生理性缺血训练联合生长激素...心功能的影响及作用机制分析_张文强.pdf

论著DOI:10 3969/j issn 1671 4695 2023 07 001文章编号:1671 4695(2023)07 0673 05生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6 静脉注射对心力衰竭大鼠心功能的影响及作用机制分析张文强1李慧1薛强2叶飞林1文亮2*(1 空军第九八六医院心内科陕西西安710054;2 空军军医大学西京医院心内科陕西西安710032)基金项目:国家自然科学基金青年项目(编号:81600356)*通讯作者:文亮，E mail:zwqq986163 com【摘要】目的探讨生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6 对心力衰竭大鼠心功能的影响及作用机制。方法SD 大鼠 60 只中取50 进行造模，最终造模成功50 只，将其分为5 组，模型组(n=9)、假手术组(n=10)、生理性缺血训练组(A 组，n=9)、生长激素释放肽 6 组(B 组，n=11)、生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6 组(C 组，n=11)。模型组与假手术组尾静脉注射 100 g/kg 0 9%氯化钠溶液，A 组大鼠给予生理性缺血训练。B 组尾静脉注射 100 g/kg 生长激素释放肽 6。C 组给予生理性缺血训练与生长激素释放肽 6，5 组均干预 4 周。观察 5 组大鼠的心功能及心脏结构指标、血清胱抑素 C、氨基末端 脑钠肽前体(NT proBNP)、血管紧张素(Ang)及醛固酮水平、心肌胶原蛋白含量、胆碱酯酶活性、Bcl 2 及 Bax 蛋白表达、胆碱能神经密度，分析 Bcl 2、Bax 蛋白表达与胆碱酯酶活性及胆碱能神经密度的相关性。结果模型组大鼠的左室射血分数、左室短轴缩短率明显较假手术组、A 组、B 组、C 组低，左室收缩末径、左室舒张末内径较假手术组、A 组、B 组、C 组高;C 组的左室射血分数、左室短轴缩短率、左室收缩末径、左室舒张末内径较 A 组、B 组高，差异均有统计学意义(P 0 05)。模型组大鼠的血清胱抑素 C、NT proBNP、Ang及醛固酮水平较假手术组、A 组、B 组、C 组高;C 组血清胱抑素 C、NT proBNP、Ang及醛固酮水平较 A 组、B 组低，差异均有统计学意义(P 0 05)。模型组大鼠的心肌胶原蛋白含量、胆碱酯酶活性、Bcl 2 及胆碱能神经密度较假手术组、A组、B 组、C 组低，Bax 蛋白较其余 4 组高;C 组的心肌胶原蛋白含量、胆碱酯酶活性、Bcl 2 及胆碱能神经密度较 A 组、B组高，Bax 蛋白明显较 A 组、B 组低，差异均有统计学意义(P 0 05)。A 组与 B 组的以上各指标比较，差异均无统计学意义(P 0 05)。Bcl 2 蛋白表达与胆碱酯酶活性胆碱能神经密度呈正相关(r=0 562、0 689，P 0 05)，Bax 蛋白表达与胆碱酯酶活性胆碱能神经密度负正相关(r=0 489、0 710，P 0 05)。结论生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6 可改善心力衰竭大鼠心功能，可能与其可提高大鼠的 Bcl 2、胆碱酯酶活性及胆碱能神经密度，降低血清胱抑素 C、NT proBNP、Ang、醛固酮水平及 Bax 蛋白表达有关。【关键词】大鼠生理性缺血训练生长激素释放肽 6心力衰竭Effect of physiologic ischemic training combined with growth hormone releasing peptide 6 intravenous injection on cardiac function andits mechanism in rats with heart failure ZHANG Wen qiang1，LI Hui1，XUE Qiang2，et al 1 Department of Cardiovascular Medicine，986Air Force Hospital，Xian Shaanxi 710054，China;2 Department of Cardiology，Xijing Hospital of Air Force Medical University，Xian Shaanxi710032，China【Abstract】ObjectiveTo investigate the effects of physiologic ischemic training combined with growth hormone releasing peptide 6 oncardiac function in rats with heart failure and its mechanism MethodsSD rats take 50 of 60 mold，the final mold successful 50，divided into 5groups，model group(n=9)，sham group(n=10)，physiological ischemia training group(group A，n=9)，growth hormone release peptide 6 group(group B，n=11)，physiological ischemia training combined growth hormone release peptide 6 group(group C，n=11)Model andsham groups received 100 g/kg of saline，injected in the tail vein，and rats in group A were given physiological ischemia training Group B weregiven 100 g/kg sompin releasing peptide 6 in the tail vein Group C were given physiological ischemia training with growth hormone releasingpeptide 6，and group 5 all intervened for 4 weeks The cardiac function and cardiac structure index，serum cystatin C，N terminal pro brainnatriuretic peptide(NT proBNP)，angiotensin (Ang)and aldosterone levels，myocardial collagen content，cholinesterase activity，Bcl 2and Bax protein expression，cholinergic nerve density，and the correlation between Bcl 2 and Bax protein expression and cholinesterase activityand cholinergic nerve density was analyzed esultsThe left ventricular ejection fraction and left ventricular short axis shortening rate of rats inmodel group were significantly lower than those in sham operation group，group A，group B and group C，and the left ventricular end systolic diam-eter and left ventricular end diastolic diameter were higher than those in sham operation group，group A，group B and group C;the left ventricularejection fraction，left ventricular short axis shortening rate，left ventricular end systolic diameter and left ventricular end diastolic diameter of groupC were higher than those of group A and group B，and the differences were statistically significant(P 005)The levels of serum cystatin C，NT proBNP，Ang and aldosterone in model group were higher than those in sham operation group，group A，group B and group C;the levelsof serum cystatin C，amino terminal pro brain natriuretic peptide，Ang and aldosterone in group C were lower than those in group A andgroup B，and the differences were statistically significant(P 0 05)The myocardial collagen content，cholinesterase activity，Bcl 2 and cho-linergic nerve density of rats in model group were lower than those in sham operation group，group A，group B and group C，while Bax protein was376临床和实验医学杂志2023 年 4 月第 22 卷第 7 期higher than those in other four groups;the myocardial collagen content，cholinesterase activity，Bcl 2 and cholinergic nerve density in group Cwere higher than those in group A and group B，and the Bax protein was significantly lower than those in group A and group B，and the differenceswere statistically significant(P 0 05)There was no significant difference in the above indexes between group A and group B(P 0 05)Bcl 2 protein expression was positively correlated with cholinesterase activity cholinergic nerve density(r=0562，0689，P 0 05)，whileBax protein expression was negatively correlated with cholinesterase activity cholinergic nerve density(r=0 489，0 710，P 0 05)ConclusionBiological ischemia training combined with growth hormone release peptide 6 can improve cardiac function in heart failure rats，which may be related to improving Bcl 2，cholinesterase activity and cholinergic nerve density in rats，reducing serum cystatin C，NT proBNP，Ang，aldosterone levels and Bax protein expression【Key words】ats;Physiologic ischemic training;Growth hormone releasing peptide 6;Heart failure心力衰竭是多种疾病的终末阶段，患病率较高1。心力衰竭的发展过程多包括两个因素，一是在交感神经系统或肾素 血管紧张素 醛固酮系统等主要的神经内分泌系统过度激活引起的一种系统反应，二是重症心肌炎、急性心肌梗死等心肌凋亡、坏死、自噬引起的。因此临床上对以上两个过程的发生、发展进行有效预防及治疗可预防心力衰竭2，其主要发病机制为心肌病理重构，心肌细胞从能量代谢、功能异常到心肌细胞数量减少，直至心肌细胞纤维化，最终出现心肌病理性重构3。心肌细胞凋亡是引起心肌细胞数量减少的一个主要原因，也是心力衰竭由代偿期发展至失代偿期的一个转折点。因此对心肌细胞凋亡发生进行抑制，可防止心力衰竭的发生及发展4。目前我国每年约有 290 万人死于心脏疾病，心力衰竭已成为我国心脏疾病预防的突出难题。因此临床上需从心力衰竭发生机制出发，寻找心力衰竭防治的新方法、新手段5。生长激素释放肽是人工合成可以刺激生长激素释放功能的氨基酸短肽，此外其还在细胞保护、内分泌调节、胃肠运动调节、抗氧化、抗炎及心血管疾病治疗方面有一定作用。生理性缺血训练可以对心肌梗死后心力衰竭大鼠的心室重塑产生逆转作用，改善大鼠的心功能，因此本文分析了生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6 对心力衰竭大鼠心功能的影响，以为临床上心力衰竭选择有效的治疗方法提供依据。1材料与方法11实验动物SD 大鼠 60 只，清洁级，8 10 周龄，大鼠体重 200 220 g，平均(210 45 18 56)g，由空军军医大学提供。控制动物室饲养温度在(24 2)，湿度在(35 4)%，通风避光，实验前适应性饲养 1 周，本实验动物使用遵循实验动物饲养管理和使用指南中关于实验大鼠的要求6。1 2实验试剂及仪器10%水合氯醛注射液购自南京奥多福尼生物公司;庆大霉素注射液购自沈阳康鑫医药;注射用青霉素购自哈药集团制药总厂;离心机购自湖南仪器仪表总厂;MP120 2 型电子分析天平购自上海精密科学仪器公司;恒温水浴购自美国 Pharmacia 公司;DP 4800 全数字便携超声诊断仪购自迈瑞生物医疗公司;生长激素释放肽 6 购自大连美仑生物技术公司;磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution，PBS)、枸橼酸缓冲液购自武汉博士德生物工程公司;BL 420F 生物机能实验系统购自成都泰盟科技有限公司。1 3实验动物造模本研究使用大鼠自主呼吸下的冠状动脉左前降支结扎法制备心肌梗死后的心力衰竭大鼠模型。术前 6 h 禁水、12 h 禁食。将手术器械再高压下进行灭菌，手术间在紫外灯下照射2 h。腹腔注射0 3mL/100 g 10%水合氯醛麻醉大鼠，麻醉后将大鼠仰卧位置于解剖台上，固定其头部及四肢，在胸前术区进行备皮，使用 75%乙醇对术区进行消毒，铺无菌孔单。之后在大鼠的左缘 1 0 1 5 cm 处、第 3 4 肋间隙的交叉处作一个纵行 2 3 cm 的切口，将浅筋膜进行钝性分离，之后将胸大肌充分显露出来，沿着胸大肌的肌纤维走形，将胸大肌、胸小肌进行钝性分离，在胸大肌切口上1/3 处、胸小肌切口下 1/3 处穿 2 根 4 0 丝线，作为备用，之后将切口撑开，将肋间隙暴露，选择心脏搏动最明显的第 3 4 肋间隙作为开胸切口。之后依肌纤维走形，将肋间外肌、肋间内肌进行钝性分离，将胸膜暴露，之后用止血钳将胸膜刺破，张开止血钳，扩大切口。用左手对右侧胸壁进行稍微用力挤压，将心脏挤出，之后用湿棉签轻推左心耳，在肺动脉圆锥、左心耳交界的下方2 mm 处，将其作为冠状动脉前降支结扎点，设置进针深度为 0 15 0 30 mm，使用 5 0 丝线进行结扎，之后可见近心尖左室前壁呈暗紫色，在结扎后将心脏还纳，不处理在肋间肌切口，之后将连接注射器的引流软管置于胸腔内，预先在胸肌切口上的 2 根缝合线进行迅速结扎，之后将胸腔闭合。之后用注射器将胸腔中的空气吸引，待稍感阻力时，停止吸引，之后将引流管拔出，夹闭皮肤后进行迅速缝合，使用复方碘酒对伤口进行消毒。术后待大鼠的呼吸平稳后，进行心电检测，急性前壁心肌梗死形成的标志是、AVL 导联 ST 段弓背向上抬高。使用庆大霉素注射液冲洗大鼠伤口，术后肌肉注射 4 万 U/d 青霉素，1 次/d，共注射 10 d。术后 5 周，使用超声诊断仪检测大鼠的心功能，心力衰竭模型造模成功标准为左室射血分数 45%7。造模中因麻醉过度、术后感染等原因死亡大鼠 6 只，未达到心力衰竭标准的大鼠 4 只，最终造模成功的大鼠 50 只。1 4动物分组及给药分组:将 50 只大鼠按照随机数表法分为 5 组，模型组(n=9)、假手术组(n=10)、生理性缺血训练组(A 组，n=9)、生长激素释放肽 6 组476Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol22，No7Apr2023(B 组，n=11)、生理性缺血训练联合生长激素释放肽6 组(C 组，n=11)。方法:模型组和假手术组尾静脉注射 100 g/kg0 9%氯化钠溶液，1 次/d，连续 4 周。A 组大鼠使用外径 4 2 mm、内径1 8 mm 无创乳胶止血带对大鼠的双下肢近端进行环扎，以阻止血流，直至股动脉博消失、皮肤紫绀为准，每次缺血 5 min，灌注 5 min，每天进行 4 个循环，每周训练 5 d，停 2 d，持续 4 周。假手术组大鼠将心脏挤出后，不结扎前降支，直接将心脏放回胸腔。B 组尾静脉注射 100 g/kg 生长激素释放肽 6，1 次/d，连续 4 周。C 组给予生理性缺血训练与生长激素释放肽6，方法同 A 组及 B 组。1 5观察指标1 5 1观察 5 组大鼠的心功能及心脏结构指标实验完成后 1 d，使用超声诊断仪检测大鼠的心脏功能及结构。检测前给予 0 3 mL/100 g 10%水合氯醛麻醉大鼠，之后胸部备皮，将大鼠仰卧位固定，测量胸骨旁左室乳头肌短轴切面及左室长轴，检测心脏功能(左室射血分数及左室短轴缩短率)与心脏结构指标(左室收缩末径、左室舒张末内径)指标，其中左室短轴缩短率=(左室舒张末内径 左室收缩末内径)/左室舒张末内径 100%。1 5 25 组大鼠的血清生化指标水平心脏超声检测结束后，经腹主动脉穿刺，取血液标本，待离心后将血清分离，之后冷存备用。使用酶联免疫吸附试验检测血清胱抑素 C 及氨基末端 脑钠肽前体(N terminal pro brain natriuretic peptide，NT proBNP)、血管紧张素(angiotensin，Ang)及醛固酮水平。1 5 35 组大鼠的心肌胶原蛋白含量血液标本取出后，处死大鼠，将部分心脏组织取出浸泡中组织固定液中，行常规石蜡切片，脱蜡后对切片进行 Masson 染色，光镜下心肌细胞呈黄色呈现红色，胶原纤维呈现蓝绿色，之后拍摄、扫描，使用 Image pro plus 6 0 图像分析仪对心肌胶原含量进行测定。胶原纤维面积占比，其为胶原纤维像素面积/组织像素面积 100%。1 5 45 组大鼠的胆碱酯酶活性处死大鼠后取 100mg 左心室的心肌组织，用 PBS 液将心肌组织漂洗 3 次，之后在心肌组织中按 1 100 比例加入预冷 0 9%氯化钠溶液在 13 000 r/min 下进行离心，离心半径 8 cm，离心30 min，之后取上清液，使用 Ellman 法检测胆碱酯酶活性。胆碱酯酶活性=(检测吸光度 空白吸光度)/(标准管吸光度 空白吸光度)标准品浓度/蛋白浓度。1 5 55 组大鼠的 Bcl 2 及 Bax 蛋白表达处死大鼠后另取 100 mg 左心室的心肌组织，将该组织剪碎研磨，根据 Trizol NA 试剂盒说明提取总 NA，对提取的NA 进行反转录，使用 T PC 法检测 Bcl 2 及 Bax蛋白表达。1 5 6检测 5 组大鼠的胆碱能神经密度处死大鼠后取 100 mg 左心室的心肌组织，将其置于预冷后的甲醛钙中进行固定，时间为 24 h，之后制为 6 m 冰冻切片，使用 Karnovsky oots 法检测。胆碱能神经密度=神经染色面积/总检测面积。1 5 7分析相关性分析 Bcl 2、Bax 蛋白表达与胆碱酯酶活性及胆碱能神经密度的相关性。1 6统计学处理采用 SPSS 23 0 软件对本研究的数据进行处理，计量资料以均数 标准差(?x s)表示，单因素方差分析法进行对比分析，两组间使用 SNK 法进行对比分析;使用 Pearson 法进行相关性分析;P 0 05 为差异有统计学意义。2结果21观察 5 组大鼠的心功能及心脏结构指标模型组大鼠的左室射血分数、左室短轴缩短率明显较假手术组、A 组、B 组、C 组低，左室收缩末径、左室舒张末内径较假手术组、A 组、B 组、C 组高，C 组的左室射血分数、左室短轴缩短率、左室收缩末径、左室舒张末内径较 A组、B 组高;C 组的左室射血分数、左室短轴缩短率较假手术组低，左室收缩末径、左室舒张末内径较高，差异均有统计学意义(P 0 05);A 组与 B 组的左室射血分数、左室短轴缩短率、左室收缩末径、左室舒张末内径比较，差异均无统计学意义(P 0 05)。见表 1。表 15 组大鼠的心功能及心脏结构指标比较(?x s)组别只数左室射血分数(%)左室短轴缩短率(%)左室收缩末径(mm)左室舒张末内径(mm)模型组93210 4121778 245810 1561041 199假手术组106770 6233871 425489 078785 105A 组93705 6582540 389588 102832 121B 组113658 6952578 412595 123845 125C 组114278 6553012 445699 125956 136F 值5118636188100395351P 值00010001000100012 25 组大鼠的血清胱抑素 C、NT proBNP、Ang及醛固酮水平模型组大鼠的血清胱抑素 C、NT proB-NP、Ang及醛固酮水平较假手术组、A 组、B 组、C 组高，C 组以上指标较 A 组、B 组低，C 组以上指标较假手术组高，差异均有统计学意义(P 0 05);A 组与 B 组以上指标比较，差异均无统计学意义(P 0 05)。见表 2。表 25 组大鼠的血清胱抑素 C、NT proBNP、Ang及醛固酮水平比较(?x s)组别只数血清胱抑素C(g/L)NT proBNP(ng/L)Ang(ng/L)醛固酮(ng/L)模型组93158 5161705 22511589 2210 11475 2045假手术组101700 245910 1898810 15899041 1525A 组92758 3151245 24110042 1658 10741 1245B 组112810 3851258 28910078 1745 10875 1141C 组112210 2151002 3159041 13259642 842F 值267781294139384972P 值0001000100010002576临床和实验医学杂志2023 年 4 月第 22 卷第 7 期2 35 组大鼠的心肌胶原蛋白含量模型组、假手术组、A 组、B 组、C 组大鼠的心肌胶原蛋白含量分别为(9 45 1 23)%、(36 75 4 15)%、(15 78 2 75)%、(16 25 2 98)%、(23 75 4 12)%，组间比较差异有统计学意义(F=98 420，P 0 001)。模型组大鼠的心肌胶原蛋白含量较假手术组、A 组、B 组、C 组低，C 组明显较 A 组、B 组高;C 组较假手术组低，差异均有统计学意义(P 0 05);A 组与 B 组比较，差异均无统计学意义(P 0 05)。2 45 组大鼠的胆碱酯酶活性、Bcl 2、Bax 蛋白及胆碱能神经密度模型组大鼠的胆碱酯酶活性、Bcl 2 及胆碱能神经密度较假手术组、A 组、B 组、C 组低，Bax 蛋白较其余 4 组高，C 组的胆碱酯酶活性、Bcl 2 及胆碱能神经密度较 A 组、B 组高，Bax 蛋白明显较 A 组、B 组低;C 组的胆碱酯酶活性、Bcl 2 及胆碱能神经密度明显较假手术组低，Bax 蛋白明显较假手术组高，差异均有统计学意义(P 0 05);A 组与 B 组的胆碱酯酶活性、Bcl 2、Bax 蛋白及胆碱能神经密度比较，差异均无统计学意义(P 0 05)。见表 3。表 35 组大鼠的胆碱酯酶活性、Bcl 2、Bax 蛋白及胆碱能神经密度比较(?x s)组别只数胆碱酯酶(U/mg prot)Bcl 2Bax胆碱能神经密度(103m2/mm2)模型组9285 052040 008094 0231005 098假手术组10411 075079 012054 0081843 156A 组9329 048056 012069 0111345 210B 组11335 051058 014072 0131378 189C 组11388 058069 017085 0091545 245F 值7482121161170025268P 值00010001000100012 5分析 Bcl 2、Bax 蛋白表达与胆碱酯酶活性及胆碱能神经密度的相关性Bcl 2 蛋白表达与胆碱酯酶活性、胆碱能神经密度呈正相关，Bax 蛋白表达与胆碱酯酶活性、胆碱能神经密度呈负相关(P 005)。见表4。表 4Bcl 2、Bax 蛋白表达与胆碱酯酶活性及胆碱能神经密度的相关性指标胆碱酯酶活性r 值P 值胆碱能神经密度r 值P 值Bcl 20 5620 0050 6890001Bax0 4890 0100 71000013讨论心力衰竭是一种常见的心内科疾病，也是多种心血管疾病的终末期，因再入院率、病死率均高，其治疗是临床科研的研究重点。因临床中伦理等因素影响，动物实验是临床研究的一个重要方法，因大鼠心脏与人类结构相似，且基因组高度相似，价格较为低廉，易饲养，对实验耐受性较好，因此本研究选择了大鼠作为心力衰竭的模型8。临床上因心肌梗死后冠状动脉供血不足，会使得机体的心肌出现缺血坏死，从而引起心力衰竭，因此本研究采用了自主呼吸下的冠状动脉左前降支结扎法制备心肌梗死后的心力衰竭大鼠模型，该方法制备的心力衰竭病理、生理表现与人类心力衰竭表现类似，可准确反映人类在心肌梗死后并发心力衰竭的急性期、代偿期病理及生理特征，本研究结果表明，模型组大鼠的心脏结构及功能均出现明显变化，表明造模成功。本研究结果表明，C 组的左室射血分数、左室短轴缩短率、心肌胶原蛋白、左室收缩末径、左室舒张末内径较 A 组、B 组高;表明在单独给予生理性缺血训练、生长激素释放肽 6 及生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6 后，心力衰竭大鼠的心脏功能及结构均有了明显改善，且联合组的改善程度较单一干预高，可能是由于生理性缺血训练可以缩小扩大的心脏，增强心肌的收缩力，从而提高射血功能9;生长激素释放肽 6 可以通过神经营养作用，参与神经纤维保护、内分泌调节过程及神经重构的过程，进而对损伤的心肌进行修复10，因此二者联合后进一步改善了心力衰竭大鼠的心功能。本研究结果表明，C 组的血清胱抑素 C、NT proB-NP、Ang、醛固酮、Bax 蛋白表达较 A 组、B 组低，胆碱酯酶活性、Bcl 2 及胆碱能神经密度较 A 组、B 组高;Bcl 2 蛋白表达与胆碱酯酶活性胆碱能神经密度呈正相关，Bax 蛋白表达与胆碱酯酶活性胆碱能神经密度负正相关，表明生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6静脉注射可能通过降低心力衰竭大鼠的血清胱抑素 C、NT proBNP、Ang、醛固酮、Bax 蛋白表达，提高胆碱酯酶活性、Bcl 2 及胆碱能神经密度有关。主要是由于NT proBNP 是慢性心力衰竭临床诊断的灵敏、有效生化指标，其在心室容量负荷过重或心室扩张时会增加，与心力衰竭严重程度呈反比11;胱抑素 C 由 112 个氨基酸组成，在机体出现心力衰竭时，其心排量不满足机体代谢需要，会使得机体的器官灌注不足，增加组织细胞变性、坏死，引起血管硬化，增加胱抑素 C 的生成12。Ang作用于血管紧张素受体，会产生相应的生物学效应，其可通过促进机体的血管收缩，升高机体血压来增加心脏的负担，使得心力衰竭难以控制13;此外其也可刺激机体释放去甲肾上腺素，抑制去加肾上腺的重吸收，增加血液中去甲肾上腺素的含量，从而加重心力衰竭程度。醛固酮是类固醇类激素，可以通过增加水、钠重吸收来促进钾排泄，造成电解质紊乱，引起血管收缩，也会促进机体钾钠通道 ATP、钠通道蛋白的合成增多，引起血管重构及心肌纤维化，通过给予心力衰竭大鼠生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6 水平，降低了血清胱抑素 C、NT proBNP、Ang、醛固酮水平来改善了心功能。Bcl 2、Bax 是心肌细胞凋亡分子调控过程中的重要调控因子，其中 Bcl 2 是抗凋亡基因，Bax 是促细胞凋亡的基因，其可通过作用于线粒体膜通透性转换孔，使得线粒体通透性改变引起级联反应14，因此生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6 静脉注射可能通676Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol22，No7Apr2023过下调 Bax 表达、上调 Bac 2 表达来抑制心肌细胞凋亡，以起到心肌保护的作用。引起心力衰竭、心肌梗死的一个主要原因为自主神经平衡失调，交感神经活性持续增加会使得心肌重构、心室功能出现恶化，增加心肌梗死后的病死率，而迷走神经活性持续降低，会加速心肌重塑及左室功能不全进程，引起心力衰竭15，因此治疗心力衰竭的目的是降低患者的交感神经活性，而短暂的阻断股动脉会产生远隔心脏保护作用，对大鼠的正常肢体行缺血再灌注会对保护远隔的心脏组织，其可激活脑干迷走节前神经元，而迷走神经末梢会释放乙酰胆碱等主要神经递质，其会使机体的血管内皮细胞产生内皮源性舒张因子等血管活性因子，该因子会扩张冠状动脉，增加冠脉血流，而乙酰胆碱含量与胆碱能神经的密度降低有一定相关性，因此推测可以通过生理性缺血训练提高胆碱能神经密度，进而增加胆碱能含量，改善迷走神经活性，从而改善心力衰竭大鼠的心功能。4结论生理性缺血训练联合生长激素释放肽 6 可改善心力衰竭大鼠心功能，可能与其可提高大鼠的 Bcl 2、胆碱酯酶活性及胆碱能神经密度，降低血清胱抑素 C、NT proBNP、Ang、醛固酮水平及 Bax 蛋白表达有关。参考文献 1李强，陆士娟，黄康，等 慢性心力衰竭患者利钠肽活化酶、心钠素水平与病情严重程度及预后的关系J 临床和实验医学杂志，2022，21(12):1258 1262 2 Pfeffer MA，Shah AM，Borlaug BA Heart failure with preserved ejectionfraction in perspective J Circ es，2019，124(11):1598 1617 3Di Palo KE，Barone NJ Hypertension and Heart Failure:Prevention，Targets，and Treatment J Heart Fail Clin，2020，16(1):99 106 4王明亮，刘敏，徐亚伟，等 心肌缺血再灌注时内皮功能紊乱与心肌细胞凋亡的相关性研究 J 中华老年医学杂志，2021，40(4):501 505 5胡阳，邓洁，王婷婷，等 基于 PI3K/Akt 信号通路探讨雄性激素对慢性心力衰竭心肌细胞凋亡的影响J 中国老年学杂志，2022，42(10):2471 2476 6王建飞 实验动物饲养管理和使用指南M 上海:上海科学技术出版社，2012:1 25 7唐榕，刘剑刚，熊双，等 射血分数保留的心力衰竭模型建立及心脏结构特征的超声学评价J 中华超声影像学杂志，2021，30(12):1081 1087 8Blanco ivero J，Couto GK，Paula SM，et al Enhanced sympatheticneurotransduction in the superior mesenteric artery in a rat model ofheart failure:role of noradrenaline and ATPJ Am J Physiol HeartCirc Physiol，2021，320(2):563 574 9张秀，程怡慧，张心彤，等 生理性缺血训练改善心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心功能及心室重塑的神经机制J 中国康复医学杂志，2021，36(8):915 922 10 王聖茜，苏亚楠，邢宇彤，等 生长激素释放肽 6 对心力衰竭模型大鼠心功能的影响J 中国老年学杂志，2019，39(22):56125615 11 崔泽岩，臧艳静，高淑娜 血清糖类抗原125、氨基末端脑钠肽前体和尿酸联合检测对慢性心力衰竭合并心房颤动患者预后的评估价值J 临床内科杂志，2021，38(2):97 100 12 Ivey Miranda JB，Inker LA，Griffin M，et al Cystatin C and MuscleMass in Patients With Heart FailureJ J Card Fail，2021，27(1):48 56 13 吴金春，苏晓灵，李卫，等 脑啡肽酶抑制剂与血管紧张素受体拮抗剂在心力衰竭患者中的应用对比研究 J 中国循证心血管医学杂志，2021，13(1):64 67，73 14 Aslan A，Beyaz S，Gok O，et al oyal jelly abrogates flouride in-duced oxidative damage in rat heart tissue by activating of the nrf 2/NF kappa B and bcl 2/bax pathwayJ Toxicol Mech Methods，2021，31(1/9):644 654 15 程怡慧，张秀，张心彤，等 迷走神经在生理性缺血训练改善心力衰竭大鼠心功能中的作用 J 中国康复医学杂志，2021，36(6):639 648(收稿日期:2022 11 21)DOI:10 3969/j issn 1671 4695 2023 07 002文章编号:1671 4695(2023)07 0677 05CLDN4 对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型凋亡和自噬的影响及其机制研究杨娟1张超1*徐颢1杨琦1戴菲2(1 西北大学附属医院西安市第三医院消化内科陕西西安710068;2 西安交通大学第二附属医院消化内科陕西西安710068)基金项目:陕西省重点研发计划项目(编号:2020SF235)*通讯作者:张超，E mail:zzwwcc2001163 com【摘要】目的本研究目的在于探究 CLDN4 在急性胰腺炎中的作用及其作用机制。方法使用雨蛙素分别处理大鼠胰腺腺泡细胞(A42J)0、2、4、6、8、10 h 建立急性胰腺炎细胞模型;本研究将 A42J 细胞按随机数字表法分为5 组:对照组:正常培养的 A42J 细胞;雨蛙素组:经雨蛙素处理的 A42J 细胞;si control 组:经雨蛙素处