CircITGB6调节miR-542-3p_PCNA轴对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响及其机制.pdf

细胞的增殖是生物最主要的生命特征,而细胞的增殖是通过分裂来完成,通过细胞分裂而形成单细胞个体10。细胞凋亡,又叫程序性细胞死亡。在器官组织的生长发育、新陈代谢、免疫和异常细胞消除过程发挥着重要的作用11。miRNA 与细胞增殖和凋亡关系密切,例如过表达 miRNA-30b 可靶向 ITGB3 抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭,并促使其凋亡12。过表达miR-558 可靶向 CD155 促进乳腺癌细胞的凋亡13。在本研究中 miR-101 在 MCF-7 细胞中的表达明显低于 HBL-100 细胞,且细胞增殖实验表明过表达 miR-101 随着时间的推移可显著抑制 MCF-7 细胞的增殖,过表达 miR-101 可显著增加 MCF-7 细胞 BAX/BCL-2 蛋白和基因的表达,细胞凋亡率增加。上述结果表明 miR-101 过表达可显著抑制 MCF-7 细胞的生长并诱导细胞凋亡。综上所述,在乳腺癌 MCF-7 细胞中,过表达 miR-101 可显著抑制 MCF-7 细胞增殖,抑制细胞自噬,促进其凋亡。但有关 miRNA-101 在乳腺癌临床治疗的价值和抗肿瘤机制仍需更深入研究。【参考文献】1 Guo F,Kuo YF,Shih YCT,Giordano SH,Berenson AB.Trends in breast cancer mortality by stage at diagnosis a-mong young women in the United StatesJ.Cancer,2018,124(17):3500-3509.2 Zheng WB,Zou Y,He JJ,et al.Global profiling of lncRNAs-miRNAs-mRNAs reveals differential expression of coding genes and non-coding RNAs in the lung of beagle dogs at different stages of Toxocara canis infectionJ.Int Parasitol,2021,51(1):49-61.3 Hussen BM,Salihi A,Abdullah ST,et al.Signaling pathways modulated by miRNAs in breast cancer angiogenesis and new therapeuticsJ.Pathol Res Pract,2022,230:153764.4 Iorio MV,Ferracin M,Liu CG,et al.MicroRNA gene expres-sion deregulation in human breast cancerJ.Cancer Res,2005,65(16):7065-7070.5Coughlin SS.Epidemiology of breast cancer in womenJ.Adv Exp Med Biol,2019,1152:9-29.6 Wu K,Jiang Y,Zhou W,et al.Long Noncoding RNA RC3H2 facilitates cell proliferation and invasion by targeting microR-NA-101-3p/EZH2 axis in OSCCJ.Mol Ther Nucleic Acids,2020,20:97-110.7 Wang Z,He R,Xia H,Wei Y,Wu S.MicroRNA-101 has a suppressive role in osteosarcoma cells through the targeting of c-FOSJ.Retraction of Exp Ther Med,2016,11(4):1293-1299.8 Xue P,Huang S,Han X,et al.Exosomal miR-101-3p and miR-423-5p inhibit medulloblastoma tumorigenesis through targeting FOXP4 and EZH2J.Cell Death Differ,2022,29(1):82-95.9 Frankel LB,Wen J,Lees M,et al.microRNA-101 is a potent inhibitor of autophagyJ.EMBO,2011,30(22):4628-4641.10 Jia H,Wu D,Zhang Z,Li S.TCF3-activated FAM201A en-hances cell proliferation and invasion via miR-186-5p/TNKS1BP1 axis in triple-negative breast cancerJ.Pub-lished correction appears in Bioorg Chem,2021,110:104726.11 Wu Q,Li Q,Zhu W,Zhang X,Li H.Epsin 3 potentiates the NF-B signaling pathway to regulate apoptosis in breast cancerJ.Mol Med Rep,2022,25(1):15.12钟科,邓天芝,黄大翠.miRNA-30b 调控 ITGB3 表达促进乳腺癌细胞凋亡J.中国肿瘤临床,2021,48(15):761-766.13 李冰,邹晓明,董长城,等.miR-558 靶向 CD155 调控乳腺癌细胞 MCF7 的凋亡研究J.中国现代普通外科进展,2021,24(7):510-513.【文章编号】1006-6233(2023)08-1245-08CircITGB6 调节 miR-542-3p/PCNA 轴对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响及其机制廖圣银,蔡丽芳,游梦星,肖琳琳,谢雪花,黄伟明,林栖,黄丽斌,何丽梅(福建省莆田市第一医院肿瘤内科,福建莆田 351100)【摘要】目的:探讨环状 RNA(Circ)ITGB6 调节微小 RNA(miR)-542-3p/增殖细胞核抗原(PC-NA)轴对卵巢癌(OC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及其机制。方法:qRT-PCR 检测 OC 组织及正常卵巢组织、SKOV3、SKOV3/DDP、正常卵巢上皮细胞系(IOSE-80)中 CircITGB6、miR-542-3p、PCNA mRNA 表达水平;SKOV3/DDP 设置为对照组(不作处理)、干扰(si CircITGB6)组(转染 si CircITGB6)、5421 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 【基金项目】福建省莆田市科技计划项目,(编号:2020SY006)阴性对照(si NC)组(转染 si NC)、si CircITGB6+抑制物阴性对照(inhibitor NC)组(共转染 si CircITGB6、inhibitor NC)、si CircITGB6+miR-542-3p 抑制物(miR-542-3p inhibitor)组(共转染 si CircITGB6、miR-542-3p inhibitor)。流式细胞仪、CCK-8、qRT-PCR 分别检测各组 SKOV3/DDP 细胞中凋亡、增殖、耐药性及 CircITGB6、miR-542-3p、PCNA mRNA 表达水平;双荧光素酶验证 miR-542-3p 与 CircITGB6、PC-NA 的靶向关系;Western blot 检测 PCNA、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、细胞增殖相关核抗原(Ki-67)。结果:OC 组织中 CircITGB6(1.660.17 比 0.950.10)、PCNA mRNA(1.590.16 比 0.980.10)表达高于正常卵巢组织,miR-542-3p 表达(0.640.07 比 1.060.11)降低(均 P0.05);IOSE-80、SKOV3、SKOV3/DDP 中 CircITGB6、PCNA mRNA 表达依次增加,miR-542-3p 表达依次减少(P0.05);与对照组、si NC 组相比,si CircITGB6 组细胞增殖率及 IC50、CircITGB6(1.210.13 比 1.880.19、1.840.19)、Ki-67、PCNA 显著降低,凋亡率及 Bax、miR-542-3p 表达(0.860.09 比 0.510.06、0.550.06)显著增加(均 P0.05);与 si CircITGB6+inhibitor NC 组相比,CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组细胞增殖率及 IC50、Ki-67、PCNA 显著增加,凋亡率及 Bax、miR-542-3p 表达显著降低(均 P0.05)。结论:干扰 CircITGB6 表达可通过调节 miR-542-3p/PCNA 轴降低 SKOV3 对 DDP 的耐药性。【关键词】卵巢癌;顺铂耐药性;CircITGB6;miR-542-3p;增殖细胞核抗原【文献标识码】A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2023.08.03Effect and Mechanism of CircITGB6 on Cisplatin Resistance in Ovarian Cancer Cells by Regulating miR-542-3p/PCNA AxisLIAO Shengyin,CAI Lifang,YOU Mengxing,et al(Putian First Hospital,Fujian Putian 351100,China)【Abstract】Objective:To investigate the influences of circular RNA(Circ)ITGB6 on cisplatin(DDP)resistance of ovarian cancer(OC)cells by regulating miR-542-3p/proliferating cell nuclear antigen(PC-NA)axis and its mechanism.Methods:The expression levels of CircITGB6,miR-542-3p,PCNA mRNA in OC tissues,normal ovarian tissues,SKOV3,SKOV3/DDP and normal ovarian epithelial cell line(IOSE-80)were detected by qRT-PCR;SKOV3/DDP was set as control group(no treatment),interference(si CircIT-GB6)group(transfected with si CircITGB6),negative control(si NC)group(transfected with si NC),si CircITGB6+inhibitor negative control(inhibitor NC)group(co-transfected with si CircITGB6 and inhibitor NC),and si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor group(co-transfected with si CircITGB6 and miR-542-3p inhibitor).Apoptosis,proliferation,drug resistance,and the expression levels of CircITGB6,miR-542-3p,PCNA mRNA in SKOV3/DDP cells of each group were detected by flow cytometry,CCK-8 and qRT PCR re-spectively;double luciferase was used to verify the targeting relationship between miR-542-3p and CircIT-GB6,PCNA;the PCNA,Bcl-2 associated X protein(Bax)and cell proliferation related nuclear antigen(Ki-67)were detected by Western blot.Results:The expression of CircITGB6(1.660.17 vs 0.950.10)and PCNA mRNA(1.590.16 vs 0.980.10)in OC tissues was higher than that in normal ovarian tissues,and the expression of miR-542-3p(0.640.07 vs 1.060.11)was lower(all P0.05);the expression of CircITGB6 and PCNA mRNA in IOSE-80,SKOV3 and SKOV3/DDP increased in turn,the expression of miR-542-3p decreased in turn(P0.05);compared with the control group and the si NC group,the cell proliferation rate and IC50,CircITGB6(1.210.13 vs 1.880.19,1.840.19),Ki-67,PCNA in the si CircITGB6 group were obviously reduced,the apoptosis rate and expression of Bax and miR-542-3p(0.860.09 vs 0.510.06,0.550.06)were obviously increased(all P0.05);compared with the si CircITGB6+inhibitor NC group,the cell proliferation rate and IC50,Ki-67,PCNA in the CircITGB6+miR-542-3p in-hibitor group were obviously increased,the apoptosis rate and the expression of Bax and miR-542-3p were obviously decreased(all P0.05).Conclusion:Interfering with CircITGB6 expression can reduce the resist-ance of SKOV3 to DDP by regulating miR-542-3p/PCNA axis.【Key words】Ovarian cancer;Cisplatin resistance;CircITGB6;MiR-542-3p;PCNA 6421 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 卵巢癌(OC)是女性常见的恶性肿瘤之一,具有较高的发病率和死亡率1。目前,OC 的主要治疗方法是手术切除和以顺铂(DDP)为基础的化疗,但由于DDP 耐药的发生,OC 患者的总生存率仍较低2。因此,有必要进一步研究 OC 癌变和 DDP 耐药的分子机制,以改善 OC 患者的预后和生存率。环状 RNA(cir-cRNA)由于独特的闭环结构使其在生物体内极其稳定,许多研究证实 circRNA 与癌症恶性进展有关3,且其在癌症化疗耐药中的作用也被许多研究证实4。最新研究发现 CircITGB6 在铂类耐药 OC 患者的肿瘤组织和血清中显著升高,与预后不良相关5,但其作用机制尚需深入探索。微小 RNA(miR)-542-3p 在上皮性 OC 组织和细胞系中下调,可在 OC 中作为肿瘤抑制性 miRNA 发挥作用6,但其在 OC 中对 DDP 耐药性机制的影响鲜有报道。增殖细胞核抗原(PCNA)作为一种在细胞增殖期大量表达的核蛋白,与肿瘤发生和发展中的作用密切相关,已有研究证明 PCNA 在OC 组织中的表达水平明显高于良性卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织,可能与 OC 发生、发展、侵袭和转移相关7。生物信息学显示 miR-542-3p 分别与 CircIT-GB6、PCNA 存在结合位点,但 CircITGB6 能否通过调节 miR-542-3p/PCNA 轴影响 OC 细胞顺铂(DDP)耐药性尚未报道,故本研究旨在探讨 CircITGB6 通过调节 miR-542-3p/PCNA 轴对 OC 细胞 DDP 耐药性的研究。1 材料与方法1.1 组织及细胞来源:选取 2019 年至 2022 年在莆田市第一医院就诊的 66 例 OC 患者,所有患者均接受手术治疗,未接受化疗或放疗,于手术中收集肿瘤标本并储存在液氮中。另选取 66 例因子宫肌瘤行全子宫双附件切除患者的正常卵巢组织为对照组。参与本研究的所有病人或其近亲属均签署知情同意书,且研究经莆田市第一医院伦理委员会审核批准。人 OC 细胞系SKOV3 和 DDP 抗 性 菌 株(SKOV3/DDP)(美 国ATCC);正常卵巢上皮细胞系(IOSE-80)(国家实验细胞资源保藏中心)。SKOV3 细胞在含有 10%FBS、1%青霉素/链霉素的 DMEM 培养基中培养。SKOV3/DDP 细胞培养基中添加 0.5 g/mL 的 DDP。IOSE-80 细胞在完全培养基中培养,细胞融合至 80%时,胰蛋白酶消化进行传代培养。1.2 主 要 试 剂 与 仪 器:CircITGB6 抑 制 物(si CircITGB6)及阴性对照(si NC)、miR-542-3p 模拟物(miR-542-3p mimics)、抑制物(miR-542-3p inhibi-tor)及相应阴性对照(mimics NC、inhibitor NC)、荧光素酶质粒报告(上海吉玛制药有限公司);TRIzol 试剂(美国 Invitrogen 公司);细胞凋亡试剂盒、CCK-8 试剂盒、BCA 蛋白测定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司);PrimeScript RT 试剂盒(日本 Takara 公司);Bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、细胞增殖相关核抗原(Ki-67)、PCNA、-actin 一抗(英国 Abcam 公司)。美国 Bio-Rad 提供 Real-time PCR 仪;BioTek Instruments 提供ELx 800 酶标仪。1.3 方 法1.3.1qRT-PCR 检测组织及细胞中 CircITGB6、miR-542-3p、PCNA mRNA 表达水平:TRIzol 试剂提取 OC组织和正常卵巢组织、SKOV3、SKOV3/DDP、IOSE-80细胞以及各组 SKOV3/DDP 细胞中的 RNA,逆转录获得 cDNA,在 Agilent Mx3000P PCR 系统进行 qRT-PCR分析。引物序列:CircITGB6 上游 5-TGTGGTGAC-CCCTGTAACTC-3,下游 5-TGCACACACATTCACCA-CAG-3;miR-542-3p上 游5-GCGCGATATCGCGACGAGCGACC-3,下游 5-TTA-AGCGAGCTATCGCGCGCGAGCG-3;PCNA 上游 5-TGAAGCACCAAACCAGGAG-3,下 游 5 -GAAG-GCATCTTTACTACACAGC-3;内 参 U6 上 游 5 -CTCGCTTCGGCAGCACATATACT-3,下游 5-ACGCT-TCACGAATTTGCGTGTC-3;内参 -actin 上游 5-GCAGAAGTGCGAAGAGGAGG-3,下游 5-GCTTGAT-GGAGTTGTCGGTGTA-3。PCR 反 应 体 系:10L SYBR Mix、1L cDNA 模板、0.5L 上下游引物。反应条件:95 5min、95 1min、60 50s、72 10min,共40 个循环。以 U6、-actin 为内参,采用 2-CT法分析 CircITGB6、miR-542-3p、PCNA 表达。1.3.2 细胞分组及处理:取 SKOV3/DDP 细胞分为对照组(不经任何处理)、si NC 组(转染 si NC)、si Cir-cITGB6 组(转染 si CircITGB6)、si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组(共转染 si CircITGB6、miR-542-3p in-hibitor)、si CircITGB6+inhibitor NC 组(共转染 si Cir-cITGB6、inhibitor NC),转 染 采 用 Lipofectamine TM 2000 试剂。转染 48h 后,各组均加入 2 g/mL 的 DDP处理 24h,随后进行各指标分析。1.3.3 CCK-8 法检测细胞增殖及耐药性:将 SKOV3/DDP 接种到 96 孔板(1103/孔),按照 1.3.2 中进行分组处理,向每孔中加入 10L CCK-8 溶液,在 37孵育 2h 后,使用酶标仪在 450nm 处测量每个孔的吸光度,计算细胞增殖率。耐药性检测:以 0、2、4、8、16、7421 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 32、64g/L DDP 溶液(100L/孔)分别加入到各组细胞10,培养 48h 后,采用 CCK-8 法检测细胞增殖活性,计算细胞增殖抑制率,分析各组细胞药物半数抑制浓度(IC50)值。1.3.4 流式细胞术检测细胞凋亡:SKOV3/DDP 细胞以 1106密度接种到 24 孔板中,并用磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤两次。然后将细胞悬浮在 500L 结合缓冲液中,室温下加 5L 膜联蛋白 V-FITC 和 10L PI在黑暗中染色 5min。流式细胞仪分析细胞凋亡变化。1.3.5 双荧光素酶实验验证 miR-542-3p 与 CircIT-GB6、PCNA 的靶向关系:分别将 CircITGB6、PCNA 与miR-542-3p mimics 基因结合片段插入到荧光素酶pGL4 载体中,构建 CircITGB6、PCNA 野生型质粒(Cir-cITGB6-WT、PCNA-WT);利用基因突变技术构建 Cir-cITGB6、PCNA 突变型质粒(CircITGB6-MT、PCNA-MT),之后将 CircITGB6-WT、PCNA-WT 及 CircITGB6-MT、PCNA-MT 分别与 miR-542-3p mimics、mimics NC 共转染到 SKOV3/DDP 细胞,24h 后测定细胞的荧光素酶活性,实验重复 3 次。1.3.6 Western blot 检测相关蛋白表达水平:使用 RI-PA 裂解液提取各组细胞总蛋白质并测定其浓度。蛋白质通过 SDS-PAGE 分离并转移到 PVDF 膜上,将膜与 Bax、Ki-67、PCNA、-actin 一抗(1 1000)共同孵育,洗涤后,与二抗(1 2000)共同孵育,显影,分析各蛋白含量。1.4 统计学分析:SPSS26.0 软件分析结果,计量资料以均数标准差(xs)表示,多组间比较采用单因素方差分析,进一步行 SNK-q 检验;两组间比较采用 t 检验。P0.05 为差异有统计学意义。2 结 果2.1 OC 组织及细胞中 CircITGB6、miR-542-3p、PC-NA mRNA 表达水平比较:与正常卵巢组织相比,OC组织 CircITGB6、PCNA mRNA 表达显著增加(P 0.05),miR-542-3p 表达显著降低(P0.05),见表 1。与 IOSE-80 相比,SKOV3、SKOV3/DDP 细胞 CircIT-GB6、PCNA mRNA 表达显著增加,但 miR-542-3p 表达显著降低(P0.05);与 SKOV3 相比,SKOV3/DDP细胞 CircITGB6、PCNA mRNA 表达显著增加,但 miR-542-3p 表达显著降低(P0.05),见表 2。表 1 OC 组织中 CircITGB6 miR-542-3p PCNA mRNA 表达水平(xs,n=66)组别CircITGB6miR-542-3pPCNA mRNA正常卵巢组织0.950.101.060.110.980.10OC 组织1.660.17a0.640.07a1.590.16at29.24526.17026.265P0.0010.0010.001 注:与正常卵巢组织比较,aP0.05表 2 不同 OC 细胞中 CircITGB6、miR-542-3p PCNA mRNA 表达水平(xs,n=6)组别CircITGB6miR-542-3pPCNA mRNAIOSE-80 细胞0.920.101.040.110.960.10SKOV3 细胞1.430.15a0.740.08a1.510.16aSKOV3/DDP 细胞1.880.19ab0.510.06ab1.850.19abF60.53457.52950.636P0.0010.0010.001 注:与 IOSE-80 细胞比较,aP0.05;与 SKOV3 细胞相比,bP0.052.2 各组 SKOV3/DDP 细胞增殖率变化:与对照组、si NC 组比较,si CircITGB6 组 SKOV3/DDP 细胞增殖率显著降低(P0.05);与 si CircITGB6+inhibitor NC 组比较,si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组 SKOV3/8421 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 DDP 细胞增殖率显著增加(P0.05),见表 3。表 3 各组 SKOV3/DDP 细胞增殖率变化(xs,n=6)组别细胞增殖率(%)对照组1000.00si NC 组90.079.01si CircITGB6 组44.624.47absi CircITGB6+inhibitor NC 组42.684.27si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组75.117.52cF115.870P0.001 注:与对照组比较,aP0.05;与 si NC 组比较,bP0.05;与si CircITGB6+inhibitor NC 组比较,cP0.052.3各组 SKOV3/DDP 细胞对 DDP 耐药性的影响:与对照组、si NC 组比较,si CircITGB6 组 IC50 值显著降低(P0.05);与 si CircITGB6+inhibitor NC 组比较,si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组 IC50 值显著增加(P0.05),见表 4。表 4 各组 SKOV3/DDP 细胞对 DDP耐药性的比较(xs,n=6)组别IC50(g/L)对照组41.414.15si NC 组42.164.22si CircITGB6 组15.131.55absi CircITGB6+inhibitor NC 组17.241.73si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组28.882.89cF101.153P0.001 注:与对照组比较,aP0.05;与 si NC 组比较,bP0.05;与si CircITGB6+inhibitor NC 组比较,cP0.052.4 各组 SKOV3/DDP 细胞凋亡率变化:与对照组、si NC 组比较,si CircITGB6 组凋亡率显著增加(P 0.05);与 si CircITGB6+inhibitor NC 组比较,si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组凋亡率显著降低(P0.05),见图 1、表 5。表 5 各组 SKOV3/DDP 细胞凋亡率的比较(xs,n=6)组别凋亡率(%)对照组6.550.67si NC 组6.840.69si CircITGB6 组37.133.72absi CircITGB6+inhibitor NC 组35.443.55si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组21.112.12cF206.484P0.001 注:与对照组比较,aP0.05;与 si NC 组比较,bP0.05;与si CircITGB6+inhibitor NC 组比较,cP0.05图 1 各组 SKOV3/DDP 细胞凋亡变化2.5 各组 SKOV3/DDP 细胞中 CircITGB6、miR-542-3p、PCNA mRNA 的表达水平比较:与对照组、si NC 组比较,si CircITGB6 组 CircITGB6、PCNA mRNA 表达水平显著降低(P0.05),miR-542-3p 表达水平显著增加(P0.05);与 si CircITGB6+inhibitor NC 组比较,si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组 miR-542-3p 表达水平显著降低(P0.05),PCNA mRNA 表达水平显著增加(P0.05),见表 6。2.6验证 miR-542-3p 与 CircITGB6 的靶向关系:Starbase 数据库显示 miR-542-3p 与 CircITGB6 存在结合位点,如图 2。荧光素酶活性比较:CircITGB6 WT+miR-542-3p mimics 组较 CircITGB6 WT+mimics NC 组降低(P0.05),见表 7。9421 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 表 6 各组 SKOV3/DDP 细胞 CircITGB6 miR-542-3p PCNA mRNA 的表达比较(xs,n=6)组别CircITGB6miR-542-3pPCNA mRNA对照组1.880.190.510.061.850.19si NC 组1.840.190.550.071.840.21si CircITGB6 组1.210.13ab0.860.09ab1.140.15absi CircITGB6+inhibitor NC 组1.230.150.810.101.160.17si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组1.310.140.520.06c1.530.16cF25.89128.85823.097P0.0010.0010.001 注:与对照组比较,aP0.05;与 si NC 组比较,bP0.05;与 si CircITGB6+inhibitor NC 组比较,cP0.05图 2 数据库预测 miR-542-3p 与 CircITGB6 的结合位点表 7 miR-542-3p 与 CircITGB6 的靶向关系验证(xs,n=6)组别荧光素酶相对活性CircITGB6 MUT+mimics NC 组1.010.11CircITGB6 MUT+miR-542-3p mimics 组1.080.11CircITGB6 WT+mimics NC 组1.010.11CircITGB6 WT+miR-542-3p mimics 组0.480.05aF48.021P0.001 注:与 CircITGB6 WT+mimics NC 组比较,aP0.052.7 验证 miR-542-3p 与 PCNA 的靶向关系:Starbase数据库显示 miR-542-3p 与 PCNA 存在结合位点,如图 3。荧光素酶活性比较:PCNA WT+miR-542-3p mimics 组较 PCNA WT+mimics NC 组降低(P0.05),见表 8。图 3 数据库预测 miR-542-3p 与 PCNA 的结合位点表 8 miR-542-3p 与 PCNA 的靶向关系验证(xs,n=6)组别荧光素酶相对活性PCNA MUT+mimics NC 组1.040.11PCNA MUT+miR-542-3p mimics 组1.080.11PCNA WT+mimics NC 组1.090.11PCNA WT+miR-542-3p mimics 组0.410.05aF67.650P0.001 注:与 PCNA WT+mimics NC 组比较,aP0.052.8各组 SKOV3/DDP 细胞中 Ki-67、PCNA、Bax 蛋白表达水平比较:与对照组、si NC 组比较,si CircIT-GB6 组 Ki-67、PCNA 蛋白水平显著降低(P0.05),Bax 蛋白水平显著增加(P0.05);与 si CircITGB6+in-hibitor NC 组比较,si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor0521 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 组 Ki-67、PCNA 蛋白水平显著增加(P0.05),Bax 蛋白水平显著降低(P0.05),见图 4,表 9。表 9 各组 SKOV3/DDP 细胞中 Bax Ki-67 PCNA 表达的比较(xs,n=6)组别Ki-67/-actinPCNA/-actinBax/-actin对照组0.880.091.120.120.340.05si NC 组0.820.101.150.100.380.04si CircITGB6 组0.420.05ab0.550.06ab0.770.08absi CircITGB6+inhibitor NC 组0.460.060.570.070.720.09si CircITGB6+miR-542-3p inhibitor 组0.710.08c0.880.09c0.440.05cF42.66760.75457.014P0.0010.0010.001 注:与对照组比较,aP0.05;与 si NC 组比较,bP0.05;与 si CircITGB6+inhibitor NC 组比较,cP0.05图 4 各组 SKOV3/DDP 细胞中 Bax、Ki-67、PCNA 蛋白表达(Western blot 图)注:A 为对照组;B 为 si NC 组;C 为 si CircITGB6 组;D 为 si CircITGB6+inhibitor NC 组;E 为 si CircITGB6+miR-542-3p in-hibitor 组。3 讨 论据统计,超过 70%的 OC 患者最终出现复发和转移,其高死亡率和复发率的主要原因是缺乏高敏感性、特异性的早期诊断技术以及长期有效的治疗方案8。因此寻找有效的治疗靶点已成为近年来 OC 治疗领域的一个焦点。DDP 被广泛用作 OC 的有效一线治疗选择,DDP耐药显著影响卵巢癌患者的生存率。研究表明,circR-NAs 在 OC 肿瘤组织的化疗耐药和化疗敏感中差异表达,参与 OC 化疗耐