安顺市羊场腹泻羔羊的大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析.pdf

安顺市羊场腹泻羔羊的大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析安顺市羊场腹泻羔羊的大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析张洪浩 申茂恒 陈浩林 蒲 龄(.安顺市动物卫生监督所贵州 安顺 .贵州省农业科学院畜牧兽医研究所贵州 贵阳)摘要:为了解贵州省安顺市腹泻羔羊大肠杆菌的感染及耐药情况 年在全市各养羊场采集腹泻羔羊的肛门拭子、粪便、肠道内容物样品共 份采用分离培养、技术鉴定大肠杆菌用 纸片法对分离的大肠杆菌进行药敏试验 结果:共分离出 株大肠杆菌分离率为.分离菌株对氟苯尼考的耐药率最高达到.对氨苄西林、大观霉素、庆大霉素的耐药率较高分别为.、.、.对阿莫西林、恩诺沙星、红霉素、多粘菌素、新霉素、多西环素的耐药率次之分别为.、.、.、.、.、.对林可霉素、环丙沙星的耐药率较低分别为.、.结论:安顺市羊场腹泻羔羊的大肠杆菌感染率较高分离菌株对多种抗菌药物耐药 临床上应科学使用抗菌药建议采用疫苗精准使用抗菌药替抗产品生物安全的综合措施加强羔羊大肠杆菌病的防控关键词:安顺市腹泻羔羊大肠杆菌药敏试验中图分类号:.文献标识码:文章编号:()大肠杆菌(大肠埃希氏菌)为革兰氏阴性短小杆菌广泛存在于动物体内、粪便及环境中是 种条件致病菌 羔羊大肠杆菌病临床表现为剧烈腹泻、败血症、脱水、发热、食欲减退可导致生长发育不良甚至死亡愈后羊生产性能下降 大肠杆菌血清型复杂不同菌株的耐药谱差异较大在全国广泛开展“兽用抗菌药使用减量化行动”大背景下通过细菌耐药性监测指导临床抗菌药物的收稿日期:资金项目:“贵州黑山羊肉用新品系阶段化培育与梅花鹿特定生产目的群体构建与示范”贵州省科技计划项目黔科服企()“贵州黑山羊生态养殖关键技术集成与示范”国家重点研发计划()作者简介:张洪浩()男硕士兽医师研究方向:动物疫病监测与防制:.通信作者:蒲龄()女硕士兽医师研究方向:畜禽疫病监测与防控:.使用显得尤为重要 本研究通过对贵州省安顺市羊场腹泻羔羊进行大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析以期为当地羊场科学使用抗菌药提供参考 材料与方法.检测样品 年采集腹泻羔羊的肛门拭子 份、粪便 份、肠道内容物 份病料样品共 份采样地点覆盖安顺市西秀区(份)、平坝区(份)、关岭自治县(份)的各养羊场.主要试剂 液体培养基、固体培养基、液体培养基、固体培养基、麦康凯培养基(均购自青岛海博生物技术有限公司)药敏纸片(购自杭州天和微生物制剂有限公司)细菌 提取试剂盒、(均购自北京世纪康为生物科技有限公司)季)原因可能是秋季天气变凉昼夜温差大动物抵抗力下降导致猫更易感染弓形虫 本次调查结果表明猫感染弓形虫与其饲养区域、环境、年龄、季节均有密切关系 弓形虫病作为 种重要的人兽共患寄生虫病有潜在的公共卫生安全隐患 下一步应全面开展监测分析掌握西安市家养动物弓形虫病的感染情况和规律提出预防策略降低感染率保障人和动物健康 参考文献 张渊.新疆乌鲁木齐市宠物犬、猫弓形虫感染情况调查及分析.乌鲁木齐:新疆农业大学.徐斌董春霞陈忠琼等.重庆市犬和猫弓形虫病的血清学调查.动物医学进展():.徐斌张夏兰董春霞等.重庆地区猪弓形虫病流行病学调查研究.动物医学进展():.():.():.王雪郑雪莹拱海鸥等.北京地区猫弓形虫感染流行病学风险分析.中国兽医杂志():.张丹英.厦门市宠物医院犬猫弓形虫病血清学调查.福建畜牧兽医():.何丹王金秋王文利等.犬猫肿瘤的细胞学与组织病理学联合诊断研究.北京农业职业学院学报():.田义.北京市房山区宠物犬猫弓形虫病流行病学调查.北京农业职业学院学报():.贵州畜牧兽医 年 第 卷 第 期 提取试剂盒购(购自宝日医生物技术有限公司)核酸染料(购自北京索莱宝科技有限公司)引物(上海生工生物有限公司合成).主要仪器 仪(型号:美国伯乐科技有限公司)、水平电泳仪(型号:北京六一生物科技有限公司)、凝胶成像系统(型号:美国伯乐科技有限公司)、单人垂直超净工作台(型号:无锡净化设备有限公司)、立式压力蒸汽灭菌器(型号:上海博迅医疗生物仪器股份有限公司).细菌培养与分离鉴定.细菌培养及染色镜检在超净工作台内用一次性灭菌棉签蘸取粪便和肠道内容物至 液体培养基将肛门拭子直接放入 液体培养基 /培养 用接种环将培养物接种至 固体培养基 培养箱内倒置培养 用接种环挑取单菌落接种至麦康凯培养基挑取形态、颜色疑似大肠杆菌的单个菌落接种于 液体培养基内纯化培养 取纯培养物进行革兰氏染色镜检观察菌体特征.鉴定按照细菌 提取试剂盒说明书方法提取细菌 以大肠杆菌 基因(登录号:.)为参照序列使用 软件设计特异引物:(值 预扩增长度 )反应体系:.上、下游引物(/)各 .反应程序:预扩增 共 个循环 延伸 以沙门氏菌 为阴性对照以大肠杆菌标准菌株()为阳性对照.药敏试验参照美国临床实验室标准化协会()年推荐的标准药敏试验法细菌在 液体培养基 振荡培养 用生理盐水调整菌液浓度为/取菌液 用一次性灭菌棉签涂布至 固体培养基分别贴上含 种药物的药敏纸片 培养 测定抑菌圈直径每个抑菌圈测量 次取平均值 药敏试验判定标准见表 表 大肠杆菌药敏试验判定标准药物名称 抑菌圈直径/耐药()中介()敏感()头孢噻肟 阿莫西林 氨苄西林 续表 药物名称 抑菌圈直径/耐药()中介()敏感()新霉素 庆大霉素 氟苯尼考 多西环素 红霉素 恩诺沙星 环丙沙星 大观霉素 林可霉素 多粘菌素 结果与分析.分离菌特征分离菌在 固体培养基上呈水润透明的白色菌落(见图)在麦康凯培养基上呈玫红色、光滑、边缘整齐的圆形菌落(见图)革兰氏染色镜检为红色、短杆状细菌与革兰氏阴性菌特征相符(见图)图 琼脂培养基生长菌落图 麦康凯培养基生长菌落图 细菌革兰氏染色镜检().细菌 鉴定结果 扩增产物长度为 (见图)与预期片段相符鉴定为大肠杆菌 贵州畜牧兽医 年 第 卷 第 期:阳性对照:分离菌:阴性对照图 分离菌株 鉴定.大肠杆菌分离情况由表 可见:份样品共分离出 株大肠杆菌总分离率为.其中肠道内容物的大肠杆菌分离率最高为.(/)肛门拭子、粪便的分离率较低分别为.(/)、.(/)表 大肠杆菌分离情况样品类型样品/份分离菌/株分离率/肛门拭子.粪便.肠道内容物.合计.药物敏感性由表 可见:株大肠杆菌对氟苯尼考的耐药率最高达到.(/)对氨苄西林、大观霉素、庆大霉素的耐药率较高分别为.(/)、.(/)、.(/)对阿莫西林、恩诺沙星、红霉素、多粘菌素、新霉素、多西环素的耐药率次之分别为.(/)、.(/)、.(/)、.(/)、.(/)、.(/)对林可霉素、环丙沙星的耐药率较低分别为.(/)、.(/)表 分离大肠杆菌的耐药情况抗菌药物耐药菌/株中敏菌/株敏感菌/株耐药率/头孢噻肟.阿莫西林.氨苄西林.新霉素.庆大霉素.氟苯尼考.多西环素.红霉素.恩诺沙星.环丙沙星.大观霉素.林可霉素.多粘菌素.结论安顺市羊场腹泻羔羊的大肠杆菌感染率较高分离菌株对多种抗菌药物耐药 临床上应科学使用抗菌药建议采用疫苗精准使用抗菌药替抗产品生物安全的综合措施加强羔羊大肠杆菌病的防控 讨论滥用抗生素引起大肠杆菌的耐药选择性压力使临床防控难度加大因此对临床分离的大肠杆菌进行耐药表型分析并筛选敏感药物有重要的现实意义 本试验从安顺市羊场采集 份样品共分离出 株大肠杆菌总分离率为.说明大肠杆菌在安顺市羊场中感染率较高具有流行性特征对分离的大肠杆菌进行耐药表型检测氟苯尼考的耐药率高达.氨苄西林、大观霉素、庆大霉素、阿莫西林、恩诺沙星、红霉素、多粘菌素的耐药率均在 以上说明该地区的羊大肠杆菌对常见抗菌药物产生了较大的耐药性 冯杰等在宁夏地区羊场采集 份样品分离出 株大肠埃希氏菌分离率为.与本试验在安顺市的分离率相近且耐药类型与本试验一致氟苯尼考的耐药率最高不同地区、不同养殖场因地域环境和用药情况不同该菌的耐药表型结果各不相同 据报道内蒙古、四川等地羊场分离的大肠杆菌对阿莫西林耐药率为 提示应慎重选用阿莫西林作为治疗药物徐海军等分离的羊源大肠杆菌对卡那霉素、新霉素、阿莫西林、庆大霉素、红霉素等耐药根据耐药表型结果选择头孢噻呋钠搭配中药麻杏石甘散病情很快得到了控制 对于大肠杆菌的防治除科学合理使用抗菌药外还应采用血清型一致的疫苗进行适时免疫预防结合中兽药、噬菌体等替抗产品加强生物安全措施以实现科学、高效、安全防控 参考文献 江婉琳徐双军刘雨欣等.新疆阿克苏地区奶牛粪源大肠杆菌分型与耐药性分析.中国兽医学报():.范琳琳.羔羊大肠杆菌病的临床症状、剖检变化、实验室诊断和防控措施.现代畜牧科技():.张学海马铁柱.规模化养羊场羔羊大肠杆菌病的治疗.中国动物保健():.赵朋宽.河南省濮阳市犊牛腹泻大肠杆菌分离鉴定及生物学特性分析.中国动物检疫():.杨翠仙.抗菌药物耐药性研究进展.中国药物经济学():.冯杰马剑钢张新等.宁夏地区羊源大肠埃希氏菌的分离鉴定及耐药性检测.动物医学进展():.刘正明李金泉黄德浩等.内蒙古地区羊源大肠杆菌耐药性研究.中国畜牧兽医():.崔羽茜丹雨晴武慧敏等.株羊源大肠埃希氏菌的分离鉴定及相关耐药基因的研究.动物医学进展():.徐海军李小红爨淑楠等.山羊肺源肠外致病型大肠杆菌的分离鉴定、耐药性测定和毒力基因检测.西北农业学报():.贵州畜牧兽医 年 第 卷 第 期