乙酰肝素酶癌症转移治疗的靶点.pdf

药学学报A c t aP h a r m a c e u t i c aS i n i c a2 0 0 5，4 0(1 0)：8 7 1 8 7 58 7 1 乙酰肝素酶癌症转移治疗的靶点赵华军1 2，章雄文1，丁健h(中国科学院1 上海生命科学研究院上海药物研究所国家新药研究重点实验室肿瘤药理组，2 研究生院，上海2 0 1 2 0 3)关键词：乙酰肝素酶；癌症转移；抑制剂中图分类号：R 7 3 3 7；R 7 3 0 5文献标识码：A文章编号：0 5 1 3 4 8 7 0(2 0 0 5)1 0 0 8 7 1 0 5H e p a r a n a s e：t a r g e tf o rc a n c e rm e t a s t a t i ct h e r a p yZ H A OH u a j u n l”，Z H A N GX i o n g w e l l l，D I N GJ i a n l4(J D i v i s i o no f A n t i t u m o rP h a r m a c o l o g y，S t a t eK e yL a b o r a t o r yo f D r u gR e s e a r c h，S h a n g h a iI n s t i t u t eo f M a t e r i aM e d i c a，S h a n g h a iI n s t i t u t e sf o rB i o l o g i c a lS c i e n c e，2 G r a d u a t eS c h o o lo ft h eC h i n e s eA c a d e m yo fS c i e n c e s，C h i n e s eA c a d e m yo fS c i e n c e s，S h a n g h a i2 0 1 2 0 3，C h i n a)K e yw o r d s：h e p a r a n a s e；c a n c e rm e t a s t a s i s；i n h i b i t o r近年来研究表明，乙酰肝素酶与癌症组织的转移有极为密切的相关性，通过抑制乙酰肝素酶可以阻止癌细胞的转移，提示乙酰肝素酶可成为癌症转移治疗的靶点。1乙酰肝素酶及其作用机制侵染性细胞尤其是转移性肿瘤细胞和白细胞可通过调节一系列降解酶从而通过胞外基质和基底膜两层屏障。起初，科学家认为这两层屏障的主要成分结构蛋白的破坏是肿瘤细胞转移的决定性步骤，因此，过去的研究大多集中在底物为结构蛋白的丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶类和基质金属蛋白酶(m a t r i xm e t a u 叩r o t e i n a s e s，M M P s)类上。事实上，作为胞外基质和基底膜的另一主要成分糖胺聚糖的水解酶有不可忽视的作用。实验发现，胞外基质中硫酸乙酰肝素(H S)的降解是细胞侵染的前提条件。侵染性细胞可产生一种糖苷内切酶乙酰肝素酶来切割H S 链上的特定位点。乙酰肝素酶基因编码区全长1 7k b，编码5 4 3个氨基酸的6 5k D 前体蛋白，加工后形成5 0k D 和8收稿日期：2 0 0 4 1 0-2 0 基金项目：科技部国家重点基础研究发展计划(9 7 3 计划)项目(2 0 0 3 C B 7 1 6 4 0 4)+通讯作者T e l：8 6 2 1 5 0 8 0 6 0 7 9，F a x：8 6 2 1 5 0 8 0 6 7 2 2，E-m a i l：j d i n g m a i l s h c n c a e a nk D 亚基组成的活性形式，是人体内唯一具有降解H S 功能的酶。乙酰肝素酶以水解酶机制切割糖苷键，与细菌中的消除酶(e l i m i n a s e)如肝素酶(h e p a r i n a s e)和h e p a r i t i n a s e 切割机制不同。H S 中只有少量的乙酰肝素酶酶切位点，乙酰肝素酶的降解产物仍是较大的片段(1 0 一2 0 个糖基)，说明此酶识别独特稀有的H s 结构。而消除酶可将肝素和H S 降解成二糖或四糖单位。V l o d a v s k y 的研究小组通过大肠杆菌(E c o l i)飚产生的外多糖(e x o p o l y s a c c h a r i d e)经酶法和化学修饰研究表明，人血小板和肝癌乙酰肝素酶要求底物0 一硫酸化，对一硫酸化或I d o A 残基无必须要求HJ。肝素衍生的1 个八糖可以与抗凝血酶I I I(a n t i t h r o m b i n，A TI I I)结合，它可以被乙酰肝素酶点切割。底物选择性的6 0 去硫酸化不影响乙酰肝素酶切割，但可被2 0 一去硫酸化抑制，说明距切割位点2 个糖基的己糖醛酸上的2 0 硫酸对于乙酰肝素酶的识别是很重要的1。在此基础上，可确定乙酰肝素酶可切割的最小H S 序列在 H e x A G l c N S A c(6 S)一G l c A G l c N S A c H e x A 2 S G l c N S A c。H e x A 1 内，但乙酰肝素酶似乎可切割H S 中不完全包含A TI I I 识别位点的序列。还有一些研究表明一硫酸和0 硫酸也不是乙酰肝素酶切割的必要条件嵋J。另外，O k a d a 等1 对乙酰肝素酶底物的识别结构作了 万方数据药学学报A c t aP h a r m a c e u t i c aS i n i c a2 0 0 5，4 0(1 0)：8 71 8 7 5一系列的研究，认为：(1)最小的识别骨架是三糖G 1 c N G l c A G l c N；(2)G 1 c A 在硫酸化区域内；(3)-G l c N(6 S)-G l c A G l c N(N S)顺序是乙酰肝素酶切割位点的必要但不充分序列。由此可见，乙酰肝素酶切割H S 后形成葡糖醛酸的新还原末端，但其准确的酶切位点仍未完全阐明。进一步确证乙酰肝素酶的作用位点和蛋白质三维结构将会对其抑制剂的研究提供指导意义。2乙酰肝素酶的肿瘤生物学功能2 1 促进肿瘤细胞侵染和转移多种肿瘤细胞的侵染、转移潜能与乙酰肝素酶表达量具有相关性。V l o d a v s k y 等4o 用半定量R T P C R 对不同转移程度的人乳腺癌细胞进行检测，在非转移性乳腺癌细胞M C F-7 中没有观察到乙酰肝素酶基因扩增的产物，在中度转移性乳腺癌细胞M D A M B-2 3 1 中有表达，而在高度转移性乳腺癌细胞M D A M B-4 3 5 的表达明显升高。通过对正常乳腺组织和发生侵染的乳腺癌组织原位杂交检测，发现浸润性乳腺导管癌组织样品细胞质中出现大面积乙酰肝素酶阳性染色。免疫组化采用单克隆抗体检测石蜡包埋结肠癌组织以及同一患者肝转移标本，发现细胞质和细胞表面均有阳性染色物。M i a o 等o 也发现患有转移性癌症的动物和恶性黑色素瘤脑转移病人血清中乙酰肝素酶的含量和活性增加。W a l c h 等1 建立一种缺失或突变p 7 5 N T R 基因的恶性畸胎瘤细胞系，增加了它对脑组织的转移能力，在这种细胞中乙酰肝素酶含量增加了8 1 0 倍。H u l e t t 等一1 也报道，在大鼠高转移性乳腺癌细胞系M A T l 3 7 6 2 及D M B A 一8 A 中，乙酰肝素酶的m R N A 表达及酶活力均比各自相应的非转移性变异株(JC l o n e 及D M B A S a s k)高。而正常组织中，乙酰肝素酶的表达限于淋巴器官、胎盘和胎儿肝脏等极少器官组织一8 I。由此认为，乙酰肝素酶的高水平表达只有在一个细胞群处于侵染状态下才会发生。乙酰肝素酶基因转染的实验也证明乙酰肝素酶在肿瘤转移中的作用。当淋巴细胞和癌细胞被乙酰肝素酶基因稳定转染后，会激发其转移能力。V l o d a v s k y 等Ho 将乙酰肝素酶全长基因导人非浸润的淋巴瘤细胞系E b T 后形成稳定克隆，乙酰肝素酶表达和活性明显增高，接种到裸鼠肝脏后转移及致死能力明显提高，实验组同期死亡率达9 0，对照组仅6 0。肝组织大体及镜下检查发现，E b T 细胞主要分布在肝窦区和门静脉区血管周围或在血管内，对照组无此改变。在乙酰肝素酶基因瞬时转染低转移潜能的黑色素瘤细胞后，该细胞肺转移率增加了4 0 0 5 0 0。另外，U n o po 和Z h a n g 10。等证实，反义中介的乙酰肝素酶活性抑制能显著抑制肿瘤细胞的入侵能力。E d o v i t s k y 等1。用R N A 干扰技术说明，乙酰肝素酶基因沉默能有效地抑制肿瘤细胞入侵和癌症转移。临床研究表明，在人结肠癌发展的过程中，乙酰肝素酶的m R N A 和蛋白质水平随着细胞群由高分化向低分化发展而逐渐增高，毗连的和形态上正常的结肠癌周边组织没有乙酰肝素酶的表达。高侵染性的结肠癌细胞群和毗连的引起粘连的基质成纤维细胞群呈现高水平的乙酰肝素酶m R N A 和蛋白质2 I。也有研究证实，乙酰肝素酶m R N A 表达的增加与胰腺癌病人手术后成活率降低有显著相关性13 I。A n d e l a 等4o 近来发现，N F 一，(B 信号通路的抑制同时下调了M M P 一9、血浆纤维蛋白溶酶原激活因子和乙酰肝素酶，阻止了实验和自发的肿瘤转移。相反地，星形胶质细胞通过产生乙酰肝素酶促进黑色素瘤细胞的脑转移5 I。H e 等刮研究表明，缺氧能诱导乙酰肝素酶表达，从而促进肿瘤细胞的人侵能力。另外，体内使用乙酰肝素酶抑制剂(P I 一8 8)可有效降低(9 0)肿瘤转移率7 I，此结果适用于多种肿瘤模型。2 2 促进血管生成在血管生成的早期，内皮细胞降解内皮下基底膜，然后内皮细胞植入、增殖形成血管芽。乙酰肝素酶可能在内皮细胞植入过程中起降解基底膜的作用。V l o d a v s k y 等8 研究表明，在体外将乙酰肝素酶基因转染E b T 淋巴细胞后，血管生成能力增加了4 倍。免疫组化染色可见乙酰肝素酶存在于肿瘤的血管芽部分即血管生长点，而成熟血管没有9 I。乙酰肝素酶可能直接作用于内皮细胞以出芽方式促进血管生成。血管产生的另一关键是它依赖于H S 结合性生长因子。其中一些生长因子贮存于胞外基质中，并随乙酰肝素酶和其他水解酶降解、液化胞外基质而释放出来。同时乙酰肝素酶可以从内皮细胞表面上释放出一些具有碱性成纤维生长因子(b F G F)激活作用的H S 降解物片段来诱发直接的血管反应。Z c h a r i a 等。2 0。研究表明，转乙酰肝素酶基因的小鼠，其乳腺和皮肤等组织的血管密度均比对照组有显著增加。K e l l y 等。2 1。研究表明，在骨髓瘤中，乙酰肝素酶活性与血管密度成正相关性。以上事实说明血管生成的某个特定阶段可能是乙酰肝素酶依赖性的，这使得利用乙酰肝素酶抑 万方数据一、食道癌食道癌早期症状1.咽下梗噎感最多见，可自行消失和复发，不影响进食。常在病人情绪波动时发生，故易被误认为功能性症状。2.胸骨后和剑突下疼痛较多见。咽下食物时有胸骨后或剑突下痛，其性质可呈烧灼样、针刺样或牵拉样，以咽下粗糙、灼热或有刺激性食物为著。初时呈间歇性，当癌肿侵及附近组织或有穿透时，就可有剧烈而持续的疼痛。疼痛部位常不完全与食管内病变部位一致。疼痛多可被解痉剂暂时缓解。3.食物滞留感染和异物感咽下食物或饮水时，有食物下行缓慢并滞留的感觉，以及胸骨后紧缩感或食物粘附 于食管壁等感觉，食毕消失。症状发生的部位多与食管内病变部位一致。http:/ 2/3 的食管周径被癌肿浸润时，才出现咽下困难。因此，在上述早期症状出现后，在数月内病情逐渐加重，由不能咽下固体食物发展至液体食物亦不能咽下。如癌肿伴有食管壁炎症、水肿、痉挛等，可加重咽下困难。阻塞感的位置往往符合手癌肿部位。2.食物反应常在咽下困难加重时出现，反流量不大，内含食物与粘液，也可含血液与脓液。3.其他症状当癌肿压迫喉返神经可致声音嘶哑；侵犯膈神经可引起呃逆或膈神经麻痹；压迫气管或支气管可出现气急和干咳；侵蚀主动脉则可产生致命性出血。并发食管-气管或食管-支气管瘘或癌肿位于食管上段时，吞咽液体时常可产生颈交感神经麻痹征群。四、体征早期体征要缺如。晚期可出现打呃、吞咽困难。并且由于患者进食困难可导致营养不良而出现消瘦、贫血、失水或恶病质等体征。当癌肿转移时，可触及肿大而坚硬的浅表淋巴结，或肿大而有结节的肝脏。还可出现黄疸、腹水等。其他少见的体征尚有皮肤、腹白线处结节，腹股沟淋巴结肿大。赵华军等：乙酰肝素酶癌症转移治疗的靶点制剂阻止肿瘤血管生成成为一个重要的研究方向。3乙酰肝素酶的其他生物学功能3 1 炎症慢性炎症的特点是白细胞持续游离出血管壁，然后进入并聚集于炎症部位。与肿瘤细胞的浸染过程一样，乙酰肝素酶也参与了白细胞降解内皮下基底膜的过程。所以，活化的T 细胞诱发炎症的能力与其表达的乙酰肝素酶活性紧密相关。正常个体中，乙酰肝素酶m R N A 只能在大量的白细胞、部分外周血白细胞中检测到 J，因为这些细胞要穿过血管壁进入炎症部位。实验表明前炎症因子可强烈诱导乙酰肝素酶活性表达。肝素和肝素衍生物如许多硫酸多糖作为乙酰肝素酶的有效抑制剂而具有抗炎作用。这些实验结果支持白细胞外渗需要乙酰肝素酶参与的观点。3 2 平滑肌细胞增生血管壁的胞外基质中的H S可抑制血管平滑肌细胞的增生心2。血管受创后，可能是外渗的白细胞产生的乙酰肝素酶降解了抑制性H S，使得平滑肌细胞增生。临床手术常用球形血管再生术清除动脉粥样斑块造成的血管堵塞，而平滑肌细胞增生与此术后的血管再狭窄密切相关。大鼠模型实验表明，乙酰肝素酶抑制剂P I 8 8 可明显减少球形血管再生术诱导的血管再狭窄。说明乙酰肝素酶在平滑肌增生中起重要作用。3 3 正常发育和组织重塑(t i s s u er e m o d e l i n g)乙酰肝素酶可能对胚胎着床和乳腺的表型起作用。4乙酰肝素酶抑制剂的研究由于乙酰肝素酶与肿瘤转移之间的密切关系，研究者一直在寻找乙酰肝素酶抑制剂，试图用于控制肿瘤转移。当前乙酰肝素酶的抑制剂研究集中于硫酸多糖类物质或结构类似于多糖的负离子多聚物。目前已有1 个抑制剂(P I 一8 8)进人二期临床，是一个应当注意的新方向。4 1 肝素及其衍生物肝素作为乙酰肝素酶的竞争性抑制底物能抑制动物中癌症的转移。但肝素具有很强的抗凝血作用，并可促进胞外基质中贮存的生长因子如b F G F 等释放心3 J，从而引起一系列的负面效应，故不宜使用。对肝素的多种化学结构衍生物的研究悼3 2 4o 发现，硫酸化程度越高，抑制效果越好。在肝素的一系列衍生物中，只有一己烷化肝素和一乙酰化肝素具有较弱的b F G F 释放作用，且这些衍生物具有各不相同的抗凝活性。因而，寻找较少副作用又能抑制乙酰肝素酶活性的肝素衍生物仍需继续努力。4 2 磷酸甘露糖戊糖硫酸盐(p h o s p h o m a n n o p e n-t a o s es u l f a t e。P I-8 8)和麦芽己糖硫酸盐(m a l t o-h e x a o s es u l f a t e)硫酸寡糖类具有与H S 相似的结构，可能干扰许多血管生长因子与H S 的识别，同时抑制乙酰肝素酶对H S 的切割。P a r i s h 等发现在乙酰肝素酶活性和血管生长两种测活系统中，高硫酸化的长度为5 个以上的线性多糖才具有以上两种抑制活性。其中P I 一8 8 和麦芽己糖硫酸盐就有这些活性，P I 8 8(P-6 一M a n-仅-(1 _ 3)一M a n p-O L-(1。3)斗M a n-a(1 _ 3)一M a n p-o c-(1 _ 2)-M a n。)是从二倍体酵母P i c h i ah o l s t i i(s t r a i nN R R L Y-2 4 4 8，前称H a n s e n u l ah o l s t i i)的外多糖中制备的。它有低毒性的特点，同时兼具抗血管增生及防止癌细胞扩散的双重功能。其抑制大鼠高度浸润性腺癌生长为5 0，抑制淋巴癌转移为4 0，抑制血源性癌转移为9 0，降低肿瘤新生血管形成为3 0。作为药物，该化合物已于1 9 9 0 年由澳大利亚的普基公司(P r o g e n)研发成功，并已通过英国人体第一阶段无毒测试。目前，美国和澳大利亚各大城市正在进行以黑色素细胞癌、肺癌及多发性骨髓癌等为主要临床应用的第二期临床试验。除了现有的适应症外，台湾的基亚公司的研究团队也积极寻求以P I 一8 8 治疗肾脏癌或胰脏癌的可行性。4 3硫酸昆布多糖硫酸昆布多糖(1 a m i n a r i ns u l f a t e，L S)是一种亲水性线性多聚物，基本单元是口1，3 一葡聚糖在葡聚糖残基的2，6 位硫酸化形成。它有3 0 4 0 的肝素抗凝性，已用于脑血管局部缺血的预防和治疗。也能有效抑制大鼠乳腺癌细胞1 3 6 7 2M A T 和小鼠B 1 6 一B L 6 黑色素瘤细胞的乙酰肝素酶活性，其I c，n 为0 2 1 0I x g m L“1。且已被证明具有抑制细胞增生、血管生成和鼠肿瘤生长的作用2 6 1 2 7 1。4 4人工合成的硫代磷酸的寡聚脱氧核苷酸G u v a k o v a 等。2 8。曾报道硫代磷酸的胞嘧啶同聚物(S d C)和胸腺嘧啶同聚物(S a T)可与b F G F 结合，抑制b F G F 与细胞表面的受体结合。并且可释放胞外基质中H S 结合的b F G F，与H S 有竞争作用。测试S d C5 及S d C2 8 对乙酰肝素酶的抑制作用，S D C 2 8在0 1m m o l L。1 浓度下完全抑制黑色素瘤的乙酰肝素酶活力。2 引。在静脉注射接种黑色素瘤细胞或乳腺癌细胞前，腹腔注射0 1 m 0 1 L 1S d C2 8 可抑制肺中转移细胞的克隆数约8 0 9 0。4 5 苏拉明和苏拉明类似物旧。苏拉明是一种多磺酸基萘硫脲，能有效抑制乙酰肝素酶活性，其I c，。为4 6p,m o l L，同时也能显著地抑制B。黑色素 万方数据药学学报A c t aP h a r m a c e u t i c aS i n i c a2 0 0 5，4 0(1 0)：8 7 1 8 7 5瘤细胞的入侵能力，其I c 小于1 0i x m o l L，且其对细胞人侵能力的影响独立于抗增殖活性。苏拉明类似物能更强地抑制乙酰肝素酶的活性，其I C，。为2 0 3 0p。m o l L，也能显著抑制人7 0w 细胞的入侵能力和乙酰肝素酶诱导的血管生成。4 6A-7 2 3 6 3T a k a t s u 掣3 03 从S t r e p t o m y c e sn o b i l i sS A N K6 0 1 9 2 中分离出几种化合物，A-7 2 3 6 3A 一1，A 一2 和c，它们都有对乙酰肝素酶活性的抑制作用，其中A-7 2 3 6 2C 最强，其I c，。为1 2I x m o l L。4 7 异吲哚羧酸类衍生物E 3 1o异吲哚羧酸类衍生物是一类新型的小相对分子质量的乙酰肝素酶抑制剂。这类化合物能有效地抑制乙酰肝素酶活性和血管生成，其中个别化合物抑制乙酰肝素酶活性的I C 5 0 达2 0 0 5 0 0n m o l L。4 8其他I s h i d a 等旧2 3 3。发现一些微生物代谢物和模拟硫酸乙酰肝素的小分子化合物有抑制乙酰肝素酶的活性，但其细胞和动物水平的生物学效应未见进一步报道。这些结果为寻找乙酰肝素酶抑制剂提供了新的思路。5 展望乙酰肝素酶在肿瘤细胞中的高表达是肿瘤转移的一个重要特征。乙酰肝素酶在炎症、平滑肌细胞增生和正常发育以及组织重塑中也有重要的作用。因此乙酰肝素酶抑制剂的研究是抗肿瘤药物研发中的一个新领域。由于乙酰肝素酶的不稳定性及其检测方法的复杂性，关于乙酰肝素酶活性抑制剂等研究的报道很、少。对于在癌症转移过程中起决定性作用的乙酰肝素酶来说，仅将研究限于检测R N A 等方面的研究是远远不够的。我国在天然产物资源方面有独特优势，建立乙酰肝素酶检测系统，寻找活性强副反应小的乙酰肝素酶抑制剂是一个新的研究方向。作者已开展对乙酰肝素酶抑制剂的研究，从昆虫表达载体p A c G P 6 7 获得信号肽，采用具有双启动子的昆虫表达载体p A c U W 5 1 以及无血清的昆虫细胞培养体系，同时分泌表达乙酰肝素酶大小亚基；用肝素亲和柱一步纯化乙酰肝素酶。采用高度灵敏的荧光H P L C 法来检测乙酰肝素酶活性，筛选乙酰肝素酶抑制剂。对筛选获得的新型低毒寡糖类抑制剂进行一系列体内外生物学评价，发现该抑制剂对人乳腺癌M D A M B-4 3 5 裸小鼠原位移植瘤生长和肺转移能力以及血管生成均有明显的抑制作用(成果未公开发表)，将有可能找到比P I 一8 8 更加有效的乙酰肝素酶抑制剂。R e f e r e n c e s 1 P i k a sD S，L iJ P，V l o d a v s k yI，e ta 1 S u b s t r a t es p e c i f i c i t yo fh e p a r a n a s e sf r o mh u m a nh e p a t o m aa n dp l a t e l e t s J I，B i o lC h e m，1 9 9 8，2 7 3(3 0)：1 8 7 7 0 1 8 7 7 7 2 P a r i s hC R，F r e e m a nC，B r o w nK J，e ta 1 I d e n t i f i c a t i o no f s u l f a t e do l i g o s a e e h a r i d e b a s e di n h i b i t o r so ft u m o rg r o w t ha n dm e t a s t a s i su s i n gn o v e l 讥v i t r oa s s a y sf o ra n g i o g e n e s i sa n dh e p a r a n a s ea c t i v i t y J C a n c e rR e s，1 9 9 9，5 9(1 4)：3 4 3 3 3 4 4 1 3 O k a d aY，Y a m a d aS，T o y o s h i m aM，e ta 1 S t r u c t u r a lr e c o g n i t i o nb yr e c o m b i n a n th u m a nh e p a r a n a s et h a tp l a y sc r i t i c a lr o l e si nt u m o rm e t a s t a s i s H i e r a r c h i c a ls u l f a t eg r o u p sw i t hd i f f e r e n te f f e c t sa n dt h ee s s e n t i a lt a r g e td i s u l f a t e dt r i s a c c h a r i d es e q u e n c e J JB i o lC h e m，2 0 0 2，2 7 7(4 5)：4 2 4 8 8 4 2 4 9 5 4 V l o d a v s k yI，F r i e m a n nY，E l k i nM，e ta 1 M a m m a l i a nh e p a r a n a s e：g e n ec l o n i n g，e x p r e s s i o na n df u n c t i o ni nt u m o rp r o g r e s s i o na n dm e t a s t a s i s J N a tM e d，1 9 9 9，5(7)：7 9 3 8 0 2 5 M i a oH Q，O r n i t zD M，A i n g o r nE，e ta 1 M o d u l a t i o no ff i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r-2r e c e p t o rb i n d i n g，d i m e r i z a t i o n，s i g n a l i n g，a n da n g i o g e n i ca c t i v i t yb yas y n t h e t i ch e p a r i n m i m i c k l i n gp o l y a n i o n i cc o m p o u n d J JC l i nI n v e s t，1 9 9 7，9 9(7)：1 5 6 5 1 5 7 5 6 W a l c hE T，M a r c h e t t iD R o l eo fn e u r o t r o p h i n sa n dn e u r o t r o p h i n sr e c e p t o r si nt h ei nv i t r oi n v a s i o na n dh e p a r a n a s ep r o d u c t i o no fh u m a np r o s t a t ec a n c e rc e l l s J C l i nE x pM e t a s t a s i s，1 9 9 9，1 7(4)：3 0 7 3 1 4 7 H u l e t tM D，F r e e m a nC，H a m d o r fB J，e ta 1 C l o n i n go fm a m m a l i a nh e p a r a n a s e，a ni m p o r t a n te n z y m ei nt u m o ri n v a s i o na n dm e t a s t a s i s J N a tM e d，1 9 9 9，5(7)：8 0 3 8 0 9 8 M c K e n z i eE，T y s o nK，S t a m p sA，e ta 1 C l o n i n ga n de x p r e s s i o np r o f i l i n go fH p a 2，an o v e lm a m m a l i a nh e p a r a n a s ef a m i l ym e m b e r J B i o c h e mB i o p h y sR e sC o m m u n，2 0 0 0，2 7 6(3)：1 1 7 0 1 1 7 7 9 U n oF，F u j i w a r aT，T a k a t aY，e ta 1 A n t i s e n s e-m e d i a t e ds u p p r e s s i o no fh u m a nh e p a r a n a s eg e n ee x p r e s s i o ni n h i b i t sp l e u r a ld i s s e m i n a t i o no fh u m a nc a n c e rc e l l s J C a n c e rR e s，2 0 0 1，6 1(2 1)：7 8 5 5 7 8 6 0 1 0 Z h a n gY L，F uZ R，Z h a n gJ，e ta 1 I n h i b i t i o no fi n v a s i v e n e s so fh u m a nm a m m a r yc a r c i n o m ac e l ll i n eM D A 4 3 5b yh e p a r a n a s ea n t i s e n s eo l i g o d e o x y n u c l e o t i d e J N a t lM e dJC h i n a(中华医学杂志)，2 0 0 3，8 3(3)：2 0 4 2 0 7 1 1 E d o v i t s k yE，E l k i nM，Z c h a r i aE，e ta 1 H e p a r a n a s eg e n es i l e n c i n g，t u m o ri n v a s i v e n e s s，a n g i o g e n e s i s，a n dm e t a s t a s i s J JN a t lC a n c e rI n s t，2 0 0 4，9 6(1 6)：1 2 1 9 1 2 3 0 1 2 F r i e d m a n nY，V l o d a v s k yI，A i n g o r nH，e ta 1 E x p r e s s i o no fh e p a r a n a s ei nn o r m a l，d y s p l a s t i ca n dn e o p l a s t i ch u m a nc o l o n i cm u c o s aa n ds t r o m a E v i d e n c eo fi t sr o l ei nc o l o n i ct u m o r i g e n e s i s J A mJP a t h o l，2 0 0 0，1 5 7(4)：1 1 6 7 1 1 7 5 1 3 K o l i o p a n o sA，F r i e s sH，K l e e f fJ，e ta 1 H e p a r a n a s e 万方数据赵华军等：乙酰肝素酶癌症转移治疗的靶点8 7 5 e x p r e s s i o ni np r i m a r ya n dm e t a s t a t i cp a n c r e a t i cc a n c e r J C a n c e rR e s，2 0 0 1，6 1(1 2)：4 6 5 5 4 6 5 9 1 4A n d e l aV B，S c h w a r zE M，P u z a sJ E，e La 1 T u m o rm e t a s t a s i sa n dt h er e c i p r o c a l r e g u l a t i o no fp r o m e t a s t a t i ca n da n t i m e t a s t a t i cf a c t o r sb yn u c l e a rf a c t o rk a p p a B J C a n c e rR e s，2 0 0 0，6 0(2 3)：6 5 5 7 6 5 6 2 1 5M a r c h e t t iD，L iJ，S h e nR A s t r o c y t e sc o n t r i b u t et ot h eb r a i n m e t a s t a t i cs p e c i f i c i t yo fm e l a n o m ac e l l sb yp r o d u c i n gh e p a r a n a s e J C a n c e rR e s，2 0 0 0，6 0(1 7)：4 7 6 7 4 7 7 0 1 6 H eX，B r e n c h l e yP E，J a y s o nG C，e ta 1 H y p o x i ai n c r e a s e sh e p a r a n a s e d e p e n d e n tt u m o rc e l li n v a s i o n w h i c hc a nb ei n h i b i t e db ya n t i h e p a r a n a s ea n t i b o d i e s J C a n c e rR e s，2 0 0 4，6 4(1 1)：3 9 2 8 3 9 3 3 1 7 P a r i s hC R，F r e e m a nC，B r o w nK J，e ta 1 I d e n t i f i c a t i o no f s u l f a t e do l i g o s a c c h a r i d e b a s e di n h i b i t o r so ft u m o rg r o w t ha n dm e t a s t a s i su s i n gn o v e li nv i t r oa s s a y sf o ra n g i o g e n e s i sa n dh e p a r a n a s ea c t i v i t y J C a n c e rR e s，1 9 9 9，5 9(1 4)：3 4 3 3 3 4 4 1 1 8 V l o d a v s k yI，E l k i nM，P a p p oO，e ta 1 M a m m a l i a nh e p a r a n a s ea sm e d i a t o ro ft u m o rm e t a s t a s i sa n da n g i o g e n e s i s J I s rM e dA s s o cJ，2 0 0 0，2S u p p l：3 7 4 5 1 9 E l k i nM，I l a nN，I s h a i M i c h a e l iR，e ta 1 H e p a r a n a s ea sm e d i a t o ro fa n g i o g e n e s i s：m o d eo fa c t i o n J F A S E BJ，2 0 0 1，1 5(9)：1 6 6 1 1 6 6 3 2 0 Z e h a r i aE，M e t z g e rS，C h a j e k S h a u lT，e ta 1 T r a n s g e n i ce x p r e s s i o no fm a m m a l i a nh e p a r a n a s eu n c o v e r sp h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n so fh e p a r a ns u l f a t ei nt i s s u em o r p h o g e n e s i s，v a s c u l a r i z a t i o n，a n df e e d i n gb e h a v i o r J F A S E BJ，2 0 0 4，1 8(2)：2 5 2 2 6 3 2 1 K e l l yT，M i a oH Q，Y a n gY，e ta 1 H i g hh e p a r a n a s ea c t i v i t yi nm u l t i p l em y e l o m ai sa s s o c i a t e dw i t he l e v a t e dm i c r o v e s s e ld e n s i t y J C a n c e rR e s，2 0 0 3，6 3(2 4)：8 7 4 9 8 7 5 6 2 2 B i n g l e yJ A，H a y w a r dI P，C a m p b e l lJ H，e ta 1 A a e r i a lh e p a r a ns u l f a t ep r o t e o g l y c a n si n h i b i tv a s c u l a rs m o o t hm u s c l ec e l