心房钠尿肽信号通路在小鼠支气管哮喘发病中的作用及其机制.pdf

DOI:107683/xxyxyxb 2015 04 001收稿日期:2014 11 27基金项目:国家自然科学基金资助项目(编号:81360006);广西壮族自治区卫生厅科研基金资助项目(编号:S201316-02)作者简介:高远(1987 )，男，河南卫辉人，在读硕士研究生，研究方向:哮喘。通信作者:曾锦荣(1963 )，男，广西桂林人，硕士，教授，研究方向:肺癌;E-mail:zjr glmc edu cn。马礼兵(1987 )，男，江西兴国人，博士，副教授，研究方向:哮喘;E-mail:181275547 qq com欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉氉氉氉。本文引用:高远，曾锦荣，马礼兵，等 心房钠尿肽信号通路在小鼠支气管哮喘发病中的作用及其机制J 新乡医学院学报，2015，32(4):291-294，298【基础研究】心房钠尿肽信号通路在小鼠支气管哮喘发病中的作用及其机制高远，曾锦荣，马礼兵，王绩英，余园园，杜寅俊(桂林医学院附属医院呼吸内科，广西桂林541004)摘要:目的探讨心房钠尿肽(ANP)信号通路在小鼠支气管哮喘(BA)发病中的作用及其机制。方法40 只雌性 BALB/C 小鼠随机分为正常对照组、BA 组、ANP 组和 ANP+A71915 组，每组 10 只;建立 BA 小鼠模型和 ANP 在体干预模型，观察各组小鼠支气管炎症改变情况和支气管黏液分泌情况，采用免疫组织化学技术检测肺组织 T-bet 和GATA-3 蛋白的表达。结果BA 组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较正常对照组显著(P 0.01)，ANP 组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较 BA 组更严重(P 0 01)，ANP+A71915 组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较 ANP 组明显减轻(P 0 01)。BA 组小鼠肺组织中 GATA-3 蛋白阳性表达显著高于正常对照组(P 0 01)，ANP 组小鼠肺组织中 GATA-3 蛋白阳性表达显著高于 BA 组(P 0.01)，ANP+A71915 组小鼠肺组织中 GATA-3 蛋白阳性表达显著低于 ANP 组(P 0 01)。BA 组小鼠肺组织中 T-bet蛋白表达显著低于正常对照组(P 0 01)，ANP 组小鼠肺组织中 T-bet 蛋白表达明显低于 BA 组(P 0 01)，ANP+A71915 组小鼠肺组织中 T-bet 蛋白表达明显高于 ANP 组(P 0 01)。结论ANP 信号可能通过调控 T-bet 和GATA-3 蛋白的表达参与 BA 小鼠免疫功能失衡的发病过程。关键词:支气管哮喘;心房钠尿肽;转录因子中图分类号:562 2文献标志码:A文章编号:1004-7239(2015)04-0291-05Effect and its mechanism of atrial natriuretic peptide signaling pathway in the pathogenesis of bron-chial asthma in miceGAO Yuan，ZENG Jin-rong，MA Li-bing，WANG Ji-ying，YU Yuan-yuan，DU Yin-jun(Department of espiratory Medicine，the Hospital Affiliated to Guilin Medical College，Guilin 541004，Guangxi Zhuang Autono-mous egion，China)Abstract:ObjectiveTo discuss the effect and its mechanism of atrial natriuretic peptide(ANP)signaling pathway inthe pathogenesis of bronchial asthma(BA)in mice MethodsForty female BALB/C mice were divided into normal controlgroup，BA group，ANP group and ANP+A71915 group，ten mice in each group The BA mice models and ANP interventionmodels were established The inflammation and mucus secretion of bronchus of mice were observed The expression of T-bet andGATA-3 protein in lung tissue was detected by immunohistochemical method esultsThe bronchial mucosal congestion andedema and peribronchial inflammatory cell infiltrate in BA group were significantly more than those in normal control group(P 0 01)The bronchial mucosal congestion and edema and peribronchial inflammatory cell infiltrate in ANP group weresignificantly more seriously than those in BA group(P 0 01)The bronchial mucosal congestion and edema and peribronchialinflammatory cell infiltrate in ANP+A71915 group were significantly less than those in ANP group(P 0 01)The positiveexpression of GATA-3 in lung tissue of mice in BA group was significantly higher than that in normal control group(P 0.01)The positive expression of GATA-3 in lung tissue of mice in ANP group was significantly higher than that in BA group(P 0 01)The positive expression of GATA-3 in lung tissue of mice in ANP+A71915 group was significantly lower thanthat in ANP group(P 0 01)The expression of T-Bet protein in lung tissue of mice in BA group was significantly lower thanthat in normal control group(P 0 01)The expression of T-Bet protein in lung tissue of mice in ANP group was significantlylower than that in BA group(P 0 01)The expression of T-Bet protein in lung tissue of mice in ANP+A71915 group wassignificantly higher than that in ANP group(P 0 01)ConclusionANP signal may be involved in the pathogenesis of im-mune imbalance of mice with BA by regulating the expression of T-bet and GATA-3 proteinKey words:bronchial asthma;atrial natriuretic peptide;transcription factor192第 32 卷第 4 期2015 年 4 月新乡医学院学报Journal of Xinxiang Medical UniversityVol32No4Apr2015支气管哮喘(bronchial asthma，BA)是常见的慢性支气管炎症性疾病，研究发现，BA 的发病机制与辅助性 T 细胞(T helper cell，Th)1/Th2 细胞功能失衡有密切的关系，主要表现为 Th1 型免疫反应被抑制，Th2 型免疫反应亢进。通过增强 Th1 型反应、降低 Th2 型反应，对 BA 可以起到治疗作用1。T-bet是 Th1 细胞亚群分化的特异性转录因子，GATA-3是 Th2 细胞亚群分化的特异性转录因子。T-bet 和GATA-3 的平衡调控是决定 Th1/Th2 细胞功能平衡的关键因素2。有研究发现，BA 患者的外周血、支气管肺泡灌洗液及肺组织匀浆中心房钠尿肽(atrialnatriuretic peptide，ANP)水平升高3。本研究通过建立 BA 小鼠模型，并应用 ANP 及其受体抑制剂A71915 干预，观察小鼠支气管炎症及转录因子T-bet、GATA-3 的表达情况，探讨 ANP 信号通路在BA 发病中的作用及其机制。1材料与方法1 1实验动物及分组清洁级 BALB/C 雌性小鼠40只，8 周龄，体质量(200 20)g，由桂林医学院实验动物中心提供。40 只小鼠随机分为 4 组:正常对照组、BA 组、ANP 组和 ANP+A71915 组，每组10 只。1 2试剂与仪器鼠 GATA-3 单克隆抗体(美国Proteintech 公司)，鼠 T-bet 单克隆抗体(美国 Abcam公司)，免疫组织化学染色试剂盒(美国 D 公司)，ANP(美国 California Bioscience 公司)，A71915(美国 Bachem 公司)，卵白蛋白(ovalbumin，OVA)、氢氧化铝凝胶(美国 Sigma 公司)，偶联辣根过氧化物酶的羊抗鼠二抗(美国 Santa Cruz 公司)，1 5 mLEpendorff(EP)管(美国 Axygen 公司)，手术器械(桂林医学院附属医学院设备科)，402AI 超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司)。1 3BA 小鼠模型的建立BA 组小鼠利用 OVA和氢氧化铝凝胶(0 01 mg OVA 溶于0 2 mL 氢氧化铝凝胶，第 1、13 天经腹腔注射)致敏及反复雾化吸入 50 gL1的 OVA 溶液，持续雾化 30 min，每周 3次，直至第 56 天处理小鼠;ANP 组小鼠在每次 OVA雾化吸入前 30 min 雾化吸入 ANP(1 gg1);ANP+A71915 组小鼠在每次 ANP 雾化吸入前30 min 腹腔注射 A71915(0 5 gg1);正常对照组小鼠应用生理盐水代替。1 4肺组织病理学观察小鼠最后 1 次雾化 24 h后，用 100 gL1水合氯醛麻醉后取肺组织放入40 gL1多聚甲醛溶液中固定 24 h，采用颈椎脱臼法处死小鼠。乙醇梯度脱水后石蜡包埋切片，苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色。观察各组小鼠支气管改变，每只小鼠挑选 3 张有完整支气管横断面的切片，采用 MIAS-2000 医学图像分析系统在 400 倍光镜下观察，参照 BA 小鼠支气管炎症评分标准4 进行支气管炎症评分:无炎症细胞浸润为0 分;少量炎症细胞浸润为 1 分;1 层炎症细胞围绕支气管为 2 分;2 4 层炎症细胞围绕支气管为 3分;4 层以上炎症细胞围绕支气管为 4 分。过碘酸-希夫(periodic acid-schiff，PAS)染色:切片后置入5 gL1高碘酸溶液中氧化5 min，用蒸馏水冲洗后加入 Schiff 试剂染色 30 min，然后在偏重亚硫酸钠浸洗 2 遍后行苏木精染核 5 min。观察支气管黏膜杯状细胞增生和支气管黏液分泌情况，以PAS 染色阳性的杯状细胞数占支气管上皮细胞数的百分比表示，评分标准5:5%为 0 分;5%25%为 1 分;26%50%为 2 分;51%75%为 3分;75%为 4 分。1 5肺组织转录因子 GATA-3 和 T-bet 免疫组织化学染色小鼠肺组织行固定、脱水、包埋、切片后，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidiu-perosidase，SP)三步法行抗 T-bet 和GATA-3 免疫组织化学反应。切片常规脱蜡至水，置于装有柠檬酸的高压锅中进行抗原修复;质量分数 0 3%H2O2溶液中孵育 10 min，磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)冲洗 3 次，每次3 min;滴加最适合比例一抗，37 温箱孵育 1 h;PBS 冲洗 3 次，每次 3 min;滴加二抗，37 温箱孵育 15 min;PBS 冲洗 3 次，每次 3 min。3，3-二氨基联苯胺显色(1 mL 蒸馏水加显色剂 A、B、C 各 1 滴，混匀)，显色后自来水冲洗;苏木精复染、脱水、透明，树胶封片;显微镜观察。GATA-3 蛋白主要表达于支气管壁及其周围肺组织、肺间质的炎症细胞内，阳性反应为棕黄色颗粒沉着。T-bet 蛋白主要表达在支气管壁及其周围肺组织、肺间质的炎症细胞内，阳性反应为棕黄色颗粒沉着。1 6统计学处理应用 SPSS 19 0 软件进行统计分析，计量资料以均数 标准差(珋x s)表示，各组计量资料进行正态性检验和方差齐性检验，符合正态性分布和方差齐的数据比较采用单因素方差和 t 检验，P 0 05 为差异有统计学意义。2结果2 1各组小鼠行为学变化与正常对照组比较，其他 3 组小鼠均出现明显的烦躁不安、抓耳挠腮、呼吸加快等 BA 发作表现。激发至约 1 周后，BA 组小鼠症状更加严重，且出现嗜睡状态，整个建模过程中未出现小鼠死亡。292新乡医学院学报http:/www xxyxyxb com2015 年第 32 卷2 2肺组织病理学结果见图 1、图 2 和表 1。正常对照组:小鼠支气管及肺泡结构正常，未见明显炎症细胞及明显的 PAS 染色阳性上皮细胞。BA 组:可见支气管黏膜充血水肿及大量坏死脱落的上皮细胞，支气管周围发现大量的炎症细胞，炎症细胞浸润程度明显高于正常对照组(P 0 01);PAS 染色可见大量的阳性细胞，细胞轮廓粗大饱满，上皮细胞坏死脱落明显，支气管黏液分泌功能亢进，与正常对照组比较差异有统计学意义(P 0 01)。ANP 组:与BA 组比较，支气管黏膜充血水肿更显著，炎症细胞浸润更严重，炎症程度明显高于 BA 组(P 0.01);PAS 染色阳性细胞数量及支气管上皮细胞黏液分泌更多(P 0 01)。ANP+A71915 组:与 ANP 组比较，炎症细胞浸润明显减轻(P 0 01)，PAS 染色阳性细胞减少，支气管上皮细胞黏液分泌减少(P 0.01)。A:正常对照组;B:BA 组;C:ANP 组;D:ANP+A71915 组。图 1小鼠肺组织病理学变化(HE 染色，100)Fig 1Pathological changes in lung tissue of mice(HE staining，100)A:正常对照组;B:BA 组;C:ANP 组;D:ANP+A71915 组。图 2小鼠肺组织病理学变化(PAS 染色，100)Fig 2Pathological changes in lung tissue of mice(PAS staining，100)表 14 组小鼠肺组织炎症细胞浸润及支气管黏液分泌程度比较Tab 1Comparison of inflammatory cell infiltration oflung tissue and mucus secretion of bronchus of mice in thefour groups(珔x s)组别n炎症细胞浸润程度评分支气管黏液分泌程度评分正常对照组100 40 0 520 50 053BA 组102 50 0 53a2 51 053aANP 组103 60 0 52b3 40 052bANP+A71915 组102 30 0 48c2 50 053c注:与正常对照组比较aP 0 01;与 BA 组比较bP 0 01;与ANP 组比较cP 001。2 3小鼠肺组织中 GATA-3 蛋白表达结果见图3 和表2。正常对照组:肺组织内棕黄色颗粒沉着较少，颜色较浅。BA 组:肺组织、肺间质及支气管壁周围有大量的棕黄色颗粒沉着，阳性细胞颜色深且分布广泛，GATA-3 蛋白阳性表达显著高于正常对照组(P 001)。ANP 组:支气管壁及其周围肺组织、肺间质有大量棕黄色颗粒沉着，阳性细胞着色深且分布广泛，严重程度明显强于 BA 组，GATA-3 蛋白阳性表达明显高于 BA 组(P 0 01)。ANP+A71915 组:支气管壁及其周围有较多的棕黄色颗粒沉着，GATA-3蛋白阳性表达明显低于 ANP 组(P 001)。A:正常对照组;B:BA 组;C:ANP 组;D:ANP+A71915 组。图 3小鼠肺组织中 GATA-3 蛋白的表达(免疫组织化学，100)Fig 3Expression of GATA-3 protein in lung tissue of mice(immunohistochemistry，100)2 4小鼠肺组织中 T-bet 蛋白表达结果见图 4和表 2。正常对照组:肺组织内有大量的棕黄色颗粒沉着，颜色较深。BA 组:肺组织、肺间质及支气管壁周围有少量的棕黄色颗粒沉着，阳性细胞颜色浅392第 4 期高远，等:心房钠尿肽信号通路在小鼠支气管哮喘发病中的作用及其机制而分布不广泛，T-bet 蛋白表达低于正常对照组(P 0 01)。ANP 组:支气管壁上皮细胞及其周围肺组织、肺间质较少棕黄色颗粒沉着，着色更浅，阳性细胞明显少于 BA 组，T-bet 蛋白表达明显低于BA 组(P 0 01)。ANP+A71915 组:支气管壁及其周围有少量的棕黄色颗粒沉着，T-bet 蛋白表达明显高于 ANP 组(P 0 01)。A:正常对照组;B:BA 组;C:ANP 组;D:ANP+A71915 组。图 4小鼠肺组织中 T-bet 蛋白的表达(免疫组织化学，100)Fig 4Expression of T-bet protein in lung tissue of mice(immunohistochemistry，100)表 2小鼠肺组织中 T-bet、GATA-3 蛋白的表达Tab2Expression of T-bet and GATA-3 protein in lungtissue of mice(珔x s)组别nT-bet 蛋白GATA-3 蛋白正常对照组101 95 0 170 89 011BA 组101 42 0 10a1 69 016aANP 组100 80 0 16b2 61 018bANP+A71915 组101 48 0 18c1 72 015c注:与正常对照组比较aP 0 01;与 BA 组比较bP 0 01;与ANP 组比较cP 001。3讨论BA 的发病机制至今仍不明确，其中，免疫失调被公认为 BA 的重要发病机制，最具代表性的是CD4+T 细胞群中的 Th1/Th2 亚群数量与功能的失衡，即 Th2 型应答优势化6。目前有效的治疗手段为规范地吸入激素与长效支气管扩张剂;然而，临床发现不少 BA 患者即使接受规范的吸入治疗，仍出现依赖甚至耐药情况，进而发展为难治性 BA;其可能机制为 BA 患者的个体差异、长期吸入治疗致使相应的受体敏感度下降及受体内化致数量减少、支气管重塑致反应性下降等7-8，而这些因素在短时间内很难解除。因此，寻找新的替代药物或联合用药成为解决此困境的重要手段之一。ANP 又称心钠素，为利钠肽家族主要成员，是一种经典的调控机体容量-压力内稳态的多效能活性肽，具有扩张血管、利钠、利尿等作用9;利钠肽受体 A 是 ANP 的主要作用受体，可介导相关细胞活动如增殖、分化、凋亡等 10。近期研究发现，ANP 信号可抑制 CD4+T 淋巴细胞亚群 Th17 细胞的分化与功能，表明 ANP 信号参与免疫调节，这提示除具有调节循环内稳态功能外，ANP 信号还拥有诸多值得关注的生物学功能 11。有研究发现，急性过敏性 BA 小鼠外周血、支气管肺泡灌洗液及肺组织匀浆中 ANP 水平升高，并且雾化吸入 ANP 后，醋甲胆碱诱发的 BA小鼠支气管痉挛明显减弱，其舒张支气管的强度与沙丁胺醇类似 12，与潘金兵等 5 结论基本一致，表明ANP 信号参与 BA 的发病，但其机制尚不清楚。有体外研究发现，ANP 信号可引起不成熟树突状细胞的表型变化，促进其抗原提呈作用，并且在 ANP 和脂多糖共同刺激下，利用树突状细胞和初始 CD4+T 细胞进行共同培养，发现可促进 Th2 细胞表型反应 13。综上推测，ANP 信号是否可能通过调控 Th1/Th2 细胞亚群的数量与功能平衡，参与 BA 免疫失衡的发病过程。为了明确 ANP 信号在 Th1/Th2 细胞表达功能中的作用，本研究通过建立 BA 小鼠模型并给予 ANP 及其受体抑制剂 A71915 进行干预。研究发现，雾化吸入 ANP 后，抑制了小鼠 Th1 型转录因子 T-bet 蛋白表达，同时加强了 Th2 型转录因子 GATA-3 蛋白表达，加重了支气管炎性反应以及支气管黏液分泌程度;而注入 ANP 受体抑制剂 A71915 后，Th1 型转录因子 T-bet 表达则有所上升，Th2 型转录因子 GATA-3 表达受到抑制，同时给予 ANP 受体抑制剂 A71915 后小鼠肺组织支气管的炎症反应也有所缓解，支气管黏液分泌明显减少。结果提示，ANP 信号参与了 Th1/Th2 细胞功能的表达过程，ANP 信号通过参与调控 Th1/Th2细胞功能平衡 14，抑制 Th1 型细胞反应而促使 Th2型细胞反应优势化，从而加重 BA 支气管炎症反应，使小鼠 BA 加重。参考文献:1刘艳明，农光民，吴娇华，等 抑制肺组织信号转导和转录激活因子-3 磷酸化对支气管哮喘小鼠呼吸道炎症及呼吸道重塑的影响J 中华实用儿科临床杂志，2014，29(4):265-269 2俞海国，钱丽娟，钱小青，等 转录因子 T-bet/GATA-3 在支气管哮喘小鼠中的表达及地塞米松的干预作用J 南京医科大学学报:自然科学版，2009，29(1):55-59 3Ma L B，Li J X，Wang G Y，et al Atrial natriuretic peptide sup-presses Th17 development regulation of cGMP-dependent proteinkinase and P13K-Akt signaling pathwaysJ egul Pept，2013，181:9-16(下转第 298 页)492新乡医学院学报http:/www xxyxyxb com2015 年第 32 卷白 Bax，是一系列凋亡相关蛋白中最重要的一对调节子13-16，Bax 通过与 Bcl-2 形成异源二聚体，封闭Bcl-2 活性，导致细胞凋亡17-19。本实验结果显示白花蛇舌草可使 amos 细胞 Bcl-2 蛋白表达水平下调，且随着剂量的增加，Bcl-2 蛋白下降更加明显;而Bax 蛋白表达水平上调，导致 Bax 和 Bcl-2 蛋白之间的比例平衡被打破，Bax/Bcl-2 比值升高，细胞出现凋亡。这可能是白花蛇舌草引起 amos 细胞凋亡的分子机制之一，即细胞活化调控胱天蛋白依赖的线粒体途径，进而促进肿瘤细胞凋亡。参考文献:1陈永康 白花蛇舌草的化学成分研究进展J 中国实验方剂学杂志，2011，17(17):290-293 2曾永长，梁少瑜，罗佳波，等 白花蛇舌草水提部位体内外抗肿瘤实验研究J 中药新药与临床药理，2011，22(5):521-524 3隋在云，王爱洁 白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍对小鼠 H22 肝癌细胞周期及凋亡的影响 J 中国实验方剂学杂志，2012，18(23):290-292 4张翔，叶宝东，林圣云，等 白花蛇舌草注射液对多发性骨髓瘤细胞株 PMI8226 增殖的影响J 中国中西医结合杂志，2012，32(12):1658-1662 5张焱，谢蕊繁，陈坚，等 白花蛇舌草对人胶质瘤 U87 细胞的影响及机制J 中华实验外科杂志，2011，28(12):2171-2173 6刘岩，张春阳，张大田，等 白花蛇舌草提取物诱导人肾癌GC-1 细胞凋亡及抑制血管生成的实验研究J 山东医药，2011，51(8):97-98 7余萍 白花蛇舌草注射液诱导 SKOV-3 细胞株凋亡的研究J中国药业，2012，21(18):24-25 8刘汝青，邓雪清，肖勇梅，等 白花蛇舌草提取物对鼻咽癌细胞株 CNE1 的毒性及其机制 J 新医学，2011，42(8):510-512 9杨娴，刘汝青，杜德荣，等 白花蛇舌草总黄酮对黑色素瘤A375 和 B16 细胞增殖抑制作用的研究J 世界中西医结合杂志，2011，6(10):844-846，856 10单保恩，张金艳，杜肖娜，等 白花蛇舌草的免疫学调节活性和抗肿瘤活性J 中国中西医结合杂志，2001，21(5):370-374 11Estaquier J，Vallette F，Vayssiere J L，et al The mitochondrial path-ways of apoptosisJ Adv Exp Med Biol，2012，942(1):157-183 12Zielinski ，Eigl B J，Chi K N Targeting the apoptosis pathwayin prostate cancerJ Cancer J，2013，19(1):79-89 13Lam L T，Zhang H，Chyla B Biomarkers of therapeutic responseto BCL2 antagonists in cancerJ Mol Diagn Ther，2012，16(6):347-356 14周俊，何湘珍，肖启国 金樱子通过增加 Bcl-2/Bax 表达比抑制大鼠糖尿病性白内障晶状体上皮细胞的凋亡J 眼科新进展，2014，34(4):314-318 15吴俭，金国强，杨利丽，等 复方丹参注射液对感染性休克大鼠脑损伤时一氧化氮、B-细胞淋巴瘤-2 蛋白及 S100 的影响J 中华实用儿科临床杂志，2014，29(10):758-760 16梁冰，曹永亮，郭爱华，等 Edaravone 对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠 Bcl-2 和 Bax 表达的影响 J 眼科新进展，2013，33(4):316-318 17Thomas S，Quinn B A，Das S K，et al Targeting the Bcl-2 familyfor cancer therapyJ Expert Opin Ther Targets，2013，17(1):61-75 18Tomek M，Akiyama T，Dass C ole of Bcl-2 in tumour cell sur-vival and implications for pharmacotherapyJ J Pharm Pharma-col，2012，64(12):1695-1702 19陶红芳，方建林，刘元生，等 紫杉醇下调死亡结构域沉默子表达促进白血病细胞凋亡新机制研究J 中华实用儿科临床杂志，2014，29(11):862-865(本文编辑:杨博英文编辑:杨博)(上接第 294 页)4Hellermann G，Kong X Y，Gunnarsdottir J，et al Mechanism of-bronchoprotective effects of a novel natriuretic hormone peptideJ J Allergy Clin Immunol，2004，113(1):79-85 5潘金兵，张铁栓，侯宇虹，等 支气管哮喘患者血浆心钠素、C型利钠肽的水平及临床意义 J 中华结核和呼吸杂志，2000，23(9):521 6潘小晶，王锁英，许化溪，等 T-bet 基因传递对支气管哮喘模型小鼠 T 淋巴细胞亚群的免疫调节作用 J 中华实用儿科临床杂志，2013，28(4):281-284 7Louis，Schleich F，Barnes P J Corticosteroids:still at the front-line inasthma treatmentJ Clin Chest Med，2012，33(3):531-541 8Bergeron C，Tulic M K，Hamid Q Airway remodelling in asthma inasthma:from benchside to clinical practiceJ Can espir J，2010，17(4):e85-e93 9郁淼，秦兵，张莉，等 脑钠肽在老年慢性心力衰竭诊断及预后评估中的应用价值J 新乡医学院学报，2013，30(9):741-743 10Misono K S，Philo J S，AraKawa T，et al Structure，signalingmechanism and regulation of the natriuretic peptide receptor gua-nylate cyclaseJ FEBS J，2011，278(11):1818-1829 11马礼兵 ANP 信号调控 CD4+T 细胞及其在过敏性哮喘中的作用研究D 长沙:中南大学，2012 12Ma L B，Xiang X D Atrial natriuretic peptide/natriuretic peptidereceptor A(ANP/NPA)signaling pathway:a potential thera-peutic target for allergic asthmaJ Med Hypotheses，2011，77(5):832-833 13Morita，Ukyo N，Furuya M，et al Atrial natriuetic peptide polar-izes human dendritic cells toward a Th2-promoting phenotypethrough its receptor guanylyl cyclase-coupled receptor AJ JImmunol，2003，170(12):5869-5875 14王谷宜-arrestin-2 对急性哮喘小鼠脾 CD4+T 细胞 Th1/Th2型细胞因子分泌的影响及其机制研究D 长沙:中南大学，2011(本文编辑:徐自超英文编辑:徐自超)892新乡医学院学报http:/www xxyxyxb com2015 年第 32 卷