维生素的测定.pptx

第三章第三章 维生素测定维生素测定 维生素广泛存在于各种生物体中，其种类维生素广泛存在于各种生物体中，其种类繁多，化学结构与生理功效各异。所以无法按繁多，化学结构与生理功效各异。所以无法按照结构或功效分类。照结构或功效分类。按其溶解性可分为按其溶解性可分为脂溶性脂溶性(VA(VA、VDVD、VEVE、VK)VK)和和水溶性水溶性(V(VBlBl、V VB2B2、V VB6B6、V VBl2Bl2、V VP P、V VPPPP、Vc)Vc)两大类。两大类。1 1维生素的测定1/81 维生素是人体生命活动不可缺乏营养物质，它们普维生素是人体生命活动不可缺乏营养物质，它们普维生素是人体生命活动不可缺乏营养物质，它们普维生素是人体生命活动不可缺乏营养物质，它们普通在动物和人体内不能合成或合成数量少，满足不通在动物和人体内不能合成或合成数量少，满足不通在动物和人体内不能合成或合成数量少，满足不通在动物和人体内不能合成或合成数量少，满足不了动物和人体需要，必须依靠从食物中摄取。在食了动物和人体需要，必须依靠从食物中摄取。在食了动物和人体需要，必须依靠从食物中摄取。在食了动物和人体需要，必须依靠从食物中摄取。在食物中缺乏了任何一个维生素，人和动物都会发生特物中缺乏了任何一个维生素，人和动物都会发生特物中缺乏了任何一个维生素，人和动物都会发生特物中缺乏了任何一个维生素，人和动物都会发生特有缺乏症状，有缺乏症状，有缺乏症状，有缺乏症状，如缺乏维生素如缺乏维生素如缺乏维生素如缺乏维生素A A A A、B B B B和和和和C C C C时，可分别引发时，可分别引发时，可分别引发时，可分别引发夜盲症、脚气病和坏血病等，严重时足以致命夜盲症、脚气病和坏血病等，严重时足以致命夜盲症、脚气病和坏血病等，严重时足以致命夜盲症、脚气病和坏血病等，严重时足以致命。一。一。一。一些维生素含量高低，是评价农产品品质主要指标之些维生素含量高低，是评价农产品品质主要指标之些维生素含量高低，是评价农产品品质主要指标之些维生素含量高低，是评价农产品品质主要指标之一。一。一。一。2 2维生素的测定2/81l 维生素是维持人体正常生理功效所必需一类有机维生素是维持人体正常生理功效所必需一类有机化合物。化合物。l 维生素按其溶解性可分为：维生素按其溶解性可分为：水溶性维生素水溶性维生素 抗坏血酸（抗坏血酸（VcVc）含有酸性和强还原性，水果中含有酸性和强还原性，水果中柑橘、柠檬含量较高，为柑橘、柠檬含量较高，为40-50mg%40-50mg%，红果和枣含量，红果和枣含量更高，枣中更高，枣中540mg%540mg%。3 3维生素的测定3/81 硫胺素（硫胺素（VBVB1 1）缺乏，则神经组织功效不足，可出现对缺乏，则神经组织功效不足，可出现对应神经肌肉症状如多发性神经炎、肌肉萎缩及水肿。谷类、豆应神经肌肉症状如多发性神经炎、肌肉萎缩及水肿。谷类、豆类及肉类含量较多，动物性食品中以肝、肾、脑含量较多。类及肉类含量较多，动物性食品中以肝、肾、脑含量较多。核黄素（核黄素（VBVB2 2）需要量与能量代谢相关。动物性食品需要量与能量代谢相关。动物性食品比植物性食品含量高，肝脏达比植物性食品含量高，肝脏达2mg/100g 2mg/100g 烟酸（烟酸（VppVpp）可预防癞皮病发生。含量最多是蘑菇、可预防癞皮病发生。含量最多是蘑菇、酵母等，肝脏为酵母等，肝脏为10mg/100g10mg/100g。叶酸叶酸 叶酸为各种细胞生长所必需。动物肝脏、叶酸为各种细胞生长所必需。动物肝脏、豆类、各种绿叶蔬菜和水果含量较多豆类、各种绿叶蔬菜和水果含量较多。4 4维生素的测定4/81 维生素维生素B B6 6 可帮助糖类、脂肪和蛋白质分解、利用，也可帮助糖类、脂肪和蛋白质分解、利用，也帮助糖元由肝脏或肌肉中释放热能。蛋黄、肉、鱼、乳，以及帮助糖元由肝脏或肌肉中释放热能。蛋黄、肉、鱼、乳，以及谷类、种子外皮、蔬菜含量丰富。谷类、种子外皮、蔬菜含量丰富。维生素维生素B B1212 唯一含金属（钴）维生素，机体中含量降至唯一含金属（钴）维生素，机体中含量降至0.5mg/100g0.5mg/100g左右便会出现贫血，即恶性贫血。主要起源为肉类，左右便会出现贫血，即恶性贫血。主要起源为肉类，以内脏、鱼类、以内脏、鱼类、蠔蠔类及蛋类为多。类及蛋类为多。泛酸（泛酸（VBVB3 3）与糖类、脂肪和蛋白质代谢有亲密关系。广泛与糖类、脂肪和蛋白质代谢有亲密关系。广泛存在于动、植物食品中。存在于动、植物食品中。生物素生物素 参加体内固定参加体内固定COCO2 2（羧化）和转羧基作用。分布（羧化）和转羧基作用。分布广泛，肠道细菌亦能合成。广泛，肠道细菌亦能合成。5 5维生素的测定5/81n 脂溶性维生素脂溶性维生素 V VA A 含有促进正常生长与繁殖、维持上皮组织与视力正常生含有促进正常生长与繁殖、维持上皮组织与视力正常生理功效。只存在于动物性食品中，肝、肾鸡蛋、鱼卵和全奶等。理功效。只存在于动物性食品中，肝、肾鸡蛋、鱼卵和全奶等。植物则可提供作为维生素植物则可提供作为维生素A A元类胡萝素或胡萝卜素，如菠菜、元类胡萝素或胡萝卜素，如菠菜、胡萝卜、红心甘薯胡萝卜、红心甘薯、辣椒，以及水果如杏、柿子等。辣椒，以及水果如杏、柿子等。V VD D 人体人体V VD D主要起源并非食物，而是皮下主要起源并非食物，而是皮下7-7-脱氢胆固醇经紫脱氢胆固醇经紫外线照射转变而来。海水鱼肝脏含量最为丰富。外线照射转变而来。海水鱼肝脏含量最为丰富。6 6维生素的测定6/81 V VE E 含有抗氧化功效，与机体抗衰老相关。人体含有抗氧化功效，与机体抗衰老相关。人体所需大多来自谷类于植物油。所需大多来自谷类于植物油。V VK K 作用主要是促进肝脏生产凝血酶原，从而含作用主要是促进肝脏生产凝血酶原，从而含有促进凝血作用。绿叶蔬菜含量最为丰富，蛋黄、有促进凝血作用。绿叶蔬菜含量最为丰富，蛋黄、大豆油和猪肝也是良好起源。大豆油和猪肝也是良好起源。7 7维生素的测定7/81n n维生素分析是一项比较复杂工作。其样品分析普通维生素分析是一项比较复杂工作。其样品分析普通维生素分析是一项比较复杂工作。其样品分析普通维生素分析是一项比较复杂工作。其样品分析普通程序是：程序是：程序是：程序是：用酸、碱或酶分解样品，使其中维生素用酸、碱或酶分解样品，使其中维生素用酸、碱或酶分解样品，使其中维生素用酸、碱或酶分解样品，使其中维生素游离出来；游离出来；游离出来；游离出来；用溶剂进行提取；用溶剂进行提取；用溶剂进行提取；用溶剂进行提取；分离干扰物质，分离干扰物质，分离干扰物质，分离干扰物质，对样液进行分离提纯；对样液进行分离提纯；对样液进行分离提纯；对样液进行分离提纯；用适当方法进行定量等。用适当方法进行定量等。用适当方法进行定量等。用适当方法进行定量等。维生素分析方法很多，选取方法时应依据样品品种、维生素分析方法很多，选取方法时应依据样品品种、维生素分析方法很多，选取方法时应依据样品品种、维生素分析方法很多，选取方法时应依据样品品种、类型、待测维生素性质、含量以及干扰物质多少等类型、待测维生素性质、含量以及干扰物质多少等类型、待测维生素性质、含量以及干扰物质多少等类型、待测维生素性质、含量以及干扰物质多少等原因来决定。原因来决定。原因来决定。原因来决定。n n下面重点介绍维生素下面重点介绍维生素下面重点介绍维生素下面重点介绍维生素C C C C、维生素、维生素、维生素、维生素B1B1B1B1和和和和B2B2B2B2以及作为维生以及作为维生以及作为维生以及作为维生素素素素A A A A原原原原-胡萝卜素测定。胡萝卜素测定。胡萝卜素测定。胡萝卜素测定。8 8维生素的测定8/81一、维生素一、维生素C C测定测定n n维生素维生素维生素维生素C C C C又称抗坏血酸。又称抗坏血酸。又称抗坏血酸。又称抗坏血酸。n n（1 1 1 1）纯品为白色无臭结晶，熔点为）纯品为白色无臭结晶，熔点为）纯品为白色无臭结晶，熔点为）纯品为白色无臭结晶，熔点为190190190190192192192192。n n（2 2 2 2）溶于水或乙醇中，不溶于油剂。）溶于水或乙醇中，不溶于油剂。）溶于水或乙醇中，不溶于油剂。）溶于水或乙醇中，不溶于油剂。n n（3 3 3 3）在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，）在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，）在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，）在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件下较稳定。在弱酸条件下较稳定。在弱酸条件下较稳定。在弱酸条件下较稳定。9 9维生素的测定9/811010维生素的测定10/811111维生素的测定11/81n n总抗坏血酸包含总抗坏血酸包含总抗坏血酸包含总抗坏血酸包含还原型还原型还原型还原型、氧化型抗坏血酸和氧化型抗坏血酸和氧化型抗坏血酸和氧化型抗坏血酸和2,3-2,3-2,3-2,3-二二二二酮古乐糖酸酮古乐糖酸酮古乐糖酸酮古乐糖酸。n nVcVcVcVc测定主要有：测定还原型测定主要有：测定还原型测定主要有：测定还原型测定主要有：测定还原型VcVcVcVc和氧化型和氧化型和氧化型和氧化型VcVcVcVc总含量总含量总含量总含量（如荧光法，（如荧光法，（如荧光法，（如荧光法，2,42,42,42,4二硝基苯肼法二硝基苯肼法二硝基苯肼法二硝基苯肼法、高效液相色谱、高效液相色谱、高效液相色谱、高效液相色谱法等法等法等法等)及还原型及还原型及还原型及还原型VcVcVcVc测定法测定法测定法测定法(2,62,62,62,6二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法，电位滴定法，碘滴定法，钼蓝比色法，碘酸钾萃取电位滴定法，碘滴定法，钼蓝比色法，碘酸钾萃取电位滴定法，碘滴定法，钼蓝比色法，碘酸钾萃取电位滴定法，碘滴定法，钼蓝比色法，碘酸钾萃取分光光度法等分光光度法等分光光度法等分光光度法等)两类两类两类两类,其中其中其中其中,有些方法既可测定有些方法既可测定有些方法既可测定有些方法既可测定VcVcVcVc全全全全量量量量,也可测定还原型也可测定还原型也可测定还原型也可测定还原型Vc,Vc,Vc,Vc,如酶法。如酶法。如酶法。如酶法。1212维生素的测定12/81n n高效液相色谱法、荧光法要求样品纯度较高，高高效液相色谱法、荧光法要求样品纯度较高，高高效液相色谱法、荧光法要求样品纯度较高，高高效液相色谱法、荧光法要求样品纯度较高，高效液相色谱法能够同时测得效液相色谱法能够同时测得效液相色谱法能够同时测得效液相色谱法能够同时测得抗坏血酸和脱氢抗坏抗坏血酸和脱氢抗坏抗坏血酸和脱氢抗坏抗坏血酸和脱氢抗坏血酸血酸血酸血酸含量，含有干扰少，准确度高，重现性好，含量，含有干扰少，准确度高，重现性好，含量，含有干扰少，准确度高，重现性好，含量，含有干扰少，准确度高，重现性好，灵敏、简便、快速等优点，是上述几个方法中最灵敏、简便、快速等优点，是上述几个方法中最灵敏、简便、快速等优点，是上述几个方法中最灵敏、简便、快速等优点，是上述几个方法中最先进、可靠方法，但需要有昂贵仪器，当前尚无先进、可靠方法，但需要有昂贵仪器，当前尚无先进、可靠方法，但需要有昂贵仪器，当前尚无先进、可靠方法，但需要有昂贵仪器，当前尚无法普遍采取。法普遍采取。法普遍采取。法普遍采取。1313维生素的测定13/81n n2.6-2.6-2.6-2.6-二靛酚滴定法测定是还原型抗坏血酸，该法二靛酚滴定法测定是还原型抗坏血酸，该法二靛酚滴定法测定是还原型抗坏血酸，该法二靛酚滴定法测定是还原型抗坏血酸，该法简便，也较灵敏，但特异性差，样品中其它还原简便，也较灵敏，但特异性差，样品中其它还原简便，也较灵敏，但特异性差，样品中其它还原简便，也较灵敏，但特异性差，样品中其它还原性物质性物质性物质性物质(如如如如FeFeFeFe2+2+2+2+、SnSnSnSn2+2+2+2+、CuCuCuCu2+2+2+2+等等等等)会干扰测定，使测会干扰测定，使测会干扰测定，使测会干扰测定，使测定值偏高。对深色样液滴定终点不易区分，如山定值偏高。对深色样液滴定终点不易区分，如山定值偏高。对深色样液滴定终点不易区分，如山定值偏高。对深色样液滴定终点不易区分，如山楂，树莓，草莓等楂，树莓，草莓等楂，树莓，草莓等楂，树莓，草莓等 。1414维生素的测定14/81n n2,4-2,4-2,4-2,4-二硝基苯肼比色法和荧光法测得是抗坏血酸二硝基苯肼比色法和荧光法测得是抗坏血酸二硝基苯肼比色法和荧光法测得是抗坏血酸二硝基苯肼比色法和荧光法测得是抗坏血酸和脱氢抗坏血酸总量，操作麻烦，耗时较长。和脱氢抗坏血酸总量，操作麻烦，耗时较长。和脱氢抗坏血酸总量，操作麻烦，耗时较长。和脱氢抗坏血酸总量，操作麻烦，耗时较长。n n但也易受色素影响但也易受色素影响但也易受色素影响但也易受色素影响,当待测液本身有颜色时当待测液本身有颜色时当待测液本身有颜色时当待测液本身有颜色时,消光消光消光消光值会受到影响值会受到影响值会受到影响值会受到影响,从而影响到测定结果准确性。从而影响到测定结果准确性。从而影响到测定结果准确性。从而影响到测定结果准确性。1515维生素的测定15/81n n钼蓝比色法则不然钼蓝比色法则不然钼蓝比色法则不然钼蓝比色法则不然,该法不易受样品提取液颜色影该法不易受样品提取液颜色影该法不易受样品提取液颜色影该法不易受样品提取液颜色影响。响。响。响。n n紫外分光光亮法是操作简便，不受样品提取液颜色紫外分光光亮法是操作简便，不受样品提取液颜色紫外分光光亮法是操作简便，不受样品提取液颜色紫外分光光亮法是操作简便，不受样品提取液颜色影响，不过重复间偏差较大影响，不过重复间偏差较大影响，不过重复间偏差较大影响，不过重复间偏差较大 。n n碘滴定法不适于花青素含量高果蔬样品碘滴定法不适于花青素含量高果蔬样品碘滴定法不适于花青素含量高果蔬样品碘滴定法不适于花青素含量高果蔬样品VcVcVcVc测定。测定。测定。测定。1616维生素的测定16/811717维生素的测定17/811818维生素的测定18/811919维生素的测定19/812020维生素的测定20/81（一）还原型维生素（一）还原型维生素C C测定测定n n维生素维生素维生素维生素C C C C含有较强还原性，对光敏感，氧化后产物含有较强还原性，对光敏感，氧化后产物含有较强还原性，对光敏感，氧化后产物含有较强还原性，对光敏感，氧化后产物称为脱氢抗坏血酸，依然含有生理活性。深入水称为脱氢抗坏血酸，依然含有生理活性。深入水称为脱氢抗坏血酸，依然含有生理活性。深入水称为脱氢抗坏血酸，依然含有生理活性。深入水解则生成解则生成解则生成解则生成2 2 2 2，3-3-3-3-二酮古乐糖酸，失去生理作用二酮古乐糖酸，失去生理作用二酮古乐糖酸，失去生理作用二酮古乐糖酸，失去生理作用。在。在。在。在食品中，这三种形式都有存在，但主要是前二者，食品中，这三种形式都有存在，但主要是前二者，食品中，这三种形式都有存在，但主要是前二者，食品中，这三种形式都有存在，但主要是前二者，故许多国家食品成份表均以抗坏血酸和脱氢抗坏故许多国家食品成份表均以抗坏血酸和脱氢抗坏故许多国家食品成份表均以抗坏血酸和脱氢抗坏故许多国家食品成份表均以抗坏血酸和脱氢抗坏血酸总量表示。血酸总量表示。血酸总量表示。血酸总量表示。2121维生素的测定21/812222维生素的测定22/81n n1 1 1 1、方法原理、方法原理、方法原理、方法原理 抗坏血酸抗坏血酸抗坏血酸抗坏血酸(Vc)(Vc)(Vc)(Vc)结构中有结构中有结构中有结构中有烯二醇烯二醇烯二醇烯二醇存在，所以含有存在，所以含有存在，所以含有存在，所以含有还原性还原性还原性还原性，能，能，能，能将将将将蓝色染料蓝色染料蓝色染料蓝色染料2 2 2 2，6-6-6-6-二氯靛酚还原为无色化合物二氯靛酚还原为无色化合物二氯靛酚还原为无色化合物二氯靛酚还原为无色化合物，VcVcVcVc则被氧则被氧则被氧则被氧化为脱氢化为脱氢化为脱氢化为脱氢VcVcVcVc，反应式以下：，反应式以下：，反应式以下：，反应式以下：2323维生素的测定23/81n n2,6-2,6-2,6-2,6-二氯靛酚含有二氯靛酚含有二氯靛酚含有二氯靛酚含有酸碱指示酸碱指示酸碱指示酸碱指示及及及及氧化还原氧化还原氧化还原氧化还原指示两种特指示两种特指示两种特指示两种特征。氧化态时呈征。氧化态时呈征。氧化态时呈征。氧化态时呈深蓝色深蓝色深蓝色深蓝色(碱介质中碱介质中碱介质中碱介质中)或或或或浅红色浅红色浅红色浅红色(酸性介酸性介酸性介酸性介质质质质，变色范围，变色范围，变色范围，变色范围pH4pH4pH4pH45)5)5)5)，还原态时为，还原态时为，还原态时为，还原态时为无色无色无色无色。n n依据这个特征用碱性蓝色染料标准溶液滴定植物依据这个特征用碱性蓝色染料标准溶液滴定植物依据这个特征用碱性蓝色染料标准溶液滴定植物依据这个特征用碱性蓝色染料标准溶液滴定植物样品酸性浸出液中样品酸性浸出液中样品酸性浸出液中样品酸性浸出液中VcVcVcVc到刚变到刚变到刚变到刚变浅红色浅红色浅红色浅红色为终点，由染料为终点，由染料为终点，由染料为终点，由染料用量即可计算用量即可计算用量即可计算用量即可计算VcVcVcVc含量。含量。含量。含量。n n滴定终点红色是滴定终点红色是滴定终点红色是滴定终点红色是刚过量刚过量刚过量刚过量未被还原未被还原未被还原未被还原(氧化型氧化型氧化型氧化型)染料溶液染料溶液染料溶液染料溶液在在在在酸性介质酸性介质酸性介质酸性介质中颜色。中颜色。中颜色。中颜色。2424维生素的测定24/812 2、注释、注释（1 1 1 1）偏磷酸是偏磷酸是偏磷酸是偏磷酸是VcVcVcVc最正确稳定剂，且含有沉淀蛋白质作最正确稳定剂，且含有沉淀蛋白质作最正确稳定剂，且含有沉淀蛋白质作最正确稳定剂，且含有沉淀蛋白质作用用用用。但其。但其。但其。但其价格较贵价格较贵价格较贵价格较贵，在室温下放置，在室温下放置，在室温下放置，在室温下放置易转化为正磷酸易转化为正磷酸易转化为正磷酸易转化为正磷酸，降低对降低对降低对降低对VcVcVcVc稳定性。草酸廉价易得稳定性。草酸廉价易得稳定性。草酸廉价易得稳定性。草酸廉价易得,有与磷酸相近稳定有与磷酸相近稳定有与磷酸相近稳定有与磷酸相近稳定性。而醋酸适于浸提含有性。而醋酸适于浸提含有性。而醋酸适于浸提含有性。而醋酸适于浸提含有FeFeFeFe2+2+2+2+样品。样品。样品。样品。n n依据依据依据依据VcVcVcVc在酸性溶液中相对较稳定这一特征，从来采在酸性溶液中相对较稳定这一特征，从来采在酸性溶液中相对较稳定这一特征，从来采在酸性溶液中相对较稳定这一特征，从来采取提取剂都是各种各样酸性溶液取提取剂都是各种各样酸性溶液取提取剂都是各种各样酸性溶液取提取剂都是各种各样酸性溶液,现在普通采取主要现在普通采取主要现在普通采取主要现在普通采取主要是是是是2%2%2%2%偏磷酸偏磷酸偏磷酸偏磷酸、2%2%2%2%草酸溶液草酸溶液草酸溶液草酸溶液，其次是，其次是，其次是，其次是8%8%8%8%醋酸醋酸醋酸醋酸、10%10%10%10%三氯三氯三氯三氯乙酸乙酸乙酸乙酸及及及及偏磷酸偏磷酸偏磷酸偏磷酸-醋酸混合液醋酸混合液醋酸混合液醋酸混合液。2525维生素的测定25/812626维生素的测定26/812727维生素的测定27/81n n(2)(2)(2)(2)所用提取剂所用提取剂所用提取剂所用提取剂草酸草酸草酸草酸、标定、标定、标定、标定VcVcVcVc用用用用碘酸液碘酸液碘酸液碘酸液以及以及以及以及标准标准标准标准VcVcVcVc液液液液均均均均不稳定，须避光、低温不稳定，须避光、低温不稳定，须避光、低温不稳定，须避光、低温保留。碘酸液以贮备液保保留。碘酸液以贮备液保保留。碘酸液以贮备液保保留。碘酸液以贮备液保留（较高浓度，留（较高浓度，留（较高浓度，留（较高浓度，0.1mol0.1mol0.1mol0.1molLLLL-1-1-1-1）。）。）。）。VcVcVcVc临用临配，不能临用临配，不能临用临配，不能临用临配，不能加热配制加热配制加热配制加热配制。n n(3)(3)(3)(3)样品采取后，样品采取后，样品采取后，样品采取后，应浸泡在已知量应浸泡在已知量应浸泡在已知量应浸泡在已知量2 2 2 2草酸溶液中草酸溶液中草酸溶液中草酸溶液中，以预防抗坏血酸氧化损失。测定时整个操作过程要以预防抗坏血酸氧化损失。测定时整个操作过程要以预防抗坏血酸氧化损失。测定时整个操作过程要以预防抗坏血酸氧化损失。测定时整个操作过程要快速，预防抗坏血酸被氧化。快速，预防抗坏血酸被氧化。快速，预防抗坏血酸被氧化。快速，预防抗坏血酸被氧化。2828维生素的测定28/81n n(4)4)KIOKIO3 3与还原与还原VcVc主要反应以下：主要反应以下：n n从上述反应式可知从上述反应式可知从上述反应式可知从上述反应式可知1mol(1/6KIO1mol(1/6KIO1mol(1/6KIO1mol(1/6KIO3 3 3 3)与与与与1mol(1/2C1mol(1/2C1mol(1/2C1mol(1/2C6 6 6 6H H H H8 8 8 8O O O O6 6 6 6)完全反应，故完全反应，故完全反应，故完全反应，故1/2C1/2C1/2C1/2C6 6 6 6H H H H8 8 8 8O O O O6 6 6 6摩尔质量为摩尔质量为摩尔质量为摩尔质量为88gmol88gmol88gmol88gmol-1-1-1-1。2929维生素的测定29/81n n(5)(5)(5)(5)2,6-2,6-2,6-2,6-二氯靛酚固体试剂有时含有分解产物，染料二氯靛酚固体试剂有时含有分解产物，染料二氯靛酚固体试剂有时含有分解产物，染料二氯靛酚固体试剂有时含有分解产物，染料溶液长久贮存时也会生成份解主物，从而使滴定终溶液长久贮存时也会生成份解主物，从而使滴定终溶液长久贮存时也会生成份解主物，从而使滴定终溶液长久贮存时也会生成份解主物，从而使滴定终点不敏锐，点不敏锐，点不敏锐，点不敏锐，所以应在使用前检验所以应在使用前检验所以应在使用前检验所以应在使用前检验。n n检验方法：检验方法：检验方法：检验方法：取取取取15mL15mL15mL15mL染料溶液加入过量染料溶液加入过量染料溶液加入过量染料溶液加入过量VcVcVcVc溶液，若还溶液，若还溶液，若还溶液，若还原后溶液带有颜色，表示此溶液已不能使用。原后溶液带有颜色，表示此溶液已不能使用。原后溶液带有颜色，表示此溶液已不能使用。原后溶液带有颜色，表示此溶液已不能使用。n n保留在保留在保留在保留在棕色瓶和冰箱棕色瓶和冰箱棕色瓶和冰箱棕色瓶和冰箱中。中。中。中。3030维生素的测定30/81n n(6)(6)(6)(6)使用白陶土时，要对每批新白陶土测定对使用白陶土时，要对每批新白陶土测定对使用白陶土时，要对每批新白陶土测定对使用白陶土时，要对每批新白陶土测定对VcVcVcVc回收回收回收回收率。率。率。率。n n(7)(7)(7)(7)样品中可能有其它还原性物质也可使染料还原。样品中可能有其它还原性物质也可使染料还原。样品中可能有其它还原性物质也可使染料还原。样品中可能有其它还原性物质也可使染料还原。但其还原染料速度较慢，故但其还原染料速度较慢，故但其还原染料速度较慢，故但其还原染料速度较慢，故滴定终点以浅红色在滴定终点以浅红色在滴定终点以浅红色在滴定终点以浅红色在15s15s15s15s不褪色为准不褪色为准不褪色为准不褪色为准。n n(8)(8)(8)(8)本法适合用于本法适合用于本法适合用于本法适合用于测定还原型抗坏血酸测定还原型抗坏血酸测定还原型抗坏血酸测定还原型抗坏血酸，不适于有亚，不适于有亚，不适于有亚，不适于有亚铁、亚锡、亚铜、亚硫酸盐或硫代硫酸盐共存样品。铁、亚锡、亚铜、亚硫酸盐或硫代硫酸盐共存样品。铁、亚锡、亚铜、亚硫酸盐或硫代硫酸盐共存样品。铁、亚锡、亚铜、亚硫酸盐或硫代硫酸盐共存样品。3131维生素的测定31/81n n(9)(9)(9)(9)样品切碎、缩分及称量等过程会使样品切口接样品切碎、缩分及称量等过程会使样品切口接样品切碎、缩分及称量等过程会使样品切口接样品切碎、缩分及称量等过程会使样品切口接触空气而促进维生素触空气而促进维生素触空气而促进维生素触空气而促进维生素C C C C氧化，应尽可能动作快速氧化，应尽可能动作快速氧化，应尽可能动作快速氧化，应尽可能动作快速,VcVcVcVc提取液对光敏感，操作室内应设置窗帘，以防加提取液对光敏感，操作室内应设置窗帘，以防加提取液对光敏感，操作室内应设置窗帘，以防加提取液对光敏感，操作室内应设置窗帘，以防加速速速速VcVcVcVc氧化。氧化。氧化。氧化。n n(10)(10)(10)(10)全部试剂最好用重蒸馏水配制。全部试剂最好用重蒸馏水配制。全部试剂最好用重蒸馏水配制。全部试剂最好用重蒸馏水配制。n n(11)(11)(11)(11)标定靛酚滴定液时与滴定样品液时，滴定终点标定靛酚滴定液时与滴定样品液时，滴定终点标定靛酚滴定液时与滴定样品液时，滴定终点标定靛酚滴定液时与滴定样品液时，滴定终点掌握应严格一致，不然将引发误差。掌握应严格一致，不然将引发误差。掌握应严格一致，不然将引发误差。掌握应严格一致，不然将引发误差。n n(12)(12)(12)(12)测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体积。除空白体积。除空白体积。除空白体积。3232维生素的测定32/81n n(13)(13)(13)(13)VcVcVcVc含量随样品个体或部位不一样差异很大，所以测定含量随样品个体或部位不一样差异很大，所以测定含量随样品个体或部位不一样差异很大，所以测定含量随样品个体或部位不一样差异很大，所以测定VcVcVcVc时取样代表性尤为主要。测定样品平均含量时，普通最少取时取样代表性尤为主要。测定样品平均含量时，普通最少取时取样代表性尤为主要。测定样品平均含量时，普通最少取时取样代表性尤为主要。测定样品平均含量时，普通最少取均匀个体均匀个体均匀个体均匀个体5 5 5 5个以上，纵切分成个以上，纵切分成个以上，纵切分成个以上，纵切分成4 4 4 48 8 8 8等分，再分别取对角等分，再分别取对角等分，再分别取对角等分，再分别取对角2-42-42-42-4片，片，片，片，切碎，充分混合后四分法分取样。切碎，充分混合后四分法分取样。切碎，充分混合后四分法分取样。切碎，充分混合后四分法分取样。n n(14)(14)(14)(14)滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观察颜色改变参考。察颜色改变参考。察颜色改变参考。察颜色改变参考。n n(15)(15)(15)(15)在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇辛醇辛醇辛醇消除。消除。消除。消除。n n（16161616）还原型还原型还原型还原型VcVcVcVc含量（含量（含量（含量（mg.kgmg.kgmg.kgmg.kg-1-1-1-1）100 100 100 100 允许误差（允许误差（允许误差（允许误差（mg.kgmg.kgmg.kgmg.kg-1-1-1-1）5.05.05.05.0，100-1000 100-1000 100-1000 100-1000 允许允许允许允许10.010.010.010.03333维生素的测定33/81（二）维生素（二）维生素（二）维生素（二）维生素C C C C总量测定总量测定总量测定总量测定(2(2(2(2，4 4 4 4二硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法)n n1 1 1 1、方法原理：、方法原理：、方法原理：、方法原理：Vc Vc Vc Vc总量总量总量总量包含还原型包含还原型包含还原型包含还原型VcVcVcVc、脱氢型、脱氢型、脱氢型、脱氢型VcVcVcVc和二酮古乐糖酸和二酮古乐糖酸和二酮古乐糖酸和二酮古乐糖酸，将，将，将，将样品中还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，深入水样品中还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，深入水样品中还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，深入水样品中还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，深入水解为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与解为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与解为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与解为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与2,4-2,4-2,4-2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼二硝基苯肼二硝基苯肼耦联生成红色脎。其呈色强度与二酮古乐糖酸浓度成耦联生成红色脎。其呈色强度与二酮古乐糖酸浓度成耦联生成红色脎。其呈色强度与二酮古乐糖酸浓度成耦联生成红色脎。其呈色强度与二酮古乐糖酸浓度成正比，能够比色定量。正比，能够比色定量。正比，能够比色定量。正比，能够比色定量。3434维生素的测定34/812 2、操作步骤、操作步骤n n称样称样称样称样 加等量加等量加等量加等量2%2%2%2%草酸草酸草酸草酸 于高速捣碎机捣碎于高速捣碎机捣碎于高速捣碎机捣碎于高速捣碎机捣碎 取匀浆取匀浆取匀浆取匀浆20g 20g 20g 20g 用用用用1%1%1%1%草酸定容草酸定容草酸定容草酸定容100ml 100ml 100ml 100ml 过滤过滤过滤过滤 取取取取滤液滤液滤液滤液10ml 10ml 10ml 10ml 加加加加1%1%1%1%草酸草酸草酸草酸10ml 10ml 10ml 10ml 加少许活性炭加少许活性炭加少许活性炭加少许活性炭 摇摇摇摇1 1 1 1分钟分钟分钟分钟 静置过滤静置过滤静置过滤静置过滤 各取滤液各取滤液各取滤液各取滤液2ml2ml2ml2ml于样品管和于样品管和于样品管和于样品管和样品空白管样品空白管样品空白管样品空白管 各管各管各管各管加入加入加入加入1 1 1 1滴硫脲溶液滴硫脲溶液滴硫脲溶液滴硫脲溶液 于样品管于样品管于样品管于样品管中中中中加入加入加入加入2 2 2 2，4-4-4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼二硝基苯肼二硝基苯肼0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 分别于两个管加分别于两个管加分别于两个管加分别于两个管加盖盖盖盖 于于于于37373737保温箱保温箱保温箱保温箱3 3 3 3小时小时小时小时3535维生素的测定35/81n n保温箱保温箱保温箱保温箱3 3 3 3小时小时小时小时 取出后样品管放入冰水中取出后样品管放入冰水中取出后样品管放入冰水中取出后样品管放入冰水中 样品空样品空样品空样品空白管取出后冷至室温白管取出后冷至室温白管取出后冷至室温白管取出后冷至室温 在样品空白管加入在样品空白管加入在样品空白管加入在样品空白管加入2 2 2 2，4-4-4-4-二二二二硝基苯肼硝基苯肼硝基苯肼硝基苯肼 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 样品管和空白管都于样品管和空白管都于样品管和空白管都于样品管和空白管都于冰浴中冰浴中冰浴中冰浴中 滴加滴加滴加滴加9 9 9 91H1H1H1H2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 4 2ml 2ml 2ml 2ml于各管中于各管中于各管中于各管中 边滴边摇边滴边摇边滴边摇边滴边摇 预预预预防温度升高炭化后呈黑色防温度升高炭化后呈黑色防温度升高炭化后呈黑色防温度升高炭化后呈黑色 冰浴中取出冰浴中取出冰浴中取出冰浴中取出 室温下室温下室温下室温下放置放置放置放置30303030分钟后分钟后分钟后分钟后，在，在，在，在540nm540nm540nm540nm测测测测消光值，从标准曲线上查消光值，从标准曲线上查消光值，从标准曲线上查消光值，从标准曲线上查出对应含量。出对应含量。出对应含量。出对应含量。3636维生素的测定36/81n n3 3、注意事项、注意事项n n（1 1 1 1）本法为国家标准方法，适合用于蔬菜、水果及其制品中本法为国家标准方法，适合用于蔬菜、水果及其制品中本法为国家标准方法，适合用于蔬菜、水果及其制品中本法为国家标准方法，适合用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸测定。总抗坏血酸测定。总抗坏血酸测定。总抗坏血酸测定。n n（2 2 2 2）硫脲可预防硫脲可预防硫脲可预防硫脲可预防VcVcVcVc被氧化，且可帮助脎形成，最终溶液中硫被氧化，且可帮助脎形成，最终溶液中硫被氧化，且可帮助脎形成，最终溶液中硫被氧化，且可帮助脎形成，最终溶液中硫脲浓度应一致，不然影响色度。脲浓度应一致，不然影响色度。脲浓度应一致，不然影响色度。脲浓度应一致，不然影响色度。n n（3 3 3 3）加入加入加入加入H H H H2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 4(9(9(9(91)1)1)1)溶液后试管从冰水中取出，溶液颜色溶液后试管从冰水中取出，溶液颜色溶液后试管从冰水中取出，溶液颜色溶液后试管从冰水中取出，溶液颜色会继续变深，所以必须准确加入会继续变深，所以必须准确加入会继续变深，所以必须准确加入会继续变深，所以必须准确加入H H H H2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 4后后后后30min30min30min30min内比色内比色内比色内比色(糖存糖存糖存糖存在造成显色不稳定在造成显色不稳定在造成显色不稳定在造成显色不稳定,颜色会逐步加深颜色会逐步加深颜色会逐步加深颜色会逐步加深)。3737维生素的测定37/81n n(4)(4)(4)(4)活性炭反抗坏血酸氧化作用，是基于其表面吸附活性炭反抗坏血酸氧化作用，是基于其表面吸附活性炭反抗坏血酸氧化作用，是基于其表面吸附活性炭反抗坏血酸氧化作用，是基于其表面吸附氧进行界面反应，加入量过低，氧化不充分，测定氧进行界面反应，加入量过低，氧化不充分，测定氧进行界面反应，加入量过低，氧化不充分，测定氧进行界面反应，加入量过低，氧化不充分，测定结果偏低，加入量过高，反抗坏血酸有吸附作用，结果偏低，加入量过高，反抗坏血酸有吸附作用，结果偏低，加入量过高，反抗坏血酸有吸附作用，结果偏低，加入量过高，反抗坏血酸有吸附作用，使结果也偏低。使结果也偏低。使结果也偏低。使结果也偏低。n n活性炭须活性炭须活性炭须活性炭须充分酸化充分酸化充分酸化充分酸化，才能有，才能有，才能有，才能有较强氧化能力较强氧化能力较强氧化能力较强氧化能力，且含有，且含有，且含有，且含有除色素除色素除色素除色素双重作用。双重作用。双重作用。双重作用。n n1mol1mol1mol1molL L L L-1-1-1-1HCl,100gHCl,100gHCl,100gHCl,100g于于于于750ml750ml750ml750ml，煮沸，煮沸，煮沸，煮沸1-2h1-2h1-2h1-2h，沸水洗涤至，沸水洗涤至，沸水洗涤至，沸水洗涤至无无无无FeFeFeFe2+2+2+2+，烘干。，烘干。，烘干。，烘干。3838维生素的测定38/81n n(5)(5)(5)(5)2,4-2,4-2,4-2,4-二硝基苯肼和氧化型二硝基苯肼和氧化型二硝基苯肼和氧化型二硝基苯肼和氧化型VcVcVcVc藕联形成脎在藕联形成脎在藕联形成脎在藕联形成脎在脱水氧化环境脱水氧化环境脱水氧化环境脱水氧化环境下才稳定。下才稳定。下才稳定。下才稳定。n n(6)(6)(6)(6)溶液中其它酮和酮衍生物和溶液中其它酮和酮衍生物和溶液中其它酮和酮衍生物和溶液中其它酮和酮衍生物和2,4-2,4-2,4-2,4-二硝基苯肼也形成脎，故二硝基苯肼也形成脎，故二硝基苯肼也形成脎，故二硝基苯肼也形成脎，故须作空白试验须作空白试验须作空白试验须作空白试验（指没有（指没有（指没有（指没有VcVcVcVc参