磁共振成像纳米分子探针透明质酸-Gd_%282%29O_%283%29%40MSN对动脉粥样硬化的靶向识别.pdf

动脉粥样硬化是一种比较常见的心脑血管系统疾病，而易损斑块的发生以及继发性血栓的形成是高死亡率和致残率的主要原因 1。目前，临床常用的影像学方法无法精准对动脉粥样硬化易损斑块的发生和发展过程进行高分辨率监测，也不适用于早期识别动脉粥样硬化 2，对动脉粥样硬化进行早期精准识别是预防心脑血管疾病的关键环节。不同于传统影像学技术，分子影像技术的发展为早期精准识别动脉粥样硬化斑块的结Hyaluronic acid-Gd2O3MSN,nanoparticle probe of MRI for targeted identification ofatherosclerosisMA Ruifan1,CHENG Jianing1,HAO Liguo2,LI Zhongtao2,YIN Qiangqiang1,HU Haifeng3,WANG Yuguang31School of Medical Technology,2Department of Imaging Equipment and Technology,School of Medical Technology,Qiqihar MedicalUniversity,Qiqihar 161006,China;3Imaging Center,the Second Hospital Affiliated of Qiqihar Medical University,Qiqihar 161006,China摘要：目的 探究合成透明质酸（HA）修饰的介孔二氧化硅MR纳米探针HA-Gd2O3MSN的性能以及成像特点，为动脉粥样硬化疾病提供新的检查技术手段。方法 以CTAB为模板，正硅酸四乙酯和十六烷基三甲基溴化铵在碱性条件下制备成MSN，滴加GdCl36H2O变成Gd2O3MSN，在600下煅烧2 h去除十六烷基三甲基溴化铵模板，最后制备成分子探针Gd2O3MSN，再通过酰胺缩合制备成HA-Gd2O3MSN。运用透射电镜观察其形貌特征，动态光散射法检测其水合粒径和Zeta电位。运用3.0T MR观察其成像效果，并利用ICP-MS数据分析探针的弛豫率。结果 合成的探针水动力尺寸为223.510.5 nm，Zeta电位为-13.04 mV，弛豫率为11.023 mmolL-1s-1)；随着分子探针浓度逐渐升高，T1信号也随之增强。体外细胞试验研究显示透明质酸-Gd2O3MSN以HA依赖的方式靶向巨噬细胞表面受体CD44。在细胞毒性试验中发现HA包被的纳米探针毒性较小。结论 HA修饰的介孔二氧化硅MR纳米探针HA-Gd2O3MSN T1弛豫率高，细胞毒性小，靶向效果好，具有较好的MR成像增强效果，为进一步早期识别动脉粥样硬化斑块奠定基础。关键词：透明质酸；介孔二氧化硅；MR分子探针；纳米分子探针Abstract:Objective To synthesize a hyaluronic acid(HA)-modified mesoporous silica nanoprobe(MSN)for MRI,which is HA-Gd2O3MSN.Its performance and imaging characteristics were preliminarily studied,so as to provide a new technical tool forthe diagnosis of atherosclerosis.Methods The cetyltrimethylammonium bromide(CTAB)was utilized as the template,and tet-raethyl orthosilicate and CTAB were formulated into MSN under alkaline conditions.GdCl36H2O was incrementally intro-duced to produce the Gd2O3MSN.Subsequently,the CTAB template was eliminated through calcination at 600 for 2 h,which led to the formation of the molecular probe Gd2O3MSN.The HA-Gd2O3MSN was then prepared through amide con-densation.The morphology of HA-Gd2O3MSN was examined by transmission electron microscopy,while its hydrodynamicdiameter and zeta potential were measured by dynamic light scattering technique.The imaging results were observed by a3.0T MR scanner and the relaxation rate of the molecular probe Gd2O3MSN was analyzed using data from the inductively cou-pled plasma mass spectrometry testing.Results The hydrodynamic diameter of the synthesized probe HA-Gd2O3MSN was223.510.5 nm,the zeta potential of HA-Gd2O3MSN was-13.04 mV,with its relaxation rate being 11.023 mmol L-1 s-1.As theconcentration of the molecular probe increased incrementally,the T1 signal was correspondingly enhanced.Through in vitrocellular studies,we demonstrated that HA-Gd2O3MSN was capable to bind and target the CD44 receptors on the surface ofmacrophages in a HA-dependent manner.Furthermore,the HA-coated nanoprobes were found to be less toxic in cytotoxicityassays.Conclusion The nanoprobe HA-Gd2O3MSN,with its high T1 relaxation rate,low cytotoxicity,excellent targeting ca-pacity and good MR imaging enhancement effects,it lays the foundation for identification of atherosclerotic plaques at earlierstages.Keywords:hyaluronic acid;mesoporous silica;MR molecular probes;nanoparticle probe磁共振成像纳米分子探针透明质酸磁共振成像纳米分子探针透明质酸-Gd-Gd2 2O O3 3MSNMSN对动脉粥样硬对动脉粥样硬化的靶向识化的靶向识别别马瑞繁1，成佳宁1，郝利国2，李忠涛2，尹强强1，胡海峰3，王余广3齐齐哈尔医学院1医学技术学院，2医学技术学院影像设备与技术学教研室，黑龙江 齐齐哈尔 161006；3齐齐哈尔医学院附属第二医院影像中心，黑龙江 齐齐哈尔 161006收稿日期：2023-02-21基金项目：齐齐哈尔医学院研究生创新基金（QYYCX2022-12）；齐齐哈尔医学院临床科研基金（QMSI2019L-14）作者简介：马瑞繁，在读硕士研究生，E-mail:通信作者：王余广，主任医师，E-mail:分子影像学杂志,2023,46(4):583-590doi 10.12122/j.issn.1674-4500.2023.04.02 583构成分变化、发生发展机制和功能代谢提供了有效工具 3。近年来研究发现，利用透明质酸(HA)包覆的纳米材料可以提高纳米材料的生物相容性和生物降解性，这些优点使HA成为生物医学领域的热门研究课题 4-6。有学者设计了HA-阿托伐他汀偶联物，在动脉粥样硬化的诊断治疗方面取得了一定的效果，但阿托伐他汀存在一定的药理毒性，因此限制了它的进一步应用 7。有学者将低聚HA-2-丙-2,2-二酰基（硫）二乙酸-羟甲基二茂铁与姜黄素结合，形成纳米胶束，用于动脉粥样硬化的靶向治疗，但是纳米胶束在体内循环稳定性不佳，且载药率低，因此仍需要优化 8。本研究选取临床Gd剂作MRI阳性造影剂 9。但游离的Gd3+毒性强，不能通过离子形式注入人体，因此需要制成螯合物以降低毒性后才能使用。与传统的纳米药物载体相比，介孔二氧化硅(MSNs)纳米粒子作为药物载体，可以有效提高药物的利用率，降低细胞毒性 10-11。将Gd3+装载到MSNs的孔隙或二氧化硅骨架上，不仅可避免Gd3+的提前泄露，而且有利于水中的氢原子与磁性中心的交换，介孔二氧化硅负载钆可以提高纳米探针的生物安全性，增强其弛豫率 12。被动靶向很难达到对动脉粥样硬化的精准识别，而利用HA主动靶向动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞CD44受体，可以实现精准靶向成像。因此，本研究构建了一种以介孔二氧化硅为载体合成MR分子探针HA-Gd2O3MSN的方法，初步研究其性能以及成像特点，为动脉粥样硬化疾病提供新的检查技术手段，现报道如下。1 材料与方法1.1 试剂与仪器1.1.1 试剂耗材 Dulbecco改良Eagle培养基（博奥森），青霉素-链霉素（兰杰柯），胎牛血清、小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)（海星生物）。CCK-8溶液由上海陶素提供。十六烷基三甲基溴化铵(CTAB，99%)、正硅酸四乙脂(TEOS，99%)、氯化钆六水合物(GdCl36H2O，99.9%)、三乙胺、HA（97%)、1-Eth-yl-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)（上海阿拉丁科技有限公司）。3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES，99%)、4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐（DAPI）、荧光素-5-异硫氰酸盐（FITC）、脂多糖（麦克林科技有限公司）。1.1.2 仪器设备 集热式磁力搅拌器（上海力辰仪器科技有限公司），DF-101S（加深款）；数显恒温磁力加热搅拌器（江苏正基仪器有限公司）；万分之一电子天平(上海惜今）；透射电镜（日本日立）；粒度分析仪(美国 PSS)；3.0 T磁共振（飞利浦）；多功能酶标仪（瑞士Tecan）；冷冻干燥仪（上海沪析）；NM120 核磁共振造影剂弛豫率分析与成像系统（苏州纽迈分析仪器股份有限公司）；电感耦合等离子体质谱-质谱仪（ICP-MS,Agilent 770s，美国）；实验所用溶液均用去离子水配置。1.2 Gd2O3MSN的制备根据文献 13 合成了Gd2O3MSN，并对其稍作修改。称量0.25 g CTAB放入200 mL容量的茄型瓶中缓慢搅拌10 min，再加入0.5 mL NaOH溶液(70 mg/mL)和110 mL去离子水，在磁力搅拌(200 r/min)下，将温度升至 80，保持此条件 30 min 后，在滴加 1 mL 的TEOS溶液，继续反应2 h。然后，将10 mL(6 mg/mL)的GdCl36H2O溶液滴加到茄型瓶中，继续反应1 h，再滴加0.25 mL的TEOS溶液，继续反应2 h，之后收集溶液静置8 h，并用乙醇和去离子水洗涤、离心，将再次离心收集的样品置于鼓风干燥箱65 烘干12 h取出，最后经马弗炉600 煅烧2 h，除去模板CTAB，煅烧得到的产物即为钆点缀的介孔二氧化硅，即Gd2O3MSN。1.3 HA-Gd2O3MSN的制备称量25 mg Gd2O3MSN于烧杯中，随后加入7.5mL乙醇搅匀。之后在滴加50L APTES于烧杯中。在45 条件下搅拌8 h。离心并洗涤后得到氨基功能化钆和介孔二氧化硅，即Gd2O3MSN-NH2。Gd2O3MSN-NH2粉末0.5 g溶解于50 mL去离子水中。之后在另一烧杯中称量18.5 mg/mL的NHS和10 mg/mL的EDC的粉末与1.5 mg/mL的HA溶液混合 14。将得到的这两种混合溶液用三乙胺作催化剂调节pH至9.0。混合液在40 下搅拌24 h。最后离心并用去离子水洗涤3次，进行冷冻干燥后得到HA修饰的Gd2O3MSN，即HA-Gd2O3MSN。1.4 FITC标记的Gd2O3MSN和HA-Gd2O3MSN称量40 mg HA-Gd2O3MSN样品Gd2O3MSN-NH2样品分别溶于6 mL的去离子水中，再加入10 mLFITC乙醇溶液(0.6 mg/mL)混合。避光搅拌8 h，最后将制备的纳米颗粒用乙醇洗涤、离心，直到上清液变为无色。即可得到FITC-Gd2O3MSN-NH2和FITC-HA-Gd2O3MSN。1.5 HA-Gd2O3MSN的表征检测采用透射电子显微镜(TEM)测定纳米颗粒大小及形貌特征；采用粒度分析仪测量纳米体水动力尺寸与Zeta电位；采用扫描透射电子显微镜高角度环形暗场（STEM-HAADF）测 定 Mapping 元 素 分 析；采 用Brunauer-Emmett-Teller(BET)测 量 和 Barrett-Joyner-Halenda（BJH,ASAP2460,Micromeritics Inc,Nocross,GA,USA）分析用于确定不同颗粒的表面积和孔径分布。ICP-MS分析Gd3+含量。1.6 弛豫率测定分别配置不同Gd3+浓度的HA-Gd2O3MSN探针分子影像学杂志,2023,46(4):583-590http:/www.j- 584溶液分散在去离子水中，通过纽迈磁共振分析仪进行弛豫率测定。分别检测Gd3+浓度为0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0 mmol/L的样品，根据溶液浓度和峰值时间，将所得坐标点数据使用Origin2021软件绘制拟合曲线并计算HA-Gd2O3MSN弛豫率。1.7 体外MRI成像将HA-Gd2O3MSN纳米探针分散在去离子水中稀释成0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0 mmol/L(以Gd3+浓度为标准)的浓度梯度，每管液量为4 mL，超声波震荡5min使液体混匀。采用3.0T磁共振成像系统进行T1WI成像。1.8 细胞培养复苏RAW264.7细胞，倒掉旧的培养基，通过离心将并RAW264.7细胞分别接种于含10%胎牛血清和1%的青霉素-链霉素的Dulbecco改良Eagle培养基中来收获细胞。并在37、5%CO2培养箱中进行细胞培养。1.9 细胞毒性实验采用CCK-8法来检测纳米探针的体外细胞毒性。将RAW264.7细胞分别接种于96孔板中，37、5%CO2条件下进行孵育24 h。24 h后，弃去旧的培养基并在每孔中加入含有不同浓度(20、40、80、120、160、200、320、400 g/mL)HA-Gd2O3MSN培养基溶液，孵育24 h后再分别加入10 L的CCK-8溶液，再孵育2 h。使用多功能酶标仪测量波长的吸光度A450 nm。细胞毒性计算公式为：细胞活力(%)=A450 nm(实验)-A450 nm(空白)/A450 nm(对照)-A450 nm(空白)100%。1.10 体外细胞摄取为验证 RAW264.7 细胞对 Gd2O3MSN 和 HA-Gd2O3MSN探针的摄取能力，使用激光共聚焦扫描显微镜来验证Gd2O3MSN和HA-Gd2O3MSN纳米探针是否内化进入RAW264.7细胞。将RAW264.7细胞接种于6孔板中，37、5%CO2条件下进行孵育。贴壁过夜后，换成新培养基再加入20 g/mL脂多糖并培养8 h。用PBS缓冲液冲洗并用4%多聚甲醛固定。以PBS 为 对 照 组，FITC 标 记 的 Gd2O3MSN 和HA-Gd2O3MSN为实验组，在培养箱中孵育2 h。之后进行DAPI染色，避光后弃去DAPI染液，使用无菌PBS冲洗后完成染色。为了进一步验证巨噬细胞的靶向性，将FITC标记的HA+HA-Gd2O3MSN(500 g/mL)与RAW264.7细胞共培养2 h，并进行与上述相同的处理。最后置于激光共聚焦扫描显微镜下观察各组细胞的共聚焦图像。1.11 统计学分析采用SPSS23.0软件进行统计学分析，所有实验至少重复3次，所有计量数据均以均数标准差表示，两两比较采用t检验，多组间均数的比较采用单因素方差分析。以P0.05为差异有统计学意义。在Origin2021版本软件中进行图形和统计分析。2 结果2.1 HA-Gd2O3MSN的合成机制本研究HA-Gd2O3MSN的合成，用于动脉粥样硬化管理（图1）。将TEOS和CTAB在碱性条件下制备成MSN，滴加GdCl36H2O变成Gd2O3MSN，在600下煅烧2 h去除CTAB模板，再通过后嫁接法，得到氨基功能化 Gd2O3MSN（Gd2O3MSN-NH2）。经过 EDC/NHS反应与HA的羧基（-COOH）共价共轭，得到HA修饰的Gd2O3MSN，即HA-Gd2O3MSN。CTABGdCl36H2OGdCl36H2OTEOS+CTABHANaOHAPTESEDC/NHSAPTESCalcinedat 600for 2 h图1 HA-Gd2O3MSN的合成示意图Fig.1 Schematic diagram of the synthesis of HA-Gd2O3MSN.2.2 透射电镜的检测结果HA-Gd2O3MSN煅烧后呈白色粉末状。其溶于液体后外观为白色，无沉淀现象，水溶性良好（图2A）。HA-Gd2O3MSN在TEM下的图像（图2B），制备的HA-Gd2O3MSN的形状为球形或椭球形，大小分布均匀。http:/www.j-分子影像学杂志,2023,46(4):583-590 5852.3 水动力尺寸以及Zeta电位的测定结果水合粒径的平均粒径为223.510.5 nm，呈正态分布（图3A）；Zeta电位测试结果显示HA-Gd2O3MSN电位为-13.04 mV（图3B）。ABAB图3 纳米探针的水合粒径及Zeta表面电位Fig.3 Hydrated particle size and Zeta surface potential of nanoprobes.A:Hydration particle size of HA-Gd2O3MSN;B:Zeta potential of HA-Gd2O3MSN.图2 纳米探针的实物照片及透射电子显微镜图像Fig.2 Physical photograph of the nanoprobe and transmission electron microscope image.A:HA-Gd2O3MSN;B:TEM image of HA-Gd2O3MSN.2.4 元素mapping的检测结果STEM-HAADF 图像和元素 mapping 图像证实Gd、Si、O三种元素的存在和均匀分布，表明Gd3+元素均匀分布在MSNs结构中（图4）。2.5 N2吸附等温线及孔径分布曲线的测定结果煅烧去除CTAB模板后，氮气吸附实验表明所制备的HA-Gd2O3MSN BET表面积为451.753 m2/g（图5A）。通过BJH方法计算出MSNs的孔径分别为3.204nm（图5B）。2.6 MRI成像效能及弛豫率检测随着Gd3+浓度的增高，HA-Gd2O3MSN纳米探针的 T1加 权 MR 图 像 亮 度 明 显 增 强（图 6A）。HA-Gd2O3MSN 纳 米 探 针 的 弛 豫 率 为 r1=11.023mmol/（Ls）（图6B）。2.7 细胞毒性实验为评估HA-Gd2O3MSN的细胞毒性，使用CCK-8法检测。将RAW264.7细胞与不同浓度(20、40、80、120、160、200、320、400 g/mL)HA-Gd2O3MSN探针共同培养24 h，检测细胞存活率有无变化，结果显示RAW 264.7细胞的存活率高于85%（图7）。2.8 体外细胞摄取将FITC标记的Gd2O3MSN和HA-Gd2O3MSN与RAW264.7细胞共培养2 h，并通过激光共聚焦扫描显微镜来观察Gd2O3MSN和HA-Gd2O3MSN探针在细胞中的靶向选择性。FITC-Gd2O3MSN处理的细胞显示出部分绿色荧光（图8）。相比之下，FITC-HA-Gd2O3MSN组显示出显著的绿色荧光。如果在FITC-HA-Gd2O3MSN处理前用游离HA(10 mg/mL)处理RAW264.7细胞，结果显示出非常弱的绿色荧光。分子影像学杂志,2023,46(4):583-590http:/www.j- 5863 讨论动脉粥样硬化的发生涉及众多细胞因子和细胞类型，形成的斑块具有隐匿性，并且随着病变累积和侵蚀，在血流动力学作用下如果斑块破裂，则会导致血栓、心肌梗塞或中风等并发症的发生 15-16。纳米材料与纳米医学的发展，为精准靶向生物标记物的研究和设计提供了新思路 17，但各种分子探针纳米材料合成成本高，以及合成工艺复杂和产率低、体内安全性仍然是主要问题 18。因此，我们选用成本低的Gd2O3纳米材料作为MRIT1造影剂，通过将Gd2O3装载到MSNs的孔隙或二氧化硅骨架上来提高纳米探针的生物安全性。选用HA来提高纳米探针的生物降解性以及靶向性，合成HA-图4 纳米探针的高角环形暗场扫描透射及元素mapping分析Fig.4 High-angle annular dark-field scanning transmission and elemental mapping analysis of nanoprobes.A:STEM-HAADFanalysis of HA-Gd2O3MSN;B:Mapping analysis of element Gd;C:Mapping analysis of element Si;D:Mapping analysis of ele-ment O;E:Merged image of mapping analysis of elements Gd,Si and O.ABCDEAB图5 纳米探针的氮气吸附等温线和孔径分布图Fig.5 Nitrogen adsorption isotherm and pore size distribution of nanoprobes.A:BET nitrogen adsorption isotherm;B:Distribution of BJH pore diameters.Adsorbed volume(cm3/g)Cumulative Volume(cc/g)Pore width(nm)Relative pressure(p/p0)http:/www.j-分子影像学杂志,2023,46(4):583-590 587Gd2O3MSN纳米探针，以非侵入性地方式识别巨噬细胞，为早期识别动脉粥样硬化斑块提供新的检查技术手段。对本研究所制备MR分子探针的合成、表征及其相关实验结果分析如下:（1）TEM 结果显示了 HA-Gd2O3MSN 纳米探针的基本形态结构，STEM-HAADF图像和元素mapping的检测结果进一步表明，Gd、Si、O三种元素均匀分布在HA-Gd2O3MSN中，证实了HA-Gd2O3MSN纳米探针载体的成功制备 19。BET分析HA-Gd2O3MSN的氮气吸收-解吸等温线结果可得，HA-Gd2O3MSN的表面积约为451.753 m2/g，具有明显的滞后效应，BJH测得HA-Gd2O3MSN平均孔径为3.204 nm，表明探针存在介孔结构 20-21，且BJH显示孔隙体积减小，证明HA成功修饰在纳米探针表面，证明了探针的最终合成 19,22。（2）纳米探针水合粒径为 223.5 10.5 nm，在 水 溶 液 的 分 散 均 匀；HA-Gd2O3MSN Zeta电位结果为-13.04 mV，负电位下探针在体内可拥有更长的循环时间，有利于在病变部位富集，以更好的进行成像 23。在体外成像中，随着Gd3+浓度增加，HA-Gd2O3MSN纳米探针的T1信号强度随图6 纳米探针的磁共振成像性能Fig.6 Magnetic resonance imaging properties of nanoprobes.A:Magnetic resonance T1-weighted imaging results.The inten-sities of MR images increase with the incremental increase of the concentration of Gd3+;B:T1 relaxation rate(r1)of nano-probes.A0.0625 mmol/L 0.125 mmol/L 0.25 mmol/L0.5 mmol/L1 mmol/LB1/T1(S-1)Gd3+(mmol/L)图7 纳米探针的细胞毒性Fig.7 Cytotoxicity of synthesized HA-Gd2O3MSN nanoprobes.Cell viability(%)HA-Gd2O3MSNHA-Gd2O3MSN(g/mL)100806040200204080120160200320400分子影像学杂志,2023,46(4):583-590http:/www.j- 588之增强，靶向纳米探针 HA-Gd2O3MSN 弛豫率为11.023 mmolL-1s-1，比临床常用的Magnevist（r1=4.998mmolL-1s-1）高2.20倍，成像效果明显优于Magnevist，以上结果证明，HA-Gd2O3MSN纳米探针显示出具有成为临床T1造影剂的潜力 24。（3）在生物安全性的评估方面，CCK-8结果显示当HA-Gd2O3MSN浓度为400g/mL时，巨噬细胞细胞存活率仍在85%左右，这表明HA-Gd2O3MSN纳米探针对RAW264.7细胞无明显的毒性作用，具有良好的生物相容性 25。（4）HA-Gd2O3MSN的细胞靶向实验显示，HA-Gd2O3MSN组较Gd2O3MSN组荧光信号强度更强，归因于HA-Gd2O3MSN纳米探针对CD44高表达的巨噬细胞具有高度的靶向特异性 26，竞争抑制性实验的结果显示，在封闭组中，将游离HA与巨噬细胞共培养，以阻断RAW264.7细胞表面的CD44受体，随后与靶向纳米探针HA-Gd2O3MSN共培养，观察到其荧光信号强度与非靶向 Gd2O3MSN 组相似，进一步证明了 HA-Gd2O3MSN纳米探针对巨噬细胞的特异性靶向作用是通过CD44介导的。因此，上述各组细胞实验数据表明，本研究所制备的HA-Gd2O3MSN纳米探针以HA依赖的方式靶向巨噬细胞表面受体CD44，可以实现动脉粥样硬化的精准靶向成像。综上所述，本研究证明HA-Gd2O3MSN MR探针具有弛豫率高、细胞毒性低、靶向效果好、合成工艺简单等优点，具备体外MR成像能力和成为MR T1造影剂的潜力，可以弥补MR在动脉粥样硬化中对隐匿性斑块早期检测的不足，深化与之密切相关的分子探针及相关动脉粥样硬化的研究，为进一步早期识别动脉粥样硬化斑块奠定了基础。参考文献：1 Htun NM,Chen YC,Lim B,et al.Near-infrared autofluorescenceinduced by intraplaque hemorrhage and heme degradation asmarker for high-risk atherosclerotic plaques J .Nat Commun,2017,8:75.2 Zhang J,Li C,Zhang X,et al.In vivo tumor-targeted dual-modalfluorescence/CT imaging using a nanoprobe co-loaded with an图8 不同纳米探针与RAW264.7巨噬细胞的共聚焦显微成像图Fig.8 Laser scanning confocal images of RAW264.7 macrophages with different nanoprobes.DAPIFITCMergedGd2O3MSNHA-Gd2O3MSNBlockedhttp:/www.j-分子影像学杂志,2023,46(4):583-590 589aggregation-induced emission dye and gold nanoparticles J .Biomaterials,2015,42:103-11.3 Lairez O,Fayad ZA.Imaging of atherosclerosis:can molecularimaging do more?J .Arch Cardiovasc Dis,2013,106(11):551-3.4 Wolf KJ,Kumar S.Hyaluronic acid:incorporating the bio into thematerial J .ACS Biomater Sci Eng,2019,5(8):3753-65.5 Goh EJ,Kim KS,Kim YR,et al.Bioimaging of hyaluronic acidderivatives using nanosized carbon dots J .Biomacromolecules,2012,13(8):2554-61.6 Lee MY,Yang JA,Jung HS,et al.Hyaluronic acid-goldnanoparticle/interferoncomplexfortargetedtreatmentofhepatitis C virus infection J .ACS Nano,2012,6(11):9522-31.7 Hossaini NS,Rashidijahanabad Z,Ramadan S,et al.Effectiveatherosclerotic plaque inflammation inhibition with targeted drugdelivery by 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