circ-BAX.3和circ-BAX.11抑制急性髓细胞性白血病细胞作用的机制研究.pdf

（编校：闫沛）3359MODERNONO.31.No.182023年0 9 月第31卷第18 期现代肿瘤医学cell growth and apoptosis by targeting BCL2L11 in gastric cancerJ.Protein Cell,2016,7(2):141-151.8LIU R,ZHANG HY,WANG X,et al.The miR-24-Bim pathwaypromotes tumor growth and angiogenesis in pancreatic carcinomaJ.Oncotarget,2015,6(41):43831-43842.9YAN L,MA JZ,ZHU YP,et al.miR-24-3p promotes cell migra-tion and proliferation in lung cancer by targeting SOX7 J.J CellBiochem,2018,119(5):3989-3998.10 JAFFE N.Osteosarcoma:review of the past,impact on the future.The American experience J.Cancer Treat Res,2009,152:239-262.11CALIN GA,DUMITRU CD,SHIMIZU M,et al.Frequent deletionsand down-regulation of micro-RNA genes miR15 and miR16 at13q14 in chronic lymphocytic leukemia J.Proc Natl Acad SciUSA,2002,99:15524.12FLEMMING A.Heart failure:Targeting miRNA pathology in heartdisease J.Nat Rev Drug Discov,2014,13:336.13DI LEVA G,GAROFALO M,CROCE CM.MicroRNAs in cancerJ.Annu Rev Pathol,2014,9:287.14NITURE S,GADI S,QI Q,et al.MicroRNA-483-5p inhibitshepatocellular carcinoma cell proliferation,cell steatosis,and fi-brosis by targeting PPAR and TIMP2 J.Cancers(Basel),2023,15(6):1715.15JAVDANI H,MOLLAEI H,KARIMI F,et al.Review article epi-thelial to mesenchymal transition-associated microRNAs inbreast cancer J.Mol Biol Rep,2022,49(10):9963-9973.16DONG ZH,LIAO ZP,He YL,et al.Advances in the biologicalfunctions and mechanisms of miRNAs in the development of os-teosarcoma J.T e c h n o l C a n c e r Re s T r e a t,2 0 2 2,2 1:15330338221117386.17JAMAYRAN AK,OKSUZ BA,AFANASYEVA Y,et al.Prognosticrole of elevated miR-24-3p in breast cancer and its associationwith the metastatic process J.Oncotarget,2018,9(16):12868-12878.18WANG B,YAN LF,SHI WH,et al.CircRNA PVT1 promotes pro-liferation and chemoresistance of osteosarcoma cells via the miR-24-3p/KLF8 axis J.Int J Clin Oncol,2022,27(4):811-822.19WOODS AL,HALL PA,SHEPHERD NA,et al.The assessment ofproliferating cell nuclear antigen(PCNA)immunostaining in pri-mary gastrointestinal lymphomas and its relationship to histologicalgrade,S+G2+M phase fraction(flow cytometric analysis)andprognosis J.Histopathology,1991,19(1):21-27.circ-BAX.3和 circ-BAX.11 抑制急性髓细胞性白血病细胞作用的机制研究邢增文，王文芳，石丹妮?，李家威，姚琦，韩燕媚，张正义1海口市妇幼保健院，海南海口57 0 2 0 3；2 中国人民解放军联勤保障部队第92 8 医院检验科；3肿瘤内科，海南海口57 0 2 0 3【摘要】目的：探讨circRNA-BAX.3（h s a _c i r c _0 0 517 99）、c i r c RNA-BA X.11（h s a _c i r c _0 0 518 0 0）和miR-128、m i R-2 14以及BAX在人急性髓系白血病（AML)细胞中的相互作用关系及其在AML细胞增殖和调亡中的作用。方法：采用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测外周血样本和AML细胞系中circRNA-BAX.3、c ir c RNA-BA X.11、m iR-12 8、m iR-2 14和BAX-mRNA的表达水平。免疫印迹法（WB）检测BAX蛋白表达水平。采用CCK-8和流式细胞仪检测细胞的增殖和调亡能力。通过双荧光素酶报告分析BAX3UTR和miR-128、m i R-2 14之间的靶向关系。结果：circRNA-BAX.3和circRNA-BAX.11在AML组织和细胞中表达下调,且两者均可明显促进AML细胞的增殖及抑制细胞调亡（P0.05）。本研究发现了circRNA-BAX.3、c i r c RNA-BA X.11、m i R-12 8 和miR-214以及BAX的共调节网络。生物信息学分析结果显示,BAX是miR-128和miR-124的靶基因。miR-128和miR-214能够明显下调BAX表达，促进细胞增殖并抑制细胞调亡（P0.05），而circ-BAX.3和circ-BAX.11通过结合miR-128和miR-214促进BAX表达并加速AML细胞调亡。结论：circRNA-BAX.3和circRNA-BAX.11通过抑制miR-128和miR-214并促进BAX的表达来抑制AML的进展。【关键词】急性髓细胞白血病;circRNA-BAX.3;circRNA-BAX.11;miR-128;miR-214;BAX【中图分类号】R733.71【文献标识码】AD0I:10.3969/j.issn.1672-4992.2023.18.005【文章编号】16 7 2-4992-（2 0 2 3)18-3359-0 7【收稿日期】2022-11-03【修回日期】2023-05-20【作者简介】邢增文（198 9一），男，海南海口人，主管检验师，主要从事分子诊断、生化免疫研究。【通信作者】韩燕媚（198 0），女，海南人，副主任医师，主要从事医学遗传、产前诊断工作。E-mail：42 8 4390 3 q q.c o mModern Oncology 2023,31(18):3359-3365acute3360.circ-BAX.3和circ-BAX.11抑制急性髓细胞性白血病细胞作用的机制研究邢增文，等Mechanical studies of the effects of circ-BAX.3 and circ-BAX.11 in inhibitingmyeloid leukemia cellsXING Zengwen,WANG Wenfang,SHI Danni,LI Jiawei,YAO Qi,HAN Yanmei,ZHANG Zhengyi33Haikou of the Maternal and Child Health Hospital,Hainan Haikou 570203,China;Department of Clinical Laboratory Examina-tion;Department of Internal Medicine-Oncology,the 928th Hospital of the Joint Logistics Support Force of the Chinese Peoples Libera-tion Army,Hainan Haikou 570203,China.【A b s t r a c t Objective:To explore the regulatory relationship between circRNA-BAX.3(hsa_circ_0051799),cir-cRNA-BAX.11(hsa_circ_0051800),miR-128,miR-214 and BAX in human acute myeloid leukemia(AML)cells proliferation and apoptosis.Methods:Real-time fluorescent quantitative PCR(qRT-PCR)was used to detectthe expression levels of circRNA-BAX.3,circRNA-BAX.11,miR-128,miR-214 and BAX in peripheral bloodsamples and cell lines.Western-blot(WB)was used to detect the expression level of BAX protein.CCK-8 andflow cytometry were used to detect cell proliferation and apoptosis.The target relationship between BAX 3UTR andmiR-128 and miR-214 was analyzed by dual luciferase report.Results:circRNA-BAX.3 and circRNA-BAX.11were down-regulated in AML samples and cells,and both can promote the proliferation of AML cells and inhibit cellapoptosis,and the difference was statistically significant(P0.05).This study found a co-regulatory network ofcircRNA-BAX.3,circRNA-BAX.11,miR-128,miR-214,and BAX.Further bioinformatics found that BAX wasthe target gene of miR-128 and miR-124.miR-128 and miR-214 can significantly down-regulate BAX expres-sion,promote cell proliferation and inhibit cell apoptosis(P0.05),while circ-BAX.3 and circ-BAX.11 promoteBAX by binding to miR-128 and miR-214 expresses and accelerates apoptosis in AML cells.Conclusion:circRNA-BAX.3 and circRNA-BAX.11 inhibit the progression of AML by inhibiting miR-128 and miR-214 and promo-ting the expression of BAX.Key wordsacute myeloid leukemia,circRNA-BAX.3,circRNA-BAX.11,miR-128,miR-214,BAX急性髓系白血病（acutemyeloidleukemia，A M L）是一种造血系统恶性疾病，可导致骨髓中髓系前体细胞过度积聚。该病是成人白血病最常见的类型,存活率较低1-2 。据报道，AML在美国等国家的发病率为3.6/10 万人，死亡率为2.8/10万人3。尽管常规化疗可以改善疾病症状，但AML患者的治疗仍是一个挑战4。因此,深入探讨AML进程的调控机制有助于筛选及开发新型靶向药物或辅助疗法来改善患者的治疗效果和生存率。环状RNA(circRNA）最初被认为是错误剪接RNA或剪接错误的副产物5。然而，最近的高通量测序和新的方法表明，它们更可能是调控反向剪接RNA的产物6 。目前，已知circRNA在真核转录组中非常普遍，在细胞质甚至血液中含量丰富、保守且稳定7 。研究表明,circRNA与包括白血病在内的多种癌症有关,并且在其发病机制和诊断中发挥重要作用8 。微小RNA（mi c r o RNA,mi RNA）是内源性表达的非编码RNA,在细胞分化、增殖、调亡等生物过程中起着重要作用9。对原发性白血病的研究发现,与正常造血细胞相比，miRNA在AML中的表达存在差异10-1。BCL2相关X（BA X）编码的蛋白质属于BCL2蛋白家族。研究显示,BAX的激活可诱导白血病细胞的调亡,表明,BAX在抑制AML进展中起着重要的作用12 。然而，关于BAX、c i r c RNA 和miRNA在AML细胞和组织中相互作用的研究较少,有待进一步探讨。而circ-BAX.3和circ-BAX.11是有BAX为母基因生成的环状RNA且目前该circRNA在AML进程中的调控作用及调控机制尚不明确。因此本研究探索circRNA（c i r c-BAX.3和circ-BAX.11)对AML细胞增殖及凋亡的影响。进一步验证circRNA、m i RNA 和BAX之间的相互作用关系，通过本研究能够更好地了解其在AML中的潜在机制1材料和方法1.1样本来源采集中国人民解放军联勤保障部队第92 8 医院2 0 17 年1月至2 0 19 年12 月的外周血样本共114份，包括57 名AML患者和57 名体检健康者，所有血样均置于液氮中进行保存。所有患者均为首次采集骨髓，经病理证实为AML并排除同时患有其他心脑血管疾病、感染及严重的炎症疾病的患者。AML患者包括男性33例，女性2 4例，中位年龄在54（18 80)岁，诊断时骨髓原始细胞在45%91%；匹配的健康对照人群包括男性31例，女性2 6 例，中位年龄57（18 8 0）岁。所有临床基础资料差异不存在统计学意义，具有可比性（表1）。本研究获得所有分析的患者的生物学研究的书面知情同意书，并获得我院伦理委员会的批准。1.2试剂与仪器SKNO1和HEK293细胞（北纳生物，中国），lipo-fectamine2000（Si g ma，美国），二甲基亚砜（Sigma，美国），TR-izol（In v i t r o g e n，美国），cDNA合成试剂盒（Invitrogen，美国），IMDM培养基（生工生物，中国），抗BAX（A b c a m，美国）、抗BCL2（A b c a m，美国），抗BCLXL（A b c a m，美国），抗GAPDH(Abcam，美国），CCK8检测试剂盒（上海生物，中国），AnnexinV(Sigma,美国）;THUNDERBIRD SYBRqPCRMix（T o y o b o，日本），超净工作台（Sigma，美国），二氧化碳培养箱（Sigma，美国），离心机（Optima，德国），蛋白凝胶电泳仪（Bi o-b a d，美国），实时荧光定量PCR仪（Sigma，美国），酶标仪（美谷分子，中国），显微镜（Nikon，日本）。细胞培养AML细胞系SKNO-1和HEK293来自BeNa3361MODERNONCO.31,No.18第31卷第18 期现代肿瘤医学2023年0 9 月培养中心（细胞均经STR鉴定正确，无相关污染）。所有细胞均在含10%FBS、青霉素（10 0 U/mL）、链霉素（10 0 g/mL)的90%IMDM培养基中培养,培养温度为37,CO浓度为5%。表1患者临床特征Tab.1Characteristics of patients(n=57)and healthy(n=57)VariableAMLHealthyGender n(%)Male33(57.89)31(54.39)Female24(42.11)26(45.61)Age at diagnosis(years)Median5457Range18 8018 80Bone marrow blasts at diagnosis(%)Median67.4Range4591WBC(10/L)Median22.57.9Range2.7 87.24.010.01.3细胞转染将410/mL细胞接种于6 孔板中，当细胞生长至8 0%90%底面积时进行细胞转染。本研究过表达circ-BAX.3、c ir c-BA X.11及相关对照载体均设计并购自于上海吉凯基因医学科技股份有限公司。而miR12 8 m i m i c s（模拟物）、miR-214mimics（模拟物）以及相关对照miR-NC均设计并购自于吉玛基因。首先在转染前将细胞铺板在2mL含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中进行培养,然后将10 Llipofectamine2000加人至50 0 L的无血清培养液中并加相关过表达载体或对照载体混匀后开始转染操作。其中miR-128及miR-214mimics的转染剂量为50nmol/L,两者混合物的混合比例为1:1且混合后的终浓度为50nmol/L，转染2 4h。然后在37，5%COz条件下培养细胞2 4 7 2 h。1.4实时荧光定量PCR（q RT-PC R）检测circ-BAX.3、circ-BAX.11、m iR-12 8 和miR-214的表达水平使用TRIzol分离总RNA，使用cDNA合成试剂盒和oligodT引物合成cDNA。使用THUNDERBIRDSYBR?qPCRMix通过定量PCR测定circ-BAX.3、c ir c-BA X.11、m iR-12 8和miR-214的表达水平。对于环状RNA，不同的引物由circinteractome（h t t p s:/c i r c i n t e r a c t o m e.n i a.n i h.g o v/）设计。PCR引物序列信息见表2。1.5细胞增殖试验选择细胞计数试剂盒（CCK-8）（中国上海生物技术公司）测定细胞增殖能力。在96 孔培养板中,将SKNO-1(6103）细胞接种并培养0、2 4、48 或7 2 h。每孔加人10 uLCCK-8溶液，继续培养4小时后使用ELISA酶标仪（BioTek，美国）测量49 0 nm处吸光度1.6流式细胞则细胞亡情况为了证明所研究的circRNA和miRNA可能影响细胞调亡，收集转染的SKNO-1细胞，离心并悬浮在50 0 L结合缓冲液中。然后将细胞依次用5LAnnexinV-EGFP和5L碘化丙啶染色。染色的细胞在室温下避光孵育15min，然后使用FACSCalibre进行分析。表2QRT-PCR引物序列Tab.2QRT-PCRprimersequenceGenePrimer sequencecircRNA-BAX.3Forward5_TGATGACCCTCTGACCCTAGC-3Reverse5-AGCTTCTTGGTGGACGCAT-3circRNA-BAX.11Forward5-GATTAGTGCCTTCTGCCCTCC-3Reverse5-TGCCACTCGGAAAAAGACCT-3miR-214Forward5-TGACGGACAGACACGGACGA-3Reverse5-ACTCTTTCATTGATCTGTCCCA-3miR-128Forward5-TTTCTCTGGCCAAGTGACAC-3Reverse5-ACTCTTTCATTGATCTGTCCCA-3GAPDHForward5-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3Reverse5-GGATCTCGCTCCTGGAAGATG-3U6Forward5-CTCGCTTCGGCAGCACATA-5Reverse5-AACGATTCACGAATTTGCGT-31.7双荧光素酶报告试验使用荧光素酶载体psiCHECK构建了具有突变circRNA和突变BAX3UTR的重组质粒。将具有不同重组的质粒与miRNA模拟物或模拟物对照共转染HEK-293细胞。用荧光素酶活性检测试剂盒检测各组细胞的荧光表达强度。1.8蛋白质印迹检测凋亡相关蛋白表达情况转染细胞在含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液中裂解并提取蛋白质。通过BCA测定蛋白质浓度，并在10%SDS-PAGE凝胶上分离2 5g蛋白质，转移至PVDF膜，然后在4下与兔抗单克隆抗体（BAX,BCL-2,BCL-XL,GAPDH)杂交过夜。在室温下用二抗对膜孵育1h后用增强化学发光法观察信号。GAPDH用作内参。一抗在本研究中使用如下：抗BAX(1:500）,抗BCL-2（1:2 0 0）,抗BCL-XL（1:500）和抗GAPDH。二抗为HRP标记二抗（1:10 0 0 0）1.9统计学分析用GraphPadPrism6.0软件进行统计分析。计数资料采用均数标准差的形式进行表示。符合正态分布的数据采用t检验对两组间差异情况进行比较，采用单因素方差分析对3组差别进行比较,Tukey法进行两两比较。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1circ-BAXS和BAX的表达情况与57 份健康血液样本相比,57 份AML患者外周血中的circ-BAX.3(has_circ_0051799)和 circ-BAX.11(has_circ_0051800)表达显著降低（图1A-B,P0.05）。A M L患者中BAXmRNA的表达明显下调（图1C,P0.05）。此外，通过Westernblot检测调亡相关蛋白BAX、BCL2 和BCL-XL，结果显示，在AML样本中促调亡蛋白BAX和BCL-XL明显减少，抗调亡蛋白BCL2明显增加（图1D）（P 0.0 5）。最后，为了鉴定circ-BAX.3和circ-BAX.11的成环特性，我们用RNaseR处理相关RNA后，对circRNA和BAX的表达进行检测发现RNaseR能够显著降解BAX的表达而对circRNA无影响（图1E-F）。3362：circ-BAX.3和circ-BAX.11抑制急性髓细胞性白血病细胞作用的机制研究邢增文，等APeripheralbloodBPeripheralbloodCPeripheralblood2.5n=57P0.052.5-n=57P0.053.5-n=57P0.053.02.0-2.02.5-1.5-1.5-2.01.0-1.01.51.00.5-0.5-0.5-0.00.00.0HealthAMLHealthAMLHealthAMLDE1.5-mockRNaseRF1.57mockRNaseRPeripheralbloodBAX1.0-1.0-BCL2BCL-XL0.5-0.5-GAPDHHealthAML0.00.0-circ-BAX.1lBAXcirc-BAX.3BAX图1circRNA在急性髓系白血病（AML）中的表达情况（*P0.05）A-C:qRT-PCR检测circ-BAX.3（h a s _c i r c _0 0 517 99）、c i r c-BA X.11(h a s _c i r c _0 0 518 0 0）和BAXmRNA在57 例AML患者和57 例健康人群中的表达水平;D：W e s t e r n-b l o t 检测AML样本中促凋亡蛋白BAX、BCL-XL和抗调亡蛋白BCL2的表达;E-F:qRT-PCR验证RNaseR处理后circRNA和BAX的表达，验证其成环特性。Fig.1The expression of circ-RNA in acute myeloid leukemia(AML)(*P0.05)A-C:qRT-PCR to detect the expression levels of circ-BAX.3(has_circ_0051799),circ-BAX.11(has_circ_0051800)and BAX mRNA in 57AML patients and 57 healthy people.D:Western-blot to detect the expression levels of pro-apoptotic proteins BAX,BCL-XL and anti-apoptotic pro-tein BCL2 in AML samples.E-F:qRT-PCR was used to verify the expression of circRNA and BAX after RNase R treatment to verify the looping property.2.2miR-128和miR-214与BAX的3 UTR相互结合基因网络根据TargetScan算法分析靶点关系，由Cyto-scape绘制。BAX基因网络的分析显示，circ-BAX.3（h a s _circ_0051799）和circ-BAX.11（h a s _c i r c _0 0 518 0 0）靶向相同的2 个miRNA,miR-214-3p和miR-128-3p（图2 A）。UCSC结果显示，circBAXs和BAX源自位于19号染色体（c h r 19）中的相同亲本基因（图2 B）。5个外显子包含BAXmRNA,3个外显子包含circ-BAX.3（h a s _c i r c _0 0 517 99）mRNA,2个外显子包含circ-BAX.11（h a s _c i r c _0 0 518 0 0）（图2 B上）。所有这些包括3 UTR的外显子都包含hsa-miR-214和has-miR-128的靶位点（图2 B下）。进一步我们通过双荧光素酶报告检测以验证miR-214、m iR-12 8和circRNA3UTR的靶标关系（图2 C,P0.05）。与模拟对照相比，miR-214和miR-128组的荧光素酶活性较低,miR-214+miR-128组最低，表明circ-BAX.3和circ-BAX.11对miR-214和miR-128均存在靶向调控关系。通过对Mfold（h t t p:/u n a f o l d.r n a.a l b a n y.e d u/？q=mfold)上BAX-3UTR二级结构的分析,具有循环目标的miR-214显示出更高的组合可能性（图3A）。进行双荧光素酶实验以验证miR-214、m i R-12 8 和BAX3UTR的靶标关系（图3B,P0.05）。与模拟对照相比，miR-214和miR-128组的荧光素酶活性较低,miR-214+miR-128组最低，表明miR-214和miR-128均对BAX3UTR有影响。2.3miR-128和miR-214调控BAX表达对细胞增殖和凋亡的影响miRNA模拟物成功转染到人急性髓系白血病细胞SK-NO-1中(图3C,P0.05）。与SKNO-1细胞中的模拟对照相比，miR-214或miR-128以及它们的混合物，都可以抑制BAXmRNA水平（图3D,P0.05）。m iR-2 14和miR-128通过抑制促凋亡蛋白（BAX和BCL-XL）的表达和增加抗凋亡蛋白（BCL2）的表达，明显促进细胞增殖、抑制细胞调亡（图4,P0.05），并且miR-214和miR-128的混合物对细胞的作用最明显。因此，选择该混合物进行以下实验。2.4circ-BAX.3和circ-BAX.11对BAX表达及AML进程的影响情况转染circRNA过表达载体后，circ-BAX.3（c i r c 7 99）和circ-BAX.11（c i r c 8 0 0)表达上调（图5A,P0.05）。当circ-BAX.3和circ-BAX.11过表达时,miR-214和miR-128下降（图5B-C,P0.05）。此外，过表达circ-BAX.3和circ-BAX.11能够通过下调miR-214和miR-128进而诱导BAXmRNA和蛋白的表达上调，且这一作用被miR-214和miR-128的混合处理组所逆转（图5D和图6 A，P0.05）。c ir c-BA X.3和circ-BAX.11还导致BCL2的减少和BCL-XL的增加,以抑制SKNO-1细胞增殖并促进SK-NO-1细胞调亡（图6,P0.05）。然而当miR-214和miR-128的混合物与circRNA同时处理时能够降低BAX、BCL2和BAX-XL的蛋白表达量进而影响肿瘤细胞增殖和细胞凋亡的变化。3讨论急性髓系白血病（AML)是一种造血系统恶性疾病,是成人白血病最常见的类型。深人探讨AML分子机制对提高患者的治疗效果具有重要意义13-14。本研究结果显示,circ-BAX.3和circ-BAX.11通过结合miR-128和miR-214促进BAX的表达，促进AML细胞调亡，这对白血病患者的发病机制和早期诊断具有重要意义。MODERNONC31.No.1833632023年0 9 月第31卷第18 期现代肿瘤医学AC1.5Icirc-BAX.11-WTAGO2:12circ-BAX.11-MUThsa_circ_0051800hsa-miR-766-3p1.0-hsa-miR-24-3pAGO2:10Lhsa_circ.0051799hsa_circ_00518010.5-hsa-miR-298*hsa-miR-128-3p0.0MimicsmiR-214miR-128miR-214+hsa_circ_0051798controlmiR-128hsa_circ_00517971.5-Icirc-BAX.3-WThsa-miR-34a-5pcirc-BAX.3-MUThsa-miR-122-5pBAXhsa-miR-504-5phsa-miR-148a-3p1.0-hsa-miR-148b-3phsa-miR-15b-5phsa-miR-1-3p0.5-hsa-miR-181a-5p*hsa-miR-7-5phsa-miR-30a-5p*hsa-miR-365a-3p0.0MimicsmiR-214miR-128miR-214+controlmiR-128Bchr1919p1219123113.4215.49BAXhsa_circ_0051799hsa_circ_0051800hsa-miR-214hsa-miR-1283ugacggacagacacGGACGACa53uuucucuggccaAGUGACACu51UCAAUCCCCGAUUCAUCUACCCUGCUGACCUCCCAGUGACCCUGACCUCACUGUGACCUUGACUUGAUUAGUGC7576CUUCUGCCCUCCCUGGAGCCUCCACUGCCUCUGGAAUUGCUCAAGUUCAUUGAUGACCCUCUGACCCUAGCUCUU150151UCCUUUUUUUUUUUU165BAX3UTR图2内源性竞争机制预测（ceRNA网络）（*P0.05）A：Cy t o s c a p e 绘制了环状BAXRNA/miR-128和miR-214/BAX的ceRNA机制;B：根据UCSC，包含3UTR外显子的circ-BAX和BAX均来源于BAX的亲本基因；C：双荧光素酶报告分析证实miRNA与circRNA3UTR的靶向关系。Fig.2 Prediction of endogenous competition mechanism(ceRNA network)(*P0.05)A:Cytoscape mapped the ceRNA mechanism of circular BAX RNAs/miR-128 and miR-214/BAX.B:According to UCSC,both circ-BAX and BAXcontaining 3UTR exons are derived from the parental genes of BAX.C:Dual luciferase report analysis confirmed the targeting relationship between miRNAand circRNA3UTR.ABCDBAX-wildtype1.5-BAX-WT口BAX-MUT10-1.51.0-861.0-0.5-40.5-2一0.000.0MimicsmiR-214miR-128controlMimicsTransfectedMimicsmiR-128control图3miR-128/miR-214与BAX3UTR的靶向关系（*P0.05）A：M f o l d 预测BAX3UTR的第二个结构；B：双荧光素酶报告分析证实miRNA与BAX3UTR的靶向关系；C:qRT-PCR验证miR-214或miR-128转染SKNO-1后的表达;D:miR-214或/和miR-128过表达组对AML细胞中BAXmRNA表达的影响。Fig.3The targeting relationship between miR-128/miR-214 and BAX 3UTR(*P0.05)A:Mfold predicted the second structure of BAX 3UTR.B:Dual luciferase report analysis confirmed the targeting relationship between miRNA and BAX3UTR.C:qRT-PCR verified the expression of miR-214 or miR-128 after transfection of SKNO-1.D:The effect of miR-214 or/and miR-128overexpression group on BAX mRNA expression in AML cells.目前研究显示与癌症患者的发病机制和诊断相关的环状RNA已被部分研究所证实15。在本研究中，与健康人相比,circ-BAX.3和circ-BAX.11在AML中显著下调，并且该结果在AML细胞系SKNO-1中同样得到证实。本研究推断circ-BAX.3和circ-BAX.11可能与AML的发生有关。研究表明16 ,miRNA表达谱与特定的人类肿瘤表型显miR-214 and miR-128.D:circ-BAX.3 and circ-BAX.11groups increas