LncRNA IQCH-AS1调节miR-494-3p_ARID1A轴抑制孕激素耐药的子宫内膜癌细胞增殖.pdf

BasicResearch基础研究Original Article论著回3335MODERNONO.31,No.182023年0 9 月第31卷第18 期现代肿瘤医学LncRNAIQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴抑制孕激素耐药的子宫内膜癌细胞增殖强贤，欧阳俊，王海珍，葛素梅常州市妇幼保健院病理科，江苏常州2 130 0 3【摘要】目的：探讨LncRNAIQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴对孕激素耐药的子宫内膜癌（EC)细胞增殖、凋亡的影响。方法：体外培养Ishikawa细胞，构建EC孕激素耐药细胞株Ishikawa/醋酸甲羟孕酮（MPA），M T T 法验证Ishikawa/MPA细胞的耐药性；qRT-PCR法检测Ishikawa细胞和Ishikawa/MPA细胞中孕激素受体（PR）、Ln c RNA IQ CH-A S1、m i R-494-3p 和ARID1AmRNA表达。双荧光素酶报告基因实验、RNApull-down实验验证Ishikawa/MPA细胞中LncRNAIQCH-AS1、m i R-494-3p 和ARID1A间靶向关系。Ishikawa/MPA细胞分为Ad-NC组、Ad-IQCH-AS1组、Ad-IQCH-AS1+miR-NC组和Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p组,qRT-PCR法检测LncRNAIQCH-AS1、m i R-494-3p、A RID 1AmRNA、PRm RNA 表达；MTT检测细胞增殖活力；流式细胞仪检测细胞调亡率；Westernblot法检测ARID1A、PR、Cy c l i n D 1、CD K 4、c l e a v e d-c a s p a s e-3、c l e a v e d-PA RP蛋白表达。裸鼠成瘤实验观察LncRNAIQCH-AS1对Ishikawa/MPA细胞裸鼠移植瘤生长和MPA耐药性的影响。结果：本研究构建的Ishikawa/MPA细胞耐药指数为4.33。Ishikawa/MPA细胞中PRmRNA、Ln c RNA IQ CH-A S1和ARID1AmRNA低表达，而miR-494-3p高表达（P0.05）。经验证,Ishikawa/MPA细胞中miR-494-3p与LncRNAIQCH-AS1、A RID 1A 均存在靶向关系。Ishikawa/MPA细胞中过表达LncRNAIQCH-AS1能够下调miR-494-3p表达，同时上调ARID1A、PRm RNA 和蛋白表达，降低细胞存活率和CyclinD1、CD K 4蛋白表达，提高细胞调亡率和cleaved-caspase-3、c l e a v e d-PA RP蛋白表达（P0.05）；而过表达miR-494-3p可减弱过表达LncRNAIQCH-AS1对ARID1A、PR表达以及细胞增殖、调亡的影响。此外，过表达LncRNAIQCHA S1可抑制Ishikawa/MPA细胞的裸鼠移植瘤生长，并降低MPA耐药性。结论：LncRNAIQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴抑制孕激素耐药的EC细胞增殖,并诱导其凋亡。【关键词】LncRNAIQCH-AS1;miR-494-3p;ARID1A；孕激素；耐药性；子宫内膜癌【中图分类号】R737.33【文献标识码】AD0I:10.3969/j.issn.1672-4992.2023.18.001【文章编号】16 7 2-4992-（2 0 2 3)18-3335-0 7LncRNA IQCH-AS1 inhibits proliferation of progesterone-resistant endometrial carcino-ma cells by regulating miR-494-3p/ARID1A axisQIANG Xian,OUYANG Jun,WANG Haizhen,GE SumeiDepartment of Pathology,Changzhou Maternal and Child Health Care Hospital,Jiangsu Changzhou 213003,China.Abstract】O b j e c t i v e:T o i n v e s t i g a t e t h e i m p a c t s o f Ln c RNA IQ CH -A S1 o n t h e p r o l i f e r a t i o n a n d a p o p t o s i s o fprogesterone-resistant endometrial carcinoma(EC)cells by regulating miR-494-3p/ARID1A axis.Methods:Ishikawa cells were cultured in vitro and the EC progesterone resistant cell line Ishikawa/MPA was constructed.MTTmethod was applied to verify the drug resistance of Ishikawa/MPA cells.The expression of progesterone receptor(PR),LncRNA IQCH-AS1,miR-494-3p and ARID1 A mRNA in Ishikawa cells and Ishikawa/MPA cells wasdetected by qRT-PCR.The double luciferase reporter gene experiment and RNA pull-down experiment were【收稿日期】2023-03-15【修回日期】2023-0511【基金项目】江苏省常州市卫生健康青苗人才培养（编号：CZQM2020102）【作者简介】强贤（198 1一），女，江苏溧阳人，硕士，副主任医师，主要从事妇产科肿瘤、宫颈脱落细胞学的病理诊断工作。E-mail：Q a n 8 10 【通信作者】葛素梅（197 9一），女，江苏沛县人，硕士，副主任医师，主要从事妇产科肿瘤、乳腺肿瘤的病理诊断工作。Ema i l：2 96 IModern.Uncology 2u23,31():3333-33413336强LncRNAIQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴抑制孕激素耐药的子宫内膜癌细胞增殖贤，等applied to verify the targeting relationship between LncRNA IQCH-AS1,miR-494-3p and ARID1A in Ishikawa/MPA cells.Ishikawa/MPA cells were grouped into Ad-NC group,Ad-IQCH-AS1 group,Ad-IQCH-AS1+miR-NC group and Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p group.The expression of LncRNA IQCH-AS1,miR-494-3p,ARIDIA mRNA and PR mRNA was detected by qRT-PCR.The cell proliferation activity was detected by MTT.The apoptosis rate was detected by flow cytometry.Western blot was applied to detect the expression of ARIDIA,PR,CyclinD1,CDK4,cleaved-caspase-3,and cleaved-PARP proteins.The effect of LncRNA IQCH-AS1 on thegrowth and MPA resistance of Ishikawa/MPA cells transplanted tumor in nude mice was observed by tumorigenesisexperiment in nude mice.Results:The drug resistance index of Ishikawa/MPA cells constructed in this study was4.33.The expression of PR mRNA,LncRNA IQCH-AS1 and ARID1A mRNA in Ishikawa/MPA cells was low,whilethe expression of miR-494-3p was high(P0.05).It had been verified that miR-494-3p in Ishikawa/MPAcells had a targeted relationship with LncRNA IQCH-AS1 and ARID1A.Overexpression of LncRNA IQCH-AS1 inIshikawa/MPA cells could down-regulate the expression of miR-494-3p,and up-regulate the expression of AR-ID1A,PR mRNA and protein,reduce the cell survival rate and the expression of CyclinD1,CDK4 proteins,and in-crease the cell apoptosis rate and the expression of cleaved-caspase-3,cleaved-PARP proteins(P0.05).Theoverexpression of miR-494-3p was able to attenuate the effect of overexpression of LncRNA IQCH-AS1 on the ex-pression of ARIDIA,PR,cell proliferation and apoptosis.In addition,overexpression of LncRNA IQCH-AS1 was a-ble to inhibit the growth of transplanted tumor of Ishikawa/MPA cells in nude mice and reduce MPA resistance.Con-clusion:LncRNA IQCH-AS1 regulates miR-494-3p/ARID1A axis to inhibit the proliferation of progesterone-resistant EC cells and induce their apoptosis.Key wordsLncRNA IQCH-AS1,miR-494-3p,ARID1A,progesterone,drug resistance,endometrial carcinoma随着子宫内膜癌（endometrialcarcinoma，EC）发病人群呈年轻化趋势，内分泌治疗因可以保留生育能力而成为一种很有前途的保守治疗方法，但孕激素耐药是目前的主要挑战 。因此,迫切需要阐明EC孕激素耐药机制，从而寻找新的潜在靶点，以增强和优化希望保留生育能力或晚期、复发EC患者的保守治疗效果。近年,LncRNA、m i RNA 等非编码RNA在EC发生发展和化疗、孕激素耐药中的作用逐渐受到重视,且多个LncRNAm iRNA m RNA 相互作用网络在EC中被陆续报道2 。已有研究通过LncRNA测序发现，LncRNAIQCH-AS1在EC组织中表达下调，可辅助子宫内膜癌前病变及EC患者的早期诊断3。此外,LncRNA IQCH-AS1通过调节miR-196a-5p/PPP2R1B信号通路增强甲状腺癌细胞对多柔比星的敏感性4。本研究前期通过生物信息学分析显示，LncRNAIQCHA S1与miR-494-3p存在靶向结合位点，ARID1A是miR-494-3p的靶基因之一。既往研究亦显示,抑制miR-494-3p表达可上调其靶基因HOXA10表达,进而改善超排卵小鼠的子宫内膜容受性5敲除ARID1A通过下调EC中孕激素受体（progesteroneresist-ance,PR)表达促进原发性孕激素抵抗6 。然而,LncRNAIQCH-AS1对孕激素耐药的EC细胞增殖、凋亡的影响及其机制是否与miR-494-3p/ARID1A轴有关尚待阐明。据此,本研究旨在探讨LncRNA IQCH-AS1对孕激素耐药的EC细胞增殖、调亡的影响以及miR-494-3p/ARID1A轴在此过程中的作用,以期为EC抗孕激素耐药提供新的见解。1材料与方法1.1材料及试剂人EC细胞Ishikawa购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司。5周龄雌性BALB/c裸鼠（体质量18 2 1g）购自江苏集萃药康生物科技有限公司常州分公司，生产许可证：SCXK（苏)2 0 19-0 0 0 9。MTT检测试剂盒、TRIzol试剂、荧光定量PCRMasterMix（SY BRG r e e n）购自上海联迈生物工程有限公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司;RNApulld o w n 试剂盒购自中国赛默飞世尔；LncRNAIQCH-AS1过表达腺病毒载体（Ad-IQCH-AS1)及其阴性对照（Ad-NC）、m i R-494-3p 模拟物（miR-494-3pmimic）及其阴性对照（miR-NC）、生物素标记的miR-494-3p(Bio-miR-494-3p)和 miR-NC(Bio-NC)和所用引物由苏州泓迅生物技术股份有限公司合成；ARID1A、PR、Cy c l i n D 1、CD K 4、c l e a v e d -c a s p a s e -3、c l e a v e d -PA RP、GAPDH抗体购自英国Abcam公司或美国Invitrogen公司；AnnexinV-FITC/PI双染细胞调亡检测试剂盒购自南京莱富赛生物科技有限公司。1.2实验方法1.2.1细胞培养和EC激耐药细胞株构建Ishikawa细胞复苏后悬浮于含10%胎牛血清和1%双抗的RPMI-1640培养基中，置于37、5%CO培养箱中培养，待细胞融合度达到8 0%左右时进行消化传代，2 3天换液一次,取对数生长期细胞开展后续实验。以Ishikawa细胞为亲本细胞，醋酸甲羟孕酮（MPA）为诱导剂,采用持续作用、浓度呈梯度递增的方式构建稳定的EC孕激素耐药细胞株Ishikawa/MPA，并将Ishikawa/MPA细胞在含有10 mol/LMPA的培养基中培养，以保持耐药性，历经4个月成功建立稳定的EC孕激素耐药细胞株Ishikawa/MPA71.2.2MTT法验证Ishik/MPA细胞的耐药性Ishikawa细胞、Ishikawa/MPA细胞以每孔510 个接种于96 孔板中，待细胞融合度达到8 0%左右时添加不同浓度的MPA（终浓度为0、10、2 0、40、6 0、8 0、10 0 mol/L）7 ，另设不含细胞的培养液作为空白组，在37、5%CO2培养箱中培养48 h后每孔添加5mg/mLMTT溶液2 0 L,继续培养4h后在酶标仪中检测各孔细胞在490 nm波长处的吸光度值（O D 490 mm），计算细胞存活率、MPA抑制细胞增殖的半数抑制浓度（ICso）和耐药指数。细胞存活率（%）=（实验组3337.MODERNONO31.No.182023年0 9 月第31卷第18 期现代肿瘤医学OD490mm-空白组OD490mm）/（对照组OD490m空白组OD490mm)100%。1.2.3qRT-PCR检测Ishikawa细胞和Ishikawa/MPA细胞中孕激素受体（PR）m RNA、Ln c RNA I Q C H-A S1、m i R-494-3p和ARID1AmRNA表达Trizol试剂提取Ishikawa细胞和Ishikawa/MPA细胞中总RNA,并将其逆转录为cDNA，随后以cDNA为模板配制qRT-PCR反应体系,在qRT-PCR仪上进行扩增。反应程序为95预变性5min;95变性30 s,60退火30 s,40个循环。根据qRT-PCR结束后获取的循环阈值（Ct值），采用2-AACt法计算目的基因相对表达量。引物序列如下,PR上游：5-CGCGCTCTACCCTGCACTC-3,下游：5*-TGAATCCGGCCTCAGGTAGTT-3;LncRNAIQCH-AS1上游：5*-AGCTCTGATACCACAACAAT-3，下游:5-AAAACGGTAATTTATCCTTC-3;miR-494-3p上游:5-GATACTCGAAGGAGAGGTTGTC-3，下游：5-GAGGTTTCCCGTGTATGTTTCAT-3;ARID1A上游：5-GGTGTAGGTTTTAGAGATGT-3，下游：5-AAACAAACTCACTCCCTT-3;U6上游：5-CTCGCTTCGGCAGCACA3，下游：5-ACGCTTCACGAATTTGCGT-3;GAPDH上游：5-GACCTGACCTGCCGTCTA-3，下游：5-AGGAGTGGGTGTCGCTGT-31.2.4双荧光素酶报基因实验Starbase数据库(http:/ RI D 1A 的潜在结合位点。将预测的LncRNAIQCHA S1、A RI D 1A 序列片段进行突变，随后将LncRNAIQCH-AS1、A RI D 1A 序列片段和突变片段分别插人到pmirGLO荧光素酶载体构建野生型载体（IQ CH-A S1-W T、A RID 1A-W T）和突变型载体（IQCH-AS1-MUT、A RI D 1A-M U T）。采用Lipofectamine3000试剂将所构建的野生型载体和突变型载体分别与miR-494-3pmimic(miR-494-3p mimic 组)、miR-NC(miR-NC 组)共转染至Ishikawa/MPA细胞中，转染48 h后，参照双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明检测细胞荧光素酶活性。1.2.5RNApull-down实验Ishikawa/MPA细胞以每孔510 个接种于6 孔板，待细胞融合度达到8 0%左右时转染Bio-miR-494-3p和Bio-NC,转染48 h后收集细胞，使用RNApull-down裂解液裂解细胞，将裂解产物与M280链霉亲和素包被的磁珠4孵育4h（磁珠预先使用无RNase的BSA和酵母tRNA处理），Trizol试剂提取磁珠结合的RNA，q RT-PC R检测LncRNAIQCH-AS1相对表达量（操作步骤参照1.2.3）1.2.6细胞分组与干预Ishikawa/MPA细胞以每孔510 5个接种于6 孔板，分为Ad-NC组（转染Ad-NC）、A d-IQ CH-A S1组（转染Ad-IQCH-AS1）、A d-I Q CH-A S1+m i R-NC组（共转染Ad-IQCH-AS1 和miR-NC)和Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p组（共转染Ad-IQCH-AS1和miR-494-3pmimic)。依据转染试剂盒说明，分别将对应载体或质粒转染至各组Ishikawa/MPA细胞中，每组设置6 个复孔。转染48 h后收集细胞，验证转染效率以及对PR表达的影响。其中LncRNAIQCH-AS1、m i R-494-3p、A RID 1A m RNA 和 PRmRNA表达采用qRT-PCR法检测（操作步骤参照1.2.3），ARID1A、PR蛋白表达采用Westernblot检测。1.2.7Westernblot检测各组Ishikawa/MPA细胞中ARID1A、PR、Cy c l i n D 1、CD K 4、c l e a v e d -c a s p a s e -3、cleaved-PARP蛋白表达收集转染48 h后的各组Ishikawa/MPA细胞，使用裂解液于冰上裂解后离心，获取上清液，BCA法检测蛋白浓度。SDS-PAGE电泳分离等量变性蛋白，将分离的蛋白转至PVDF膜5%BSA室温封闭1h后加人一抗（ARID1A、PR、CyclinD1、CD K 4、c l e a v e d -c a s p a s e -3、c l e a v e d -PA RP、GAPDH抗体，1:10 0 0)4孵育过夜，加人二抗（HRP标记羊抗兔IgG,1:5000）室温孵育1h,ECL显色，ImageJ软件定量分析各蛋白条带灰度值（GAPDH为内参蛋白）。1.2.8MTT法检测各组Ishikawa/MPA细胞增殖活力转染48 h后的各组Ishikawa/MPA细胞以每孔510 3个接种于96 孔板中，另设不含细胞的培养液作为空白组，在37、5%C O z 培养箱中培养48 h后每孔添加5mg/mLMTT溶液2 0 L,继续培养4h后在酶标仪中检测各孔细胞的OD490m，计算细胞存活率。1.2.9流式细胞仪检shik/MPA细胞凋亡率收集转染48 h后的各组Ishikawa/MPA细胞，PBS洗涤后加人18 5LAnnexinV-FITC结合液重悬细胞，随后加人5LAnnexinV-FITC和10 LPI染色液室温避光染色15min，上样流式细胞仪，检测细胞调亡率。1.2.10裸鼠成瘤实验20只雌性BALB/c裸鼠在温度2 0 2 2、湿度40%50%、光照/黑暗12 h/12h、自由饮水饮食的环境条件下适应性饲养7 d后,随机分为Ad-NC+DMSO组、Ad-NC+MPA组、Ad-IQCH-AS1+DMSO组和Ad-IQCH-AS1+MPA组，每组各5只。根据分组，分别皮下注射110 7 个转染Ad-NC或Ad-IQCH-AS1的细胞（10 0 L）,并当肿瘤直径约为5mm时,各组对应腹腔注射10 0 mg/kgMPA或相同体积的DMSO,每两天注射1次，直至第2 8 天被处死8 。处死裸鼠后取出瘤体，称取肿瘤重量、测定肿瘤体积。肿瘤体积=（长宽）/21.3统计学方法实验数据应用SPSS25.0软件分析，以均值标准差（xs)表示，两组间差异采用t检验，多组间差异采用单因素方差分析，多组间有差异的任意两两组间差异采用SNK-q检验。P0.05表明差异有统计学意义。2结果2.1EC耐药细胞株的建立与0 mol/LMPA比较,2 0、40、6 0、8 0、10 0 mol/LMPA均可降低Ishikawa细胞存活率（P0.05），而40、6 0、8 0、10 0mol/LMPA才可降低Ishikawa/MPA细胞存活率(P0.05）（图1）。经计算，MPA对Ishikawa细胞、Ishikawa/MPA细胞的ICso分别为17.52、7 5.8 6 mol/L，耐药指数为4.33。表明本研究构建的EC孕激素耐药细胞株Ishikawa/MPA具有一定耐药性，可以开展后续实验2.2PR mRNA、Ln c RNA I Q C H-A S1、m iR-49 4-3p 和ARIDIAmRNA在Ishikawa细胞和Ishikawa/MPA细胞中的表达与Ishikawa细胞比较，Ishikawa/MPA细胞中PRmRNA、LncRNAIQCH-AS1和ARID1AmRNA表达水平降低（t=10.893、11.42 4、12.2 2 1,P 0.0 5）,而miR-494-3p表达水3338强贤，等LncRNAIQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴抑制孕激素耐药的子宫内膜癌细胞增殖平升高（t=20.839,P0.05,图2)。1507Ishikawa:Ishikawa/MPA100-*50-工工工一*工*01020406080100MPA(mol/L)图1不同浓度MPA干预后Ishikawa细胞和Ishikawa/MPA细胞存活率比较与 0 mol/L MPA比较,*P0.05。Fig.1Comparison of Ishikawa cell and Ishikawa/MPA cell survival ratesafter MPA intervention at different concentrationsCompared with 0 mol/L MPA,*P0.05.2.57IshikawaIshikawa/MPA2.01.5-1.0-0.5-0.0PRmRNAmiR-494-3pARIDIAmRNALnCRNAIQCH-AS图2Ishikawa细胞和Ishikawa/MPA细胞中mRNA表达水平比较与Ishikawa比较,*P0.05。Fig.2Comparison of mRNA expression levels in Ishikawa cell and Ish-ikawa/MPAcellCompared with Ishikawa,*P0.05.2.31Ishikawa/MPA细胞中LncRNAIQCH-AS1、m iR-494-3p和ARID1A间靶向关系Starbase数据库预测发现，miR-494-3p与LncRNAIQCHA S1、A RID 1A 均存在靶向结合位点（图3）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-NC组比较，miR-494-3pmimic组共转染IQCH-AS1-WT(1.000.07vs0.490.06,n=6,t=13.550,P=0.000)或ARID1A-WT的细胞相对荧光素酶活性降低（0.990.0 8 vs0.460.07,n=6,t=12.213,P=0.000),而共转染IQCH-AS1-MUT(1.020.06 vs 0.98 0.07,n=6,t=1.063,P=0.313)或ARID1A-MUT的细胞相对荧光素酶活性无显著差异（1.0 30.0 7 vs1.01 0.08,n=6,t=0.461,P=0.655)。RNA p u ll-d o w n实验结果显示,与Bio-NC比较,Bio-miR-494-3p能够富集更多的LncRNAIQCH-AS1(1.010.09vs14.261.83,n=6,t=17.714,P0.05）,这进一步验证了 LncRNA IQCH-AS1与miR-494-3p的靶向关系。2.4Ishikawa/MPA细胞中LncRNAIQCH-AS1靶向调节miR-494-3p/ARID1A轴与Ad-NC组比较,Ad-IQCH-AS1组Ishikawa/MPA细胞中LncRNAIQCH-AS1、A RI D 1A m RNA 和蛋白表达水平升高，miR-494-3p表达水平降低（P0.05）；与Ad-IQCH-AS1+miR-NC组比较,Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p组Ishikawa/MPA细胞中LncRNAIQCH-AS1表达水平无显著差异（P0.05），而ARID1AmRNA和蛋白表达水平降低，miR-494-3p表达水平升高（P0.05）(图4)。LncRNAIQCH-AS15.gagcuuacccaggaaUGUUUCu.3miR-494-3p3.cuccaaagggcacauACAAAGu.5ARIDIA5.ggaaaaagucucuccUGUUUCu.3图3miR-494-3p与LncRNAIQCH-AS1、A RI D 1A 的靶向结合位点Fig.33Targetedbinding sites of miR-494-3p with LncRNAIQCH-AS1 and ARID1AARID1AGAPDHABCD2.5-Ad-NCAd-IQCH-AS1+miR-NCAd-IQCH-AS1Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p2.01.5-#1.00.5-0.0LncRNAmiR-494-3pARID1AARID1AIQCH-AS1mRNAprotein图4各组Ishikawa/MPA细胞中LncRNAIQCH-AS1、m i R-494-3P、A RI D I A m RNA 和蛋白表达水平比较A:Ad-NC;B:Ad-IQCH-AS1;C:Ad-IQCH-AS1+miR-NC;D:Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p。与Ad-NC组比较，*P0.05;与Ad-IQCH-AS1+miR-NC组比较,#P0.05。Fig.4Comparison of expression levels of LncRNA IQCH-AS1,miR-494-3p,ARID1AmRNA and protein in Ishikawa/MPA cell ineach groupA:Ad-NC.B:Ad-IQCH-AS1.C:Ad-IQCH-AS1+miR-NC.D:Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p.Compared with Ad-NCgroup,*P0.05.Compared with Ad-IQCH-AS1+miR-NC group,#P0.05.2.5LncRNAIQCH-AS1靶向调节miR-494-3p/ARIDIA轴促进Ishikawa/MPA细胞中PR表达与Ad-NC组比较,Ad-IQCH-AS1组Ishikawa/MPA细胞中PRmRNA和蛋白表达水平升高（P0.05);与Ad-IQCH-AS1+miR-NC组比较,Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p组Ishikawa/MPA细胞中PRmRNA和蛋白表达水平降低（P0.05）（图5）。3339.MODERNONCOL31.No.182023年0 9 月第31卷第18 期现代肿瘤医学PRGAPDHABCDAd-NC2.07Ad-IQCH-AS1Ad-IQCH-AS1+miR-NC1.5#Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p1.0-0.5-0.0PRmRNAPRprotein图5各组Ishikawa/MPA细胞中PRmRNA和蛋白表达水平比较A:Ad-NC;B:Ad-IQCH-AS1;C:Ad-IQCH-AS1+miR-NC;D:Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p。与Ad-NC组比较,*P0.05;与Ad-IQCH-AS1+miR-NC 组比较,#P0.05。Fig.5Comparison of expression levels of PR mRNA and protein in Ish-ikawa/MPA cell in each groupA:Ad-NC.B:Ad-IQCH-AS1.C:Ad-IQCH-AS1+miR-NC.D:Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p.Compared with Ad-NC group,*P0.05.Compared with Ad-IQCH-AS1+miR-NC group,#P0.05.2.6LncRNAIQCH-AS1靶向调节miR-494-3p/ARID1A轴抑制Ishikawa/MIPA细胞增殖与Ad-NC组比较,Ad-IQCH-AS1组Ishikawa/MPA细胞存活率和CyclinD1、CD K 4蛋白表达水平降低（P0.05);与Ad-IQCH-AS1+miR-NC组比较,Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p组Ishikawa/MPA细胞存活率和CyclinD1、CD K 4蛋白表达水平升高（P0.05)(图6)。2.7LncRNAIQCH-AS1靶向调节miR-494-3p/ARIDIA轴促进Ishikawa/MPA细胞凋亡与Ad-NC组比较,Ad-IQCH-AS1组Ishikawa/MPA细胞凋亡率和cleaved-caspase-3、c l e a v e d-PA RP蛋白表达水平升高(P0.05);与 Ad-IQCH-AS1+miR-NC 组比较,Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p组Ishikawa/MPA细胞调亡率和cleaved-caspase-3、c l e a v e d-PA RP蛋白表达水平降低（P0.05)(图 7 -8)。150-1.5-IAd-NCAd-IQCH-AS1+miR-NCCyclinD1Ad-IQCH-AS1Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p100-1.0-50#CDK40ON-PV0.5-GAPDHAd-IQCH-ASI0.0ABCDCyclinD1CDK4Ad-IQCH-AS1-miR-494-3p图6各组Ishikawa/MPA细胞CyclinD1、CD K 4蛋白表达水平及存活率比较AAd-NC;B:Ad-IQCH-AS1;C:Ad-IQCH-AS1+miR-NC;D:Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p。与Ad-NC组比较,*P0.05;与Ad-IQCH-AS1+miR-NC组比较,#P0.05。Fig.6Comparison of CyclinD1 and CDK4 protein expression levels and survival rate of Ishikawa/MPA cells in each groupA:Ad-NC.B:Ad-IQCH-AS1.C:Ad-IQCH-AS1+miR-NC.D:Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p.Compared with Ad-NC group,*P0.05.Compared with Ad-IQCH-AS1+miR-NC group,#P0.05）A d-IQ CH-A S1+D M-3340：强LncRNAIQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴抑制孕激素耐药的子宫内膜癌细胞增殖贤，等SO组、Ad-IQCH-AS1+MPA组肿瘤重量和肿瘤体积降低(P0.05);与Ad-NC+MPA组比较,Ad-IQCH-AS1+DMSO组、Ad-IQCH-AS1+MPA组肿瘤重量和肿瘤体积降低(P0.05);与Ad-IQCH-AS1+DMSO组比较,Ad-IQCH-AS1+MPA组肿瘤重量和肿瘤体积降低（P0.05）(图9)。Ad-NC0.8rAd-IQCH-AS1cleaved-caspase-3Ad-IQCH-AS1+miR-NC0.6HAd-IQCH-AS1+miR-494-3pcleaved-PARP0.4#0.2HGAPDH0.0ABCDcleaved-caspase-3cleaved-PARP图8各组Ishikawa/MPA细胞中cleaved-caspase-3、c l e a v e d-PA RP蛋白表达A:Ad-NC;B:Ad-IQCH-AS1;C:Ad-IQCH-AS1+miR-NC;D:Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p。与Ad-NC 组比较,*P0.05;与Ad-IQCH-AS1+miR-NC组比较,#P0.05。Fig.8 Expression of cleaved-caspase-3 and cleaved-PARP protein in Ishikawa/MPA cell in each groupA:Ad-NC.B:Ad-IQCH-AS1.C:Ad-IQCH-AS1+miR-NC.D:Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p.Compared with Ad-NC group,*P0.05.Compared with Ad-IQCH-AS1+miR-NC group,#P 0.05.Ad-NC+DMSOAd-NC+MPAAd-IQCH-AS1+DMSOAd-IQCH-AS1+MPA500元4001.0#300F#0.5200F1000.0L0Ad-NC+DMSOAd-NC+MPAAd-NC+DMSOAd-IQCH-AS1+MPAAd-IQCH-ASI+MPA图9各