T_NAIA 0218-2023 污水中11种毒品及其代谢物和人口标记物可替宁的测定.docx

ICS 13.060.30CCS Z 16TB团体标准T/ NAIA 0218-2023污水中 11 种毒品及其代谢物和人口标记物可替宁的测定 液相色谱-三重四极杆质谱法Determination of 11 illicit drugs and their metabolites residues & cotinine of demographic marker in sewage Liquid chromatography- tandem mass spectrometry2023-08-28 发布2023-08-31 实施宁夏化学分析测试协会发 布前 言本文件按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：众旺达（宁夏）技术咨询有限公司、宁夏中科精科检测技术有限公司、宁夏凯普检测有限公司、宁夏化学分析测试协会。本文件主要起草人：刘娜娜、张院萍、路喜龙、宋克纯、徐亚宁、李慧芳、王彤、何保宏、杨永刚、曹伟、何晓丽、周晶晶、李宁军、孙飞、撒世军、李超、张小飞。本文件为首次发布。污水中 11 种毒品及其代谢物和人口标记物可替宁的测定液相色谱-三重四极杆质谱法1 范围本文件规定了污水中 11 种毒品及其代谢物（O6-单乙酰吗啡、可卡因、可待因、苯甲酰爱康宁、吗啡、氯胺酮、去甲氯胺酮、3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺（以下简称 MDMA）、3,4-亚甲二氧基苯丙胺（以下简称 MDA）、甲基苯丙胺、苯丙胺）和人口标记物可替宁含量的液相色谱-三重四极杆质谱测定方法。本文件适用于污水中 11 种毒品及其代谢物和人口标记物可替宁含量的测定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法HJ 91.1 污水监测技术规范GA/T 122 毒物分析名词术语3 术语和定义GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理本方法用工作曲线作对照，按照平行操作要求，向试样中加入同位素内标，并进行提取、净化、浓缩，采用液相色谱-三重四极杆质谱法在多反应监测模式下检测，以保留时间和特征离子对进行定性，内标法定量。5 试剂与材料除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682中规定的一级水。5.1 盐酸（HCl）。5.2 甲醇（CH3OH）：HPLC 级。5.3 乙腈（C2H3N）：HPLC 级。5.4 甲酸（HCOOH）：HPLC 级。5.5 氨水（NH3H2O）：HPLC 级。5.6 甲酸水溶液：0.1%(CH3OH)。移取 1000 L 甲酸（5.4）于 1000 mL 水中。5.7 氨水-甲醇溶液(5+95)：用氨水（5.5）和甲醇（5.2）按 5+95 体积比混合。5.9 标准溶液以下所有标准溶液应恢复至室温并摇匀后使用。5.9.1 标准贮备液：=100 g/mL购买市售有证标准溶液，组分包括 O6-单乙酰吗啡、可卡因、可待因、苯甲酰爱康宁、吗啡、氯胺酮、去甲氯胺酮、MDMA、MDA、甲基苯丙胺、苯丙胺，溶剂为甲醇。贮备液于 -20 冷冻密封避光保存或参照制造商的产品说明保存。5.9.2 可替宁标准贮备液：=1000 g/mL购买市售有证可替宁标准贮备溶液，溶剂为甲醇。-20 冷冻密封避光保存或参照制造商的产品说明保存。5.9.3 混合标准物质中间液：用 5.9.1 和 5.9.2 贮备溶液用甲醇稀释得到，使 11 种毒品及其代谢物与可替宁为（1:10） 浓度的关系配制，密封后置于冰箱冷冻保存，有效期 6 个月。5.9.4 混合标准物质使用液：用 5.9.3 标准物质使用液浓度为 0.550 g/L，对应可替宁标准使用液浓度为 5500 g/L，溶剂为甲醇。密封，置于冰箱冷藏保存，有效期 1 个月。5.10 氘代内标溶液：5.10.1 氘代内标标准贮备液：=100 g/mL购买市售氘代内标标准贮备液，推荐组分为 O6-单乙酰吗啡-D3、可卡因-D3、可待因-D3、苯甲酰爱康宁-D3、吗啡-D3、氯胺酮-D4、去甲氯胺酮-D4、MDMA-D5、MDA-D5、甲基苯丙胺-D5、苯丙胺-D5、可替宁-D3，溶剂为甲醇。贮备液于-20 冷冻密封避光保存或参照制造商的产品说明保存。5.10.2 氘代内标混合中间液：移取 5.10.1 标准贮备液，配制成 10 g/mL 氘代内标混合中间液，溶剂为甲醇。密封， 置于冰箱-20 冷冻保存，有效期 6 个月。5.10.3 氘代内标混合使用液：将氘代内标混合中间液配制成 250 g/L 的氘代内标混合使用液，溶剂为甲醇。密封， 置于冰箱-20 冷冻保存，有效期 1 个月。6 仪器与设备6.1 液相色谱-三重四极杆质谱仪：带有梯度洗脱功能，质谱为带电喷雾离子源（ESI）的。6.2 色谱柱：填料粒径 1.8 m，柱长 100 mm，内径 2.1 mm 的 C18 反向液相色谱柱，或及其它等效柱。6.3 混合型强阳离子交换反相柱：MCX，30mg/3mL 或等效固相萃取柱。6.4 固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。6.5 氮吹浓缩或真空浓缩装置。6.6 一般实验室常用仪器和设备。7 样品7.1 样品采集与保存7.1.1 按照 HJ/T 91 的相关规定进行水样的采集和保存。采集水样的体积不得少于 1000mL。7.1.2 采集的水样应置于干净的 PP 材质的采样瓶中，并尽快分析。如不能立即分析时，应加入盐酸（5.1）至 pH2，置于 4下运输保存，到达实验室后应置于-20 冷冻保存，保存时间不超过 10 d。7.2 试样制备7.2.1 预处理将污水样品完全解冻后，充分摇匀。过 0.45 m 玻璃纤维滤膜，并量取 50.00 mL 加入 20L 氘代内标混合使用液（5.10.2）。7.2.2 固相萃取及浓缩7.2.2.1 依次用 4 mL 甲醇（5.2）、4 mL 水和 4 mL pH 为 2 的水对固相萃取小柱（6.3）进行活化，流速不超过 4mL/min；取上述预处理样品（7.2.1）通过活化好的固相萃取小柱，控制流速约为 2 mL/min；用 4 mL 水和 4 mL 甲醇（5.2）淋洗固相萃取小柱，流速不超过 4 mL/min， 并增加固相萃取装置（6.3）的压力，使小柱内的水分排干；用 4 mL 氨水-甲醇溶液（5.7） 从小柱洗脱目标化合物，洗脱流速小于 1 mL/min。7.2.2.2 将上述淋洗液置于浓缩装置中，浓缩至近干。用 250 L 0.1%甲酸溶液（5.6）复溶， 混合均匀，过 0.22 m 滤膜，待测。7.3 空白样品以自来水为空白样品，与污水样品平行操作，得到空白提取液。8 分析步骤8.1 仪器参考条件8.1.1 液相色谱参考条件流动相 A：0.1%甲酸水溶液（5.6），流动相 B：乙腈（5.3），梯度程序见表 1；流速： 0.2mL/min，柱温：35 ，进样体积：5 L。表1推荐梯度洗脱条件时间/min流动相 A/%流动相 B/%195528515870308.5595135958.1.2 质谱参考条件8.1.2.1 电离方式：电喷雾离子源（ESI），正离子模式。8.1.2.2 监测方式：多反应离子监测（MRM）。8.1.2.3 其余参考条件见附录B。8.1.3 仪器调谐不同厂家的仪器调谐参数存在一定差异，应按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对质谱进行仪器质量数和分辨率的校正，以确保仪器处于最佳质量状态。8.2 校准8.2.1 标准工作曲线的建立8.2.1.1 取与污水等量自来水过膜， 并量取 50.0 mL 加入 20 L 氘代内标标准使用液（5.10.3），添加混合标准使用液（5.9.4），使其目标物（除可替宁）浓度为 1 ng/L500 ng/L，对应可替宁浓度为 10 ng/L5000 ng/L，按照固相萃取及浓缩（7.2.2）进行操作，得到标准工作曲线提取液，待测。8.2.1.2 按照仪器参考条件（8.1），由低浓度到高浓度依次对标准工作曲线提取液进行测定， 以目标化合物的质量浓度（ng/L）为横坐标，以其对应的响应值与该化合物内标物的响应值的比值和内标物浓度的乘积为纵坐标，建立标准工作曲线。1O6 单乙酰吗啡，2O6 单乙酰吗啡 D3，3苯丙胺，4苯丙胺 D5，5苯甲酰安康宁，6苯甲酰爱康宁 D3，7可卡因，8可卡因 D3，9可待因，10可待因 D3，11可替宁，12可替宁 D3，13氯胺酮，14氯胺酮 D4，15MDA，16MDA-D5，17MDMA，18MDMA-D5，19甲基苯丙胺，20甲基苯丙胺 D5，21吗啡，22吗啡 D3，23去甲氯胺酮，24去甲氯胺酮 D4图 1 11 种毒品及代谢物和人口标记物可替宁总离子流图在本标准推荐的仪器参考条件下，目标化合物的总离子流图见图 1（除可替宁浓度为500 ng/L，其余目标物浓度为 50 ng/L，氘代内标物浓度均为 20 ng/L）。8.3 试样测定按照与标准工作曲线的建立（8.2.1）相同的仪器条件进行试样（7.2）的测定。8.4 空白试验8.2.2 标准参考图谱响应值时间（min）1O6 单乙酰吗啡，2O6 单乙酰吗啡 D3，3苯丙胺，4苯丙胺 D5，5苯甲酰安康宁，6苯甲酰爱康宁 D3，7可卡因，8可卡因 D3，9可待因，10可待因 D3，11可替宁，12可替宁 D3，13氯胺酮，14氯胺酮 D4，15MDA，16MDA-D5，17MDMA，18MDMA-D5，19甲基苯丙胺，20甲基苯丙胺 D5，21吗啡，22吗啡 D3，23去甲氯胺酮，24去甲氯胺酮 D4图 1 目标化合物总离子流图在本方法推荐的仪器参考条件下，目标化合物的总离子流图见图 1（除可替宁浓度为500 ng/L，其余目标物浓度为 50 ng/L，氘代内标物浓度均为 100 ng/L）。8.3 试样测定按照与标准工作曲线的建立（8.2.1）相同的仪器条件进行试样（7.2）的测定。8.4 空白试验按照与试样测定（8.3）相同的仪器条件进行空白试样（7.2）的测定。9 结果计算和表示9.1 定性测定选择 1 个母离子和 2 个子离子对目标化合物进行监测。在同样测试条件下，试样中的目标化合物的保留时间与标准工作溶液中该目标化合物的保留时间的相对偏差的绝对值应小于 2.5 %，且对试样中目标化合物定性子离子的相对离子丰度（Ksam）与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性子离子的相对丰度（Kstd）进行比较，偏差不超过表 2 规定的范围，则可判定样品中存在对应的目标化合物。Kstd =Astd 2Astd 1100% （1）式中：Kstd标准样品中目标化合物定性子离子的相对丰度，%； Astd2标准样品中目标化合物二级质谱定性子离子响应值； Astd1标准样品中目标化合物二级质谱定量子离子响应值。表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差Kstd /%Ksam 允许偏差 /%Kstd502020Kstd502510Kstd2030Kstd10509.2 结果计算和表达以目标物与对应内标定量离子对的峰面积比（Y）为纵坐标、目标物浓度为横坐标进行线性拟合，得线性回归方程。根据各样品中目标物及对应内标定量离子对的峰面积值，按式（3）计算待测样品中目标物浓度。C = Y - a（2）b式中：C待测样品中目标物质量浓度，ng/L；Y待测样品中目标物与内标定量离子对的峰面积比； a线性方程的截距；b线性方程的斜率。注：测定结果小数点后位数的保留与方法检出限一致，最多保留三位有效数字。10 精密度平行测定结果相对偏差应20%。11 方法检出限和定量限方法检出限及定量限见附录A.1。附录A（资料性附录）方法的检出限及定量限本方法中目标化合物的方法检出限和测定下限见表A.1。序号目标物检出限（ng/L）定量限（ng/L）1O6-单乙酰吗啡1.04.02可卡因0.52.03可待因1.56.04苯甲酰爱康宁0.52.05吗啡1.56.06氯胺酮0.52.07去甲氯胺酮0.52.08MDMA0.52.09MDA1.04.010甲基苯丙胺0.52.011苯丙胺0.52.012可替宁1.56.0表 A.1方法的检出限及定量限质谱参考条件:a）电喷雾电压：4000 V。b）雾化器压力：45 psi。c）离子源温度：350 。附录B（资料性附录） 质谱参考条件d）目标化合物的多反应监测条件见表B.1。表B.1目标化合物多反应监测条件序号化合物名称母离子（m/z）定量子离子（m/z）碰撞能量（V）定性子离子（m/z）碰撞能量（V）碎裂电压（V）1O6-单乙酰吗啡328.221128165441402可卡因304.21821682.1321203可待因300.2199.231165.3521154苯甲酰爱康宁290.11682077.1651105吗啡286.216540152651506氯胺酮238.12201212532807去甲氯胺酮224.1206.98125.226708MDMA194.1163810524909MDA180.1163.16104.9226010甲基苯丙胺150.1119891208011苯丙胺136.1119491167012可替宁177.1982080269013O6-单乙酰基吗啡-D3331.1211261654012514可卡因-D3307.1185201113410515可待因-D3303.2165581527811516苯甲酰爱康宁-D3293.0171.2181053610017吗啡-D3289.1165441527012018氯胺酮-D4242.021112129347519去甲氯胺酮-D4228.1211.18129.1267520MDMA-D5198.016725138337521MDA-D5185.21686138.1167022甲基苯丙胺-D5155.2124.1496.1166523苯丙胺-D5141.1124.2493.1225524可替宁-D3180.078.1691012275附录C（资料性附录）检测目标物及对应氘代内标相关信息检测目标物及对应氘代内标相关信息见表C.1。表C.1检测目标物及对应氘代内标相关信息序号化合物名称英文名或缩写CAS 号1O6-单乙酰吗啡6-Acetylmorphine2784-73-82可卡因Cocaine50-36-23可待因Codeine76-57-34苯甲酰爱康宁Benzoylecgonine519-09-55吗啡Morphine57-27-26氯胺酮Ketamine1867-66-97去甲氯胺酮Nor ketamine79499-59-583,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺MDMA42542-10-993,4-亚甲二氧基苯丙胺MDA4764-17-410甲基苯丙胺Methamphetamine7632-10-211苯丙胺Amphetamine300-62-912可替宁Cotinine486-56-613O6-单乙酰基吗啡-D36-Acetylmorphine-D3136765-25-814可卡因-D3Cocanine-D3138704-14-015可待因-D3Codeine-D370420-71-216苯甲酰爱康宁-D3Benzoylecgonine-D3115732-68-817吗啡-D3Morphine-D367293-88-318氯胺酮-D4Ketamine-D41246815-97-319去甲氯胺酮-D4Nor ketamine-D41246816-68-1203,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺-D5MDMA-D5136765-43-0213,4-亚甲二氧基苯丙胺-D5MDA-D5136765-42-922甲基苯丙胺-D5Methamphetamine-D560124-88-123苯丙胺-D5Amphetamine-D5136765-27-024可替宁-D3Cotinine-D3110952-70-0