安徽省两栖动物新记录种——秉志肥螈.pdf

四川动物 Sichuan Journal of Zoology 2023，42（4）：420-427安徽省两栖动物新记录种秉志肥螈黄平倩，汪帆，鲁航，荣鹏，肖祥寅，张方，黄松，吴孝兵，李冰欣*，陈进民*（安徽师范大学生命科学学院，重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室，安徽芜湖241000）摘要：肥螈属Pachytriton是中国的特有两栖类群，目前，安徽省只记录费氏肥螈Pachytriton feii 1种。本研究在安徽省黄山市休宁县马金岭自然保护区进行野外调查时，采集到肥螈属动物标本，形态符合秉志肥螈Pachytriton granulosus的鉴别特征，基于线粒体cyt b基因片段的分子系统学分析显示，其与秉志肥螈有最近的进化关系，确认秉志肥螈为安徽省新记录。本次发现将秉志肥螈的分布区域拓展至白际山脉，为肥螈属的生物地理学研究提供了基础资料，对于皖南及其周边地区地质史与生物区系研究具有重要意义。此外，讨论了秉志肥螈和费氏肥螈的同域共存问题，安徽省肥螈属物种的分布格局需要开展进一步的研究。关键词：肥螈属；新记录；安徽省；白际山脉中图分类号：Q959.5 文献标志码：A 文章编号：1000-7083（2023）04-0420-08Pachytriton granulosus,a New Amphibian Record in Anhui ProvinceHUANG Pingqian，WANG Fan，LU Hang，RONG Peng，XIAO Xiangyin，ZHANG Fang，HUANG Song，WU Xiaobing，LEE Pingshin*，CHEN Jinmin*（Anhui Provincial Key Laboratory of the Conservation and Exploitation of Biological Resources，College of Life Sciences，Anhui Normal University，Wuhu，Anhui Province 241000，China）Abstract:The genus Pachytriton is an amphibian group endemic to China，and has received wide attention for its scientific research and conservation values.At present，only one species（Pachytriton feii）has been recorded in Anhui Province.A field study was conducted in the Majinling Nature Reserve（Xiuning County，Huangshan City，Anhui Province），and fresh specimens of Pachytriton were collected.The morphological characteristics of the specimens were consistent with the diagnostic features of P.granulosus.In addition，the result of phylogenetic analysis using mitochondrial cyt b gene fragments revealed that the specimens had the closest evolutionary relationship with P.granulosus.Therefore，a new amphibian record of P.granulosus was confirmed in Anhui Province.This study expands the recorded distribution area of P.granulosus to the Baiji Mountains and provides the first-hand basic information for the biogeography of the genus Pachytriton，which is important for the study of the geological history and biota of southern Anhui and its surrounding areas.Furthermore，the potential sympatric coexistence of P.granulosus and P.feii was discussed，and it is recommended that the diversity and distribution pattern of Pachytriton species in Anhui Province should be further investigated.Keywords:Pachytriton；new record；Anhui Province；Baiji MountainsDOI：10.11984/j.issn.1000-7083.20220364收稿日期：2022-10-13 接受日期：2023-04-13基金项目：国家自然科学基金项目（32001222；31900323）；重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室开放基金项目（692001）；国家级大学生创新创业训练计划项目（202210370142）；休宁县生物多样性调查与评估项目；黄山国家森林公园生物多样性调查项目作者简介：黄平倩，硕士，研究方向：两栖动物分类与保护，E-mail：pingqian_*通信作者Corresponding author，E-mail：；420黄平倩等：安徽省两栖动物新记录种秉志肥螈肥螈属 Pachytriton Boulenger，1878 隶属两栖纲Amphibian有尾目Caudata蝾螈科Salamandridae，是中国的特有类群，主要分布于我国长江以南的亚热带地区，包括浙江、江西、福建、安徽、湖南、广东、广西和贵州等，栖息于山区森林溪流中（中国两栖类，2022）。目前，肥螈属已知10种，除秉志肥螈P.granulosus和黑斑肥螈P.brevipes外，其他8种均为近10余年发表的新物种（Li et al.，2018；Frost，2022；中国两栖类，2022）。安徽省的肥螈属目前已知费氏肥螈P.feii 1种（Frost，2022；中国两栖类，2022），其是2011年根据安徽黄山标本命名的新物种，目前分布于安徽南部及其相邻的江西东北部地区（Nishikawa et al.，2011；Wu&Murphy，2015）。本研究在安徽省黄山市休宁县马金岭自然保护区发现秉志肥螈，为安徽省两栖类新记录，此次发现为进一步探讨肥螈属同域物种分化提供了素材。此外，本研究将秉志肥螈的分布区域拓展至白际山脉，为肥螈属的生物地理学研究提供了基础资料，对皖南及其周边地区生物区系与地质史研究具有重要意义。1材料与方法1.1材料6 号肥螈标本（33）于 2022 年 78 月采自 安 徽 省 黄 山 市 休 宁 县 马 金 岭 自 然 保 护 区（11818 28.42 E，2931 56.33 N，海拔 445 m）。经安乐死后，取肝脏组织保存于95%乙醇溶液中；整体标本以10%甲醛溶液固定后，清水冲洗，75%乙醇溶液保存。标本及组织样品现均保存于安徽师范大学（ANU）。1.2形态鉴定与测量形态测量指标和外部形态描述主要参考费梁等（2012）、Wu 等（2012）、Yuan 等（2016）、Li 等（2018）的方法。用电子游标卡尺测量标本的24个形态指标（精度 0.1 mm）：头体长、尾长、头长、头宽、头高、吻长、眼径、眼间距、鼻眼距、鼻间距、肩宽、前肢长、后肢长、尾宽、尾高、第一指长、第二指长、第三指长、第四指长、第一趾长、第二趾长、第三趾长、第四趾长和第五趾长。1.3DNA提取、扩增及测序使 用 常 规 酚/氯 仿 抽 提 法（Sambrook et al.，1989）提取样品基因组 DNA 后，20 保存备用。参照 Wu 等（2010）的方法进行 cyt b 基因片段的PCR扩增和测序。PCR反应体系为25 L，反应程序：94 2 min；94 30 s，52 45 s，72 90 s，35个循环；72 5 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，送安徽通用有限公司双向测序。1.4分子系统发育研究使 用 DNASTAR LASERGENE 7.0（Burland，2000）的SeqMan对测序获得的双向序列峰图进行正反链互补和人工校对。将获得的新序列在GenBank上进行BLAST分析，然后搜索序列同源性，确保新获得的序列是目标DNA片段。确认后在GenBank 中下载肥螈属所有物种 cyt b 基因的代表序列，并以东方蝾螈 Cynops orientalis 和棕黑疣螈Tylototriton verrucosus 为外群（表 1），使用 MEGA 7（Kumar et al.，2016）比对序列。使用贝叶斯法（BI法）和最大似然法（ML法）同时构建系统发育树。利用JModelTest 0.1.1（Posada，2008）基于AIC标准选择最适核苷酸替代模型。运用MRBAYES 3.2（Ronquist&Huelsenbeck，2003）构建 BI 系统发育树，共运行 2 000万代，每 1 000代进行 1次抽样。通过Tracer 1.7（Rambaut et al.，2018）中的有效样本量判断结果是否收敛。基于收敛的情况，舍弃前25%代 数。运 用 RaxML（Stamatakis&Hoover，2008）构建ML系统发育树，进行1 000 bootstrap重抽样分析。肥螈属物种间的遗传距离采用MEGA 7基于P-distances距离模型进行计算。421四川动物 2023 年 第 42 卷 第 4 期Sichuan Journal of Zoology Vol.42 No.4 20232结果2.1形态描述标本经形态测量（表2）和检视，均符合秉志肥螈的鉴定特征。体型肥壮；头呈椭圆形、扁平，侧面无棱脊，头宽小于头长；吻部较长，端圆；鼻孔小且距离吻端极近，吻长大于鼻间距、鼻眼距；咽喉部有纵褶肤，颈部有明显的褶皱；唇褶发达，上下颔有细齿，犁骨齿列呈“”形，枕部有“V”形隆起，但不明显。皮肤光滑，躯干至尾基部呈圆柱状；背腹略扁平，脊背部位没有隆起而略成纵沟；肋沟11条左右，部分个体身体两侧有细的横皱纹，腹部有横皱沟。头体、四肢背面褐色，无黑色斑点；头体腹面橘红色，有少数不规则的褐色短纹或呈蠕虫状斑；四肢腹面、肛孔，以及尾巴下缘、尾巴腹面橘红色（图1）。尾基部宽厚，后半段逐渐侧扁，末端呈钝圆状，尾部有细的横皱纹，尾背鳍褶达体背前方；雄性肛部有明显隆起，肛孔纵长，内壁有乳突；雌性肛部隆起不显著，肛孔较短，内壁无乳突。四肢粗短，前肢比后肢短且细。指长顺序为3241，第一指较其他指短小；趾长顺序为34251，第一趾和第五趾较其他趾短小；指趾末端均具缘膜，无角质鞘（图2）。2.2分子系统发育分析cyt b基因序列长1 107 bp。基于BI法和ML法构建的系统发育树拓扑结构基本一致（图3）。本次采自安徽省黄山市休宁县马金岭自然保护区表1样品信息表Table 1Information of samples used in this study序号ID123456789101112131415161718192021物种Species秉志肥螈Pachytriton granulosus瑶山肥螈Pachytriton inexpectatus莫氏肥螈Pachytriton moi吴氏肥螈Pachytriton wuguanfui黄斑肥螈Pachytriton xanthospilos南方肥螈Pachytriton airobranchiatus弓斑肥螈Pachytriton archospotus黑斑肥螈Pachytriton brevipes费氏肥螈Pachytriton feii张氏肥螈Pachytriton changi棕黑疣螈Tylototriton verrucosus东方蝾螈Cynops orientalis采集地Locality安徽黄山马金岭安徽黄山马金岭安徽黄山马金岭安徽黄山马金岭安徽黄山马金岭安徽黄山马金岭浙江安吉龙王山浙江台州市天台山浙江宁海西天目山浙江淳安金紫尖广西大瑶山广西猫儿山广西猫儿山湖南宜章莽山广东惠东莲花山湖南桂东福建武夷山安徽黄山黟县地点不详地点不详浙江江山标本号Voucher IDANU000476ANU000498ANU000499ANU000501ANU000510ANU000530KIZ06364CIB88161CIB88139LSU20200827JZJ01KIZ05203KIZ07767KIZ08756KIZ06750SWUFYZY0213KIZ04563KIZ08928KIZ04228KUHE39763ZJ200806473GenBank登录号GenBank accession numberOQ409905OQ409906OQ409907OQ409908OQ409909OQ409910KU374996GQ303648GQ303646MW056200KU375000KU375003KU374983KU374988MG732931KU374978KU374981KU374992AB638709AB686174AB638713422黄平倩等：安徽省两栖动物新记录种秉志肥螈的 6号标本属于同一个谱系，与秉志肥螈的样本聚为一支，且得到支持（BPP95%；BS70%），该谱系还包括浙江安吉龙王山、浙江台州市天台山、浙江宁海西天目山和浙江淳安金紫尖种群。此外，基于Pdistance距离模型计算的肥螈属的遗传距离显示，采自安徽黄山马金岭自然保护区的肥螈标本与秉志肥螈的遗传距离最近，与来自浙江宁海西天目山的遗传距离只有0.1%（表3），分子系统学结果支持采自安徽省黄山市休宁县马金岭自然保护区的6号标本均为秉志肥螈。2.3生境描述本次采集到的秉志肥螈标本分布在安徽省黄山市休宁县马金岭自然保护区海拔445 m瀑布下的深水潭里。深潭水流较缓，水质清澈见底，水底多为落叶、石块、泥沙等。水潭分布有小鱼、水生无脊椎动物等小型动物。与其同域分布的两栖类有棘胸蛙 Quasipaa spinosa、黄山角蟾 Boulenophrys huangshanensis、天目臭蛙Odorrana tianmuii等。植被和水体均保存较好，人为破坏程度较小。3讨论本文结合形态和分子证据揭示了安徽省两栖类新记录种：秉志肥螈，加上之前记录的费氏肥螈，目前安徽省记录有2种肥螈属物种。形态上，表2安徽马金岭自然保护区的秉志肥螈标本的形态量度Table 2Measurements of Pachytriton granulosus collected from the Majinling Nature Reserve，Anhui指标Item/mm头体长尾长头长头宽头高吻长眼径眼间距鼻眼距鼻间距肩宽前肢长后肢长尾宽尾高第一指长第二指长第三指长第四指长第一趾长第二趾长第三趾长第四趾长第五趾长ANU000476（）76.871.420.313.29.26.23.25.24.64.213.415.318.18.99.01.92.72.82.12.03.24.53.82.4ANU000498（）74.467.919.012.88.75.73.14.94.24.010.815.517.67.67.91.72.53.51.92.03.35.14.52.9ANU000499（）66.856.017.911.38.95.83.14.94.53.99.514.018.17.38.61.72.43.22.22.53.34.64.02.7ANU000501（）70.862.418.511.97.56.13.14.64.84.510.514.516.78.08.51.93.43.92.42.23.05.14.52.5ANU000510（）79.775.120.914.310.66.63.75.54.34.412.917.018.79.312.82.33.13.82.62.54.36.46.13.1ANU000530（）80.468.419.913.47.66.03.46.54.64.612.515.818.88.510.72.43.44.02.31.93.85.54.63.2423四川动物 2023 年 第 42 卷 第 4 期Sichuan Journal of Zoology Vol.42 No.4 2023费氏肥螈和秉志肥螈的主要区别在体长、腹面颜色和斑纹等（Nishikawa et al.，2011；费梁等，2012）。在分子系统发育上，秉志肥螈与费氏肥螈存在明显的遗传分化，证实了其形态学的鉴定。本研究提示肥螈属的物种分布格局值得进一步研究，安徽省肥螈属物种的分布情况有待厘清。秉志肥螈和费氏肥螈可能存在同域共存现象。本研究发现，秉志肥螈分布区之前记录的是费氏肥螈（Wu&Murphy，2015；中国两栖类，2022），这2个物种对栖息环境需求相似，是否存在同域物种分化及其进化机制是未来的研究方向。本次发现将秉志肥螈的分布区域拓展至白际山脉，为肥螈属的生物地理学研究提供了重要基础资料。秉志肥螈历史记录分布于浙江和福建山区（费梁等，2012；Wu&Murphy，2015）。肥螈属的物种分布格局与山脉水系变迁有着紧密的联系，本发现对于皖南及其周边地区生物区系与地质史研究具有重要意义。图1安徽马金岭自然保护区的秉志肥螈活体照Fig.1Pachytriton granulosus from Majinling Nature Reserve，AnhuiA.ANU000499，B.ANU000501；1.背面，2.侧面，3.腹面A.ANU000499，B.ANU000501；1.dorsal view，2.lateral view，3.ventral view424黄平倩等：安徽省两栖动物新记录种秉志肥螈图2安徽马金岭自然保护区的秉志肥螈手（a、c）与足（b、d）形态（标本号：ANU000501）Fig.2Hand（a，c）and foot（b，d）of Pachytriton granulosus（voucher No.ANU000501）from the Majinling Nature Reserve，Anhuia、b.腹面ventral view，c、d.背面dorsal view图3基于线粒体cyt b基因序列构建的肥螈属贝叶斯系统发育树Fig.3Bayesian inference phylogenetic tree of the genus Pachytriton based on mitochondrial cyt b gene加粗字体为本文新测序样品，节点处的支持率为贝叶斯后验概率/最大似然支持率Bold fonts indicate the samples collected in this study，the support values at the node is the Bayesian posterior probability/ML bootstrap support values425四川动物 2023 年 第 42 卷 第 4 期Sichuan Journal of Zoology Vol.42 No.4 2023参考文献:费梁，叶昌媛，江建平.2012.中国两栖动物及其分布彩色图鉴 M.成都：四川科学技术出版社.中国两栖类.2022.“中国两栖类”信息系统 EB/OL.2022-10-10.http：/www.amphibiachina.org/.Burland TG.2000.DNASTAR s Lasergene sequence analysis softwareM.Molecular Biology and Evolution，132：71-91.Frost DR.2022.Amphibian species of the world：an online reference，version 6.0.New York（NY）：American Museum of Natural History DB/OL.2022-10-10.http：/research.amnh.org/herpetology/amphibia/index.php/.Kumar S，Stecher G，Tamura K.2016.MEGA7：molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasetsJ.Molecular Biology and Evolution，33（7）：1870-1874.Li C，Yuan Z，Li H，et al.2018.The tenth member of stout newt（Amphibia：Salamandridae：Pachytriton）：description of a new species from Guangdong，southern China J.Zootaxa，4399（2）：207-219.Nishikawa K，Jiang JP，Matsui M.2011.Two new species of Pachytriton from Anhui and Guangxi，China（Amphibia：Urodela：Salamandridae）J.Current Herpetology，30（1）：15-31.Posada D.2008.jModelTest：phylogenetic model averagingJ.Molecular Biology and Evolution，25（7）：1253-1256.Rambaut A，Drummond AJ，Xie D，et al.2018.Posterior summarisation in Bayesian phylogenetics using Tracer 1.7J.Systematic Biology，67（5）：901-904.Ronquist F，Huelsenbeck JP.2003.MrBayes 3：Bayesian phylogenetic inference under mixed modelsJ.Bioinformatics，19（12）：1572-1574.Sambrook J，Fritsch EF，Maniatis T.1989.Molecular cloning，a laboratory manual，2nd ed，vol M.New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press.Stamatakis AP，Hoover JR.2008.A rapid bootstrap algorithm for the RAxML Web servers J.Systematic Biology，57（5）：758-771.Wu Y，Wang Y，Jiang K，et al.2010.Homoplastic evolution of external colouration in Asian stout newts（Pachytriton）inferred from molecular phylogenyJ.Zoologica Scripta，39（1）：9-22.Wu Y，Wang Y，Hanken J.2012.New species of Pachytriton（Caudata：Salamandridae）from the Nanling mountain range，southeastern China J.Zootaxa，3388（1）：1-16.Wu Y，Murphy RW.2015.Concordant species delimitation from multiple independent evidence：a case study with the表3基于线粒体cyt b基因的肥螈属物种间遗传距离Table 3Genetic distance among Pachytriton species based on mitochondrial cyt b gene物种1.秉志肥螈P.granulosus（安徽黄山马金岭）2.秉志肥螈P.granulosus（浙江安吉龙王山）3.秉志肥螈P.granulosus（浙江台州市天台山）4.秉志肥螈P.granulosus（浙江宁海西天目山）5.秉志肥螈P.granulosus（浙江淳安金紫尖）6.瑶山肥螈P.inexpectatus7.莫氏肥螈P.moi8.吴氏肥螈P.wuguanfui9.黄斑肥螈P.xanthospilos10.南方肥螈P.airobranchiatus11.弓斑肥螈P.archospotus12.黑斑肥螈P.brevipes13.费氏肥螈P.feii14.张氏肥螈P.changi10.23.10.10.47.97.26.05.75.47.16.55.76.023.10.10.47.97.26.05.75.47.16.55.76.033.03.18.88.57.26.26.68.47.06.46.940.37.97.15.95.65.37.06.45.65.957.97.26.05.75.57.16.75.76.066.79.17.87.98.78.68.08.478.47.37.57.07.87.98.585.35.27.96.16.65.695.47.95.15.62.8107.15.55.65.9117.67.68.1125.56.5136.3426黄平倩等：安徽省两栖动物新记录种秉志肥螈四川省鸟类新记录海南蓝仙鹟2023年4月19日在宜宾市南溪区开展生物多样性调查过程中，于云台湖景区附近1条小溪旁的乔木林（10452 11.58 E，2859 20.97 N）观察到1只小型林鸟。通过相机拍摄和双筒望远镜观察，该鸟体长约15 cm，上体包括两翅和尾表面暗蓝色，喉、胸暗蓝色，下胸和两胁蓝灰色，其余下体白色，前额和眼上眉斑较鲜亮，嘴黑色。经查阅 中国鸟类野外手册（约翰 马敬能等，2000），确认为海南蓝仙鹟Cyornis hainanus。海南蓝仙鹟在国内主要分布于海南、广东、广西、云南、贵州南部等地，在海南岛为常见留鸟；喜好低地常绿林的中高层，种群数量不详。进一步查阅 中国鸟类分类与分布名录（第三版）（郑光美，2017）、四川省鸟类名录的修订与更新（阙品甲等，2020）等和中国观鸟记录中心（http：/），确定海南蓝仙鹟为四川省鸟类分布新记录。宜宾位于四川南部，紧邻云贵两省；宜宾及周边区域无该种鸟类的养殖记录，推测为从云贵迁徙扩散至宜宾。唐永江1，2，谢婷婷3，黄小龙3，王春晖3，阙品甲4，彭浩5，赵成1，2*(1.宜宾学院农林与食品工程学部,四川宜宾644000;2.宜宾学院动物多样性与生态保育宜宾市重点实验室,四川宜宾644000;3.生态环境部长江流域生态环境监督管理局生态环境监测与科学研究中心,武汉430010;4.成都大熊猫繁育研究基地,成都610081;5.宜宾市林业和竹业局,四川宜宾644000)作者简介：唐永江（2002），男，本科，研究方向：野生动物保护*通信作者，E-mail：图1海南蓝仙鹟Cyornis hainanus（赵成 摄于四川省宜宾市南溪区云台湖景区）Pachytriton brevipes complex（Caudata：Salamandridae）J.Molecular Phylogenetics and Evolution，92：108-117.Yuan ZY，Zhang BL，Che J.2016.A new species of the genus Pachytriton（Caudata：Salamandridae）from Hunan and Guangxi，southeastern China J.Zootaxa，4085（2）：219-232.427