肠杆菌科知识培训专家讲座.pptx

第七章 肠杆菌科 第一节 概述 肠杆菌科包含肠杆菌科包含24个与医学相关菌属个与医学相关菌属,G+Cmol39-59。1.四类引发人类腹泻和肠道感染细菌：埃四类引发人类腹泻和肠道感染细菌：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属。属。2.八种与医院感染相关条件致病菌：枸橼八种与医院感染相关条件致病菌：枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属；菌属和摩根菌属；肠杆菌科知识培训第1页3.其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对人致病性较强。另外，许多细菌既人致病性较强。另外，许多细菌既是正常菌群，也是条件致病菌。在是正常菌群，也是条件致病菌。在机体抵抗力下降，借居部位改变机体抵抗力下降，借居部位改变或菌群失调时能引发机会感染。或菌群失调时能引发机会感染。肠杆菌科知识培训第2页二、临床意义二、临床意义占临床分离菌总数占临床分离菌总数50和和-总数总数80,快要快要50败血症败血症70以上泌尿以上泌尿道感染和大量肠道感染是由肠杆菌科道感染和大量肠道感染是由肠杆菌科细菌引发。细菌引发。1.人类肠道外感染人类肠道外感染除志贺菌较少引发肠外除志贺菌较少引发肠外感染，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产感染，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆酸克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌等均可引菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌等均可引起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢神经系起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢神经系统感染统感染;肠杆菌科知识培训第3页且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可引发烈性传染病鼠疫。引发烈性传染病鼠疫。2.人类肠道感染人类肠道感染埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶尔森菌属。主要引发各种急、慢性肠尔森菌属。主要引发各种急、慢性肠道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠热症等。热症等。肠杆菌科知识培训第4页三、共同特征三、共同特征(1)1.形态结构形态结构-杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭毛，能运动。致病性菌株有菌毛。毛，能运动。致病性菌株有菌毛。2.抗原成份抗原成份抗原是细胞壁成份脂多糖。以核抗原是细胞壁成份脂多糖。以核心多糖为中心三层结构，内侧是脂类心多糖为中心三层结构，内侧是脂类A,为内毒素毒性成份。外侧是由重复为内毒素毒性成份。外侧是由重复特异多糖，决定抗原特异性。特异多糖，决定抗原特异性。肠杆菌科知识培训第5页H抗原是不耐热蛋白质抗原，氨基酸抗原是不耐热蛋白质抗原，氨基酸序列和空间构型决定序列和空间构型决定H抗原特异性。抗原特异性。表面抗原是包绕在抗原外侧多糖抗表面抗原是包绕在抗原外侧多糖抗原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠埃希菌称埃希菌称K抗原、伤寒沙门菌称抗原、伤寒沙门菌称Vi抗原抗原和志贺菌称和志贺菌称B抗原等。抗原等。O抗原和抗原和H抗原是肠杆菌科血清学分抗原是肠杆菌科血清学分群和分型依据。表面抗原存在时可阻群和分型依据。表面抗原存在时可阻断。抗原与对应抗体之间反应，加热断。抗原与对应抗体之间反应，加热处理能消除表面抗原阻断作用。处理能消除表面抗原阻断作用。肠杆菌科知识培训第6页共同特征共同特征(2)3.变异性变异性S-R变异是首次分离细菌，菌体变异是首次分离细菌，菌体抗原上都有特异性多糖链，菌落为光滑抗原上都有特异性多糖链，菌落为光滑型。在人工培养基中重复传代时，细胞型。在人工培养基中重复传代时，细胞壁上特异性多糖链消失而关键多糖仍保壁上特异性多糖链消失而关键多糖仍保留，菌落变为粗糙型。留，菌落变为粗糙型。H-O变异是有鞭毛细菌变异是有鞭毛细菌,失去鞭失去鞭毛，动力也随之消失，称毛，动力也随之消失，称H-O变异变异,有有时见于新分离菌株中。时见于新分离菌株中。肠杆菌科知识培训第7页4.培养和生化特征培养和生化特征营养要求不高，在普通培养基上生长营养要求不高，在普通培养基上生长良好；兼性厌氧，主要生化特征包含发良好；兼性厌氧，主要生化特征包含发酵葡萄糖酵葡萄糖(产酸或产酸产气产酸或产酸产气)，触酶阳性，触酶阳性,氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸盐。盐。5.抵抗力抵抗力抵抗力不强，加热抵抗力不强，加热6030min即被杀即被杀死，不耐干燥，对普通化学消毒剂均敏死，不耐干燥，对普通化学消毒剂均敏感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵抗染料抑菌作用。抗染料抑菌作用。肠杆菌科知识培训第8页四、微生物检验四、微生物检验1.标本采集标本采集肠外标本肠外标本:采自不一样感染部位如血液采自不一样感染部位如血液、体液、呼吸道、伤口、尿液及其它各、体液、呼吸道、伤口、尿液及其它各种标本。种标本。肠道标本肠道标本:疾病早期留取新鲜粪便，挑疾病早期留取新鲜粪便，挑取粘液脓血部分进行培养。应在取粘液脓血部分进行培养。应在2h内进内进行，以利志贺菌等检出。如不能及时培行，以利志贺菌等检出。如不能及时培养应冷藏待检。养应冷藏待检。2.直接镜检直接镜检-杆菌，形态及染色性无判别杆菌，形态及染色性无判别意义。意义。肠杆菌科知识培训第9页3分离培养判定分离培养判定(1)肠外标本肠外标本:采自无菌部位标本用血采自无菌部位标本用血琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其它琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其它标本中含有杂菌，需用选择性培养基标本中含有杂菌，需用选择性培养基以增加分离率，惯用伊红美蓝以增加分离率，惯用伊红美蓝(EMB)琼脂，因为琼脂，因为EMB能促进肠杆菌科细能促进肠杆菌科细菌生长并抑制其它菌生长并抑制其它-菌。菌。肠杆菌科知识培训第10页(2)肠道标本：惯用选择判别培肠道标本：惯用选择判别培养基养基(如如EMB)和针对沙门菌和志贺和针对沙门菌和志贺菌强选择判别培养基，菌强选择判别培养基，(如如SS琼脂琼脂)。如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选。如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选择琼脂择琼脂(CIN)。肠杆菌科知识培训第11页 肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌判定判定1)常规生化判定常规生化判定:为试验室最惯用方为试验室最惯用方法。各菌属法。各菌属(种种)主要生化特征有助主要生化特征有助于判定细菌。于判定细菌。2)判定试剂盒判定试剂盒:选取标准化和商品化选取标准化和商品化微生物判定试剂盒，特点是质量可微生物判定试剂盒，特点是质量可靠稳定判定能力强，并与编码技术靠稳定判定能力强，并与编码技术结合，可用仪器读取结果，实现自结合，可用仪器读取结果，实现自动化，并提升了工作效率。动化，并提升了工作效率。肠杆菌科知识培训第12页3)血清学判定：用特异性抗血清进血清学判定：用特异性抗血清进行血清学分型判定后才能作出最行血清学分型判定后才能作出最终汇报。终汇报。4)分子生物学判定：可判定至科、分子生物学判定：可判定至科、属属、种、血清型和肠毒素基因、种、血清型和肠毒素基因等。甚等。甚至可区分致病菌株和非至可区分致病菌株和非致病菌株。致病菌株。肠杆菌科知识培训第13页耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉素素G等抗生素天然耐药，而大多数是形成等抗生素天然耐药，而大多数是形成取得性耐药。有染色体或质粒介导超广谱取得性耐药。有染色体或质粒介导超广谱-内酰胺酶或内酰胺酶或AmpC酶而产生耐药性。已酶而产生耐药性。已出现了耐各种抗菌药品多重耐药菌株，因出现了耐各种抗菌药品多重耐药菌株，因此必须依据抗菌药品敏感试验选取抗生素，此必须依据抗菌药品敏感试验选取抗生素，并作好耐药性监控工作。同时细菌耐药谱并作好耐药性监控工作。同时细菌耐药谱还可成为医院感染流行病学调查中标志。还可成为医院感染流行病学调查中标志。(五五)抗菌药品敏感试验抗菌药品敏感试验肠杆菌科知识培训第14页一、分一、分类类埃希菌属包含埃希菌属包含5个种：个种：大肠埃希菌是肠道中大肠埃希菌是肠道中G-杆菌主要杆菌主要组员，组员，常引发肠内外感染，是腹常引发肠内外感染，是腹泻和泌尿道感染主要病原菌。泻和泌尿道感染主要病原菌。蟑螂埃希菌偶而检出并有潜在致蟑螂埃希菌偶而检出并有潜在致病性。病性。第二节 埃希菌属肠杆菌科知识培训第15页弗格森埃希菌；弗格森埃希菌；赫尔曼埃希菌；赫尔曼埃希菌；伤口埃希菌。伤口埃希菌。最近还发觉称为不脱胺凝聚埃最近还发觉称为不脱胺凝聚埃希菌希菌G+Cmol为为4852。肠杆菌科知识培训第16页二、临床意义二、临床意义1.致病原因致病原因侵袭力侵袭力K抗原能抗吞噬，并有抵抗抗体和抗原能抗吞噬，并有抵抗抗体和补体作用。菌毛能帮助细菌粘附于补体作用。菌毛能帮助细菌粘附于粘膜表面称定殖因子，能使细菌定殖粘膜表面称定殖因子，能使细菌定殖产生毒素而引发对应症状，直接侵产生毒素而引发对应症状，直接侵犯粘膜引发炎症。犯粘膜引发炎症。肠杆菌科知识培训第17页内毒素内毒素含有发烧、休克、含有发烧、休克、DIC等病理作用。等病理作用。肠毒素肠毒素产生不耐热和耐热肠毒素两种肠产生不耐热和耐热肠毒素两种肠毒素：均可使肠道细胞中毒素：均可使肠道细胞中cAMP水平升高，引发肠液大量分泌水平升高，引发肠液大量分泌而造成腹泻。而造成腹泻。肠杆菌科知识培训第18页二、临床意义二、临床意义2.所致疾病所致疾病肠道外感染肠道外感染是临床分离是临床分离G-杆菌中最常见杆菌中最常见菌种，可引发泌尿系等各种类型感染。菌种，可引发泌尿系等各种类型感染。引发泌尿系感染菌株以血清型引发泌尿系感染菌株以血清型01、2、6为多见，本菌还可引发菌血症、为多见，本菌还可引发菌血症、胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。常常见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面感染。感染。肠杆菌科知识培训第19页有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产生脓液粘稠，有粪臭味。该菌对普通生脓液粘稠，有粪臭味。该菌对普通抗抗生生素素敏敏感感，易易产产生生超超广广谱谱-内内酰酰胺胺酶酶，而造成对第三代头孢菌素耐药。而造成对第三代头孢菌素耐药。肠道内感染肠道内感染其中有些菌株能引发轻微腹泻至霍乱其中有些菌株能引发轻微腹泻至霍乱样严重腹泻，并能引发致死性并发症如样严重腹泻，并能引发致死性并发症如溶血性尿毒综合征。溶血性尿毒综合征。肠杆菌科知识培训第20页(1)肠毒素型大肠埃希菌肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)：引发儿童腹泻和旅行者腹泻，类似轻型引发儿童腹泻和旅行者腹泻，类似轻型霍乱样腹泻。该菌产生耐热肠毒素霍乱样腹泻。该菌产生耐热肠毒素(ST)和不耐热肠毒素和不耐热肠毒素(LT)。(2)肠致病性大肠埃希菌肠致病性大肠埃希菌(EPEC)：引发婴幼儿肠道感染引发婴幼儿肠道感染,血清型是血清型是055、0111等等,是婴儿腹泻主要病原菌。是婴儿腹泻主要病原菌。(3)肠侵袭型大肠埃希菌肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)：类似于志贺菌，侵犯肠粘膜细胞，引发类似于志贺菌，侵犯肠粘膜细胞，引发菌痢样症状，出现脓血粘液便。菌痢样症状，出现脓血粘液便。引发肠道感染大肠埃希菌引发肠道感染大肠埃希菌肠杆菌科知识培训第21页(4)肠出血型大肠埃希菌肠出血型大肠埃希菌(EHEC)，多为食，多为食源性感染，经过粪源性感染，经过粪-口路径传输。致病口路径传输。致病因子是菌毛和因子是菌毛和Vero毒素，血清型是毒素，血清型是0157：H7，可引发出血性结肠炎，有，可引发出血性结肠炎，有27发展成溶血性尿毒综合征，出现溶发展成溶血性尿毒综合征，出现溶血性贫血，血小板降低性紫癜和急性肾血性贫血，血小板降低性紫癜和急性肾衰竭，死亡率为衰竭，死亡率为310。(5)肠凝聚型大肠埃希菌肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC)：代表：代表一群不产生一群不产生LT或或ST，不能用，不能用O：H血清血清分型，可粘附于分型，可粘附于Hep-2细胞菌株。与细胞菌株。与世界各地慢性腹泻相关。世界各地慢性腹泻相关。肠杆菌科知识培训第22页三、微生物特征三、微生物特征1.形态结构形态结构G-直短杆状，直短杆状，大小为大小为1.01.5m，多数有鞭毛能运动，多数有鞭毛能运动，引发肠外感染菌株有荚膜引发肠外感染菌株有荚膜(微微荚膜荚膜)和周身菌毛。和周身菌毛。肠杆菌科知识培训第23页2.抗原成份抗原成份O抗原是多糖磷脂复合物抗原是多糖磷脂复合物(LPS)，耐，耐热加热热加热100不能灭活，已经有不能灭活，已经有171种种是血清学分型基础。是血清学分型基础。H抗原是不耐热蛋白质，已知有抗原是不耐热蛋白质，已知有56种，均为单相菌株。种，均为单相菌株。K抗原是多糖荚膜抗原，对热稳定，抗原是多糖荚膜抗原，对热稳定，能阻止能阻止O凝集。血清型别按凝集。血清型别按O：K：H次序以数字表示。次序以数字表示。肠杆菌科知识培训第24页3.培养特征培养特征兼性厌氧，营养要求不高，在普通兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂上生长良好，形成圆形光滑、湿琼脂上生长良好，形成圆形光滑、湿润菌落，在选择培养基上可发酵乳润菌落，在选择培养基上可发酵乳糖形成有色菌落。糖形成有色菌落。IMViC试验结果为试验结果为+-。肠杆菌科知识培训第25页四、微生物检验四、微生物检验(1)肠道外感染标本肠道外感染标本1.标本采集标本采集血液标本以无菌操作技术采集静脉血血液标本以无菌操作技术采集静脉血5ml注入血液培养瓶。痰标本取清晨口注入血液培养瓶。痰标本取清晨口腔清洁后从深部咳出痰液。脓、分泌腔清洁后从深部咳出痰液。脓、分泌物等标本用无菌棉拭子直接采取。物等标本用无菌棉拭子直接采取。2.直接涂片染色检验直接涂片染色检验除血液标本外，脓、痰、分泌物等标本除血液标本外，脓、痰、分泌物等标本均作涂片染色检验。尿液和各种体液离均作涂片染色检验。尿液和各种体液离心后取沉淀物作涂片心后取沉淀物作涂片,可见可见G-短杆菌。短杆菌。肠杆菌科知识培训第26页3.分离培养判定分离培养判定(1)血液标本接种肉汤增菌培养，待生血液标本接种肉汤增菌培养，待生长后移种血平板。体液标本取离心长后移种血平板。体液标本取离心沉淀物接种于血平板。尿液标本应沉淀物接种于血平板。尿液标本应同时作菌落计数。脓、痰和分泌物同时作菌落计数。脓、痰和分泌物标本可直接接种于血平板。标本可直接接种于血平板。35孵孵育育1824h后观察菌落形态。后观察菌落形态。肠杆菌科知识培训第27页(2)判别培养基上挑选有色菌落，用生判别培养基上挑选有色菌落，用生化反应、血清学试验判定到属和种。化反应、血清学试验判定到属和种。经典生化反应特征：经典生化反应特征：TSIA(双糖铁双糖铁)产酸产酸产气，产酸产酸产气，CIT(枸橼酸盐枸橼酸盐)阴性阴性,URE(脲酶脲酶)阴性阴性,IND(吲哚吲哚)阳性阳性,MOT(动力动力)+-,ORN(鸟氨酸鸟氨酸)+-。肠杆菌科知识培训第28页四、微生物检验四、微生物检验(2)肠道内感染标本肠道内感染标本引引发发腹腹泻泻ETEC、EPEC、EIEC和和EHEC含含有有与与肠肠道道外外感感染染大大肠肠埃埃希希菌菌相相同同生生物物学学特特征征，但但分分别别含含有有特特殊殊血血清型、肠毒素或毒力因子。清型、肠毒素或毒力因子。检验程序同肠道外标本。采集腹泻检验程序同肠道外标本。采集腹泻和和食食物物中中毒毒患患者者粪粪便便和和残残留留食食物物，肛肛拭拭标标本本，接接种种肠肠道道选选择择判判别别培培养养基基分分离培养和判定离培养和判定。肠杆菌科知识培训第29页肠道感染大肠埃希菌判定肠道感染大肠埃希菌判定1)ETEC生化反应、血清分型加肠毒素生化反应、血清分型加肠毒素测定：生化反应符合大肠埃希菌，但血测定：生化反应符合大肠埃希菌，但血清型别与致病没有一定联络。主要依清型别与致病没有一定联络。主要依赖赖ST和和LT肠毒素检测。肠毒素检测。2)EPEC生化反应加血清分型：用多价抗生化反应加血清分型：用多价抗血清检测血清检测O抗原，进行特异性抗血清抗原，进行特异性抗血清凝集试验，阳性菌株测定凝集滴度以凝集试验，阳性菌株测定凝集滴度以排除交叉反应，同时做排除交叉反应，同时做H抗原测定抗原测定(O：H分型分型)。肠杆菌科知识培训第30页3)EIEC生生化化反反应应、血血清清分分型型加加肠肠毒毒素素测测定定：用用O：H血血清清分分型型，赖赖氨氨酸酸脱脱羧羧酶酶阴阴性性，无无动动力力，常常见见血血清清型型0152和和0124，与与志志贺贺菌菌相相同同，主主要要判判别别试试验验是是醋醋酸酸钠钠、葡葡萄萄糖糖铵铵利利用用试试验验和和粘粘质质酸酸盐盐产产酸酸试试验验，大大肠肠埃埃希希菌菌三三者者均均阳阳性性，而而志志贺菌三者均阴性。贺菌三者均阴性。4)EHEC血血清清分分型型加加生生化化反反应应：应应常常规规作作0157：H7培培养养，必必须须经经生生化化反反应应证证实实为为大大肠肠埃埃希希菌菌。凡凡山山梨梨醇醇阴阴性性大大肠肠埃埃希希菌菌0157：H7分分离离株株无无须须再做毒素检测，因为均产生再做毒素检测，因为均产生Vero毒素。毒素。5)EaggEC用液体培养用液体培养-凝集试验，检测细菌对凝集试验，检测细菌对细胞粘附性或用细胞粘附性或用DNA探针技术。探针技术。肠杆菌科知识培训第31页可致各种感染，轻者为自愈性胃可致各种感染，轻者为自愈性胃肠炎，重者可引发致死性伤寒。伤肠炎，重者可引发致死性伤寒。伤寒和副伤寒寒和副伤寒A、B引发胃肠炎、菌血引发胃肠炎、菌血症和肠热症；猪霍乱沙门菌引发胃症和肠热症；猪霍乱沙门菌引发胃肠炎和败血症，儿童多见。肠炎和败血症，儿童多见。第三节 沙门菌肠杆菌科知识培训第32页一、分一、分类类沙门菌属是肠杆菌科中最复杂菌沙门菌属是肠杆菌科中最复杂菌属。依据属。依据O抗原分群，再依据抗原分群，再依据H抗原抗原分血清型，将沙门菌属分为分血清型，将沙门菌属分为6个亚属个亚属(亚属亚属1-6，其中亚属，其中亚属3再分为再分为3a和和3b,见表见表7。8)，绝大多数，绝大多数(99)沙门菌沙门菌临床分离株是亚群临床分离株是亚群1中菌种。本中菌种。本属细菌属细菌DNAG+C含量为含量为50-53。肠杆菌科知识培训第33页二、临床意义二、临床意义(一一)致病原因致病原因1.侵袭力侵袭力有有Vi抗原含有侵袭力，穿过小肠抗原含有侵袭力，穿过小肠上皮被吞噬后，因为上皮被吞噬后，因为Vi抗原保护抗原保护,反反而在细胞内繁殖，并随吞噬细胞至机体而在细胞内繁殖，并随吞噬细胞至机体其它部位，故称细胞内寄生菌。其它部位，故称细胞内寄生菌。肠杆菌科知识培训第34页2.内毒素内毒素有较强内毒素，可引发发烧，白有较强内毒素，可引发发烧，白细胞改变，中毒性休克，并能激活细胞改变，中毒性休克，并能激活补体，造成一系列病理生理改变。补体，造成一系列病理生理改变。3.肠毒素肠毒素一些沙门菌一些沙门菌(如鼠伤寒沙门菌如鼠伤寒沙门菌)能产能产生类似大肠埃希菌肠毒素。生类似大肠埃希菌肠毒素。肠杆菌科知识培训第35页(二二)所致疾病所致疾病1.胃肠炎胃肠炎最常见，引发腹泻，伴有低热，恶心最常见，引发腹泻，伴有低热，恶心和呕吐。和呕吐。2.菌血症或败血症菌血症或败血症以猪霍乱沙门菌感染为多，表现为高热以猪霍乱沙门菌感染为多，表现为高热寒战。常伴有胆囊炎、骨髓炎。血培养寒战。常伴有胆囊炎、骨髓炎。血培养阳性而便培养阴性。阳性而便培养阴性。3.肠热症肠热症由伤寒沙门菌引发。血培养或肥达反应由伤寒沙门菌引发。血培养或肥达反应阳性。经口感染，穿过小肠上皮抵达淋阳性。经口感染，穿过小肠上皮抵达淋巴结，进入血流，第一次菌血症。出现巴结，进入血流，第一次菌血症。出现发烧等症状。发烧等症状。肠杆菌科知识培训第36页随血流播散至肝、脾等器官中继续繁随血流播散至肝、脾等器官中继续繁殖，再次进入血流扩散，第二次菌血症，殖，再次进入血流扩散，第二次菌血症，出现连续高热、肝脾肿大、皮疹和全身中出现连续高热、肝脾肿大、皮疹和全身中毒症状。细菌随胆汁进入肠腔，经粪便排毒症状。细菌随胆汁进入肠腔，经粪便排出。出。潜伏期潜伏期720天，经典病程天，经典病程3-4周，发病周，发病2周后机体出现免疫反应，使疾病好转，周后机体出现免疫反应，使疾病好转，但同时也引发迟发性变态反应，造成肠壁但同时也引发迟发性变态反应，造成肠壁淋巴结坏死溃疡，可造成肠穿孔而危及生淋巴结坏死溃疡，可造成肠穿孔而危及生命。命。4.携带者携带者约约3患者成为携带者，粪便连续排菌达患者成为携带者，粪便连续排菌达1年以上。年以上。肠杆菌科知识培训第37页三、微生物特征三、微生物特征1.形态染色形态染色G-杆菌细长，杆菌细长，1.03.0m,有鞭毛，有鞭毛，无芽胞无芽胞和荚膜。和荚膜。2.抗原结构有抗原结构有3种种:O抗原为多糖抗原为多糖类脂类脂蛋白质复合物，能耐蛋白质复合物，能耐受受1002.5h。共有。共有58种，是分群依据种，是分群依据,凡凡含共同抗原血清型归为一个群，沙门菌含含共同抗原血清型归为一个群，沙门菌含一个或数种一个或数种O抗原抗原,每群以每群以O加上数字及括号加上数字及括号大写英文字母次序编排，如大写英文字母次序编排，如02群群(A)，Z以后以后直接加数字表示，如直接加数字表示，如051群。刺激机体产生群。刺激机体产生IgM抗体抗体,与对应抗血清反应呈颗粒状凝集。与对应抗血清反应呈颗粒状凝集。肠杆菌科知识培训第38页H抗原抗原为蛋白质抗原，加热被破坏。有两个为蛋白质抗原，加热被破坏。有两个相相,第一相当特异相，用第一相当特异相，用a、b、c表示表示,是定型依据。刺激机体产生是定型依据。刺激机体产生IgG抗体抗体,与对应抗血清呈絮状反应。与对应抗血清呈絮状反应。表面抗原表面抗原为为Vi抗原有保护作用。可阻止抗原有保护作用。可阻止O抗原抗原与对应抗体发生凝集，故在沙门菌血与对应抗体发生凝集，故在沙门菌血清学判定时应加以注意。清学判定时应加以注意。肠杆菌科知识培训第39页三、微生物特征三、微生物特征3.培养特征培养特征兼性厌氧，生长温度兼性厌氧，生长温度3537，最适，最适生长生长pH为为6.87.8;营养要求不高，在肠道营养要求不高，在肠道选择性培养基上因不发酵乳糖形成透明菌选择性培养基上因不发酵乳糖形成透明菌落，在落，在SS琼脂上形成黑色菌落。琼脂上形成黑色菌落。4.抵抗力抵抗力不强，加热不强，加热601h或或6520min，在水，在水中能活中能活23周，粪便中呵存活周，粪便中呵存活12个月个月5.变异性变异性有有S-R变异、变异、H-O变异和位相变异等具变异和位相变异等具有双相有双相H抗原菌变成单相菌抗原菌变成单相菌。肠杆菌科知识培训第40页四、微生物检验四、微生物检验1.采集标本采集标本伤寒沙门菌发病第伤寒沙门菌发病第l周取血。第周取血。第2、3周取粪便、尿液做培养分离率高。周取粪便、尿液做培养分离率高。2.直接镜检直接镜检革兰阴性杆菌。直接用胶乳凝集试验革兰阴性杆菌。直接用胶乳凝集试验检测病人标本或增菌培养物沙门菌抗检测病人标本或增菌培养物沙门菌抗原，可快速诊疗。原，可快速诊疗。肠杆菌科知识培训第41页3.分离培养与判定分离培养与判定惯用肠道判别培养基或选择培养惯用肠道判别培养基或选择培养基。在菌最较少时，血液和骨髓液基。在菌最较少时，血液和骨髓液分离培养用增菌肉汤。分离培养用增菌肉汤。35-37孵孵育，选择透明可疑菌落做判定。育，选择透明可疑菌落做判定。肠杆菌科知识培训第42页沙门菌判定沙门菌判定1.用生化试验将可疑菌落判定到属和种用生化试验将可疑菌落判定到属和种,基本基本生化反应特征：生化反应特征：TSIA(双糖铁双糖铁)产碱产酸产碱产酸或产碱产酸产气，或产碱产酸产气，H2S阳性、阳性、CIT(枸橼酸枸橼酸盐盐)阳或阴性、阳或阴性、URE(脲酶脲酶)阴性、阴性、IND(吲哚吲哚)阴性、阴性、MOT(动力动力)阳性、阳性、VP阴性、阴性、ORN(鸟鸟氨酸氨酸)阳性。凡临床分离菌乳糖、吲哚阳性，阳性。凡临床分离菌乳糖、吲哚阳性，或脲酶阳性者，均不考虑为沙门菌。或脲酶阳性者，均不考虑为沙门菌。肠杆菌科知识培训第43页2.血清学分型：血清学分型：用抗血清对所分离菌种用抗血清对所分离菌种O抗原、抗原、Vi抗原、第一、二相抗原、第一、二相H抗原进行凝集试抗原进行凝集试验。先用多价验。先用多价O抗血清抗血清(A-F)进行分群进行分群，95以上都属以上都属A-F群，对早期诊疗群，对早期诊疗有主要意义。再分别用单价因子血清有主要意义。再分别用单价因子血清定群，用定群，用H因子血清检验因子血清检验H抗原。抗原。综合综合O、H及及Vi因子血清检验结因子血清检验结果进行判断。果进行判断。肠杆菌科知识培训第44页(五五)抗体检测抗体检测(肥达反应肥达反应)用已知伤寒、副伤寒沙门菌用已知伤寒、副伤寒沙门菌O、H抗原，检测受检血清中有没有对应抗体抗原，检测受检血清中有没有对应抗体半定量试管内凝集试验，称为肥达反半定量试管内凝集试验，称为肥达反应。能辅助诊疗伤寒，甲、乙、丙型副应。能辅助诊疗伤寒，甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引发肠热症。伤寒沙门菌引发肠热症。肠杆菌科知识培训第45页1.方法方法将受检血清用生理盐水作倍比稀将受检血清用生理盐水作倍比稀释，分别加入等量伤寒沙门菌释，分别加入等量伤寒沙门菌O、H抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙H抗原，进行试管内凝集试验，凡抗原，进行试管内凝集试验，凡血清最高稀释度出现显著凝集者为血清最高稀释度出现显著凝集者为凝集效价。凝集效价。肠杆菌科知识培训第46页2.结果解释结果解释(1)正常值：各地域有所不一样，正常值：各地域有所不一样，O80,H1：160，A、B，Cl：80；或第二份血清效价增高或第二份血清效价增高4倍以上含有倍以上含有诊疗意义。诊疗意义。(2)O抗原抗体为抗原抗体为IgM，出现较早，出现较早，H抗体为抗体为IgG，出现较迟。，出现较迟。O高高H不高不高,可能为疾病早期；可能为疾病早期；周后复查如升高周后复查如升高为肠热症。为肠热症。H高高O不高，可能以往不高，可能以往患过伤寒或接收过预防接种，为回想患过伤寒或接收过预防接种，为回想反应。反应。肠杆菌科知识培训第47页、分、分类类将志贺菌属分为将志贺菌属分为4个血清群个血清群(种种)：A群为群为痢疾志贺菌；痢疾志贺菌；B群为福氏志贺菌；群为福氏志贺菌；C群为鲍群为鲍特志贺菌；特志贺菌；D群为宋内志贺菌。群为宋内志贺菌。最近将生化性状相近最近将生化性状相近A、B，C群归为群归为一群，统称志贺菌一群，统称志贺菌A、B、C血清群；而将血清群；而将生化特征与之相异，鸟氨酸脱羧酶和生化特征与之相异，鸟氨酸脱羧酶和-半半乳糖苷酶均阳性宋内志贺菌单列出来。乳糖苷酶均阳性宋内志贺菌单列出来。DNAG+Cmol为为4953。第四节 志贺菌属肠杆菌科知识培训第48页二、临床意义二、临床意义(一一)致病原因致病原因1.侵袭力侵袭力因菌毛作用，细菌粘附在肠粘膜表面因菌毛作用，细菌粘附在肠粘膜表面;2.内毒素内毒素造成粘膜细胞死亡发炎，并形成毛细血造成粘膜细胞死亡发炎，并形成毛细血管血栓，造成坏死脱落和溃疡，临床出现管血栓，造成坏死脱落和溃疡，临床出现脓血便；并引发全身中毒症状，造成发烧脓血便；并引发全身中毒症状，造成发烧、意识障碍，甚至中毒性休克；、意识障碍，甚至中毒性休克；3.外毒素外毒素A群志贺菌群志贺菌和和型产生志贺毒素，有型产生志贺毒素，有细胞毒、肠毒素和神经毒等生物学活性。细胞毒、肠毒素和神经毒等生物学活性。肠杆菌科知识培训第49页(二二)所致疾病所致疾病有以下有以下3种临床类型：种临床类型：1急性细菌性痢疾急性细菌性痢疾表现为腹痛发烧，有里急后重现象表现为腹痛发烧，有里急后重现象,便中含有粘液和血。极少进血流，中毒便中含有粘液和血。极少进血流，中毒性菌痢见于小儿，常无消化道症状而表性菌痢见于小儿，常无消化道症状而表现为全身中毒症状，往往造成死亡。现为全身中毒症状，往往造成死亡。肠杆菌科知识培训第50页2.慢性细菌性痢疾慢性细菌性痢疾菌痢治疗不彻底，造成重复发作菌痢治疗不彻底，造成重复发作迁延不愈，超出迁延不愈，超出2个月视为慢性菌个月视为慢性菌痢；痢；3.携带者携带者有恢复期带菌、慢性带菌和健康有恢复期带菌、慢性带菌和健康带菌等带菌等3种，是主要传染源。种，是主要传染源。肠杆菌科知识培训第51页三、微生物特征三、微生物特征1.G-杆菌，菌体短小，无芽胞荚膜和鞭杆菌，菌体短小，无芽胞荚膜和鞭毛，有菌毛毛，有菌毛2.抗原成份抗原成份有群和型特异性两种有群和型特异性两种O抗原，是分类依抗原，是分类依据据依依据据生生化化反反应应和和O抗抗原原不不一一样样，分分为为A、B、C、D4个血清群和个血清群和40余个血清型。余个血清型。O抗抗原原耐耐热热，加加热热100、60min不不被被破破坏坏。K抗原能阻断抗原能阻断O凝集。凝集。肠杆菌科知识培训第52页3.变异性变异性有有S-R变异、耐药性变异。多重耐药性变异、耐药性变异。多重耐药性问题己成为严重医学问题。问题己成为严重医学问题。4.培养特征培养特征兼性厌氧，生长温度兼性厌氧，生长温度37，pH7.27.4。营养要求不高，能在普通培养基上生。营养要求不高，能在普通培养基上生长。在判别培养基上形成无色半透明长。在判别培养基上形成无色半透明菌落。菌落。5.抵抗力抵抗力比其它肠道细菌抵抗力低，在比其它肠道细菌抵抗力低，在1石炭酸石炭酸中中15-30min和加热和加热6010min即被杀死即被杀死肠杆菌科知识培训第53页四、微生物检验四、微生物检验1.标本采集标本采集在治疗前采集粘液脓血便作床边在治疗前采集粘液脓血便作床边接种，不能及时接种可置甘油保留接种，不能及时接种可置甘油保留液送检液送检;2.直接镜检直接镜检G-杆菌。胶乳凝集试验和免疫荧杆菌。胶乳凝集试验和免疫荧光技术检测抗原。光技术检测抗原。肠杆菌科知识培训第54页3.核酸检测核酸检测志贺菌携带一个非结合型大质粒志贺菌携带一个非结合型大质粒,能能编码与侵袭性相关外膜蛋白编码与侵袭性相关外膜蛋白,是产是产生痢疾综合征主要致病因子生痢疾综合征主要致病因子,从中从中2.5kb侵袭相关区段中设计出侵袭相关区段中设计出ipaH引引物物,可用于检测志贺菌序列。可用于检测志贺菌序列。4.分离培养分离培养用判别培养基和选择培养基用判别培养基和选择培养基,取可疑取可疑菌落判定。菌落判定。肠杆菌科知识培训第55页志贺菌判定（志贺菌判定（1）1.生化试验生化试验判定到属和种判定到属和种基本生化反应特征基本生化反应特征:TSIA(双糖铁双糖铁)产碱产酸、不产气产碱产酸、不产气,CIT(枸橼酸盐枸橼酸盐)阴性阴性,URE(脲酶脲酶)阴阴性性,MOT(动力动力)阴性阴性,YP阴性。阴性。肠杆菌科知识培训第56页志贺菌判定（志贺菌判定（2）2.血清学判定血清学判定先用志贺菌属先用志贺菌属4种多价种多价(A群群1，2型、型、B群群16型、型、C群群l6型及型及D群群)作玻片凝集试作玻片凝集试验，凝集者再深入作定型。验，凝集者再深入作定型。A群：即痢疾志贺菌，为一群甘露醇阴性群：即痢疾志贺菌，为一群甘露醇阴性菌株，共有菌株，共有10个血清型个血清型(1)0)，其，其O抗抗原从原从1X共共10种均为独立血清理，种均为独立血清理，肠杆菌科知识培训第57页群：即福氏志贺菌，有群：即福氏志贺菌，有6个血清型个血清型和和X、Y2个变型。个变型。6型菌株缺乏共同型菌株缺乏共同群抗原，故多价血清中应包含群抗原，故多价血清中应包含6型因型因子血清，不然将会造成漏检。子血清，不然将会造成漏检。C群：即鲍特志贺菌。本菌共有群：即鲍特志贺菌。本菌共有15个个血清群，血清群，D群：即宋内志贺菌：仅有群：即宋内志贺菌：仅有个血清个血清型，但有光滑型型，但有光滑型(S)和粗糙型和粗糙型(R)两种茵两种茵落落;R型菌型菌不被不被S型血清所凝集；所以诊型血清所凝集；所以诊断血清应含有断血清应含有S及及R两种因子血清两种因子血清肠杆菌科知识培训第58页包含包含3种人类致病菌：鼠疫耶尔森种人类致病菌：鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌。还可从临床标本中分离到弗尔森菌。还可从临床标本中分离到弗氏、中间、克氏、舆氏、伯氏、莫氏氏、中间、克氏、舆氏、伯氏、莫氏、罗氏和鲁氏等、罗氏和鲁氏等8种耶尔森菌。种耶尔森菌。第五节 耶尔森菌属肠杆菌科知识培训第59页一、鼠疫耶尔森菌一、鼠疫耶尔森菌(一一)临床意义临床意义是烈性自然疫源性传染病鼠疫是烈性自然疫源性传染病鼠疫病原菌。病原菌。1致病原因致病原因有内毒素和鼠毒素两种毒素。鼠有内毒素和鼠毒素两种毒素。鼠毒素与毒力相关，作用于心血管系毒素与毒力相关，作用于心血管系统，引发不可逆性休克与死亡，该统，引发不可逆性休克与死亡，该毒素存在于细胞内，菌细胞裂解或毒素存在于细胞内，菌细胞裂解或白溶后释放。白溶后释放。肠杆菌科知识培训第60页2临床类型临床类型1)腺鼠疫：局部淋巴结腺鼠疫：局部淋巴结(多为腹股沟淋多为腹股沟淋巴结巴结)肿胀、坏死和脓肿；肿胀、坏死和脓肿；2)败血型鼠疫：由细菌侵入血流大量败血型鼠疫：由细菌侵入血流大量繁殖所致。可在繁殖所致。可在2-3天内死亡；天内死亡；3)肺鼠疫：由腺鼠疫、败血型鼠疫继肺鼠疫：由腺鼠疫、败血型鼠疫继发而成，可经过呼吸道在人与人之发而成，可经过呼吸道在人与人之间直接传输，引发原发性肺鼠疫，间直接传输，引发原发性肺鼠疫，死亡率极高。死亡率极高。肠杆菌科知识培训第61页(二二)微生物特征微生物特征1.G-杆状，杆状，0.51.0m，两极浓染，两极浓染，有荚膜，无芽胞和鞭毛。有荚膜，无芽胞和鞭毛。2.抗原结构结构复杂，主要有抗原结构结构复杂，主要有(1)F1抗原抗原:是封套抗原。特异性高，抗原是封套抗原。特异性高，抗原性强，产生抗体有良好保护作性强，产生抗体有良好保护作用用;(2)VW抗原：是菌体表面抗原：是菌体表面抗原，与本菌毒力和侵袭力相关。抗原，与本菌毒力和侵袭力相关。(3)T抗原：为为鼠毒素抗原：为为鼠毒素,有良好抗有良好抗原性和免疫原性，可脱毒成类毒素原性和免疫原性，可脱毒成类毒素制成抗毒素。制成抗毒素。肠杆菌科知识培训第62页3.兼性厌氧，生长温度为兼性厌氧，生长温度为2730，最，最适适pH为为6.97.2,血琼脂培养血琼脂培养48h后形成后形成粗糙菌落，肉汤培养粗糙菌落，肉汤培养48h后形成菌膜，稍后形成菌膜，稍加摇动后菌膜钟乳石状下垂；本菌动加摇动后菌膜钟乳石状下垂；本菌动力为阴性；力为阴性；IMViC试验反应模式为试验反应模式为+、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、硫化氢、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、硫化氢均为阴性；不液化明胶，当穿刺培养时均为阴性；不液化明胶，当穿刺培养时菌沿穿刺线纵树状发育；分解葡萄糖产菌沿穿刺线纵树状发育；分解葡萄糖产酸不产气，对多数糖不分解：酸不产气，对多数糖不分解：肠杆菌科知识培训第63页(三三)微生物检验微生物检验鼠疫耶尔森菌传染性极强，故应严格恪守操鼠疫耶尔森菌传染性极强，故应严格恪守操作规程，一旦疑为本菌，应马上向省市疾病控作规程，一旦疑为本菌，应马上向省市疾病控制中心等部门汇报，并将菌种送检验中心或专制中心等部门汇报，并将菌种送检验中心或专业试验室作深入判定。鼠疫确实诊主要依业试验室作深入判定。鼠疫确实诊主要依赖赖病病原原学学诊诊疗疗，须须经经全全方方面面生生化化反反应应、噬噬菌菌体体裂裂解试验和动物试验才得以作出最终判定。诊疗解试验和动物试验才得以作出最终判定。诊疗确立后除对患者进行隔离治疗外，对疫区及有确立后除对患者进行隔离治疗外，对疫区及有关人员须采取有效预防隔离办法，预防疫情关人员须采取有效预防隔离办法，预防疫情扩散。扩散。肠杆菌科知识培训第64页二、小肠结肠炎耶尔森菌二、小肠结肠炎耶尔森菌天然借居在各种动物体内，如猪、鼠天然借居在各种动物体内，如猪、鼠、家畜和兔等。经过污染食物、家畜和兔等。经过污染食物(牛奶、猪牛奶、