastuzumab1998humanizedHER-2HER-2过表达的转移性乳腺癌过表达的转移性乳腺癌Cetuximab2004humanizedEGFR转移性结肠癌、头颈部癌症转移性结肠癌、头颈部癌症Bevacizumab2004;2006humanizedVEGF转移性结肠癌转移性结肠癌,年龄相关性黄斑病变年龄相关性黄斑病变Infliximab1998;2002chimeric/humanTNF-节段性回肠炎、类风湿关节炎节段性回肠炎、类风湿关节炎,银屑病性关节炎银屑病性关节炎;强直性脊柱炎强直性脊柱炎Efalizumab2003humanizedCD11a银屑病银屑病Natalizumab2004human4整合素多发性硬化症整合素多发性硬化症Omalizumab2003humanizedIgE过敏性哮喘过敏性哮喘Abciximab 1994 chimeric GPb/a 冠心病血小板冠心病血小板Palivizumab 1998 humanized RSV 呼吸道合胞病毒感染呼吸道合胞病毒感染Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Characteriztion of mAbs against EpCAMby IHC and IFGenerated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.肿瘤器官移植排斥自身免疫性疾病其他肿瘤器官移植排斥自身免疫性疾病其他CD20,CD52,CD33,HER-2EGFR,VEGF,EP-CAMCD3,IL-2R（CD25）TNF-,CD11a,4整合素整合素,CD20GPb/a,IgE,RSVgpFGenerated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.Mechanisms of mAb-mediated killingGenerated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.CD20 表达于表达于B 淋巴细胞，其抗体可促进细胞对化疗的敏感性，诱导细胞凋亡、淋巴细胞，其抗体可促进细胞对化疗的敏感性，诱导细胞凋亡、ADCC、CDCCD33 表达于表达于90%以上的急性髓样白血病以上的急性髓样白血病(AML)细胞，但不表达于骨髓细胞，但不表达于骨髓CD34+造血干细胞，其抗体可诱导双链造血干细胞，其抗体可诱导双链DNA断裂和细胞死亡断裂和细胞死亡CD52 可诱导可诱导ADCC和和CDC，治疗慢性，治疗慢性B淋巴细胞白血病、淋巴细胞白血病、T细胞白血病和细胞白血病和T细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤白血病及淋巴瘤白血病及淋巴瘤白血病及淋巴瘤白血病及淋巴瘤Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.抗抗HER2/CD340 ADCC，抑制肿瘤细胞增殖和血管形成，抑制肿瘤细胞增殖和血管形成抗抗EGFR 阻断阻断EGFR与与EGF结合，诱导结合，诱导ADCC，抑制细胞增殖，抑制肿瘤血管形成，诱导凋亡，抑制细胞增殖，抑制肿瘤血管形成，诱导凋亡抗抗VEGF 阻断阻断VEGF与与VEGF受体结合，抑制肿瘤的血管生长和转移部位的发展受体结合，抑制肿瘤的血管生长和转移部位的发展实质性肿瘤实质性肿瘤实质性肿瘤实质性肿瘤Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.抗抗CD3 补体依赖的细胞毒作用（补体依赖的细胞毒作用（CDC），清除），清除T细胞，阻断细胞，阻断T细胞功能细胞功能抗抗CD25 补体依赖的细胞毒作用（补体依赖的细胞毒作用（CDC），阻断），阻断IL-2受体受体预防肾移植急性排斥反应预防肾移植急性排斥反应预防肾移植急性排斥反应预防肾移植急性排斥反应Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.抗抗TNF阻断阻断TNF-与受体结合与受体结合,降低或消除由降低或消除由TNF-刺激细胞所发生的炎症反应刺激细胞所发生的炎症反应抗抗CD11a 抑制抑制LFA-1与配体结合与配体结合,抑制白细胞黏附抑制白细胞黏附,治疗斑状牛皮癣治疗斑状牛皮癣抗抗4整合素整合素 抑制抑制VLA-4与配体结合与配体结合,抑制白细胞黏附抑制白细胞黏附CD20 治疗治疗RA自身免疫性疾病自身免疫性疾病自身免疫性疾病自身免疫性疾病Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.抗抗IgE 阻断阻断IgE与与IgE受体结合受体结合,抑制肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒和释放介质，治疗持续性哮喘抑制肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒和释放介质，治疗持续性哮喘抗抗gpb/a抑制血小板凝血，止血，预防冠状动脉血管形成术中血栓抑制血小板凝血，止血，预防冠状动脉血管形成术中血栓抗抗RSVgpF中和病毒，抑制病毒融合和复制，预防儿童在高危期中和病毒，抑制病毒融合和复制，预防儿童在高危期RSV感染感染其他疾病其他疾病其他疾病其他疾病Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.抗抗IgE mAb 治疗过敏性疾病的信号传导途径治疗过敏性疾病的信号传导途径Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.通用名类型识别抗原治疗疾病通用名类型识别抗原治疗疾病CatumaxomabRomovab 双特异性双特异性anti-CD3/Epcam结肠癌结肠癌Zanolimumab Humax-CD4人抗体人抗体,IgGCD4皮肤性皮肤性T细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤EpratuzumabLymphocide人源人源,IgG1CD22非何杰金淋巴瘤和某些自身免疫性疾病非何杰金淋巴瘤和某些自身免疫性疾病(如如SLE),与与CD20mAb联用可能会提高临床效果联用可能会提高临床效果MDX-010ipilimumab人抗体人抗体,IgGCTLA-4黑素瘤黑素瘤WX-G250Rencarex嵌合嵌合,IgG1抗碳酸酐酶晚期肾癌抗碳酸酐酶晚期肾癌AMG-162 denosumab人抗体人抗体,IgG2RANKL绝期后骨质疏松症和防止治疗肿瘤过程中激素部分切除治疗引起的骨丢失绝期后骨质疏松症和防止治疗肿瘤过程中激素部分切除治疗引起的骨丢失Anti-MRSAmAbAurograb人抗体人抗体,scFv抗甲氧苄青链素的金黄色葡萄球菌抗甲氧苄青链素的金黄色葡萄球菌(MRSA)金黄色葡萄球菌感染金黄色葡萄球菌感染PexelizumabAlexion;Eculizumab人源人源,单链可变区单链可变区,scFv补体补体C5治疗心血管术后合并症治疗心血管术后合并症,膜性肾炎膜性肾炎,急性心肌梗塞急性心肌梗塞,RAMepolizumab人源人源,IgG1IL-5特应性皮炎特应性皮炎,嗜酸细胞过多综合征嗜酸细胞过多综合征FDAFDA批准进入批准进入期临床验证的治疗性抗体（期临床验证的治疗性抗体（批准进入批准进入期临床验证的治疗性抗体（期临床验证的治疗性抗体（9 9种新的靶分子）种新的靶分子）种新的靶分子）种新的靶分子）Generated by Foxit PDF Creator Foxit Softwarehttp:/ For evaluation only.靶分子抗体种类治疗疾病商品名公司批准时间靶分子抗体种类治疗疾病商品名公司批准时间CD分子分子IL-6R人源化抗体（人源化抗体（IgG1）阻断）阻断IL-6与与IL-6R结合，治疗结合，治疗RA,Castelman病病RoActemra/Tocili