医学实验室生物安全.ppt

本标准规定了微生物和生物医学实验室生物安全防护的基本原则、实验室的分级、各级实验室的基本要求。本标准为最低要求。本标准适用于疾病预防控制机构、医疗保健、科研机构。总则定 义实验室生物安全防护：实验室工作人员所处理的实验对象含有致病的微生物及其毒素时，通过在实验室设计建造、使用个体防护装置、严格遵从标准化的工作及操作程序和规程等方面采取综合措施，确保实验室工作人员不受实验对象侵染，确保周围环境不受其污染。当建设使用传染性或有潜在传染性材料的实验室前，必须进行微生物危害评估。应依据传染性微生物致病能力的程度、传播途径、稳定性、感染剂量、操作时的浓度和规模、实验对象的来源、是否有动物实验数据、是否有有效的预防和治疗方法等诸因素进行微生物危害评估。通过微生物危害评估确定对象微生物应在哪一级的生物安全防护实验室中进行操作根据危害评估结果，制定相应的操作规程、实验室管理制度和紧急事故处理办法，必须形成书面文件并严格遵守执行必须形成书面文件并严格遵守执行。微生物危害评估第一类，不引起健康成年人疾病第二类，可通过破损皮肤、消化道及粘膜暴露等方式引起人类疾病第三类，本土或外来的微生物，通过吸入途径暴露时可以造成严重或潜在致死性疾病第四类，可以引起严重且威胁生命的人类疾病，可通过气溶胶传播，或相关的传播危险性不明的微生物生物安全防护实验室根据不同的微生物和防护要求分为四个生物安全防护级别。美国CDC/NIH对微生物指导性分类Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4th Edition,May 1999 实验室生物安全防护的基本原则实验室生物安全防护的内容包括安全设备、个体防护装置和措施（一级屏障），实验室的特殊设计和建设要求（二级屏障），严格的管理制度和标准化的操作程序及规程。应将每一特定实验室从立项、建设到使用维护的全过程中有关生物安全防护综合措施的内容编入各实验室的生物安全手册中。必须设有专职的生物安全负责人。生物安全防护实验室根据不同的微生物和防护要求分为四个生物安全防护级别。生物安全柜（biosafety cabinet）处理危险性微生物时所用的箱型空气净化安全装置。I I类生物安全柜类生物安全柜（class I biosafety cabinet）至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出。工作状态时保证工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染。生物安全柜生物安全柜类生物安全柜类生物安全柜（class biosafety cabinet）至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出。工作状态下遵守操作规程时既保证工作人员不受侵害，又保证实验对象不受污染。三、CLASS II 二级生物安全柜 CLASS II 级生物安全柜根据结构以及气流 分配不同主要是外排气流不同分为：A型:（30%排在室内）B型:B1（70%接管道外排）B2（100%接管道外排）B3（30%接管道外排）CLASS II A 生物安全柜 由向下的气流和从开口处向内进入的气流混合后部分经HEPA高效过滤形成向下的气流进入工作区，部部分分（30%气气流流）经经HEPA过滤后外排在室内过滤后外排在室内；允允许许经经HEPA过过滤滤的的外外排排气气流在实验室内排放；流在实验室内排放；CLASS II B1生物安全柜 经过HEPA高效过滤的向下气流大部分由未经污染的向内进入的气流和循环气流组成 大部分被污染的向下的气流气流（70%）通过专用的管道经）通过专用的管道经HEPA过滤后接管道外排至室过滤后接管道外排至室外外；CLASS II B2生物安全柜 来自实验室内或室外的经过HEPA过滤的向下气流（即：向下的气流中没有在安全柜内循环的气流）；所有向内进入的气流和向下的气流均通过HEPA过滤后排到室外而不在柜内循环，也不能排入实验室；100%接接管道外排管道外排。所有的被污染的管道和气流通道都在负压状态下或被直接外排的负 压管道或气流管道所包围。3.3CLASS II B3生物安全柜 经过HEPA过滤后的向下气流是由共用外排风道中的向下的气流和内向气流组成；全部外排到室外的气流全部外排到室外的气流（30%）均经过）均经过HEPA高效过滤高效过滤 它与CLASS II A型气流方向相同，但与CLASS A型不同的是，它30%外外排排气气是是接接管管道道排排到到室室外外的的。类生物安全柜（class biosafety cabinet）至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。正面上部为观察窗，下部手套箱式操作口。箱内对外界保持负压可确保人体与柜内物品完全隔绝。CLASS III生物安全柜 全封闭的、气密结构的通风柜 通过与柜体联结的橡胶手套进行操作；柜内保持至少120Pa的负压(0.50wg)；供气通过HEPA抽入内；外排的气流经过双双层层HEPA过滤或经HEPA后再经燃烧处理。管理制度实验室内设置和准入在主实验室内应合理设置清洁区、半污染区和污染区非实验有关人员和物品不得进入实验室实验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员在进入实验室及其岗位之前必须经过实验室主任的批准实验室工作人员资格和培训实验室工作人员资格和培训实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。在独立工作前须在中高级实验技术人员指导下进行上岗培训，达到合格标准，方可开始工作实验室的工作人员必须被告知实验室工作的潜在危险并接受实验室安全教育，自愿从事实验室工作实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制度、规定和操作规程实验室特殊管理对可能的危险因素，制定保证安全的工作程序事前进行有效的培训和模拟训练对于意外事故要能够提供包括紧急救助或专业性保健治疗的措施，足以应付紧急情况实验室事故处理及上报实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。包含微生物举例 大肠杆菌 格鲁伯耐格里原虫 感染性犬肝炎病毒 枯草杆菌一级生物安全防护实验室实验室应设洗手池（靠近出口处）实验室围护结构内表面应易于清洁。地面应防滑、无缝隙，不得铺设地毯实验室中的家具应牢固。应有专门放置生物废弃物容器的台（架）实验台表面应不透水，耐腐蚀、耐热实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗一级生物安全防护实验室实验室设计及建造实验室设计及建造 工作过程中禁止非工作人员进入实验室。接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及存储食物一级生物安全防护实验室标准微生物操作规程标准微生物操作规程使用机械移液器吸取液体，禁止口吸制定尖锐器具的安全操作规程按照实验室安全规程操作，降低溅出和气溶胶的产生每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时消毒所有培养物、废弃物在运出实验室前须进行灭活（如高压）。需运出实验室灭活的物品必须放在专用密闭容器内。一级生物安全防护实验室标准微生物操作规程一级生物安全防护实验室 安全设施和个体防护安全设施和个体防护一般无须使用生物安全柜等专用安全设备工作人员在实验室应穿工作服，带防护眼镜工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套n实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。n包含微生物举例 麻疹病毒 沙门氏菌 乙型肝炎病毒 HIV 血清学检测 衣原体 志贺氏菌二级生物安全防护实验室设计和建造的特殊要求设计和建造的特殊要求 消毒设施（高压灭菌锅、化学消毒装置等）消毒设施（高压灭菌锅、化学消毒装置等）洗眼装置洗眼装置 可自动关闭的门锁可自动关闭的门锁 门口有发光指示装置门口有发光指示装置 换气装置（换气装置（3-4次次/小时）小时）满足一级实验室(标准微生物操作规程)各款要求，在此基础上特别注意制定出入制度实验室人口贴上生物危险标志制定实验室特定的生物安全操作规则每年一次最新培训制度二级生物安全防护实验室特殊微生物操作规程特殊微生物操作规程生物危险级 禁止禁止用手处理破碎的玻璃器具。二级生物安全防护实验室特殊微生物操作规程特殊微生物操作规程使用塑料器材代替玻璃器材。培养基、组织、体液及其它具有 潜在危险性的废弃物须放在防漏的容器中储存、运输及消毒、灭菌v用过的针头禁止禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽，禁止禁止用手直接从注射器取下。v用过的针头必须必须直接放入防穿透的容器中。v非一次性利器必须必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗，卡介苗等)必要时收集从事危险性工作人员的本底血清严格执行实验室工作人员年度采血检测 HIV 抗体和备案制度。每半年进行一次 HIV 抗体检测，并保留样品对从事艾滋病实验室工作的人员，因工作中意外事故造成HIV 职业暴露者，所在单位应负责解决抗病毒及其它相应治疗的医疗费用二级生物安全防护实验室特殊微生物操作规程特殊微生物操作规程实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案禁止将无关动物带入实验室处理以下致病微生物时应在生物安全柜(级)中进行，包括:高浓度高浓度 大容量大容量 有喷溅可能性有喷溅可能性上述材料的离心操作如使用密封的离心机转子或安全离心杯，且只在生物安全柜中开闭，可在实验室中进行。级生物安全柜必须每年进行一次年度现场检测。二级生物安全防护实验室安全设施和个体防护安全设施和个体防护安全设施和个体防护当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行时，须使用面部保护装置应有相应的应有相应的SOP二级生物安全防护实验室安全设施和个体防护n在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，不得穿着外出。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。n当手可能接触感染材料、污染的设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室，工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。样品从一个实验室转送到另外一个实验室，必须是血清或血浆，样品从一个实验室转送到另外一个实验室，必须是血清或血浆，除特殊需要外，一般不能用全血。除特殊需要外，一般不能用全血。且需置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有明显的且需置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有明显的标记。清楚地标记为感染性材料（标记。清楚地标记为感染性材料（按所在生物安全防护实验室的级别标明相同的级别）。感染性材料必须放在密闭的管子中，再放入含有足够吸水材料的生物危感染性材料必须放在密闭的管子中，再放入含有足够吸水材料的生物危险管中，以防泄漏。将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于险管中，以防泄漏。将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理，在所放试剂管周围上下均垫有软性物质，以免破碎，容器外消毒处理，在所放试剂管周围上下均垫有软性物质，以免破碎，容器外表有表有HIVHIV检测专用字样。如果路程较远或者气候炎热时，盛有样本的容检测专用字样。如果路程较远或者气候炎热时，盛有样本的容器应至于器应至于44以下转运以下转运 样本的转送和发放样本的转送和发放生物危险级n实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素。通常已有预防的疫苗。n包含微生物举例 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 鼠疫杆菌 炭疽杆菌 Q热病原体 HIV(血清学检测除外)澳大利亚立克次氏体 加拿大立克次氏体 三级生物安全防护实验室n实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。与上述情况类似的不明微生物，也必须在四级生物安全防护实验室中进行，带有充分数据后再决定此种微生物或毒素应在四级还是在较低级别的实验室中处理。n包含微生物举例 黄病毒 埃博拉病毒 中欧蜱传脑炎病毒 四级生物安全防护实验室职业暴露是指实验室、医护、预防保健人员以及有关的监管工作人员，在从事艾滋病防治工作及相关工作的过程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病患者的血液、体液污染了破损的皮肤或非胃肠道粘膜，或被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其它锐器刺破皮肤，而具有被艾滋病病毒感染的可能性的情况。实验室事故处理实验室事故处理美国CDC的研究显示：影响针头刺伤后的危险性因素包括 伤口的深度有可见的血液从伤口溢出针头刺破了静脉或动脉污染源来自于晚期艾滋病病毒感染者(病毒载量高)紧急处理措施皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤出的血液，用70%乙醇或其它消毒剂消毒伤口。皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或其它皮肤消毒剂。粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。事故登记事故发生的时间、地点及详细经过。暴露方式；受伤部位、伤口深浅、暴露程度；污染物种类（培养液、血液或其它体液）以及其中含有HIV的情况。处理方法和经过，包括专家或领导赴现场指导和处理的情况。是否采用暴露后药物预防，如果是，应详细记录用药情况，包括首次用药时间、服药方案和毒副作用。随访检测的日期、项目和结果。报告和检测发生重大事故时，在紧急处理的同时要立即向主管领导和专家报告。同时抽血检测HIV抗体，暴露一年内要定期检测。发生小型事故时可在紧急处理后立即将事故情况和处理方法报告主管领导和专家，检测同前。HIV职业暴露后的预防由于预防性治疗药物的效力和毒性以及不同暴露方式导致HIV感染的危险性不同，所以预防性治疗药物应在HIV职业暴露预防性治疗药品储备库（点）和HIV/AIDS防治方面的专家的指导下使用。根据使用药物反应情况，可改变处方。对感染可能性很大的医护、检验人员可使用预防性治疗药物，治疗方案须根据暴露情况由专家决定。对于感染危险性很小的，建议不使用药物预防。对可能有危险的人，是否用药治疗，应权衡较低的感染危险性与使用药物的效力和药物毒、副反应以及坚持用药的依从性等利弊。暴露物是否是体液、含血体液、其他污染物或其沾染器械暴露物是否是体液、含血体液、其他污染物或其沾染器械是是否否其它污染物其它污染物血液或含血液体血液或含血液体暴暴 露露 的的 类类 型型粘膜或可能有损伤的皮肤粘膜或可能有损伤的皮肤不需不需PEPPEP只沾染完整的只沾染完整的皮肤皮肤刺、割伤皮肤刺、割伤皮肤暴露量暴露量不需不需PEPPEP危险度危险度量小量小暴露时间短暴露时间短1 1 级暴露级暴露低危：如表皮擦伤、低危：如表皮擦伤、针刺等针刺等量大量大暴露时间长暴露时间长2 2 级暴露级暴露高危：如伤口较深、高危：如伤口较深、仪器上可见血液等仪器上可见血液等2 2 级暴露级暴露3 3 级暴露级暴露步骤步骤1：确定暴露级别（：确定暴露级别（Exposure Code）步骤步骤2：确定：确定HIV暴露源头严重程度暴露源头严重程度 HIVHIV暴露源级别暴露源级别不明不明HIVHIV暴露源级别暴露源级别1 1（轻度）（轻度）HIVHIV阴性阴性HIVHIV阳性阳性暴露源的暴露源的HIVHIV情况如何？情况如何？无需无需PEPPEP暴露源不明暴露源不明暴露源的暴露源的HIVHIV滴度低滴度低（无症状、（无症状、CD4CD4计数高）计数高）暴露源的暴露源的HIVHIV滴度高滴度高（有症状、（有症状、CD4CD4计数低）计数低）HIVHIV暴露源级别暴露源级别2 2（重度）（重度）步骤步骤3：根据暴露级别和暴露源病毒载量水平选：根据暴露级别和暴露源病毒载量水平选择预防性用药的推荐处理方案择预防性用药的推荐处理方案暴露级别暴露级别感染源级别感染源级别预防性用药推荐处理方案预防性用药推荐处理方案11不一定使用，可由职业暴不一定使用，可由职业暴露者本人根据利害比较作出决定露者本人根据利害比较作出决定12使用基本用药程序使用基本用药程序21使用基本用药程序使用基本用药程序22使用强化用药程序使用强化用药程序31或或2使用强化用药程序使用强化用药程序原因不明原因不明原因不明原因不明使用基本用药程序使用基本用药程序基本用药程序：两种逆转录酶抑制剂，使用常规治疗剂量，连续服用28天。如双汰芝（AZT与3TC联合制剂）300 mg/次，每日2次，用药时间为连续服用28天。或参考抗病毒治疗指导方案。本程序适用于轻度低危暴露。强化用药程序：基本用药程序加一种蛋白酶抑制剂，如佳息患或利托那韦。均使用常规治疗剂量，连续服用28天。本程序适用于严重暴露。职业暴露后，存在感染艾滋病毒的危险性，但实际感染艾滋病毒的机率是很低的。研究资料表明，医务工作者被艾滋病病毒污染的针具刺伤后，发生艾滋病病毒感染的机率为 0.33（20/6135），粘膜表面暴露的感染艾滋病病毒的机率为 0.09（1/1143）最主要的职业是护士和实验室技术员；除三名实验室人员是暴露于艾滋病病毒培养以外，其余全部是由于污染血液或体液；到1997年为止，外科医生和被缝合针刺伤的暴露者中没有发生肯定的艾滋病病毒感染。到到19971997年年7 7月为止，美国共发生月为止，美国共发生5252名职业暴露后艾滋名职业暴露后艾滋病病毒感染者，发现其中：病病毒感染者，发现其中：医护和预防保健等人员对艾滋病病毒感染者医护和预防保健等人员对艾滋病病毒感染者和艾滋病患者从事医疗和实验检测活动是比和艾滋病患者从事医疗和实验检测活动是比较安全的。较安全的。执行严格的安全操作及防护措施，医护及检执行严格的安全操作及防护措施，医护及检验等人员的暴露事件是可以避免的。验等人员的暴露事件是可以避免的。谢谢 谢！谢！