肠杆菌科知识讲座专家讲座.pptx

第二章第二章 肠杆菌科肠杆菌科 肠杆菌科细菌是一大群生物学性状近似革肠杆菌科细菌是一大群生物学性状近似革兰氏阴性杆菌。多数是肠道正常菌群，少数兰氏阴性杆菌。多数是肠道正常菌群，少数为病原菌。肠杆菌科细菌种类繁多，如埃希为病原菌。肠杆菌科细菌种类繁多，如埃希菌属、沙门菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属菌属、沙门菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属等。等。（Enterobacteriaceae)肠杆菌科知识讲座第1页第一节第一节 埃希菌属埃希菌属（Escherichia)埃希菌属有埃希菌属有5个种，个种，其中最主要是大肠埃其中最主要是大肠埃希菌俗称大肠杆菌希菌俗称大肠杆菌（E.coli)，是最常见，是最常见临床分离菌。临床分离菌。肠杆菌科知识讲座第2页一、形态及染色特征一、形态及染色特征 革兰氏阴性小杆菌，散在或成对，周毛菌，有菌毛。革兰氏阴性小杆菌，散在或成对，周毛菌，有菌毛。肠杆菌科知识讲座第3页二、培养特征二、培养特征1.普通培养基上生长良好，光滑、普通培养基上生长良好，光滑、湿润、半透明、灰白色菌落；湿润、半透明、灰白色菌落；2.麦康凯琼脂上形成红色菌落，麦康凯琼脂上形成红色菌落，伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属光泽菌落；光泽菌落；3.致病菌株在绵羊血平板上呈致病菌株在绵羊血平板上呈型溶血；型溶血；4.生化特征：糖发酵试验（发酵乳糖）生化特征：糖发酵试验（发酵乳糖）和和IMViC（+-）试验。）试验。H2S阴性。阴性。麦康凯培养基麦康凯培养基肠杆菌科知识讲座第4页三、抗原及血清型三、抗原及血清型（一）抗原（一）抗原1.菌体抗原（菌体抗原（O抗原）：抗原）：其成份为其成份为LPS多糖侧链。多糖侧链。173种，耐热，种，耐热，1个菌株仅含个菌株仅含1种。种。2.荚膜抗原（荚膜抗原（K抗原）：抗原）：其成份多数为多糖（其成份多数为多糖（K88、K99为蛋白质）为蛋白质），80种，种，1个菌株可含个菌株可含1-2种甚至无。依据对热耐受程度不一样分种甚至无。依据对热耐受程度不一样分L、A和和B型。型。3.3.鞭毛抗原（鞭毛抗原（H抗原）：抗原）：其成份为蛋白质，不耐热，其成份为蛋白质，不耐热，55种，种，1个菌株仅含个菌株仅含1种。种。4.（二）血清型（抗原式）（二）血清型（抗原式）5.表示方法：表示方法：O：K：H，如：如：O8：K23(L)：H19 肠杆菌科知识讲座第5页H抗原抗原(鞭毛鞭毛)O抗原抗原(LPS侧链侧链)K抗原抗原或或Vi(荚膜荚膜)F抗原抗原(菌毛菌毛)复杂抗原结构复杂抗原结构肠杆菌科知识讲座第6页四、致病性四、致病性依据毒力因子与发病机制不一样，将病原性大肠杆菌分依据毒力因子与发病机制不一样，将病原性大肠杆菌分为为5类：类：（1）产肠毒素大肠杆菌（）产肠毒素大肠杆菌（ETEC）（2）产类志贺毒素大肠杆菌（）产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）（3）肠致病性大肠杆菌（）肠致病性大肠杆菌（EPEC）（4）尿道致病性大肠杆菌（）尿道致病性大肠杆菌（UPEC）（5）败血性大肠杆菌（）败血性大肠杆菌（SEPEC）肠杆菌科知识讲座第7页 （一）产肠毒素大肠杆菌（一）产肠毒素大肠杆菌（ETEC）引发人和动物腹泻，主要毒力因子有两类：引发人和动物腹泻，主要毒力因子有两类：1.黏附素（定居因子）：黏附素（定居因子）：菌毛，能黏附宿主小肠上皮菌毛，能黏附宿主小肠上皮 细胞，虽不是直接致病因子，却是首要毒力因子细胞，虽不是直接致病因子，却是首要毒力因子。2.肠毒素：肠毒素：分泌到胞外一个蛋白质性毒素。分泌到胞外一个蛋白质性毒素。3.（1）不耐热肠毒素（）不耐热肠毒素（heat-labile enterotoxin,LT)4.对热敏感，可转变成类毒素，含有对热敏感，可转变成类毒素，含有A和和B亚单位。亚单位。5.（2）耐热肠毒素（）耐热肠毒素（heat-stable enterotoxin,ST)6.耐热，分子量小，无免疫原性。耐热，分子量小，无免疫原性。肠杆菌科知识讲座第8页（二）产类志贺毒素大肠杆菌（二）产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）引发猪水肿病，有两类毒力因子：引发猪水肿病，有两类毒力因子：1.黏附性菌毛黏附性菌毛2.F18，有利于细菌在肠黏膜上皮细胞定居和繁，有利于细菌在肠黏膜上皮细胞定居和繁殖。殖。2.致水肿病致水肿病2型类志贺毒素型类志贺毒素3.直接造成该病发生主要毒力因子。直接造成该病发生主要毒力因子。肠杆菌科知识讲座第9页仔猪黄痢：仔猪黄痢：本病发生于一周以内仔猪，以一至三日龄最为常见，本病发生于一周以内仔猪，以一至三日龄最为常见，一周龄以后不发生。同窝发病率很高在一周龄以后不发生。同窝发病率很高在90%以上。以上。病死率很高，有全窝死亡。病死率很高，有全窝死亡。肠杆菌科知识讲座第10页 五、诊疗五、诊疗n标本采集：标本采集：依据临床疾病类型不一样，采集适当标依据临床疾病类型不一样，采集适当标本。如败血症病例采集病变内脏组织，腹泻病例采集本。如败血症病例采集病变内脏组织，腹泻病例采集小肠内容物。小肠内容物。n检验方法：检验方法：（一）分离培养：选择培养基（一）分离培养：选择培养基 （二）生化试验：糖发酵、（二）生化试验：糖发酵、IMViC试验、试验、H2S阴性（三阴性（三 糖铁培养基）。糖铁培养基）。（三）血清学试验：玻片凝集试验判定血清型（三）血清学试验：玻片凝集试验判定血清型肠杆菌科知识讲座第11页微生物学诊疗微生物学诊疗n对败血症病例可无菌采集其病变内脏组织，直接在血琼脂或麦康凯平板上划线分离培养。n对幼畜腹泻及猪水肿病病例应取其各段小肠内容物或粘膜刮取物以及对应肠段肠系膜淋巴结，分别在麦康凯平板和血平板上划线分离培养。n挑取麦康凯平板上红色菌落或血平板上呈溶血经典菌落，分别转种三糖铁（TSI）培养基和普通琼脂斜面做初步生化判定和纯培养。n将TSI琼脂反应模式符合埃希菌属生长物或其对应普通斜面纯培养物做O抗原判定。n进而检测毒力因子，便可确定其属于何类致病性大肠杆菌。肠杆菌科知识讲座第12页移植移植CAYECAYE培养基培养基大肠杆菌分离判定程序大肠杆菌分离判定程序病料病料粪便或肠内容物及肠粘膜刮取物粪便或肠内容物及肠粘膜刮取物麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线分离麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线分离血、肠淋巴结或其它病变组织血、肠淋巴结或其它病变组织血琼脂和麦康凯琼脂平板划线分离血琼脂和麦康凯琼脂平板划线分离挑取疑似大肠杆菌菌落挑取疑似大肠杆菌菌落510个以上分别同时接种个以上分别同时接种TSITSI琼脂和普通琼脂斜面琼脂和普通琼脂斜面革革兰兰氏氏染染色色镜镜检检形形态态，不不符合者可终止判定符合者可终止判定生化试验证实为生化试验证实为大肠杆菌大肠杆菌血清型判定血清型判定ETECETEC菌株毒力因子判定菌株毒力因子判定移植粘附素专用培养基移植粘附素专用培养基肠毒素判定（肠毒素判定（LTLT和和STST）粘附素抗原定型粘附素抗原定型猪水肿病菌株猪水肿病菌株Stx2e判定判定TSI呈呈A（K）/A反应者，其反应者，其TSI +（-），），-生长物或普通斜面纯菌生长物或普通斜面纯菌肠杆菌科知识讲座第13页六、防治六、防治当前国内外已经有各种疫苗预防大肠杆当前国内外已经有各种疫苗预防大肠杆菌病，如全菌灭活苗、亚单位疫苗、类菌病，如全菌灭活苗、亚单位疫苗、类毒素苗、基因工程疫苗等。毒素苗、基因工程疫苗等。肠杆菌科知识讲座第14页第二节第二节 沙门氏菌属（沙门氏菌属（Salmonella)绝大多数沙门氏菌对人绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性，人类和动物有致病性，人类食物中毒主要病原之一，食物中毒主要病原之一，在公共卫生上占有主要在公共卫生上占有主要地位。地位。肠杆菌科知识讲座第15页一、形态及染色一、形态及染色与大肠杆菌相同，与大肠杆菌相同，除鸡白痢和鸡伤寒除鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌无鞭毛不沙门氏菌无鞭毛不运动外，其余均以运动外，其余均以周鞭毛运动。周鞭毛运动。肠杆菌科知识讲座第16页二、培养及生化特征二、培养及生化特征麦康凯琼脂培养基：发酵乳糖（大肠杆菌）；不发酵乳糖（沙门氏菌）麦康凯琼脂培养基：发酵乳糖（大肠杆菌）；不发酵乳糖（沙门氏菌）在选择培养基上因不发酵乳糖而呈无色菌落。在选择培养基上因不发酵乳糖而呈无色菌落。IMViC试验：试验：-+-+；多数菌株；多数菌株H2S阳性。阳性。肠杆菌科知识讲座第17页三、抗原及血清型三、抗原及血清型（一）抗原（一）抗原1.菌体抗原（菌体抗原（O抗原）：抗原）：其成份为其成份为LPS多糖侧链。多糖侧链。58种，耐种，耐 热，热，1个菌株可含各种，以阿拉伯数字表示。个菌株可含各种，以阿拉伯数字表示。2.荚膜抗原（荚膜抗原（K抗原）：抗原）：与毒力相关，又称与毒力相关，又称Vi抗原。有菌株有，抗原。有菌株有，有菌株无。有菌株无。3.鞭毛抗原（鞭毛抗原（H抗原）：抗原）：其成份为蛋白质，不耐热，其成份为蛋白质，不耐热，63种种,分为两相：分为两相：（1）第）第1相（特异相）：小写英文字母表示相（特异相）：小写英文字母表示 （2）第）第2相（非特异相）：阿拉伯数字表示相（非特异相）：阿拉伯数字表示肠杆菌科知识讲座第18页n表示方法：表示方法：O抗原：第抗原：第1相相H抗原：第抗原：第2相相H抗原抗原 如：如：1，4，5，12：i:1,2 有有Vi抗原，则表示为：抗原，则表示为：（二）血清型（抗原式）（二）血清型（抗原式）O抗原：抗原：Vi抗原：第抗原：第1相相H抗原：第抗原：第2相相H抗原抗原肠杆菌科知识讲座第19页四、致病性四、致病性多数含有致病性，是一个主要人畜共患病原菌，很轻易在动物与动多数含有致病性，是一个主要人畜共患病原菌，很轻易在动物与动物、动物与人、人与人之间间接或直接传输。依据对宿主适应物、动物与人、人与人之间间接或直接传输。依据对宿主适应性不一样，可分为：性不一样，可分为：1.专嗜性：专嗜性：如鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌、马流产、牛流产、羊流如鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌、马流产、牛流产、羊流产沙门菌产沙门菌、猪伤寒沙门菌、猪伤寒沙门菌 2.2.偏嗜性：偏嗜性：如猪霍乱沙门氏菌和都柏林沙门菌如猪霍乱沙门氏菌和都柏林沙门菌 3.3.泛嗜性：泛嗜性：如鼠伤寒和肠炎沙门氏菌如鼠伤寒和肠炎沙门氏菌肠杆菌科知识讲座第20页致病机理致病机理 与侵袭相关。与侵袭相关。侵袭两个路径：侵袭两个路径：1.经过侵袭动物肠道粘膜表面肠系膜淋巴结集结（经过侵袭动物肠道粘膜表面肠系膜淋巴结集结（Payers patch）淋巴上皮中特殊抗原捕捉细胞（）淋巴上皮中特殊抗原捕捉细胞（microfold cell，M细胞）细胞），进入上皮下层组织，进入上皮下层组织 2.直接侵袭直接侵袭M细胞周围含有吸收能力上皮细胞，经过上皮细胞细胞周围含有吸收能力上皮细胞，经过上皮细胞进入上皮下层组织。进入上皮下层组织。细菌在膜小泡中存活、繁殖并被释放，被巨噬细胞吞噬或皮下细菌在膜小泡中存活、繁殖并被释放，被巨噬细胞吞噬或皮下淋巴组织吞噬。在巨噬细胞中生存，随巨噬细胞进入肠系膜淋巴结，淋巴组织吞噬。在巨噬细胞中生存，随巨噬细胞进入肠系膜淋巴结，最终侵入肝、脾、骨髓等不一样器官或组织，深入产生毒素，从而最终侵入肝、脾、骨髓等不一样器官或组织，深入产生毒素，从而引发各种临床症状。巨噬细胞为沙门菌提供了逃避中性粒细胞和体引发各种临床症状。巨噬细胞为沙门菌提供了逃避中性粒细胞和体液免疫攻击。液免疫攻击。对本菌毒力因子研究长久以来未能取得突破性进展，当前从对本菌毒力因子研究长久以来未能取得突破性进展，当前从毒力岛及毒力基因水平研究其致病机理，将认识提升到新水平。毒力岛及毒力基因水平研究其致病机理，将认识提升到新水平。肠杆菌科知识讲座第21页 （一）分离培养：选择培养基（一）分离培养：选择培养基 （二）生化试验：糖发酵、（二）生化试验：糖发酵、IMViC试验、试验、H2S阳性（三阳性（三 糖铁培养基）。糖铁培养基）。（三）血清学试验：玻片凝集试验判定血清型（三）血清学试验：玻片凝集试验判定血清型五、诊疗五、诊疗肠杆菌科知识讲座第22页沙门杆菌属分离判定程序沙门杆菌属分离判定程序肠杆菌科知识讲座第23页复习思索题复习思索题1.大肠杆菌和沙门氏菌血清型表示方法。大肠杆菌和沙门氏菌血清型表示方法。2.大肠杆菌和沙门氏菌判别诊疗关键点。大肠杆菌和沙门氏菌判别诊疗关键点。肠杆菌科知识讲座第24页第三章第三章 巴氏杆菌科及相关属巴氏杆菌科及相关属巴氏杆菌属巴氏杆菌属里氏杆菌属里氏杆菌属嗜血杆菌属嗜血杆菌属肠杆菌科知识讲座第25页 巴氏杆菌属（巴氏杆菌属（Pasteurella)本属细菌已报道有本属细菌已报道有20各种，多杀性各种，多杀性巴氏杆菌巴氏杆菌(P.multocidaP.multocida)是本属中最主是本属中最主要畜禽致病菌，可引发各种动物发生出要畜禽致病菌，可引发各种动物发生出血性败血症或传染性肺炎。血性败血症或传染性肺炎。肠杆菌科知识讲座第26页一、形态及染色一、形态及染色两端钝圆，中央微凸短杆菌两端钝圆，中央微凸短杆菌G G-菌，单个存在，有时成双排列菌，单个存在，有时成双排列,病料涂片用瑞氏染色或美蓝染病料涂片用瑞氏染色或美蓝染色时，可见经典两极着色，培色时，可见经典两极着色，培养物所作涂片，两极着色不显养物所作涂片，两极着色不显著。著。巴氏巴氏杆菌杆菌肠杆菌科知识讲座第27页二、培养特征二、培养特征 对营养要求较严格。在普通培养基上生长贫对营养要求较严格。在普通培养基上生长贫瘠，血液或血清培养基中生长良好，长成灰瘠，血液或血清培养基中生长良好，长成灰白色露珠状针尖大小菌落，不溶血，麦康凯白色露珠状针尖大小菌落，不溶血，麦康凯培养上不生长。培养上不生长。肠杆菌科知识讲座第28页 1.菌体抗原菌体抗原:16个型，个型，以阿拉伯数字表示以阿拉伯数字表示 2.荚膜抗原荚膜抗原:多糖成份，多糖成份，有有6个型，个型，大写英文字母表示大写英文字母表示 我国分离禽多杀性巴氏杆菌以我国分离禽多杀性巴氏杆菌以5A为多为多，其其次为次为8：A。猪以。猪以5：A和和6:B为主为主三、血清型三、血清型肠杆菌科知识讲座第29页 本菌抵抗力不强，普通消毒药惯用浓度本菌抵抗力不强，普通消毒药惯用浓度对本菌都有很好消毒力。在无菌蒸馏水和生对本菌都有很好消毒力。在无菌蒸馏水和生理盐水中很快死亡。冻干菌种在低温中可保理盐水中很快死亡。冻干菌种在低温中可保留长达留长达26年年。四、四、抵抗力抵抗力肠杆菌科知识讲座第30页n本菌是各种动物主要病原菌本菌是各种动物主要病原菌，主要引发出血性，主要引发出血性 败血症、肺炎，如败血症、肺炎，如猪肺疫猪肺疫、禽霍乱禽霍乱等。试验动物等。试验动物 中小鼠非常易感。中小鼠非常易感。n动物患病痊愈后，可取得较强免疫力，且对其动物患病痊愈后，可取得较强免疫力，且对其 他血清型含有交叉保护力。高免多价血清含有良他血清型含有交叉保护力。高免多价血清含有良 好紧急预防和治疗作用。好紧急预防和治疗作用。五、致病性与免疫性五、致病性与免疫性肠杆菌科知识讲座第31页六、微生物学诊疗六、微生物学诊疗 1.1.涂片或触片镜检涂片或触片镜检 染色（美蓝或瑞氏），两极着色染色（美蓝或瑞氏），两极着色 2.2.分离培养分离培养 麦康凯琼脂不生长麦康凯琼脂不生长,血平板不溶血血平板不溶血 3.3.动物试验动物试验 病料悬液或培养物接种小白鼠病料悬液或培养物接种小白鼠,引发小白鼠快速死亡引发小白鼠快速死亡 肠杆菌科知识讲座第32页病变组织分离培养纯培养动物接种触片镜检革兰氏染色，镜检生化判定肠杆菌科知识讲座第33页 里氏杆菌属（里氏杆菌属（Riemerella)鸭鸭疫疫里里氏氏杆杆菌菌（R.R.anatipestiferanatipestifer）是是本本属属代代表表种种，原原名名鸭鸭疫疫巴巴氏氏杆杆菌菌，是是雏雏鸭鸭传染性浆膜炎病原菌。传染性浆膜炎病原菌。肠杆菌科知识讲座第34页一一.形态及染色形态及染色 菌体呈杆状或椭圆形，多为单个，少菌体呈杆状或椭圆形，多为单个，少数成双或短链排列。可形成荚膜，无数成双或短链排列。可形成荚膜，无芽胞，无鞭毛。芽胞，无鞭毛。G G-菌，两极着色。菌，两极着色。肠杆菌科知识讲座第35页营养要求较高，普通培养基和麦康凯培养基上不营养要求较高，普通培养基和麦康凯培养基上不生长，在巧克力或胰蛋白胨大豆琼脂（生长，在巧克力或胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板上，）平板上，呈圆形、微突起、表面光滑、奶油状小菌落。生化试呈圆形、微突起、表面光滑、奶油状小菌落。生化试验大多阴性，不发酵葡萄糖和蔗糖，与多杀性巴氏杆验大多阴性，不发酵葡萄糖和蔗糖，与多杀性巴氏杆菌相区分。菌相区分。二二.培养及生化特征培养及生化特征肠杆菌科知识讲座第36页三三.血清型血清型 21个型，以阿拉伯数字表示，我国个型，以阿拉伯数字表示，我国多数属多数属1型。型。肠杆菌科知识讲座第37页四四.致病性致病性主要感染雏鸭，尤其主要感染雏鸭，尤其23周龄者，引发急性或慢性周龄者，引发急性或慢性败血症和浆膜炎。败血症和浆膜炎。肠杆菌科知识讲座第38页五五.诊疗诊疗n涂片镜检涂片镜检:两极着色两极着色n分离培养分离培养:巧克力培养基巧克力培养基n生化试验生化试验:不发酵葡萄糖和蔗糖不发酵葡萄糖和蔗糖肠杆菌科知识讲座第39页 嗜血杆菌属（嗜血杆菌属（Haemophilus）嗜血杆菌是一群酶系统不完全革兰氏阴嗜血杆菌是一群酶系统不完全革兰氏阴性杆菌，生长需要血液中生长因子，尤性杆菌，生长需要血液中生长因子，尤其是其是X因子和因子和V因子。因子。肠杆菌科知识讲座第40页一、一、形态及染色形态及染色 多为短杆状，有时呈多形性，无鞭毛，无芽胞，多为短杆状，有时呈多形性，无鞭毛，无芽胞，新分离致病菌株有荚膜。新分离致病菌株有荚膜。G G-菌，两极着色。菌，两极着色。肠杆菌科知识讲座第41页二、培养特征二、培养特征 首次分离培养时供给首次分离培养时供给5%10%CO2可促进生长可促进生长,本属本属菌生长需供给菌生长需供给X因子和因子和V因子（细菌呼吸过程中起递因子（细菌呼吸过程中起递氢作用两种脱氢辅酶），在巧克力平板上生长较佳。氢作用两种脱氢辅酶），在巧克力平板上生长较佳。肠杆菌科知识讲座第42页 本属菌对外界抵抗力不强本属菌对外界抵抗力不强,分离到嗜分离到嗜血杆菌要及时移植或冻干保留血杆菌要及时移植或冻干保留。三、抵抗力三、抵抗力肠杆菌科知识讲座第43页四、致病性四、致病性 可引发人和各种动物发病，其毒力因子包含荚膜、可引发人和各种动物发病，其毒力因子包含荚膜、菌毛和内毒素等。与兽医相关嗜血杆菌有：菌毛和内毒素等。与兽医相关嗜血杆菌有：1.副猪嗜血杆菌：副猪嗜血杆菌：可引发猪心肌炎、腹膜炎、胸可引发猪心肌炎、腹膜炎、胸2.膜炎及关节炎等，常与猪流感病毒联合引发猪流膜炎及关节炎等，常与猪流感病毒联合引发猪流感。感。2.副禽嗜血杆菌：副禽嗜血杆菌：可引发可引发鸡传染性鼻炎，造成产蛋量鸡传染性鼻炎，造成产蛋量 3.快速下降。快速下降。肠杆菌科知识讲座第44页 五、微生物学诊疗五、微生物学诊疗 1.1.显微镜检验显微镜检验 ：两极着色两极着色 2.2.分离培养分离培养 ：血平板（生长不好或不长）血平板（生长不好或不长）巧克力平板（生长良好）巧克力平板（生长良好）3.3.卫星现象：卫星现象：可疑菌落可疑菌落 鲜血平板鲜血平板 再接金葡菌再接金葡菌 培养培养 卫星现象卫星现象 4.4.生化试验生化试验 5.5.血清学试验血清学试验 肠杆菌科知识讲座第45页复习思索题复习思索题1 多杀性巴氏杆菌形态染色及培养方面多杀性巴氏杆菌形态染色及培养方面 有何特征？怎样进行微生物学诊疗？有何特征？怎样进行微生物学诊疗？2 鸭疫里氏杆菌微生物学诊疗。鸭疫里氏杆菌微生物学诊疗。3 嗜血杆菌为何需要用巧克力琼脂培养基嗜血杆菌为何需要用巧克力琼脂培养基 进行分离培养？进行分离培养？4 什么叫什么叫“卫星现象卫星现象”？肠杆菌科知识讲座第46页