北海竹林盐场极端嗜盐真菌的多样性及其抑菌活性研究.pdf

广西科学,2 0 2 3年,3 0卷,第3期 G u a n g x i S c i e n c e s,2 0 2 3,V o l.3 0 N o.3收稿日期:2 0 2 2 0 5 2 6 修回日期:2 0 2 2 0 8 2 2*国家自然科学基金项目(4 2 0 6 6 0 0 6,4 1 6 0 6 1 8 6,U 2 0 A 2 0 1 0 1),广西科技计划项目人才专项(桂科A D 1 9 2 4 5 1 1 6),广西自然科学基金粤桂联合基金项目(2 0 2 1 G X N S F D A 0 7 5 0 1 0),广西八桂学者专项经费项目(0 5 0 1 9 0 5 5),广东海洋药物重点实验室开放课题(LMM 2 0 2 1 3),广西创新团队项目(2 0 2 0 G X N S F GA 2 9 7 0 0 2),广西研究生教育创新计划项目(Y C S W 2 0 2 1 2 4 1),自治区级学位与研究生教育改革课题(J G Y 2 0 2 2 1 8 1)和中药学广西一流学科项目(桂教科研2 0 1 81 2号)资助。【第一作者简介】李海艳(1 9 9 7-),女,在读硕士研究生,主要从事海洋微生物多样性研究,E m a i l:1 8 3 3 6 8 1 3 2 9q q.c o m。【*通信作者】徐新亚(1 9 8 1-),男,博士,副研究员,硕士研究生导师,主要从事海洋天然产物化学研究,E m a i l:x u x y g x t c m u.e d u.c n。刘永宏(1 9 7 2-),男,博士,研究员,主要从事海洋药物研究,E m a i l:y o n g h o n g l i us c s i o.a c.c n。【引用本文】李海艳,陆春菊,张耿思,等.北海竹林盐场极端嗜盐真菌的多样性及其抑菌活性研究J.广西科学,2 0 2 3,3 0(3):4 7 8 4 8 4.L I H Y,L U C J,Z HAN G G S,e t a l.D i v e r s i t y a n d A n t i b a c t e r i a l A c t i v i t y o f E x t r e m e l y H a l o p h i l i c F u n g i f r o m B e i h a i Z h u l i n S a l t F i e l d J.G u a n g x i S c i e n c e s,2 0 2 3,3 0(3):4 7 8 4 8 4.生物科学北海竹林盐场极端嗜盐真菌的多样性及其抑菌活性研究*李海艳,陆春菊,张耿思,周冬梅,苏志维,高程海,徐新亚*,刘永宏*(广西中医药大学海洋药物研究院,广西南宁 5 3 0 2 0 0)摘要:为探讨北海竹林盐场极端嗜盐真菌的物种多样性及其抑菌活性,采用高盐培养基分离盐场饱和盐度采样点的可培养真菌,并基于I T S基因序列进行菌株鉴定;使用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M e t h i c i l l i n r e s i s t a n t S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s,MR S A)、表皮葡萄球菌(S t a p h y l o c o c c u s e p i d e r m i d i s,S E)、无乳链球菌(S t r e p t o c o c c u s a g a l a c t i a e,S A)和海豚链球菌(S t r e p s t o c o c c u s i n i a e,S I)作为指示菌,利用9 6孔板法评价真菌发酵提取物的抑菌活性。本研究分离得到可培养极端嗜盐真菌1 6株,鉴定为6科6属1 2种,其中枝孢菌属(C l a d o s p o r i u m,3种)、黑孢霉属(N i g r o s p o r a,3种)和镰刀菌属(F u s a r i u m,3种)是优势属。菌株F.i n c a r n a t u m G X I MD 0 0 5 2 7和F.c h l a m y d o s p o r u m G X I MD 0 0 5 4 1的发酵产物对4种指示菌有较强的抑菌活性9 0%M i n i m a l I n h i b i t o r y C o n c e n t r a t i o n(M I C9 0)6.2 5 g/m L,A l t e r n a r i a a l t e r n a t a G X I MD 0 0 5 3 2、C l a d o s p o r i u m c l a d o s p o r i o i d e s G X I MD 0 0 5 3 3和C u r v u l a r i a h a w a i i e n s i s G X I MD 0 0 5 3 8的发酵产物对MR S A有抑菌活性(M I C9 02 5 g/m L)。本研究丰富了广西嗜盐海洋真菌的物种多样性,为北部湾海洋微生物资源的开发利用奠定了基础。关键词:极端嗜盐真菌;生物多样性;抑菌活性;北海竹林盐场;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中图分类号:Q 9 3,P 7 3 5 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 5 9 1 6 4(2 0 2 3)0 3 0 4 7 8 0 7D O I:1 0.1 3 6 5 6/j.c n k i.g x k x.2 0 2 3 0 7 1 0.0 0 6 高浓度的结晶盐类(N a C l)会限制微生物生长,通常认为极端的高盐环境如盐田、盐湖或高浓度盐溶液食 物 中 只 存 在 原 核 生 物。直 到2 0 0 0年 左 右,B u c h a l o等1和G u n d e C i m e r m a n等2从高盐环境中分离得到真菌之后,高盐生态系统及其真菌物种多样性才引起人们的注意。具有代表性的高盐生态系统有美国大盐湖,以色列、巴勒斯坦、约旦交界处的死海,以及中国新疆、青海、内蒙古等地的盐湖等1,3。874李海艳,陆春菊,张耿思,等.北海竹林盐场极端嗜盐真菌的多样性及其抑菌活性研究生存在深海沉积物、盐湖、盐田、盐土和海水等高盐环境中的微生物统称嗜盐微生物。陈星宇等4根据不同盐度下的生长情况,把微生物划分为不同类型:非嗜盐 菌(1.1 7%N a C l)、轻 度 嗜 盐 菌(1.1 7%-2.9 3%N a C l)、中 等 嗜 盐 菌(2.9 3%-1 4.6 3%N a C l)、极端嗜盐菌(1 4.6 3%-3 0.4 0%N a C l)、耐盐菌(1.1 7%-1 4.6 3%N a C l)。我国已报道的常见嗜盐真菌有青霉属(P e n i c i l l i u m)5,6、曲霉属(A s p e r-g i l l u s)5,6、镰刀菌属(F u s a r i u m)7,8、枝孢属(C l a-d o s p o r i u m)7,8等类群。我国有绵延的海岸线,大多地势平坦,滩涂广阔,很适合建滩晒盐。因此,北起辽东半岛,南至海南岛,我国分布有大大小小超过1 0 0 0个盐湖/盐场。但是,我国高盐环境下的微生物多样性研究关注度还不足,相关研究仍然较少。嗜盐耐盐真菌次生代谢产物丰富,包括酚类9、甾醇类9、核酸类1 0、醌类1 0、生物碱1 1等单体化合物,这些化合物结构新颖,且部分具有良好的抗菌、抗肿瘤 活 性 等。在 研 究 耐 盐 真 菌P.c h r y s o g e n u m HK 1 4 0 1的次生代谢产物中,曲鹏等1 2发现化合物(2S,3R)o x a l i n e、(Z)N(4 h y d r o x y s t y r y l)f o r-m a m i d e和(E)N(4 h y d r o x y s t y r y l)f o r m a m i d e对大肠杆菌(E s c h e r i c h i a c o l i)表现出抑菌活性,化合物(2S,3R)o x a l i n e和e m o d i n对 金 黄 色 葡 萄 球 菌(S t a p h y l o c c o c u s a u r e u s)表现出抑菌活性,化合物e m o d i n还能微弱地抑制小鼠白血病悬浮细胞(P 3 8 8)的增殖。对于耐盐真菌W a l l e m i a s e b i P X P 8 9,P e n g等1 1发现 其 次 生 代 谢 产 物 对 产 气 肠 杆 菌(E n t e r-o b a c t e r a e r o g e n e s)具有抗菌活性,最小抑菌浓度为7 6.7 m o l/L。刘培培等1 3从内蒙古盐湖的沉积物中筛 选 出 一 株 耐 盐 真 菌A s p e r g i l l u s v a r i e c o l o r B 1 7,其具有明显的细胞毒活性(小鼠乳腺癌细胞株t s F T 2 1 0)和海虾(A r t e m i a s a l i n a L e a c h)致死活性;从该菌发酵产物的石油醚层提取物中分离出的3个单体化合物2(E 1 庚烯基)3,6 二羟基 5(3 甲基2 丁烯基)苯甲醛、2 庚基 3,6 二羟基 5(3 甲基 2 丁烯基)苯甲醛、2(E,E 3,5 庚二烯基)3,6 二羟基 5(3 甲基 2 丁烯基)苯甲醛,对P 3 8 8、A 5 4 9、HL 6 0和B E L 7 4 0 2肿瘤细胞表现出弱的细胞增殖抑制活性,半抑制浓度I C5 0值分别为8 8、6 8、6 6、6 5 m o l/L,9、9 9、1 1 0、8 4 m o l/L以及7 7、1 4 7、9 3、2 0 3 m o l/L。北海竹林盐场是广西最大的海晶盐生产基地,制盐历史悠久。陈显强等1 4于2 0 1 9年5月从北海竹林盐场的海盐田中分离得到2 6株嗜盐真菌,鉴定为3科4属1 1种,其中青霉菌属菌株为优势菌群;菌株E p i c o c c u m s o r g h i n u m G X I MD 0 2 0 0 1具有靶向F G-F R 2抗 肿 瘤 作 用,A s p e r g i l l u s v e r s i c o l o r G X-I MD 0 2 0 0 4和P e n i c i l l i u m c i t r i n u m G X I MD 0 2 0 0 9等具有抑制乳腺癌细胞增殖的作用。为研究冬季北海海盐田嗜盐真菌的物种多样性,本课题组于2 0 2 0年1 1月底从广西北海竹林盐场的饱和盐水区域采集样品,采用两种高盐培养基 高盐虎红培养基和高盐马铃薯葡萄糖培养基进行菌株筛选分离;同时,使用4种致病菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M e t h i-c i l l i n r e s i s t a n t S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s,MR S A)、表皮葡萄球菌(S t a p h y l o c o c c u s e p i d e r m i d i s,S E)、无乳链球菌(S t r e p t o c o c c u s a g a l a c t i a e,S A)和海豚链球菌(S t r e p s t o c o c c u s i n i a e,S I)作为指示菌,对嗜盐真菌发酵提取物的抗菌活性进行评价,从而得到具有潜在抗菌活性的菌株,为北部湾嗜盐真菌资源的开发利用奠定基础。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 培养基 培养基均经1 2 1 高温高压灭菌3 0 m i n后使用,配方如下。(1)分离培养基 高盐虎红培养基(R BM):蛋白胨5.0 g,葡萄糖1 0.0 g,KH2P O4 1.0 g,M g S O4 0.5 g,孟 加 拉 红0.0 3 3 g,琼脂粉1 5.0 g,氯霉素0.1 g,含1 0%海盐的人工海水1 0 0 0 m L。高盐查氏琼脂 培养基(C D A):N a NO3 3.0 g,K2H P O4 1.0 g,M g S O47 H2O 0.5 g,K C l 0.5 g,F e S O4 0.0 1 g,蔗糖3 0.0 g,琼脂粉1 5.0 g,氯霉素0.1 g,含1 0%海盐的人工海水1 0 0 0 m L。(2)纯化培养基 高盐马铃薯葡萄糖琼脂培养基(P D A):马铃薯提取粉6.0 g,葡萄糖2 0.0 g,琼脂粉1 5.0 g,含1 0%海盐的人工海水1 0 0 0 m L。(3)发酵培养基 高盐马铃薯葡萄糖培养基(P D):马铃薯提取粉6.0 g,葡 萄 糖2 0.0 g,含1 0%海 盐 的 人 工 海 水1 0 0 0 m L。1.1.2 采样信息 2 0 2 0年1 1月2 7日在广西北海竹林盐场选取6个饱和盐度的采样点进行采样(表1),采集的样品放974广西科学,2 0 2 3年,3 0卷,第3期 G u a n g x i S c i e n c e s,2 0 2 3,V o l.3 0 N o.3入无菌袋中,无菌袋放入装有冰袋的隔温箱里带回实验室,当天进行菌株分离。表1 采样地点坐标以及样品来源T a b l e 1 C o o r d i n a t e s o f s a m p l i n g l o c a t i o n s a n d s o u r c e s o f s a m-p l e s序号S e r i a l n u m b e r北纬N o r t h e r n l a t i t u d e东经E a s t l o n g i t u d e样品来源S a m p l e s o u r c e12 1 2 6 3 5 1 0 9 1 6 2 2 S a l t f i e l d d r a i n a g e p o o l w a t e r22 1 2 6 3 5 1 0 9 1 6 2 2 S e d i m e n t s o f s a l t d r a i n a g e p o n d s32 1 2 6 3 5 1 0 9 1 6 2 3 S a l t f i e l d w a t e r42 1 2 6 3 5 1 0 9 1 6 2 3 S e d i m e n t s o f s a l t f i e l d52 1 2 6 3 5 1 0 9 1 6 2 3 S e d i m e n t s o f s a l t f i e l d d i t c h62 1 2 6 3 5 1 0 9 1 6 2 3 S a l t f i e l d d i t c h w a t e r1.1.3 指示菌 指示菌包括两种人类致病菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌,两种水产养殖致病菌 无乳链球菌和海豚链球菌,均由华南农业大学海洋学院张晓勇副教授惠赠。1.2 方法1.2.1 真菌分离 沉积物样品取约2 g,加入2 m L无菌水,研磨混匀,即为样品原液;水池水/盐田水直接作为样品原液。用无菌海水将样品原液稀释成11 0、11 0 0的样品悬液。各取1 0 0 L两种浓度样品悬液涂布于分离培养基中,置于2 5 恒温培养箱培养1 2 d。用灭菌竹签挑取形态不同的单菌落接种于P D A培养基上,纯化菌株。1.2.2 真菌鉴定 在超净工作台中从培养平板上刮取一定量的菌丝体和孢子,放入无菌的1.5 m L离心管中。离心管中加入0.2%N a OH溶液,沸水浴5 m i n,-8 0 条件下冷冻1 0 m i n。取破壁后的菌液进行P C R扩增,扩增体系为2 5 L,其中模板D NA 0.5 L,B u f f e r(含M g2+)2.5 L,d NT P 1 L,E a s y t a q酶0.2 L,引物I T S 1和I T S 4各0.5 L,d d H2O补足至2 5 L。P C R扩增程序:预变性9 4 4 m i n;9 4 4 5 s,5 5 4 5 s,7 2 1 m i n,3 0个循环;修复延伸7 2 1 0 m i n;终止反应4 1 0 m i n。取5 L扩增产物使用1%琼脂凝胶电泳检验,并用B i o R D S凝胶成像仪观察电泳结果。将有荧光反应的P C R扩增产物进行I T S r D NA测序。所有I T S测序结果使用S e q m a n软件分析剪切,之后将剪切后的I T S序列上传至N C B I核酸序列数据库与已知序列进行比对,选择相似性高的序列进行分析。使用ME GA 7软件,采用邻接法(N e i g h b o r J o i n i n g,N J)构建系统发育树。将形态学观察结果与序列对比结果相结合进行分类、排重,将具有代表性的真菌I T S序列上传到G e n B a n k,获取登录号。1.2.3 菌株发酵提取物的制备 将纯培养所得菌株接种于P D培养基中,2 8、1 8 0 r/m i n振荡培养7 d。将等体积乙酸乙酯加入真菌P D培养基中,4 0 k H z超声提取2 0 m i n,真空抽滤,静置分层并弃去水层,将乙酸乙酯层减压浓缩后得到提取物。使用二甲基亚砜(D i m e t h y l S u l f o x i d e,DM S O)作为助溶剂,将提取物溶解成1.2 8 m g/m L的药液,备用。1.2.4 抑菌活性的测定 采用9 6孔板法测定菌株发酵提取物对MA S A、S E、S A和S I 4种指示菌的抑菌活性1 5。活化后的指示菌接种于L B培养基,3 0、1 8 0 r/m i n振荡培养至对数生长期,调整指示菌悬液浓度为11 06 C F U/m L。9 6孔板中加入1 9 5 L指示菌悬液,再加入5 L药液,混匀,使用二倍稀释法将药液稀释。每个孔混匀密封后,于3 7 培养箱中培养2 4 h,使用酶标仪于6 0 0 n m处测定O D值。青霉素G和氯霉素为两种阳性对照,初浓度都为1 m g/m L,同时设置阴性对照(DM S O)和空白对照(L B培养基)。每个样品设置3个平行样,样品抑菌活性结果用最小抑菌浓度表示,最小抑菌浓度为抑制9 0%受试菌所需要的最低药 物 浓 度(9 0%M i n i m a l I n h i b i t o r y C o n c e n t r a-t i o n,M I C9 0)。抑制率(%)=(阴性对照吸光值-样品吸光值)/阴性对照吸光值1 0 0%。2 结果与分析2.1 可培养真菌的分离结果 对采集的饱和盐度样品进行分离纯化,得到1 6株可培养极端嗜盐真菌,1至6号采样地点菌株数量分别为2、6、0、4、3、1株。其中,在盐田排水池沉积物中分离得到的真菌数量最多。2.2 可培养真菌的多样性 从竹林盐场中分离得到1 6株真菌,根据菌落形态特征差异进行分类后,对其中1 2株具有代表性的真菌进行D NA提取和P C R扩增,将菌株的I T S序084李海艳,陆春菊,张耿思,等.北海竹林盐场极端嗜盐真菌的多样性及其抑菌活性研究列经B A L S T比对,找到与其相似度达9 7%以上的匹配序列。比对检索结果得到1 2种极端嗜盐真菌,分属于6科6属,其中丛梗孢科(M o n i l i a c e a e)枝孢菌属(C l a d o s p o r i u m)3种,黑粉菌科(U s t i l a g i n a c e a e)黑孢霉属(N i g r o s p o r a)3种,瘤座孢科(T u b e r c u l a r i-a c e a e)镰刀菌属(F u s a r i u m)3种,格孢腔菌科(P l e o s-p o r a c e a e)链格孢属(A l t e r n a r i a)1种,暗色孢科(D e-m a t i a c e a e)弯 孢 属(C u r v u l a r i a)1种,隔 孢 假 壳 科(D i d y m o s p h a e r i a c e a e)P a r a p h a e o s p h a e r i a属1种(表2,图1)。表2 基于I T S序列分析鉴定的北海竹林盐场真菌T a b l e 2 F u n g u s i d e n t i f i c a t i o n o f B e i h a i Z h u l i n S a l t F i e l d b a s e d o n I T S s e q u e n c e a n a l y s i s序号S e r i a l n u m b e r菌株编号S t r a i n n u m b e r最相近菌株(B L A S T)C l o s e s t s t r a i n(B L A S T)相似度/%S i m i l a r i t y/%G e n B a n k登录号G e n B a n k a c c e s s i n g n u m b e r1G X I MD 0 0 5 2 7F u s a r i u m i n c a r n a t u m9 9.4 4ON 2 8 7 0 1 62G X I MD 0 0 5 2 8F u s a r i u m s p.L D 1 21 0 0.0 0ON 2 8 7 0 1 73G X I MD 0 0 5 2 9P a r a p h a e o s p h a e r i a s p.Q T Y C 5 01 0 0.0 0ON 2 8 7 0 1 84G X I MD 0 0 5 3 1N i g r o s p o r a o r y z a e9 9.8 0ON 2 8 7 0 1 95G X I MD 0 0 5 3 2A l t e r n a r i a a l t e r n a t a9 9.8 1ON 2 8 7 0 2 06G X I MD 0 0 5 3 3C l a d o s p o r i u m c l a d o s p o r i o i d e s1 0 0.0 0ON 2 8 7 0 2 17G X I MD 0 0 5 3 4C l a d o s p o r i u m d o m i n i c a n u m1 0 0.0 0ON 2 8 7 0 2 28G X I MD 0 0 5 3 5C l a d o s p o r i u m o x y s p o r u m9 9.8 0ON 2 8 7 0 2 39G X I MD 0 0 5 3 6N.s p h a e r i c a9 9.2 2ON 2 8 7 0 2 41 0G X I MD 0 0 5 3 8C u r v u l a r i a h a w a i i e n s i s9 9.2 2ON 2 8 7 0 2 51 1G X I MD 0 0 5 4 0N i g r o s p o r a s p.J S 39 9.6 1ON 2 8 7 0 2 61 2G X I MD 0 0 5 4 1F.c h l a m y d o s p o r u m9 9.4 4ON 2 8 7 0 2 7图1 基于N J法构建的系统发育树F i g.1 P h y l o g e n e t i c t r e e b a s e d o n t h e N J m e t h o d184广西科学,2 0 2 3年,3 0卷,第3期 G u a n g x i S c i e n c e s,2 0 2 3,V o l.3 0 N o.32.3 抑菌活性结果 真菌发酵提取物抗MA S A、S E、S A和S I活性结果如表3所示,其中F.i n c a r n a t u m G X I MD 0 0 5 2 7的发酵提取物对4种指示菌都具有极强的抑菌活性(M I C9 03.1 2 5 g/m L),其活性作用与阳性对照氯霉素相当;真菌F.c h l a m y d o s p o r u m G X I MD 0 0 5 4 1发酵提取物对4种指示菌的抑菌活性较好(M I C9 02 5 g/m L)。表3 真菌发酵产物的乙酸乙酯提取物的抑菌活性T a b l e 3 A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f e t h y l a c e t a t e e x t r a c t s o f f u n g a l f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s U n i t:g/m L 菌株编号N u m b e r o f s t r a i nM I C9 0耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MR S A表皮葡萄球菌S E无乳链球菌S A海豚链球菌S IG X I MD 0 0 5 2 73.1 2 53.1 2 53.1 2 52 52 52 5G X I MD 0 0 5 3 32 52 52 52 5G X I MD 0 0 5 3 81 2.52 52 52 5G X I MD 0 0 5 4 16.2 56.2 56.2 56.2 5C h l o r a m p h e n i c o l3.1 2 53.1 2 53.1 2 53.1 2 5P e n i c i l l i n0.7 8 1 2 52 5N o t e:c h l o r a m p h e n i c o l a n d p e n i c i l l i n a r e p o s i t i v e c o n t r o l s.3 讨论 为了研究北海竹林盐场极端嗜盐真菌的物种多样性,本课题组于2 0 2 0年1 1月在广西北海竹林盐场饱和盐度采样地采集样品,分离得到可培养极端嗜盐真菌1 6株,鉴定为6科6属1 2种。陈显强等1 4从2 0 1 9年5月采集的北海竹林盐场海盐田样品中分离得到2 6株嗜盐真菌,鉴定为3科4属1 1种,其中青霉菌属和曲霉属为优势种属,占比分别达到5 5%和2 7%。本研究所得嗜盐真菌物种与陈显强等1 4的报道相比,两者均分离得到链格孢属(A l t e r n a r i a)菌株。但不同的是,本研究分离得到的极端嗜盐真菌物种更丰富,并且优势种属不同,为枝孢菌属(3种)、黑孢霉属(3种)、镰刀菌属(3种)。上述结果表明,不同季节的北海竹林盐场极端嗜盐真菌物种多样性不同。在培养基不变的条件下,增加采样季节,可以更系统地研究北海海盐田极端嗜盐真菌的物种多样性。本研究发现两株抗菌活性显著的镰刀菌属真菌F.i n c a r n a t u m G X I MD 0 0 5 2 7和F.c h l a m y d o s p o-r u m G X I MD 0 0 5 4 1。镰刀菌属真菌广泛分布于土壤和有机体内,研究者从不同地域、样品中分离、鉴定出大量的镰刀菌属真菌1 6。该属真菌常常产生有毒物质,如镰刀属真菌毒素会污染食物或牲畜饲料,引发人类或动物的疾病1 7。镰刀菌属真菌除了产生有毒物质外,还拥有较为丰富的次生代谢产物,如生物碱、肽类、酰胺类、萜类、醌类、吡喃酮等,这些代谢产物具有抗肿瘤、抗菌等活性,因此该属真菌具有探索天然活性代谢产物的价值1 8。嗜盐真菌为了适应极端环境,进化出了特殊的代谢途径。长期生存在高盐环境下,嗜盐真菌有着与普通环境中真菌不一 样的生理特 性:高 盐 环 境 中 的N a+对嗜盐真菌细胞膜的结构稳定、细胞壁的结构完整和功能起着重要的作用。此外,嗜盐真菌细胞存在质膜、色素、H+泵、酶,使得嗜盐真菌具有在高盐极端环境下生存的能力1。特殊的生理机制造就了嗜盐真菌次生代谢产物丰富、结构新颖、活性优良的特点。本研 究 中 镰 刀 菌 属 嗜 盐 真 菌F.i n c a r n a t u m G X I MD 0 0 5 2 7、F.c h l a m y d o s p o r u m G X I MD 0 0 5 4 1的乙酸乙酯粗提物具有极好的抑菌活性,目前的研究仅仅局限于粗提物的活性测定,今后将以抑菌活性为导向,探讨两株镰刀菌属嗜盐真菌的具体活性成分。4 结论 本研究分离得到可培养极端嗜盐真菌1 6株,鉴定为6科6属1 2种。枝孢菌属、黑孢霉属、镰刀菌属、弯孢属、P a r a p h a e o s p h a e r i a属为首次从北海竹284李海艳,陆春菊,张耿思,等.北海竹林盐场极端嗜盐真菌的多样性及其抑菌活性研究林盐场中分离得到,丰富了北海竹林盐场嗜盐真菌的物种多样性。本研究考察了北海竹林盐场嗜盐真菌的抑菌活性,其中镰刀菌属真菌F.i n c a r n a t u m G X-I MD 0 0 5 2 7、F.c h l a m y d o s p o r u m G X I MD 0 0 5 4 1的发酵产物对4株测试细菌均表现出显著的抑菌活性,后续可进一步扩大发酵研究,探究其活性成分。本研究丰富了嗜盐真菌的物种多样性,为北部湾嗜盐真菌资源的进一步开发利用提供了菌种支持。参考文献1 B U CHA L O A S,N E VO E,WA S S E R S P,e t a l.F u n g a l l i f e i n t h e e x t r e m e l y h y p e r s a l i n e w a t e r o f t h e D e a d S e a:f i r s t r e c o r d s J.P r o c e e d i n g s:B i o l o g i c a l S c i e n c e s,1 9 9 8,2 6 5(1 4 0 4):1 4 6 1 1 4 6 5.2 GUN D E C I ME RMAN N,Z A L A R P,D E HOOG S,e t a l.H y p e r s a l i n e w a t e r s i n s a l t e r n s n a t u r a l e c o l o g i c a l n i c h e s f o r h a l o p h i l i c b l a c k y e a s t s J.F e m s M i c r o b i o l o-g y E c o l o g y,2 0 0 0,3 2(3):2 3 5 2 4 0.3 MA Y,GA L I N S K I E A,G R AN T W D,e t a l.H a l o p h i l e s 2 0 1 0:l i f e i n s a l i n e e n v i r o n m e n t s J.A p p l i e d a n d E n v i-r o n m e n t a l M i c r o b i o l o g y,2 0 1 0,7 6(2 1):6 9 7 1 6 9 8 1.4 陈星宇,马信,孙长龙,等.嗜盐微生物的研究进展J.盐科学与化工,2 0 1 9,4 8(2):1 4.5 曲佳,刘开辉,丁小维,等.南海局部海洋沉积物中真菌多样性及产酶活性J.微生物学报,2 0 1 4,5 4(5):5 5 2 5 6 2.6 李治滢,李绍兰,杨丽源,等.云南三个盐矿盐卤沉淀池耐盐真菌的活性研究J.天然产物研究与开发,2 0 1 3,2 5(1 1):1 4 8 5 1 4 8 8,1 5 3 2.7 王芳.嗜盐耐盐真菌的分类及系统分类学研究D.泰安:山东农业大学,2 0 1 3.8 代东梅.嗜盐耐盐真菌的分类及分子系统学研究D.泰安:山东农业大学,2 0 1 3.9 林婷婷,李铭刚,丁章贵,等.昆明盐矿真菌次生代谢产物的分离 与 鉴 定 J.云 南 大 学 学 报(自 然 科 学 版),2 0 1 7,3 9(6):1 0 6 5 1 0 7 2.1 0 Z HANG S Y,L I Z L,B A I J,e t a l.A n e w p e r y l e n e q u i-n o n e f r o m a h a l o t o l e r a n t f u n g u s,A l t e r n a r i a s p.M 6 J.C h i n e s e J o u r n a l o f N a t u r a l M e d i c i n e s,2 0 1 2,1 0(1):6 8 7 1.1 1 P E NG X P,WAN G Y,L I U P P,e t a l.A r o m a t i c c o m-p o u n d s f r o m t h e h a l o t o l e r a n t f u n g a l s t r a i n o f W a l l-e m i a s e b i P X P 8 9 i n a h y p e r s a l i n e m e d i u m J.A r-c h i v e s o f P h a r m a c a l R e s e a r c h,2 0 1 1,3 4(6):9 0 7 9 1 2.1 2 曲鹏,刘培培,付鹏,等.黄河三角洲耐盐真菌P e n i c i l-l i u m c h r y s o g e n u m HK 1 4 0 1的次生代谢产物J.微生物学报,2 0 1 2,5 2(9):1 1 0 3 1 1 1 2.1 3 刘培培,王文良,顾谦群,等.耐盐真菌A s p e r g i l l u s v a r i e c o l o r B 1 7产生的烃基苯甲醛衍生物及其细胞毒活性J.中国海洋大学学报,2 0 0 8,3 8(4):5 8 5 5 8 9.1 4 陈显强,邢楠楠,黄亮华,等.嗜盐真菌多样性及其抗肿瘤活性研究J.广西科学,2 0 2 0,2 7(5):5 2 6 5 3 1.1 5 陆春菊,陆玫霖,刘昕明,等.广西涠洲岛柳珊瑚共附生真菌多样性及其抑菌活性J.热带海洋学报,2 0 2 1,4 0(5):4 5 5 2.1 6 王世伟,王卿惠,李小鹏,等.镰刀菌分子鉴定与重要应用的研究进展J.微生物学通报,2 0 1 8,4 5(4):9 0 7 9 1 9.1 7 张向民.镰刀菌属分类学研究历史与现状J.菌物研究,2 0 0 5,3(2):5 9 6 2.1 8 L I M Z,YU R L,B A I X L,e t a l.F u s a r i u m:a t r e a s u r e t r o v e o f b i o a c t i v e s e c o n d a r y m e t a b o l i t e s J.N a t u r a l P r o d u c t R e p o r t s,2 0 2 0,3 7(1 2):1 5 6 8 1 5 8 8.D i v e r s i t y a n d A n t i b a c t e r i a l A c t i v i t y o f E x t r e m e l y H a l o p h i l i c F u n g i f r o m B e i h a i Z h u l i n S a l t F i e l dL I H a i y a n,L U C h u n j u,Z HAN G G e n g s i,Z HOU D o n g m e i,S U Z h i w e i,GAO C h e n g h a i,XU X i n y a*,L I U Y o n g h o n g*(I n s t i t u t e o f M a r i n e D r u g s,G u a n g