基于文献计量学BSA在作物育种领域的应用现状与展望.pdf

Hereditas(Beijing)2024 年 5 月,46(5):360372 收稿日期:20231123;修回日期:20240214;网络发布日期:20240403 基金项目:宁夏自然科学基金项目(编号：2022AAC03086)资助Supported by the Ningxia Natural Science Foundation Project(No.2022AAC03086)作者简介:张刚，硕士研究生，专业方向：稗草分子遗传育种。E-mail: 通讯作者:朱林，博士，教授，硕士生导师，研究方向：植物水分生理和生态学。E-mail: DOI:10.16288/j.yczz.23-292 领域动态基于文献计量学 BSA 在作物育种领域的应用现状与展望 张刚1,2,朱林1,2，聂豪杰1,2，包玉国3，程云龙3 1.宁夏大学生态环境学院，银川 750000 2.西北土地退化与生态恢复国家重点实验室培育基地，银川 750000 3.宁夏大学林草学院，银川 750000 摘要:为了解国内外集群分离分析法(bulked segregant analysis，BSA)在作物育种领域的研究现状与前沿动态，客观反映各国家、机构及研究人员在该领域的影响力，本文基于文献计量学分析方法使用文献计量分析软件CiteSpace对 WOS(Web of Science)数据库20002023年2111项和 CNKI(China National Knowledge Infrastructure)数据库 20032023 年 446 项研究成果进行关键词共现分析、突显词分析、关键词聚类分析、聚类时间线分析及作者共被引分析。结果表明：BSA 在作物育种领域应用的研究成果在国内外的发文趋势相同，国内外期刊发文量均逐年上升；在发文量国家排序中，中国排名第一、美国第二、印度第三。在 CNKI 数据库中华中农业大学的发文量最多，而在 WOS 数据库中中国农业科学院的发文量最多。国外 BSA 在作物育种领域应用的文章主要集中在植物科学、农学、园艺学和遗传学等学科，而国内主要集中在作物学、植物保护学、园艺学、生物学等学科；Michlmore RW、Kosambi DD 和 Li H 这 3 位作者在该领域的影响力最高，而 Michlmore RW、Lander ES、Li H 这 3 位作者与其他作者有更密切的联系。国内研究的热点作物和性状分别是水稻(Oryza sativa)、大豆(Glycine max)、玉米(Zea mays L.)和抗病性、株高；国外研究的热点作物和性状分别是水稻、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、小麦(Triticum aestivum L.)和抗病性。目前，BSA 在国内集中应用于作物目标性状候选基因及作物突变体突变基因的定位和功能验证，而国外则集中应用于作物目标性状基因的精细定位和功能验证及遗传机制的解析。此外，BSA 在作物育种领域应用的研究前沿分析表明，未来在该领域热点研究的对象为水稻、花生(Arachis hypogaea L.)、陆地棉(Gossypium hirsutum L.)、作物突变体和作物代谢产物。关键词:BSA；作物育种；文献计量分析法；CiteSpace 第5期 张刚等:基于文献计量学 BSA 在作物育种领域的应用现状与展望 361 Application and prospect of BSA method based on bibliometrics in crop breeding Gang Zhang1,2,Lin Zhu1,2,Haojie Nie1,2,Yuguo Bao3,Yunlong Cheng3 1.College of Ecology and Environment,Ningxia University,Yinchuan 750000,China 2.Northwest State Key Laboratory of Land Degradation and Ecological Restoration Incubation Base,Yinchuan 750000,China 3.College of Agriculture,Ningxia University,Yinchuan 750000,China Abstract:In order to understand the progress and frontier in the application of BSA(bulked segregant analysis)method in crop breeding and to reflect objectively the contribution of different countries,institutions and researchers in this field at home and abroad,this study analyzed 2111 items in the WOS(Web of Science)database from 2000 to 2023 and 446 items in the CNKI(China National through Knowledge Infrastructure)database from 2003 to 2023,regarding the researches of the application of BSA in crop breeding,basing on bibliometric analysis methods using CiteSpace software including keyword co-occurrence analysis,highlight word analysis,keyword clustering analysis,clustering timeline analysis and author co-citation.The results showed that there was an consistent increasing trend in the publication number of the application of BSA in crop breeding both in the domestic and foreign journals year by year.Ranking of the top countries according to the number of publications was China,the United States and India.The Huazhong Agricultural University displayed the highest number of publications in the CNKI database,while the Chinese Academy of Agricultural Sciences was found to have the highest number of publications in the WOS database.The published articles related to the application of BSA in crop breeding abroad mainly focused on the disciplines such as plant science,agronomy,horticulture and genetics,while those in China mainly concentrated on such disciplines as plant science,plant protection,horticulture and biology.The top three authors in terms of influence in the field of appling BSA in crop breeding were Michelmore RW,Kosambi DD and Li H,while Michelmore RW,Lander ES and Li H had closer cooperations with other authors.The top three crops relating to the studies of BSA were rice(Oryza sativa),soybean(Glycine max),corn(Zea mays L.)with the hot spot traits of disease resistance and plant height domestically.The top three crops involving the studies of BSA were rice,Arabidopsis thaliana and wheat(Triticum aestivum L.)with hot spot traits of disease resistance abroad.Up to now,BSA was mainly used to localize and functionally verify the candidate genes linking target traits and the mutated genes in crops in the domestical documents,while the foreign published studies based on BSA were mainly focused on the fine mapping and functional verification of target trait genes aiming at the revelation of genetic mechanisms in crops.Research frontier analysis indicated that rice,peanuts(Arachis hypogaea L.),upland cotton(Gossypium hirsutum L.)would be the main objects of studies concerning application of BSA in crop breeding with the hot topics of crop mutants and crop metabolites in the future.Keywords:BSA;crop breeding;bibliometric analysis;CiteSpace 目前，全球作物产能仍存在着地域性和阶段性供给不足的事实1,2，而世界粮食增产主要靠 4 大源动力维持：耕地面积的扩张3、化肥4和农药5等化工产品的使用、农业机械化6和栽培技术体系7的革新、农作物品种的改良8。鉴于耕地资源分布不均衡、人均耕地面积少、生态环境不能无序破坏9等 362 Hereditas(Beijing)2024 第 46 卷 现实，品种改良成为作物增产的最佳选择，兼顾了产量的提高和环境的保护。在现代生物技术出现前开发新作物品种需要近25 年的时间，但随着 DNA 测序技术的快速发展，分 子 标 记 辅 助 育 种(molecular marker assisted breeding，MAS)具有缩短育种年限、准确转移所需目的基因片段等优势成为作物品种改良的主要手段，从开发新作物品种并推向市场所耗的时间缩短了710 年10,11。Chen 等12基于新一代测序技术(next-generation sequencing，NGS)对油菜(Brassica napus L.)的 DH 群体进行测序并构建高密度遗传图谱，用BioMercator v.4.2 软件进行 Meta-QTL 分析，成功定位了 2 个(cqDTF-C02 和 cqDTF-C06)控制开花天数的主要数量性状位点。相较于传统数量性状位点(quantitative trait locus，QTL)定位的繁琐耗时13，集群分离分析法(bulked segregant analysis，BSA)的优势在于只需构建 F2代分离群体便能定位控制特定性状相关的 QTL，这极大地提高了育种效率，缩短了育种年限。刁卫楠等14利用 BSA-seq 技术在西瓜(Citrullus lanatus)6 号染色体上检测到控制西瓜果肉柠檬黄色的主效 QTLs；贾利等15利用 BSA-seq技术定位了 25 个与辣椒(Capsicum annuum L.)(F2分离群体)果皮颜色相关的 QTLs。1991 年，BSA 方法由 Michelmore 等16提出，并利用该方法成功鉴定了生菜(Lactuca sativa L.)(F2群体)霜霉病抗性基因位点(Dm5/8)。其原理为选择目标性状具显著差异的作物作为亲本构建子代分离群体，从子代分离群体中选择具有极端目标性状表型的单株各 30 株，等摩尔量混合成 2 个极端 DNA 混合 池，然 后 进 行 全 基 因 组 测 序(whole genome sequencing，WGS)，并用单核苷酸多态性指数法(single nucleotide polymorphism-index，SNP-index)、欧式距离(Euclidean distance，ED)、G-value 等算法进行关联分析和定位控制目标性状的QTL或基因位置。目前 BSA-seq 发展较快，有专门用于人工诱变群体的 MutMap17，专门用于自然群体的 QTL-seq18，以及以 MutMap 为基础衍生而来的 MutMap+19和MutMap-Gap20。汪泽民等21利用 MutMap、QTL-seq和 GradedPool-seq(GPS)等多种 BSA-seq 定位方法对拟南芥(Arabidopsis thaliana)辐射突变体突变基因进行定位分析，将突变基因位点定位于 2 号染色体的 7 Mb 区间，候选基因为 AT2G28610。目前，已有相关文献对 BSA-seq 进行了综述。例如：Majeed 等22对 BSA-seq 技术及其相关分析方法在基因定位中的优缺点进行了详细的比对分析；Li 等23对 BSA 的发展历史和 BSA-seq 技术的优缺点进行了详细概述，并给予解决方案；白凤虎等24对BSA结合各种分子标记在农作物基因定位中的应用现状进行了详细的阐述。但是，传统综述文献并没有全面清晰地厘清学科的发展动态问题，使用文献计量分析法虽然可以弥补传统综述文献的缺陷，而关于使用文献计量分析软件 CiteSpace25分析BSA-seq 在作物育种领域应用的研究还鲜有报道。因此，本研究使用 CiteSpace 软件对 WOS(Web of Science)数据库 20002023 年 2111 项和 CNKI(China National Knowledge Infrastructure)数据库 20032023年 446 项相关性较高、质量较好的研究成果进行关键词共现分析、突显词分析、关键词聚类分析、聚类时间线分析及作者共被引分析，以明确国内外关于 BSA-seq 在作物育种领域应用的基本情况、热点分布和发展趋势，旨在为该领域研究人员寻找研究课题切入点及客观反映各国家、机构和人员在该领域的影响力提供理论参考。1 BSA 在作物育种领域应用的数据来源与学科分布 1.1 国内的数据来源与学科分布 中文文献数据来源于中国知网(CNKI)数据库，在高级检索模式下检索主题词“BSA 测序”精准搜索相关文献。文献类型包括学术期刊(58)和学位论文(388)，来源学科限定为中药学(2)、作物学(224)、植物保护学(59)、园艺学(147)、农艺学(1)、农业基础(2)、生物学(42)、环境科学与资源利用(9)。时间跨度从 2003 年 1 月 1 日2023 年 12 月 31 日，共获得文献 446篇，以 refworks格式导出进行可视化分析。其中来源于学位论文的文献占比为 87.00%，来源的主要学科为作物学、园艺学、植物保护学和生物学，第5期 张刚等:基于文献计量学 BSA 在作物育种领域的应用现状与展望 363 占比分别为 46.09%、30.24%、12.13%和 8.64%。1.2 国外的数据来源与学科分布 英文文献数据来源于 Web of Science(WOS)数据库，为提高检索数据的可靠性，文献来源仅限于核心合集，检索式为 TS=“Bulked Segregant Analysis”，DT=“Article”and“Review Article”，时间限定为 2000年 1 月 1 日2023 年 12 月 31 日。为防止微生物、动物等遗传学文章干扰，研究领域仅限定为 Plant Sciences(植物科学)和 Agriculture(农业)，共获得文献2111篇，以纯文本文件格式导出进行可视化分析。其中主要的来源学科为 Plant Science(植物科学)、Agronomy(农学)、Horticulture(园艺学)和 Genetics Heredity(遗传学)，占比分别为 58.88%、40.41%、34.77%和 33.40%。2 BSA 在作物育种领域应用的年份发文趋势及国家、机构和研究人员影响力 2.1 国内年份发文趋势和机构发文量 由图 1A 可知，国内该领域从 20032023 的发文量总体呈增长趋势，可分为 3 个阶段：第一阶段为 20032014 年，此阶段发文量极少，年际间变化不明显；第二阶段为 20142021 年，此阶段发文量 骤升，呈指数增长；第三阶段为 20212023 年，此阶段的发文量呈指数下降，预示该领域新问题的出现。对发文机构的发文量进行分析显示(图 1B)，发文量最多的机构是农业类高校。在前 10 名中，农业类高校发文量占比为 89.62%，其中占比最高的是华中农业大学(20.28%)，而非高校农业机构中中国农业科学院占比最高(10.38%)。2.2 国外年份发文趋势 由图 2 可知，国外该领域从 2000 年至今发文量呈上升趋势。可将其分为 3 个阶段：第一阶段为20002011 年，该阶段发文量少，呈无规则周期波动，可视为研究者们对该领域的探索；第二阶段为20112017 年，该阶段发文量呈稳定上升态势，但上升缓慢，可视为该领域的积累期；第三阶段为20172023 年，该阶段发文量显著增加，呈指数上升，可视为该领域的快速发展期。2.3 国家、机构及研究人员影响力 因 CiteSpace 软件无法对 CNKI 数据进行作者共被引分析，故不作分析。在国家、机构及人员影响力分析项中，为使数据保持一致，本研究统一使用WOS 数据库的数据信息进行分析。对其发文来源国家和机构发文量进行分析可知，发文量前 5 的国家依次为中国、美国、印度、德国、澳大利亚，前 5 图 1 CNKI 数据库 20032023 年发文趋势和机构发文量分析 Fig.1 Analysis of publication trends and institutional publication volume in CNKI database from 2003 to 2023 A：年份发文趋势分析；B：发文量前 10 的机构。364 Hereditas(Beijing)2024 第 46 卷 图 2 WOS 数据库 20002023 年发文趋势分析 Fig.2 Analysis of document trends in WOS database from 2000 to 2023 的机构依次为中国农业科学院、美国农业部、中华人民共和国农业农村部、中国农业科学院作物科学研究所和中国科学院(图 3)。发文量相关性分析显示(表 1)，中国从 20122023 年每 3 年的发文量均显著增长，相比之下，排名第二的美国仅在 20092011 年和 20182020 年才表现出发文量显著增加，并且中国从 2009 年起每 3 年的发文量均显著高于其他国家。以上分析表明，20002023 年在 BSA 的使用热度及影响力上中国均高于其他国家。被引频次是作者科研水平及学术影响力的重要指标。中心性是衡量一个节点在网络中与其他节点联系的紧密程度。在作者共被引分析中，中心性越高表明该作者和其他作者联系越紧密；中心性越小表明该作者与其他作者联系越少。由表2可知，被引频次前10的年份分布于2000、2014、2015、2017、2004 和 2001 年，其中 2000 年为分布次数最多的年份，表明该领域在 2000 年产出了较多重要的研究成果。被引频次最高的 3 位作者是 Michlmore RW、Kosambi DD 和 Li H，分别共被引了 1161、441 和 427 次，表明这 3 位作者在该领域的影响力最高。而中心性最高的 3 位作者是Michlmore RW(中心性 0.63)、Lander ES(中心性0.19)和 Li H(中心性 0.17)，表明这 3 位作者与其他作者有较为紧密的联系。3 BSA 在作物育种领域应用的研究成果与热点 3.1 国内研究成果与热点 在关键词共现分析中，关键词频次和中心性越高越能代表某一领域的研究热点。由图 4 可知，国 图 3 WOS 数据库 20002023 年发文来源国家及机构发文量统计分析 Fig.3 Statistical analysis of the publication volume and source country of publishing institutions in the WOS database from 2000 to 2023 A：发文量前 10 的国家；B：发文量前 10 的机构。第5期 张刚等:基于文献计量学 BSA 在作物育种领域的应用现状与展望 365 表 1 WOS 数据库 20002023 年发文量前 5 的国家相关性分析 Table 1 Correlation analysis of the publication volume of the top five countries in the WOS database from 2000 to 2023 年份 国家 中国 美国 印度 德国 澳大利亚 20002002 4.330.33dB 20.004.16abA 4.330.33cB 3.670.88aB 4.331.45bB 20032005 4.331.86dB 20.003.06abA 4.330.67cBC 9.671.76aBC 4.000.58bC 20062008 15.001.73cdA 13.002.52bcA 4.671.20cB 3.670.67aB 5.002.08bB 20092011 21.671.33cdA 9.330.88cB 5.671.20cC 2.000.58aD 2.670.88bCD 20122014 25.001.00cdA 160.58bcB 9.670.88bC 2.670.33aD 2.330.67bD 20152017 36.671.76cA 21.334.06abB 13.001.73abC 3.330.33aD 4.000.58bD 20182020 66.008.74bA 26.000.58aB 11.000.58bC 2.670.67aC 5.000.58bC 20212023 123.0012.81aA 24.333.84abB 14.671.20aB 12.008.00aB 9.331.67aB 同列数据后不同小写字母表示两者间差异显著(P0.05)，同行数据后不同大写字母表示两者间差异显著(P0.05)。表 2 WOS 数据库 20002023 年共被引前 10 名作者统计分析 Table 2 Statistical table of the top ten authors cited in the WOS database from 2000 to 2023 频次 中心性 年份 共被引作者 1161 0.63 2000 Michlmore RW 441 0.15 2000 Kosambi DD 427 0.17 2014 Li H 400 0.19 2000 Lander ES 324 0.08 2015 Takgi H 283 0.13 2000 Vos P 234 0.07 2017 Mckenna A 218 0.06 2015 Abe A 165 0.07 2004 Murray MG 160 0.05 2001 Doyte JJ 内该领域出现频次和中心性较高的作物及其性状分别为：水稻(Oryza sativa)及其抗病性、耐旱性、耐寒性、产量、穗部形状、半不孕性、株高、下胚轴长；西 瓜 及 其 下 胚 轴 长、果 皮 颜 色；陆 地 棉(Gossypium hirsutum L.)及其产量和品质、衣分性状；甜瓜(Cucumis melo L.)及其开花时间、抗病性；花生(Arachis hypogaea L.)及其种皮颜色、株型；大豆(Glycine max)及其叶片黄化、主茎节数、抗倒伏和株高；大白菜(Brassica campestris L.ssp.Pekinensis)及其抗病性、菜花颜色；玉米(Zea mays L.)及其低温萌发、耐寒性、抗病性；小麦(Triticum aestivum L.)及其不育性、茎长、抗病性、株高；番茄(Solanum lycopersicum)及其耐寒性。以上即为 20 年来使用BSA 研究的热点作物及其性状。其中水稻(频次 37/中心性 0.15)、大豆(频次 26/中心性 0.06)、玉米(频次 24/中心性 0.06)和抗病性(频次 5/中心性 0.01)、株高(频次 6/中心性 0.02)是出现频次和中心性最高的作物及性状，即为研究热度最高。3.2 国外研究成果与热点 国外该领域出现频次和中心性较高的作物及其性状分别为：水稻及其开花时间、育性、株高、产量、耐性；拟南芥及其抗性、开花时间、育性、株高、产量、花色；油菜及其抗性；麦类作物及其株高、抗性、产量、开花时间、耐性；番茄及其抗性；玉米及其抗病性、产量、株高；小白菜(Brassica campestris L.)及其抗性(图 5)。其中水稻(频次 216/中心性 0.07)、拟南芥(频次 121/中心性 0.06)、小麦(频次 73/中心性 0.03)、抗病性(频次 211/中心性 0.07)是频次和中心性最高的作物及性状关键词，即为研究热度最高。4 BSA 在作物育种领域应用的研究前沿 4.1 国内的研究前沿 突现词(burstness)指在不同时间段内词频贡献度发生突然骤增的关键词，其出现的时间范围与受关注程度成正比。通过 CiteSpace 软件对 CNKI 数 366 Hereditas(Beijing)2024 第 46 卷 图 4 CNKI 数据库 20032023 年关键词共现图谱 Fig.4 CNKI database keyword co-occurrence graph from 2003 to 2023 图 5 WOS 数据库 20002023 年关键词共现图谱 Fig.5 WOS database keyword co-occurrence graph from 2000 to 2023 第5期 张刚等:基于文献计量学 BSA 在作物育种领域的应用现状与展望 367 据库中 446 项研究成果进行关键词聚类(图 6)及突现(表 3)分析，结果显示，国内当前形成了#0 玉米、#1 基因定位、#2 水稻、#3 遗传分析、#4 陆地棉、#5 大豆、#6 花生和#7 番茄共 8 个聚类群，说明国 图 6 CNKI 数据库 20032023 年关键词聚类图谱 Fig.6 CNKI database keyword clustering graph from 2003 to 2023 内在作物育种领域使用 BSA 研究主要聚焦于这 8 个聚类模块。突现强度排名前 25 的突增热点词以出现年份先后顺序排列，突现区间分布于 20032023 年。突增热点词“花生”的突现强度最大，为 2.38，分布在 20212023 年，表明该作物是目前研究的热点作物。高热度持续最久的突现词是穗长，持续期为 6 年，表明种产是国内科研人员最关注的性状之一。此外，自 2021 年以来陆地棉、突变体、功能验证所受的关注度提高，可能是未来研究的热点关键词。4.2 国外的研究前沿 关键词聚类时间线分析是对每个聚类模块中关键词随时间变化而发生趋势的分析，不仅可以展示该领域发展的演变，还能构建聚类之间的关系。由图 7 可知，国外在作物育种领域使用 BSA 研究主要 表 3 CNKI 数据库 20032023 年被引用次数最多的前 25 个关键词 Table 3 Top 25 keywords with the strongest citation bursts in the CNKI database from 2003 to 2023 关键词 首次出现年份 突现强度 突现起始年份 突现结束年份 突现分布年份区间(20032023 年)桔红心 2003 1.37 2003 2006 文库构建 2008 1.28 2008 2012 图位克隆 2008 0.91 2008 2012 拟南芥 2011 1.3 2011 2012 穗长 2011 1.19 2011 2016 雄性不育 2013 1.16 2013 2017 番茄 2015 1.53 2015 2018 关联分析 2015 1.46 2015 2017 小麦 2006 1.28 2015 2019 激素 2016 1.22 2016 2017 玉米 2018 1.25 2018 2019 山葡萄 2018 1.03 2018 2019 孕穗期 2018 1.03 2018 2019 性别 2018 1.03 2018 2019 重测序 2019 1.84 2019 2020 大白菜 2003 1.84 2019 2020 抗病基因 2019 1.44 2019 2021 BSA 法 2019 1.38 2019 2020 基因 2019 1.15 2019 2020 茄子 2020 1.48 2020 2021 花生 2021 2.38 2021 2023 候选基因 2017 1.79 2021 2023 陆地棉 2017 1.67 2021 2023 突变体 2021 1.36 2021 2023 功能验证 2019 1 2021 2023 368 Hereditas(Beijing)2024 第 46 卷 聚焦于#0 Candidate gene(候选基因)、#1 Molecular marker(分子标记)、#2 Grain yield(种产)、#3 Stripe rust resistance gene(抗条锈病基因)、#4 Male fertility restorer gene(雄性育性恢复基因)这 5 个聚类模块。其中#0 Candidate gene、#2 Grain yield 和#3 Stripe rust resistance gene 的延续性和时间跨度比较好，且相关成果较多，仍是未来研究的热点。突现强度排名前 17 的突增热点词以出现年份先后顺序排列(表 4)，突现区间分布于 20002023 年。突增热点词“Expression”的突现强度最大，为 21.55，表明目 图 7 WOS 数据库 20002023 年关键词聚类时间线图谱 Fig.7 WOS database keyword clustering timeline graph from 2000 to 2023 表 4 WOS 数据库 20002023 年被引用次数最多的前 25 个关键词 Table 4 Top 25 keywords with the strongest citation bursts in the WOS database from 2000 to 2023 关键词 首次出现年份 突现强度 突现起始年份突现结束年份突现分布年份区间(20002023 年)Molecular markers 2000 18.63 2000 2011 Resistance genes 2000 15.82 2000 2011 Linkage map 2000 11.53 2000 2003 AFLP markers 2000 11.33 2000 2005 RAPD markers 2000 11.05 2000 2012 Populations 2000 10.89 2000 2003 RAPD 2000 9.4 2000 2009 AFLP 2001 19.25 2001 2013 RFLP 2001 16.41 2001 2009 Microsatellite markers 2003 15.8 2003 2013 Inheritance 2000 8.55 2003 2007 Assisted selection 2001 8.54 2005 2009 Map 2000 8.74 2008 2012 SSR markers 2010 8.91 2010 2017 F.sp.tritici 2004 9.11 2012 2019 Reveals 2018 8.96 2018 2023 Rice 2004 13.14 2019 2023 Biosynthesis 2003 9.53 2019 2023 QTL-seq 2017 9.5 2019 2023 Genome 2003 8.5 2019 2023 Expression 2003 21.55 2020 2023 Encodes 2016 11.9 2020 2023 Protein 2004 10.04 2020 2023 Yield 2010 8.48 2020 2023 Fine mapping 2015 8.5 2021 2023 第5期 张刚等:基于文献计量学 BSA 在作物育种领域的应用现状与展望 369 前验证基因功能的主流方法为基因的表达水平；高热度持续最久的是“RAPD markers”和“AFLP”，持续期为 13 年，第二位是“Molecular markers”和“Resistance genes”，持续期为 12 年。表明国外长期结合分子标记技术来解决BSA无法精细定位基因的问题，而抗病性则是国外学者最关注的作物性状之一。此外，自 2020 年 Rice(水稻)、Biosynthesis(生物合成)、Protein(蛋白质)、Yield(产量)、Fine mapping(精细定位)热度提高，可能是未来研究的热点关键词。5 结语与展望 通过 CiteSpace 软件对国内外关于 BSA 在作物育种领域应用的研究成果进行可视化计量分析，结论如下：国内外在该领域的发文量均呈上升趋势，但文献总量不多(2557 篇)，表明该技术在农作物领域的应用热度不高，尚处于初期，还具有较大的发展空间。原因主要有 3 点：(1)BSA-seq 只能对目标基因进行初步的定位，而不能确定目标基因和分子标记的连锁程度及目标基因在分子图谱上的位置，还需要进一步的精确定位24；(2)BSA-seq 依赖高质量参考基因组，而目前有些作物没有构建高质量的参考基因组，在