USP14抑制对肾缺血再灌注诱导的急性肾损伤及IRE1_JNK信号通路的影响.pdf

实验研究USP14 抑制对肾缺血再灌注诱导的急性肾损伤及 IRE1/JNK 信号通路的影响黄霞1薛姗姗1李苏萌1徐芳1周涛2程成11泰州市人民医院检验科,泰州225300；2泰州职业技术学院医学系,泰州225300通信作者：程成，Email：开放科学（资源服务）标识码（OSID）【摘要】目的研究 USP14 的抑制是否可以减轻缺血再灌注（ischemia-reperfusion，IR）诱导的急性肾损伤以及潜在机制。方法通过对小鼠进行左侧肾动脉夹闭 45min 和再通建立体内肾IR 模型；HE 染色观察各组肾组织损伤情况；生化试剂盒检测血尿素氮（bloodureanitrogen，BUN）、肌酐（serumcreatinine，Scr）水平；Westernblot 检测内质网（endoplasmicreticulum，ER）应激相关蛋白（GRP78、CHOP、IRE1 和 JNK）和凋亡相关蛋白（cleavedcapase-3 和 Bcl-2）的表达；通过 TUNEL 检测肾组织细胞的凋亡水平。结果与模型组比较，IR 组中小鼠肾损伤和肾功能障碍在再灌注期呈时间依赖性逐渐加重，肾组织中 USP14 的表达和 BUN 及 Scr 的水平增加（P0.05）；与 IR+sh-NC组比较，IR+sh-USP14 组中小鼠肾病理损伤及肾组织中 USP14、BUN、Scr 的水平降低（P0.05）。此外，与模型组比较，IR 组小鼠肾组织中肾细胞凋亡，cleavedcaspase-3 和 ER 应激相关蛋白（GRP78、CHOP、IRE1、p-JNK）的表达升高，Bcl-2 的表达降低（P0.05）；与 IR+sh-NC 组比较，IR+sh-USP14组小鼠肾组织中肾细胞凋亡，cleavedcaspase-3 和 ER 应激相关蛋白表达减少，Bcl-2 的表达增加（P0.05）。结论抑制 USP14 可改善内质网应激和细胞凋亡，降低 IRE1/JNK 通路蛋白表达，从而减轻肾 IR 损伤。【关键词】急性肾损伤；再灌注损伤；泛素特异性蛋白酶 14；内质网应激；细胞凋亡基金项目：2020 年年泰州市科技支撑计划（TS202027）DOI：10.3969/j.issn.1671-2390.2023.08.008Effects of USP14 inhibition on renal ischemia-reperfusion-induced acute kidney injury andIRE1/JNK signaling pathwayHuang Xia1,Xue Shan-shan1,Li Su-meng1,Xu Fang1,Zhou Tao2,Cheng Cheng11Department of Laboratory Medicine,People s Hospital,Taizhou 225300 China;2Department ofMedicine,Taizhou Polytechnic College,Taizhou 225300 ChinaCorresponding author：Cheng Cheng,Email:【Abstract】ObjectiveToexplorewhetherornotaninhibitionofUSP14canattenuateacutere-nalinjuryinducedbyischemiareperfusion（I/R）andelucidateitsunderlyingmechanisms.MethodsAnin vivorenalI/Rmodelwasestablishedbyclampingleft-sidedrenalarteryfor45minandrecanalization.Renaltissueinjurywasobservedineachgroupafterhematoxylin-eosin（HE）stain.Serumlevelsofbloodureanitrogen（BUN）andcreatinine（Scr）weremeasuredbybiochemicalkits.Theexpressionsofendo-plasmicreticulum（ER）stress-relatedproteins（GRP78,CHOP,IRE1&JNK）andapoptosis-relatedpro-teins（cleavedcaspase-3&Bcl-2）weredetectedbyWesternblot.ApoptoticlevelofrenaltissuecellswasdetectedbyterminaldeoxynucleotidyltransferasedUTPnick-endlabeling（TUNEL）.ResultsAscom-paredwithshamgroup,renalinjuryandrenaldysfunctioninI/Rgroupbecamegraduallyworseinatime-dependentmannerduringreperfusionphaseandtheexpressionofUSP14andthelevelsofBUNandScrspikedinkidneytissue（P0.05）;ComparedwithI/R+sh-NCgroup,renalpathologicalinjuryandthelev-elsofUSP14,BUNandScrdeclinedinkidneytissuesinI/R+sh-USP14group（P0.05）.Inaddition,临床肾脏病杂志2023年8月第23卷第8期JClinNephrol，August2023，Vol.23，No.8663comparedwithshamgroup,renalcellapoptosis,theexpressionsofcleavedcaspase-3andGRP78,CHOP,IRE1&p-JNKroseandBcl-2declinedinkidneytissuesinI/Rgroup（P0.05）;ComparedwithI/R+sh-NCgroup,renalcellapoptosis,down-regulationsofcleavedcaspase-3andendoplasmicreticulum（ER）stress-relatedproteinsandup-regulationofBcl-2wereobservedinkidneytissuesinI/R+sh-USP14group（P0.05）.ConclusionsAninhibitionofUSP14amelioratesERstress,apoptosisandproteinexpres-sionofIRE1/JNKpathway,therebyattenuatingrenalI/Rinjury.【Key words】Acutekidneyinjury；ReperfusionInjury；Ubiquitin-specificprotease14；Endoplas-micreticulumstress；ApoptosisFund program：TaizhouScienceandTechnologySupportPlanin2020(TS202027)DOI：10.3969/j.issn.1671-2390.2023.08.008肾缺血再灌注（ischemia-reperfusion，IR）损伤是急性肾损伤（acutekidneyinjury，AKI）的主要原因，其特征在于肾功能显著降低，高发病率和病死率1。肾 IR 损伤是危及生命的疾病，可能由低血容量状况如感染性休克、肾移植、肾和血管手术引起2。虽然目前在治疗肾 IR 损伤方面取得了一些进展，但仍缺乏有效的治疗方法3。肾 IR 损伤的病理机制复杂，涉及内质网（endoplasmicreticulum,ER）应激、细胞凋亡、自噬、炎症反应和氧化应激4-5。多项研究表明，肾组织 ER 应激异常和细胞凋亡与肾 IR 损伤的发生发展密切相关6-8。随着肾 IR 损伤的重要性日益增加，迫切需要开发新的治疗方法来减少肾 IR 损伤的发生和发展。近年来，泛素特异性蛋白酶14（ubiquitin-specificprotease14，USP14）在 IR 后导致损伤中的作用逐渐引起关注。据报道，抑制 USP14 的表达可以减轻脑缺血再灌注引起的神经元损伤9。USP14 通过控制一些错误折叠蛋白质的蛋白酶体降解在肾细胞损伤期间发挥重要作用10。然而，USP14 是否参与肾 IR 损伤有待进一步研究。此外，IRE1/JNK 是调控炎症反应、ER 应激和细胞凋亡等生物进程的关键信号通路。抑制肾小管上皮细胞中的 IRE1/JNK 通路可减轻 IR 诱导的 AKI11。IR 在短时间内刺激 ER 应激和肾小管中的 IRE1/JNK 通路，导致持续炎症和肾小球细胞外基质大量分泌，促进肾小球硬化，最终导致AKI 向慢性肾脏病转变12。因而 IRE1/JNK 信号是缓解 IR 诱导的 AKI 的潜在作用靶点。因此，本研究通过构建小鼠体内肾 IR 损伤模型，探讨 USP14对 IR 损伤及 IRE1/JNK 信号通路的影响。材料与方法一、实验动物成年雄性 C57BL/6 小鼠，体重 2025g，由中国药科大学实验动物中心提供（动物许可证号：SYXK（苏）2021-0010），按照常规动物护理指南进行。所有小鼠在室温下进行 12h 的光照/黑暗周期，并自由获得不受限制的水和标准实验室饮食。本实验符合动物伦理。二、试剂与仪器RIPA 裂解液（上海碧云天生物技术公司）；泛素特异性蛋白酶 14（ubiquitin-specificprotease14，USP14）、CleavedCaspase-3、Bcl-2、GRP78、CHOP、IRE1、p-JNK、GAPDH 抗体和 HRP 标记的羊抗兔IgG（英国 Abcam 公司）；HRP 底物（美国密理博公司）；表达 sh-NC 和 sh-USP14 的慢病毒（山东维真生物有限公司）；血肌酐（serumcreatinine，Scr）、血尿素氮（bloodureanitrogen，BUN）试剂盒（中国南京建成有限公司）；BCA 蛋白浓度检测试剂盒（上海纪宁生物）；末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 转移酶 缺 口 末 端 标 记（TUNEL）测 定 试 剂 盒（瑞 士Roche 公司）；蛋白电泳仪和蛋白转膜仪（美国 Bio-Rad 公司）；荧光显微镜 BX51（日本奥林巴斯公司）。三、方法1.肾 IR 模型的建立根据随机数字表法，将48 只小鼠随机分为假手术组（sham 组）、IR 组、IR+sh-NC 组和 IR+sh-USP14 组，每组 6 只。术前将小鼠用戊巴比妥钠（50mg/kg）完全麻醉后置于恒温桌上。然后，所有小鼠都进行中线剖腹手术，小心地从周围组织中取出右肾，并进行肾切除术。中线切口后暴露左肾，非创伤性钳夹肾动脉 45min 后，放开动脉夹，然后在不同时期（6h、12h、24h和 48h）安乐死小鼠，收集标本。假手术组大鼠在不夹闭肾动脉的情况下进行腹部切口。最后，收获肾脏并在手术后收集血清。假手术组只切除右肾；IR+sh-NC 组和 IR+sh-USP14 组在 IR 模型建立前连续 10d 接受尾静脉注射 10mg/kgsh-NC 或 sh-664临床肾脏病杂志2023年8月第23卷第8期JClinNephrol，August2023，Vol.23，No.8USP14，每天 3 次。2.苏 木 精-伊 红 染 色（hematoxylinandeosinstaining，HE）首先对肾脏进行固定和包埋，然后制作 4m 厚的切片。切片逐渐脱蜡、水合，HE 染色。使用光学显微镜，以 200 倍放大率检查组织，并根据管腔内坏死细胞、细胞肿胀、间质充血、水肿和蛋白管型评估肾组织病理学损伤程度。采用以下 5 分评分系统评估肾损伤：0 分为肾形态正常，1 分为肾组织损伤10%，2 分为肾组织损伤10%且25%，3 分为肾损伤组织25%且45%，4 分为肾组织损伤45%且75%，5 分为肾组织损伤75%。评估图像的病理学家对分配组不知情。xs3.末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP转移酶缺口末端标记（terminaldeoxynucleotidyltransferase-me-diateddUTPnickend-labeling，TUNEL）染色使用TUNEL 检测试剂盒，按照生产商说明书，通过原位标记 DNA 片段来测量肾组织切片中存在的凋亡细胞的数量。然后将载玻片用 4,6-二脒基-2-苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）表示为。使用 Studentst 检验两组间比较，组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）检验比较。P0.05 表示差异有统计学意义。结果一、IR 诱导后导致 AKI与 sham 组比较，随着小鼠肾 IR 后不同时间点（6h、12h、24h、48h）均出现肾损伤和功能障碍，表现为肾脏近端肾小管出现急性肾小管损伤，包括肾小管扩张和刷状缘丢失，病理评分增加，BUN 和Scr 显著升高，且在肾 IR 后 24h 达到峰值（P0.05）；再灌注时间延长至 48h，病理损伤和功能逐渐恢复，病理评分减小，BUN 和 Scr 水平降低（P0.05）。（图 1）二、USP14 在肾 IR 损伤进展中的表达上调与 Sham 组比较，肾 IR 组 USP14 蛋白水平均升高（P0.05）。此外，随着再灌注时间的增加，USP14 的表达显著增强，且在肾 IR 后 24h 达到峰值，再灌注时间延长至 48h 后，USP14 蛋白表达水平降低。（图 2）三、抑制 USP14 减轻肾 IR 损伤与 sham 组比较，肾 IR 组小鼠肾组织中 USP14表达上调（P0.05）；与 IR+sh-NC 组比较，IR+sh-USP14 组肾组织中 USP14 表达下调（P0.05）。与 sham 组比较，肾 IR 组小鼠出现肾小管明显损伤和肾功能障碍，肾组织病理评分增加，BUN 和 Scr水平增加（P0.05）；与肾 IR+sh-NC 组比较，肾IR+sh-USP14 组中肾小管损伤减轻，肾功能逐渐恢复，病理评分和 BUN、Scr 水平降低（P0.05）。（图 3）四、抑制 USP14 减轻肾 IR 细胞凋亡与 sham 组比较，肾 IR 处理后导致 TUNEL 阳性细胞比例显著增加（P0.05）；与肾 IR+sh-NC 组比较，肾 IR+sh-USP14 组中 TUNEL 阳性细胞比例显著降低（P0.05）；此外，Westernblotting 结果也sham组sham组肾组织病理评分BUN水平（mmol/L）Scr水平（mol/L）012340204060802502001501005006 h12 h24 h48 hababababababababaaaba6 h12 h24 hIR组IR组sham组 6 h12 h24 h48 hIR组sham组 6 h12 h24 h48 hIR组48 h1A1B1C1D注：与 sham 组比较，aP0.05；与 IR 后 24h 组比较，bP0.05；BUN 为尿素氮；Scr 为血肌酐；IR 为缺血再灌注。图 1肾 IR 后不同时间点小鼠肾损伤情况的比较1A.HE 染色肾组织病理图（200）；1B.肾组织病理评分柱状图；1C.BUN 浓度变化折线图；1D.Scr 浓度变化折线图临床肾脏病杂志2023年8月第23卷第8期JClinNephrol，August2023，Vol.23，No.8665显示，与 sham 组比较，肾 IR 处理后肾组织中凋亡相关蛋白 cleavedcaspase-3 的表达增加，Bcl-2 的表达降低（P0.05）；与肾 IR+sh-NC 组比较，肾 IR+sh-USP14 组中 cleavedcaspase-3 的表达减少，Bcl-2 的表达增加（P0.05）。（图 4）五、抑制 USP14 抑制 IRE1/JNK 通路蛋白的表达和减轻 ER 应激为了研究抑制 USP14 对肾脏保护作用与 ER应激之间的关联，我们检测了 ER 应激相关蛋白CHOP 和 GRP78 的表达，这些蛋白参与调节未折叠蛋白反应，有助于肾脏中的细胞稳态。与 sham组比较，肾 IR 组小鼠肾组织中 GRP78 和 CHOP的 mRNA 和蛋白表达显著增加（P0.05）；与肾IR+sh-NC 组比较，肾 IR+sh-USP14 组中 GRP78 和CHOP 的 mRNA 和表达显著降低（P0.05）。此外，有研究揭示了 IRE1/JNK 通路通过下调 ER 应激在抗凋亡中发挥的作用。为进一步研究 USP14 影响肾 IR 损伤的分子机制，通过 Westernblotting 检测各组中 IRE1 和 JNK 蛋白的表达。与 sham 组比较，肾 IR 组小鼠肾组织中 IRE1 的和 JNK 蛋白磷酸化水平显著增加（P0.05）；与肾 IR+sh-NC 组比较，肾 IR+sh-USP14 组中 IRE1 和 JNK 蛋白磷酸化水平显著降低（P0.05）。（图 5）讨论AKI 主要由肾 IR 损伤、败血症和肾毒性药物引起的临床致死症状13。尽管过去几十年医疗技术取得了进步，但 AKI 仍然是一个亟待解决的医b0sham组 6 h12 h24 hIR组IR组48 hUSP14GAPDHsham组 6 h 12 h 24 h 48 h12USP14蛋白相对表达量34abaa2A2B注：与 sham 组比较，aP0.05；与 IR 后 24h 组比较，bP0.05；USP14 为泛素特异性蛋白酶 14；IR 为缺血再灌注。图 2小鼠肾 IR 后不同时间点 USP14 在肾组织中的表达比较2A.USP14 蛋白表达柱状图；2B.USP14 蛋白表达免疫印迹图sham组sham组IR组IR组4abaabb32USP14蛋白相对表达量104532肾组织病理评分1060804020BUN水平（mmol/L）020025015010050Scr水平（mol/L）0IR+sh-NC组IR+sh-NC组IR+sh-USP14组sham组IR组IR+sh-NC组IR+sh-USP14组sham组IR组IR+sh-NC组IR+sh-USP14组sham组IR组IR+sh-NC组IR+sh-USP14组sham组IR组IR+sh-NC组IR+sh-USP14组IR+sh-USP14组USP14GAPDH3A3B3C3D3E3F注：与 sham 组比较，aP0.05；与 IR+sh-NC 组比较，bP0.05；USP14 为泛素特异性蛋白酶 14；BUN 为尿素氮；Scr 为血肌酐；IR 为肾缺血再灌注。图 3抑制 USP14 可减轻 IR 小鼠的肾损伤3A.4 组小鼠 USP14 蛋白表达柱状图；3B.4 组小鼠 USP14 蛋白的免疫印迹图；3C.4 组小鼠 HE 染色肾组织病理图（200）；3D.4 组小鼠肾组织病理评分；3E.4 组小鼠 BUN 浓度；3F.4 组小鼠 Scr 浓度666临床肾脏病杂志2023年8月第23卷第8期JClinNephrol，August2023，Vol.23，No.8学问题。然而，由 IR 损伤引起的 AKI 的发病机制尚不完全清楚。广泛的肾小管细胞死亡，包括细胞凋亡和坏死，导致间质水肿和肾小球滤过率下降，是 AKI 发生的关键因素14。细胞凋亡是一种以DNA 裂解和核浓缩为特征的程序性细胞死亡形式15。研究表明，ER 应激可被多种细胞外刺激触发并诱导细胞凋亡，IR 损伤诱导的肾小管细胞凋亡与过度 ER 应激有关16。ER 应激由三种保守途径介导：IRE1-XBP-1、PERK-eIF2a 和 ATF6，在 IR发展中起关键作用。当错误折叠的蛋白质由于蛋sham组TUNELDAPIMergedIR组aaabb3020TUNEL阳性细胞（%）100bIR+sh-NC组IR+sh-USP14组sham组IR组IR+sh-NC组IR+sh-USP14组sham组IR组cleaved caspase-3蛋白相对表达量Bcl-2蛋白相对表达量41.51.00.50.03210IR+sh-NC组IR+sh-USP14组sham组IR组IR+sh-NC组Cleavedcaspase-3GAPDHBcl-2IR+sh-USP14组sham组IR组IR+sh-NC组IR+sh-USP14组4A4C4D4E4B注：与 sham 组比较，aP0.05；与 IR+sh-NC 组比较，bP0.05；TUNEL 为末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 转移酶缺口末端标记；DAPI 为细胞核染色；Merged 为合成图；Cleavedcaspase-3 为切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3；Bcl-2 为 B 淋巴细胞瘤-2 蛋白。图 4抑制 USP14 可减弱 IR 小鼠的肾小管上皮细胞凋亡4A.TUNEL 染色细胞凋亡图（200）；4B.TUNEL 阳性细胞率柱状图；4C.Cleavedcaspase-3 的表达；4D.Bcl-2 的表达；4E.Cleavedcaspase-3 和 Bcl-2 蛋白的免疫印迹图GRP78GRP78CHOPIRE1JNKGRP78CHOPp-IRE1/IRE1p-JNK/JNKCHOPIRE1p-IRE1JNKp-JNKGAPDHsham组IR组IR+sh-NC组IR+sh-USP14组sham组IR组02mRNA 水平相对表达量4602蛋白水平相对表达量4135IR+sh-NC组IR+sh-USP14组sham组IR组IR+sh-NC组IR+sh-USP14组aaaaabbbbabb5A5B5C注：与 sham 组比较，aP0.05；与 IR+sh-NC 组比较，bP0.05；GRP78 为葡萄糖调节蛋白 78；CHOP 为 C/EBP 环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白；IRE1 为肌醇依赖酶 1；p-IRE1 为磷酸化肌醇依赖酶 1；JNK 为 c-Jun 氨基末端激酶；p-JNK 为磷酸化 c-Jun 氨基末端激酶。图 5抑制 USP14 可减弱 IR 小鼠的内质网应激相关蛋白的表达5A.4 组小鼠 GRP78、CHOP、IRE1 和 JNK 蛋白的免疫印迹图；5B.4 组小鼠 GRP78、CHOP、IRE1 和 JNK 的 mRNA 表达比较；5C.4 组小鼠 GRP78、CHOP、p-IRE1 和p-JNK 的蛋白表达临床肾脏病杂志2023年8月第23卷第8期JClinNephrol，August2023，Vol.23，No.8667白酶体降解系统的损伤而积累时，ER 应激将持续存在或变得严重，然后诱导细胞凋亡。ER 应激诱导的 CHOP 和 cleavedcaspases-3 表达增加，同时通过 CHOP 激活 Blc-2 信号通路。因此，专注寻找抑制 ER 应激的策略可能有助于肾 IR 损伤的治疗。USP14 是一种去泛素化酶，与蛋白酶体相关并在调节蛋白质降解方面发挥双重功能。USP14 通过从蛋白酶体结合的底物中去除泛素链来保护蛋白质底物免于降解，而通过激活蛋白酶体促进蛋白质降解。已证明抑制 USP14 可下调受核受体共激活因子 4 水平保护神经元免受铁蛋白吞噬介导的铁死亡，从而改善脑 IR 损伤17。M2 小胶质细胞衍生的外泌体 miR-124 通过抑制 USP14 的表达减轻小鼠脑 IR 损伤18。越来越多的证据表明，USP14的表达与 ER 应激密切相关。Liu 等19作者发现，肝脏特异性敲除 USP14 可以消除 ER 应激对葡萄糖代谢的影响，并改善肥胖小鼠的高血糖和葡萄糖耐受不良。过表达 USP14 抑制 ER 相关降解途径，有助于 ER 应激20。Sareen-Khanna 及其同事发现，抑制 USP14 可以增强错误折叠蛋白质的降解并减轻肾细胞损伤10。在本研究发现小鼠进行肾 IR 后出现明显的肾损伤和功能障碍，USP14 的表达增多，且呈时间依赖性。抑制 USP14 可以有效缓解 IR 损伤后肾脏损伤和功能障碍，降低细胞凋亡和 ER 应激。据报道，IRE1/JNK 通路介导 ER 应激参与多种疾病的发生与发展。在蛛网膜下腔出血引起的早期脑损伤中，Bax 抑制剂-1 激活 IRE1/JNK 通路，抑制内质网应激从而发挥神经元保护作用21。Liang 等22的研究表明，人肾皮质近曲小管上皮细胞通过缺氧/复氧（H/R）处理构建 AKI 体外模型，H/R 上调人肾皮质近曲小管上皮细胞中的 ER 应激，激活 IRE1/JNK 通路；靶向 IRE1 或 JNK 可能是治疗肾小球硬化和预防 AKI 向慢性肾脏病转变。本研究进一步发现，IR 处理后激活了 IRE1/JNK 通路，促进 ER 应激的发生，而抑制 USP14 逆转上述作用。总之，本研究表明，抑制 USP14 缓解 IR 诱导的肾小管损伤，抑制过度的 ER 应激，减轻肾小管上皮细胞的凋亡，减少 IRE1 和 JNK 磷酸化蛋白表达，从而减轻急性损伤。这些结果表明，USP14 可能做作 IR 引起的 AKI 的潜在治疗靶点。利益冲突所有作者均声明没有利益冲突参考文献LiuH，WangL，WengXD，etal.InhibitionofBrd4alleviatesrenal1ischemia/reperfusion injury-induced apoptosis and endoplasmicreticulumstressbyblockingFoxO4-mediatedoxidativestressJ.RedoxBiol，2019，24：101195.DOI：10.1016/j.redox.2019.101195.WangL，ChenH，LiuXH，etal.OzoneoxidativepreconditioninginhibitsrenalfibrosisinducedbyischemiaandreperfusioninjuryinratsJ.ExpTherMed，2014，8（6）：1764-1768.DOI：10.3892/etm.2014.2004.2HosszuA，FeketeA，SzaboAJ.Sexdifferencesinrenalischemia-reperfusioninjuryJ.AmJPhysiolRenalPhysiol，2020，319（2）：F149-F154.DOI：10.1152/ajprenal.00099.2020.3ZhuYL，HuangJ，ChenXY，etal.SenkyunolideIalleviatesrenalIschemia-Reperfusioninjurybyinhibitingoxidativestress,endo-plasmicreticulumstressandapoptosisJ.IntImmunopharmacol，2022，102：108393.DOI：10.1016/j.intimp.2021.108393.4ZouGD，ZhouZY，XiXQ，etal.Pioglitazoneamelioratesrenalis-chemia-reperfusioninjuryviainhibitionofNF-BactivationandinflammationinratsJ.FrontPhysiol，2021，12：707344.DOI：10.3389/fphys.2021.707344.5HavasiA，BorkanSC.ApoptosisandacutekidneyinjuryJ.Kid-neyInt，2011，80（1）：29-40.DOI：10.1038/ki.2011.120.6YanMJ，ShuSQ，GuoCY，etal.EndoplasmicreticulumstressinischemicandnephrotoxicacutekidneyinjuryJ.AnnMed，2018，50（5）：381-390.DOI：10.1080/07853890.2018.1489142.7XuY，GuoM，JiangW，etal.Endoplasmicreticulumstressanditseffectsonrenaltubularcellsapoptosisinischemicacutekidneyin-juryJ.RenFail，2016，38（5）：831-837.DOI：10.3109/0886022X.2016.1160724.8Min JW，L LH，Freeling JL，et al.USP14 inhibitor attenuatescerebralischemia/reperfusion-inducedneuronalinjuryinmiceJ.JNeurochem，2017，140（5）：826-833.DOI：10.1111/jnc.13941.9Sareen-KhannaK，PapillonJ，WingSS，etal.Roleofthedeubiqui-tinatingenzymeubiquitin-specificprotease-14inproteostasisinre-nal cellsJ.Am J Physiol Ren Physiol，2016，311（5）：F1035-F1046.DOI：10.1152/ajprenal.00252.2016.10LiangY，QuLY，LiuZJ，etal.TheIRE1/JNKsignalingpathwayregulatesinflammationcytokinesandproductionofglomerularex-tracellularmatrixintheacutekidneyinjurytochronickidneydis-easetransitionJ.MolBiolRep，2022，49（8）：7709-7718.DOI：10.1007/s11033-022-07588-7.11LiangY,LiuZJ,QuLY,etal.InhibitionoftheIRE1/JNKpath-wayinrenaltubularepithelialcellsattenuatesferroptosisinacutekidneyinjuryJ.FrontPharmacol,2022.12MehtaRL，KellumJA，ShahSV，etal.AcuteKidneyInjuryNet-work:reportofaninitiativetoimproveoutcomesinacutekidneyinjuryJ.CritCare，2007，11（2）：R31.DOI：10.1186/cc5713.13WinterbergPD，LuCY.Acutekidneyinjury:thebeginningoftheendofthedarkagesJ.AmJMedSci，2012，344（4）：318-325.DOI：10.1097/MAJ.0b013e318228aef8.14SchumerM，ColombelMC，SawczukIS，etal.Morphologic,bio-chemical,andmolecularevidenceofapoptosisduringthereperfu-sionphaseafterbriefperiodsofrenalischemiaJ.AmJPathol，1992，140（4）：831-838.15GallazziniM，PalletN.EndoplasmicreticulumstressandkidneydysfunctionJ.BiolCell，2018，110（9）：205-216.DOI：10.1111/boc.201800019.16LiC，SunGC，ChenBL，etal.Nuclearreceptorcoactivator4-medi-17668临床肾脏病杂志2023年8月第23卷第8期JClinNephrol，August2023，Vol.23，No.8atedferritinophagycontributestocerebralischemia-inducedferrop-tosis in ischemic strokeJ.Pharmacol Res，2021，174：105933.DOI：10.1016/j.phrs.2021.105933.SongYY，LiZW，HeTT，etal.M2microglia-derivedexosomesprotectthemousebrainfromischemia-reperfusioninjuryviaexo-somalmiR-124J.Theranostics，2019，9（10）：2910-2923.DOI：10.7150/thno.30879.18LiuB，ZhangZJ，HuYY，etal.SustainedERstresspromoteshy-perglycemiabyincreasingglucagonactionthroughthedeubiquiti-natingenzymeUSP14J.ProcNatlAcadSciUSA，2019，116（43）：21732-21738.DOI：10.1073/pnas.1907288116.19NagaiA，KadowakiH，MaruyamaT，etal.USP14inhibitsER-as-20sociateddegradationviainteractionwithIRE1J.BiochemBio-physResCommun，2009，379（4）：995-1000.DOI：10.1016/j.bbrc.2008.12.182.ShiL，WangZZ，LiuXJ，etal.Baxinhibitor-1isrequiredforre-sistingtheEarlyBrainInjuryinducedbysubarachnoidhemorrhagethroughregulatingIRE1-JNKpathwayJ.NeurolRes，2018，40（3）：189-196.DOI：10.1080/01616412.2018.1424699.21LiangY，LiangLL，LiuZJ，etal.InhibitionofIRE1/JNKpathwayin HK-2 cells subjected to hypoxia-reoxygenation attenuatesmesangialcells-derivedextracellularmatrixproductionJ.JCellMolMed，2020，24（22）：13408-13420.DOI：10.1111/jcmm.15964.22（收稿日期：2022-07-19）临床肾脏病杂志2023年8月第23卷第8期JClinNephrol，August2023，Vol.23，No.8669