高效液相色谱柱柱效测定.pdf

高效液相色谱柱柱效测定 一、实验目的 1 了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理 2 学习高效液相色谱仪的使用 3 学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法 二、基本原理 高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法。当混合物随流动相流经色谱柱时，就会与固定相及流动相发生作用。由于混合物中各组分在理化性质和结构上的差异，与固定相及流动相间产生的作用力不同，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，随流动相先后从色谱柱流出，从而达到分离。配以适当的检测器可对不同组分进行定性和定量分析。色谱柱柱效评价可根据单位柱长的理论塔板数，即：21/25.54()RtnW 或 216()RtnW 式中：n-理论塔板数；tR为组分的保留时间；W1/2-色谱峰半高宽度；W-色谱峰底宽 三、仪器和试剂 1.仪器：Agilent 1100 高效液相色谱仪（紫外检测器）2.微量进样器 3.试剂：甲苯（30 mg/L 甲醇溶液）；苯甲酸钠（30mg/L 水溶液）四、实验条件 1.色谱柱：ZORBAX SB-C18（4.6mm ID 15cm，5m）2.流动相：甲醇:水（80:20）；流速：1.0 ml/min 3.紫外光度检测器：波长 254nm 4.进样量：10 l 五、实验步骤 1.依次打开仪器和 PC，打开色谱工作站，编辑方法 2.待基线平衡后即可进样 3.分别吸取 10l 甲苯和苯甲酸钠溶液进样 4.用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据 5.冲洗色谱柱，关机 6.根据理论塔板数公式，分别用甲苯和苯甲酸钠计算其理论塔板数 六、思考题 1试比较本实验利用不同物质计算出的理论塔板数有何不同，为什么？2紫外光度检测器是否适用于检测所有有机化合物，为什么？