UPLC-MS_MS法同时测定发酵面制品中7种甜味剂.pdf

第34卷第3期2023年9月广 西 科 技 大 学 学 报JOURNAL OF GUANGXI UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGYVol.34No.3Sept.2023UPLC-MS/MS法同时测定发酵面制品中7种甜味剂蒋叶灵1，侯绪和*2，吕保樱2（1.桂林市食品药品检验所，广西桂林541200；2.广西科技大学医学部，广西柳州545005）摘要：应用超高效液相色谱-串联质谱法（ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）实现发酵面制品的7种甜味剂（糖精钠、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、阿力甜、纽甜、三氯蔗糖）同时检测。样品经机械震荡、超声萃取，亚铁氰化钾溶液和乙酸锌沉淀蛋白，经0.22 m滤膜过滤预处理，以Agilent Eclipse Plus C18柱（2.1 mm50.0 mm，1.8 m）和乙腈-水为流动相梯度洗脱；电喷雾负离子模式（ESI-）下采用多重反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）模式进行分段采集。实验结果：7种甜味剂在0.010.50 g/mL浓度范围内线性关系较好，相关系数r2均大于0.999 1，检出限为3.010-63.010-4g/kg，定量限为1.010-51.010-3g/kg，样品平均加标回收率为84.5%96.5%，相对标准偏差为1.3%8.1%（n=6）。实验结果表明：该方法快速、准确、重现性好，在各种发酵面制品检测中有广泛的应用前景。关键词：甜味剂；发酵面制品；超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）中图分类号：TS213.2DOI：10.16375/45-1395/t.2023.03.0180引言发酵面制品是指以面粉为主要成分，经由和面-发酵-熟制而成的一类食品，包括馒头、包子、花卷、蒸糕等，是我国北方居民的主要粮食，占其主食的70%以上1，其中馒头是60%以上消费者的主食2。可见发酵面制品在人们的生活中占据着重要的地位。甜味剂能够增加食品的甜度，增强食品的口感3。目前，我国使用的甜味剂主要有安赛蜜、三氯蔗糖、甜蜜素、糖精钠、纽甜等化学合成甜味剂。化学合成甜味剂的长期大量摄入可能会引起肠道菌群结构和组成改变，使用量过大可导致血糖高、葡萄糖不耐受等代谢系统疾病，甚至会导致脾气暴躁、性格压抑、记忆力衰退、阿尔兹海默症等神经系统异常及致癌4-7。在 食品安全国家标准食品添加剂使用标准（GB 27602014）8中规定发酵面制品中均不得使用上述化学合成甜味剂，然而部分商家为了追求经济效益，存在滥用、违规使用等不规范行为。常用的化学合成甜味剂检测方法主要有气相色谱法9-10、离子色谱法11、高效液相色谱法12-14、高效液相色谱-串联质谱法（ultra-high performance liquidchromatography-tandemmassspectrometry，UPLC-MS/MS）15-16等。使用气相色谱法进行检测需要进行衍生化处理后方能使用，操作繁琐，在食品检验中适用度不高17-18。离子色谱法检测合成甜味剂时对样品基质要求纯净，而食品基质复杂性高，离子色谱法适用度较差。高效液相色谱法是合成甜味剂检测中最为常用的检测方法19，同时高效液相色谱法也是 食品安全国家标准食品中阿斯巴甜和阿力甜的测定（GB 5009.2632016）20和食品中糖精钠的测定（GB/T 5009.282003）21规定使用的测定方法。但由于发酵面制品中存在泡打粉等影响因素，存在基质干扰引起的假阳性现象22，并且在现行标准中也未有将7种合成甜味剂在高效液相色谱法中同时检测的方法。因此，开发发酵面制品中合成甜味剂同时检测的新方法是目前亟待解决的问题。本研究基于超高效液相色谱-串联质谱法，建立了同时检测发酵面制品的7种甜味剂（糖精钠、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、阿力甜、收稿日期：2023-02-03基金项目：广西科技基地和人才专项（桂科AD19110002）资助第一作者：蒋叶灵，本科，工程师，研究方向：食品安全与检测*通信作者：侯绪和，博士，助理研究员，研究方向：化学分析，E-mail：第3期蒋叶灵等：UPLC-MS/MS法同时测定发酵面制品中7种甜味剂纽甜、三氯蔗糖）的方法。该方法利用了超高效液相色谱柱效高的特点，分离度高，分析速度快，色谱峰更尖锐使得信噪比增大，从而提高分析灵敏度，解决了复杂基质的多组分同时测定的问题。由于UPLC-MS/MS选择性高、灵敏度好，因此在食品监督检测中有广泛的应用前景，并可提高监管效率，为市场上此类食品的安全检测提供参考，具有一定的社会效益。1材料与方法1.1材料、仪器与试剂样品：马拉糕、馒头、花卷、包子共50批，均购于本地超市和商店。仪器：超高压三重四极杆液质联用仪（型号：Agilent 1290-646，安捷伦科技有限公司）；电子天平（型号：XS205DU，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；Multi Reax涡旋振荡器（德国海道夫集团）；超声波清洗器（型号：DTA-42，鼎泰（湖北）生化科技设备制造有限公司）；冷冻离心机（型号：ROTANTA460R，德国Hettich有限公司）；SYNS00000密理博超纯水机（美国Millipore公司）。试剂：甲醇、乙腈（色谱纯），均为默克股份有限公司；甲酸（色谱纯）、乙酸铵（色谱纯），均为Fisher Scientific；亚铁氰化钾（分析纯）、乙酸锌（分析纯），均为西陇科学股份有限公司；微孔滤膜，0.22 m，天津市科亿隆实验设备有限公司。对照品：糖精钠（1 mg/mL，中国计量科学研究院，批号：GBW（E）100008-19001）；安赛蜜（质量分数：100%，StanfordChemicals，批号：ASF-785053-AP171106-18）；甜蜜素（质量分数：99.12%，Dr.Ehrenstorfer GmbH，批号：G140210）；阿斯巴甜（质量分数：99.50%，Stanford Chemicals，批号：ASP-841481-AL171106-06）；阿力甜（1 000 g/mL，TMstandard，批 号：3452006）；纽 甜（质 量 分 数：99.14%，Stanford Chemicals，批号：NT-230025）；三氯蔗糖（质量分数：98.41%，Stanford Chemicals，批号：24714XA-14658-036）。1.2实验方法1.2.1质谱条件离子源：电喷雾离子源，负离子模式（ESI-）；离子源温度：350；雾化气流速：5 L/min；鞘气温度：350；鞘气流速：11 L/min；雾化器电压：45psi；毛细管电压：-3 000V；扫描模式：多重反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）模式。1.2.2色谱条件液 相 色 谱 柱：Agilent Eclipse Plus C18 柱（2.1 mm50.0 mm，1.8 m）；进样体积：5 L；流速：0.3 mL/min；柱温：35；流动相：A-乙腈、B-纯水，流动相梯度洗脱条件见表1。表1流动相梯度洗脱条件时间/min015流动相A/%5590流动相B/%9595101.2.3对照品储备液的制备精密称取阿斯巴甜、纽甜、安赛蜜、三氯蔗糖、甜蜜素适量，分别用纯水（纽甜用0.1%甲酸水）配制成 1.078 6、1.037 0、1.228 0、1.089 4、0.893 1 mg/mL的单标储备液；精密移取糖精钠标准溶液2 mL，配制成0.760 mg/mL的储备液；阿力甜储备液（质量浓度1 000 g/mL）；于4 冰箱中保存。1.2.4混合标准中间液的配制精密吸取1.2.3对照品储备液中安赛蜜0.4 mL、糖精钠2 mL、甜蜜素0.2 mL、阿斯巴甜4 mL、三氯蔗糖 4 mL、纽甜 0.2 mL，阿力甜对照品原液0.04 mL定容至20 mL容量瓶中备用。1.2.5混合标准使用液的配制精密移取上述1.2.4混合标准中间液适量，加入空白基质定容至刻度，摇匀。制得混合标准使用液，含阿斯巴甜：10.786 0 mg/L，纽甜：0.518 5 mg/L，安赛蜜：1.228 0 mg/L，三氯蔗糖：10.894 0 mg/L，甜蜜素：0.446 6 mg/L，糖精钠：3.800 0 mg/L，阿力甜：0.100 0 mg/L。1.2.6样品处理发酵面制品实际样品处理测试：分别称取4份阴性样品各5 g，各精密加入1.2.4中混合标准中间液0.25 mL，分别加入纯水、20%甲醇-水、50%甲醇-水、70%甲醇-水25 mL，分别加入106 g/L亚铁氰化钾溶液和220 g/L乙酸锌溶液2.5 mL，涡旋10 min后定容至50 mL，超声15 min，经7 000 r/min 离心10 min，过0.22 m微孔滤膜后，待测。阴性样品处理：取2份阴性样品同法处理，得空白基质。1.2.7加标回收检测称取5 g不同种类发酵面制品阴性样品（代表不同基质基底），分别精密加入混合标准储备液（阿斯巴甜：10.786 0 mg/L，纽甜：0.518 5 mg/L，安赛133第34卷广 西 科 技 大 学 学 报蜜：1.228 0 mg/L，三氯蔗糖：10.894 0 mg/L，甜蜜素：0.446 6 mg/L，糖精钠：3.800 0 mg/L，阿力甜：0.100 0 mg/L）0.125 mL（低浓度水平）、0.250 mL（中浓度水平）、1.000 mL（高浓度水平），按1.2.6方法进行前处理，按上述优化好的色谱条件操作，对低、中、高3个浓度梯度水平的样品进行6次平行测定。2结果与讨论2.1质谱条件的优化分别使用5 mg/L各组分标准溶液依次采用直接进样的方式逐一进行测试，在ESI正离子和ESI负离子模式下分别进行MS2扫描，选择了响应力较强的激基缔合体的母离子，而糖精钠和安赛蜜在ESI正离子状态下无法寻找适当的母离子，所以首先使用ESI负离子方法进行测量。Product Ion 模式中选择各组分的最佳子离子和碎裂电压，在MRM模式中选定各组分子离子的碰撞能量。7种甜味剂的质谱MRM参数见表2。表27种甜味剂的质谱MRM参数化合物糖精钠安赛蜜甜蜜素阿斯巴甜阿力甜纽甜三氯蔗糖母离子质荷比182.0162.0178.0292.9330.2377.2395.0子离子质荷比105.742.2*81.8*77.9178.1*80.0260.9*199.8312.0*295.0300.9200.0*359.0碎裂电压/V1409075120130165120130120140155140碰撞能/eV18251235103041081513124注：*为定量离子。2.2色谱条件的优化2.2.1色谱柱的选择本研究分别考察了 Agilent Eclipse Plus C18（2.1 mm50.0 mm，1.8 m）、Agilent Poroshell 120SB-C8（2.1 mm100.0 mm，2.7 m）、Agilent SB-C18（2.1 mm50.0 mm，1.8 m）3种色谱柱，其高效液相色谱图见图1。通过图1可知，3种色谱柱中，Agilent Poroshell 120 SB-C8峰形有拖尾现象，保留时间为4.6 min，纽甜的峰不尖锐；Agilent SB-C18保留时间为3.4 min，峰有重叠，分离效果差；Agilent Eclipse Plus C18（简称C18）柱峰宽较窄，峰形尖锐，柱效高，分离效果最好。因为C18为全硅胶基键合18个碳的烷烃色谱柱，Agilent Poroshell 120SB-C8 为全硅胶基键合 8 个碳的烷烃色谱柱，而Agilent SB-C18具有较大的二异丁基（SB-C18）侧链基团，更适用于低pH值的体系。C18柱适合分离弱极性、中极性相对较弱的化合物，7种合成甜味剂均为极性相对偏弱的化合物，而发酵面制品基本上为弱碱性体系，因此，C18更为适用，本研究选择其作为本体系用色谱柱。102345010234560102345Agilent Eclipse Plus C18Agilent Poroshell 120 SB-C8Agilent SB-C18时间/min响应值/（102mAu）1110响应值/（102mAu）响应值/（102mAu）图1不同色谱柱高效液相色谱图2.2.2流动相的选择本研究分别对有机相和水相的选择进行优化。实验选取甲醇和乙腈作为有机相，对两者作为有机相的分离效果进行比较。结果表明，乙腈作为有机相进行检测时，其基线更低，峰形狭窄而尖锐，出峰时间较早，可以得到一个较好的分离效果。主要原因是乙腈在高效液相色谱（high performance liquidchromatography，HPLC）上的吸收小，因此基线较平稳。并且乙腈与水相混合压力较甲醇与水相混合压力更低，同样流速下柱压较低，出峰时间可以更早。对于甜味剂的合成，乙腈的洗脱能力较甲醇更强，可以有更好的分离效果。因此，在该体系中选择乙腈作为有机相流动相较好。以超纯水、摩尔浓134第3期蒋叶灵等：UPLC-MS/MS法同时测定发酵面制品中7种甜味剂度分别为10、30、50 mmol/L乙酸铵的4种水溶液作为水相，乙腈为有机相时，实验比较了7种甜味剂标样的定量离子对响应信号的强弱状况。实验结果表明：水相中乙酸铵浓度越高，化合物的响应就越低，以纯水为水相时响应最高。乙酸铵加入流动相主要是起到调节流动相pH值的作用，本体系测试中对pH值影响不大，乙酸铵的加入反而降低了化合物的响应，因此，本体系选择纯水作为水相流动。综上所述，本研究采用乙腈-纯水作为流动相。7种甜味剂混合标准溶液的定量离子对色谱图见图2。由图2可见，三氯蔗糖和阿斯巴甜的出峰时间有重叠，但可以通过选择不同的子离子来进行定性和定量分析，互不干扰。时间/min安赛蜜糖精钠甜蜜素三氯蔗糖阿斯巴甜阿力甜纽甜响应值/mAu103010301030103010201030103012345图27种甜味剂混合标准溶液的定量离子对色谱图2.3样品前处理的选择由分析各处理液所得数据可知：当用甲醇浓度过高的甲醇-水溶液处理甜蜜素和安赛蜜时，未检测到相应物质。甲醇浓度过高时，会造成甜蜜素和安赛蜜溶解度降低导致目标检测物的损失，降低体系检测灵敏度。纯水和20%甲醇-水溶液的各组分均能检出，其中纯水的各组分响应值大于20%甲醇-水的响应值。因此，本研究体系采用纯水作为前处理溶液。2.4方法学评价2.4.1线性关系、检出限和定量限将1.2.5的标准使用液用空白基质处理的稀释液稀释成标准系列，再按上述条件进行测试。以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标绘制标准曲线，得到各组分线性范围、线性方程、相关系数、检出限和定量限见表3。结果表明，7种甜味剂在其对应的线性范围内具有良好的线性关系，相关系数r2值均在0.999 0以上，检出限以S/N=3、定量限S/N=10进行计算，结果满足要求。表37种甜味剂的线性方程、相关系数、检出限和定量限化合物安赛蜜糖精钠甜蜜素三氯蔗糖阿斯巴甜阿力甜纽甜线性范围/（mgL-1）0.012 280.614 00.038 01.900 04.470 010-30.223 30.108 95.447 00.107 95.393 00.0010.0505.180 010-30.259 2线性方程y=75.22x+839.26y=32.81x540.92y=276.01x+177.30y=7.48x+304.45y=66.35x3 248.11y=768.66x217.46y=179.78x315.67相关系数r20.999 60.999 31.000 00.999 10.999 80.999 50.999 2检出限/（gkg-1）3.010-51.010-41.010-53.010-43.010-43.010-61.010-5定量限/（gkg-1）1.010-43.010-53.010-51.010-31.010-31.010-53.010-52.4.2回收率和精密度表4为不同面制品中7种甜味剂的加标回收率和精密度计算结果。表4中，添加量为标样计算数值，测得量为根据本体系优化后检测方法的测试结果，回收率=（测得量/添加量）100%。由表4可知，各目标化合物标准样品的平均加标回收率为84.5%96.5%，相对标准偏差（RSD）为1.3%8.1%。由此可见，本研究方法加标回收测试有良好的加标回收率，具有良好的准确度和精密度。135第34卷广 西 科 技 大 学 学 报表4不同面制品中7种甜味剂的加标回收率和精密度（n=6）化合物安赛蜜糖精钠甜蜜素三氯蔗糖阿斯巴甜阿力甜纽甜添加量/mg3.076.1424.569.5019.0076.001.122.238.9327.2454.47217.8826.9753.93215.720.250.502.001.302.5910.37马拉糕测得量/mg2.675.3521.348.3816.4267.410.951.947.8425.9552.18208.2923.2246.33185.950.220.441.731.162.269.19回收率/%87.287.286.988.286.488.785.386.787.895.395.895.686.185.986.288.287.386.489.587.188.6相对标准偏差/%3.55.26.15.37.54.13.33.62.24.93.25.56.75.52.96.65.48.13.34.67.5花卷测得量/mg2.655.1920.908.5016.6167.260.981.937.7125.8250.87210.2522.8446.27183.790.220.431.751.172.379.40回收率/%86.284.585.189.587.488.587.486.386.394.893.496.584.785.885.287.986.287.690.491.690.6相对标准偏差/%4.17.05.56.35.74.01.83.42.54.45.26.75.84.16.95.27.38.05.16.37.4馒头测得量/mg2.635.2120.978.4216.5366.731.001.987.8125.4450.33200.2323.0647.40192.420.210.441.761.182.339.24回收率/%85.784.985.488.687.087.889.388.687.493.492.491.985.587.989.285.987.588.290.889.789.1相对标准偏差/%3.35.87.52.14.65.86.42.81.33.92.65.27.64.86.62.73.65.06.24.57.2奶黄包测得量/mg2.655.4221.548.3016.3264.520.971.947.7426.0651.20206.1123.8147.57192.640.220.441.761.172.339.33回收率/%86.288.287.787.485.984.986.986.786.795.794.094.688.388.289.386.288.387.990.289.990.0相对标准偏差/%5.43.97.82.64.43.16.02.24.66.05.47.32.21.46.43.36.45.82.84.65.12.5实际样品的测定按照本研究所建立的方法对采购的50批样品（马拉糕5批、花卷10批、馒头20批、包子15批）依次进行检测。其中糖精钠检出6批次，质量分数为1.218180.015 mg/kg；安赛蜜检出3批次，质量分数为2.7498.439 mg/kg；阿斯巴甜检出3批次，质量分数为0.7341.044 mg/kg；其余组分均未检出。根据食品安全国家标准食品添加剂使用标准（GB 27602014）8规定，本研究中检测的7种甜味剂均不得检出，表明在市场中流通的发酵面制品存在非法添加甜味剂的现象，需要加大对此类产品的监管力度。3结论本研究建立了一种利用UPLC-MS/MS同时检测发酵面制品中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜和纽甜的方法，并对仪器条件和前处理方法进行了优化，前处理方法简便，分析体系测试分析时间在6 min以内，体现该方法的快捷高效。研究结果显示：该方法的线性关系良好，所有相关系数r2值均大于0.999 0，检出限为3.010-63.010-4g/kg，定量限为 1.010-51.010-3g/kg。本研究针对发酵面制品体系不同基质进行加标回收检测，平均回收率为 84.5%96.5%，相对标准偏差为1.3%8.1%。该方法在复杂基质基底中有着良好的加标回收率，未出现明显干扰，将其用于快速检测发酵面制品中的7种甜味剂，可大大提高检测的准确性，为安全监管发酵面制品中的甜味剂的检测提供了技术支持，具有很好的社会效益。136第3期蒋叶灵等：UPLC-MS/MS法同时测定发酵面制品中7种甜味剂参考文献1田莉，李静峰，张仁正，等.HPLC法测定发酵面制品中苯甲酸和山梨酸的含量J.安徽农业科学，2018，46（22）：157-158，178.2李里特.中国传统发酵面制品创新与面食现代化J.粮食与食品工业，2009，16（5）：1-3.3吴昌林.高效液相色谱法检测含乳饮料中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠3种添加剂含量J.分析仪器，2020（3）：38-41.4赵辉，王鑫璇.人造甜味剂与人体健康风险J.食品科学技术学报，2018，36（6）：15-20.5高玉婷，张鹏，杜刚，等.人造甜味剂对人体健康的影响J.食品科学，2018，39（7）：285-290.6食品伙伴网.美国研究：人工甜味剂饮料增加中风和痴呆风险J.中国食品报，2017，17（4）：208.7童兰艳，代政华，肖昭竞，等.液相色谱-串联质谱法同时测定食品中 9 种甜味剂J.食品科学技术学报，2020，38（2）：121-126.8中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准食品添加剂使用标准：GB 27602014S北京：中国标准出版社，2014.9中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准食品中环己基氨基磺酸钠的测定：GB5009.972016S.北京：中国标准出版社，2016.10黎良菊，李其美，朱敏.气相色谱法测定馒头中甜蜜素J.现代食品，2020（11）：185-186.11杨仁君，孙洁，李好转，等.离子色谱法同时测定白酒中 3 种甜味剂方法探讨J.酿酒科技，2016（9）：122-124.12孙立臻，周禹君，尹丽丽，等.高效液相色谱法同时测定饮料中10种天然甜味剂J.食品工业，2019，40（10）：344-348.13吴毅，何林飞，刘常凯，等.固相萃取-高效液相色谱法同时测定糕点中13种添加剂的研究J.中国食品添加剂，2019，30（11）：166-172.14佟芳荻，公绪芳，伍金华，等.超高效液相色谱法同时测定食品中4种防腐剂和5种甜味剂J.食品安全质量检测学报，2020，11（7）：2273-2280.15刘丽丽，任璐，罗冠龙，等.一种高效液相色谱-质谱联用法同时检测凤香型白酒中六种甜味剂的方法J.酿酒，2020，47（3）：101-104.16李延山.超高效液相色谱串联质谱法测定饲料中纽甜、阿力甜、阿斯巴甜、环天冬氨酰苯丙氨酸、甜蜜素、安塞蜜、糖精钠J.饲料工业，2018，39（4）：53-55.17孟庆顺.气相色谱法快速测量调味面制品中甜蜜素含量J.中国食品添加剂，2020，31（11）：126-129.18苏建国，陈枚，李歆，等.气相色谱内标法测定食品中甜蜜素含量J.监督与选择，2006（8）：58-59.19曹瑛瑛，文开勇，孙国政，等.HPLC法检测馒头中苯甲酸、山梨酸、糖精钠及安赛蜜J.食品与发酵科技，2019，55（5）：97-101.20中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准食品中阿斯巴甜和阿力甜的测定：GB5009.2632016S.北京：中国标准出版社，2016.21中华人民共和国卫生部.食品中糖精钠的测定：GB/T5009.282003S.北京：中国标准出版社，2003.22丘福保，卢丽明，薛荣旋，等.液质联用法同时测定植物饮料中的3种防腐剂和4种甜味剂J.中国食品添加剂，2020，31（9）：79-84.Simultaneous determination of 7 sweeteners in fermented flourproduct by UPLC-MS/MSJIANG Yeling1,HOU Xuhe*2,LYU Baoying2（1.Guilin Food and Drug Quality Inspection Institute,Guilin 541200,China;2.Medical School，GuangxiUniversity of Science and Technology,Liuzhou 545005,China）Abstract：This study adopted ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（UPLC-MS/MS）to detect 7 sweeteners（sodium saccharin,aspartame,acesulfame-K,neotame,alitame,saccharin sodium and chlorinated sucrose）in fermented dough products simultaneously.The sampleswere pre-treated by mechanical shaking,ultrasonic extraction,precipitation of proteins withferricyanide potassium and zinc acetate,and filtration through a 0.22 m membrane.The AgilentEclipse Plus C18 column（2.1 mm 50.0 mm,1.8 m）was washed with a gradient of acetonitrile-water.Multiple reaction monitoring（MRM）mode was used for segmented collection under negative137第34卷广 西 科 技 大 学 学 报electrospray ionization（ESI-）.The results showed that the seven sweeteners had good linearrelationships within the concentration range of 0.01 to 0.50 g/mL,with correlation coefficients r2greater than 0.999 1.The detection limit was 3.0 10-6to 3.0 10-4g/kg and the quantitation limit was1.0 10-5to 1.0 10-3g/kg.The average recoveries of the samples were 84.5%to 96.5%with relativestandard deviations of 1.3%to 8.1%（n=6）.The experiment results show that this method is fast,accurate,reproducible,and can be widely applied to the detection of various fermented flour products.Key words：sweeteners;fermented flour products;ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（UPLC-MS/MS）（责任编辑：于艳霞罗小芬）（上接第122页）sequence of the separated peptide was analyzed and verified.The angiotensin-I converting enzyme（ACE）binding energy of the peptides was also explored by molecular docking.The results showed thatafter purification by dialysis and ultra-filtration,the protein content of Lentinus edodes extractsincreased from 37.67%to 51.18%,the polysaccharide content decreased from 26.80%to 6.90%,andthe ACE inhibition rate increased from 61.83%to 79.77%,which helped to separate anti-hypertensivepeptides.The anti-hypertensive component was separated by MA-IML adsorption and identified as asingle peptide by reverse phase high-performance liquid chromatography.The amino acid sequence wasidentified to be Phe-Ala-Trp-Ala-Tyr（FAWAY）.The IC50of FAWAY was 179 mol/L.Moleculardocking results showed FAWAY could spontaneously bind to ACE,forming a stable conformation.Theprepared MA-IML can be used as an effective tool for separating anti-hypertensive peptide fromLentinus edodes.Key words：magnetic liposome;Lentinus edodes;anti-hypertensive peptide;angiotensin-I convertingenzyme（ACE）;separation and identification;molecular docking（责任编辑：罗小芬）138