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新鲜蔬菜、水果中农药多残留快速检测技术培训教材新鲜蔬菜、水果中农药多残留快速检测技术培训教材安捷伦科技安捷伦科技2003年年5月月PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/目目录录第一部分农残检测基础知识（一）专业术语一农药残留二农药残留分析（目的、特点、分类）三农残分析基本概念（二）基本程序（三）分析结果计算和表述第二部分农残检测技术综述（一）农残检测前处理技术简介（二）国外农残检测技术发展趋势（三）国内农残检测面临任务（四）CDFA-MRSM特点（五）CDFA-MRSM仪器配置（六）保留时间锁定功能PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/目目录录第三部分CDFA-MRSM标准操作程序（一）流程示意（二）操作程序一目的二内容提纲三正文第四部分Agilent实验室重现CDFA-MRSM部分实验数据（一）有机磷类农药GC-FPD标准工作曲线相关系数（二）有机磷类农药GC-FPD仪器和方法检出限（三）用CDFA-MRSM,GC-FPD分析韭菜中有机磷类农药残留的平均回收率和变异系数PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/第一部分 农残检测基础知识PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语一一 农药残留（农药残留（pesticide residue）n农药使用后残存在生物体、农副产品和环境中的微量农药母体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。以mg/kg,ug/kg,ng/kg表示。n中国一般只检测农药母体。n发达国家检测母体、代谢物、环境降解产物、工业品杂质。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语二二 农药残留分析（农药残留分析（pesticide residue analysis）对待测样品中微量农药残留进行定性、定量分析。目的:n为新农药提供其在农作物上的残留动态和最终残留量。n制定农药最大残留限量和合理使用准则。n评价农药残留对农畜产品和环境的危险性。n为制定防治农药污染措施提供依据。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语二二 农药残留分析（农药残留分析（pesticide residue analysis）特点:n分析目的物含量低，在样品中仅以ug,ng甚至pg、fg量存在n目的物种类多，化学结构差异大。n样品种类多，干扰物成分各异。n方法要求快速、简便、成本低、灵敏、准确、安全（QuEChERS)。n对样品的前处理和仪器测试要求越来越高。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语二二 农药残留分析（农药残留分析（pesticide residue analysis）分类:1 单残留分析（singal residue analysis)n对待测样品中某类某一种农残定性定量（已知、未知）n农药注册（中国、外国）n中国国标方法2 多残留分析（multiresidue analysis）n对待测样品中多类多种农药残留同时定性和定量（已知、未知）n单种类农药多残留分析（有机磷、有机氯等）中国国标方法n多种类农药多残留分析n未知多类多种残留分析（快速扫描-MRSM）（CDFA、FDA、Canada）PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语三三 农残分析基本概念农残分析基本概念1 添加回收率（fortified recovery）空白样品中加入一定浓度某一种或几种农药（C1）后，其样品中此农药浓度测定值（C2）对加入值的 百分率（F）。F=C2/C1*100%n添加回收率旨在衡量测定值与真值之间的误差，是制定农残分析方法准确度和可行性的指标。n一般以MRL值水平高一个数量级、低一个数量级和同一个数量级三个浓度水平进行添加，或者在1、5和10 LOQ水平添加，测定添加回收率；n可以单个农药添加测定单残留添加回收率，也可多种农药同时添加，测定多残留添加回收率。n至少重复三次。n测试样品具代表性（3-4种）。n测试农药具代表性（4类-5类）。n单残留回收率：80100%，多残留回收率：70120%。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语三三 农残分析基本概念农残分析基本概念2 变异系数（Coefficient of variation,CV）衡量回收率偏异程度，判定农残分析方法的精确度（重现性）指标。CV=标准偏差/平均回收率*100%n一般20%PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语三三 农残分析基本概念农残分析基本概念3 检出限，定量限（1）检出限（limit of detection）衡量仪器或方法灵敏度（检出目的物）的指标。要求低于测定目的物的MRL值（最好低一个数量级）。n在色谱图上可清楚确认的分析目的物色谱峰的下限。通常为噪音3倍（S/N=3）。n分为仪器检出限和方法检出限n仪器检出限仪器检出限无样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种分析仪器能够检出分析目的物的最小量或最低浓度。n方法检出限方法检出限有样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种方法能够检出分析目的物的最小量或最低浓度。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语三三 农残分析基本概念农残分析基本概念3 检出限，定量限（2)定量限（limit of quantitation）衡量仪器或方法灵敏度（定量目的物）的指标。n在色谱图上可准确定量分析目的物色谱峰值的下限。通常为噪音10倍（S/N=10）。n分为仪器定量限和方法定量限n仪器定量限仪器定量限无样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种分析仪器能够准确定量分析目的物的最小量或最低浓度。n方法定量限方法定量限有样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种方法能够准确定量分析目的物的最小量或最低浓度。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语三三 农残分析基本概念农残分析基本概念3 检出限，定量限（3）测定方法n仪器检出限或定量限,用某分析目的物的最低浓度标样测定。nAgilent仪器化学工作站可以直接测定S/N。如:-BHC 标样浓度为0.01ppm，S/N=30，则仪器LOD=0.001ppm,仪器LOQ=0.003ppmn方法检出限或定量限,用添加某分析目的物最低浓度水平或预测水平的样品，经过该方法的全部操作程序测定。重复实验两次。如:-BHC 添加在韭菜中，CDFA方法添加水平为0.01ppm，样品最终浓度为 0.01ppm，S/N=12，方法LOD=0.0025ppm，方法 LOQ=0.008ppm。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语三三 农残分析基本概念农残分析基本概念4 农残分析方法认证指标n准确度（Accuracy）真值（true value）回收率n精密度（Precision）重现性（reproducibility），变异系数n灵敏度（sensitivity），检出限，定量限n仪器线性范围（Linearity），标准曲线（standard curves）n（五个不同浓度，覆盖三个数量级或1X,5X,10X LOQ水平）n相关系数（R0.9900),测定天数（3days）PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）专业术语三三 农残分析基本概念农残分析基本概念5 农残分析质量保证和质量控制（QA/QC）n试剂空白实验（reagent blank）（每日）n基质空白实验（matrix blank）（每日）n农药标样（基质中添加农药混合标样；至少两种基质；2X LOQ水平）（每日）n添加回收率（添加混标，轮换添加）（每日）nLOD、LOQ、仪器、方法（仪器、方法条件改变时）n仪器线性关系、标准曲线、相关系数（至少三天）PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/三三 农残分析基本概念农残分析基本概念6 最大残留限量（Maximum Residue Limit，MRLs）n在农畜产品中农药残留的法定最高允许浓度，又称最高残留限量，以每千克农畜产品中农药残留的毫克数（毫克/千克）表示。n制订目的：控制食品中过量农药残留以保障食用者安全，对超标的产品采取措施，即禁止食用。推行和指导合理用药，农产品监测超标时，表明未按规定用药。减少国际贸易纠纷，各国均制订本国的MRLs，国际组织FAO/WHO也制定其相应的MRLs标准。n制订方法：按照农药标签上规定的施药剂量和方法使用农药后，在农产品中的最大残留浓度，其数值必须是毒理学上可以接受的，由各国政府部门按法规公布。n在农残检测中，以MRL值判断是否超标。（一）专业术语PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/食品中农药的最大允许残留限量（mg/kg）（强制性国家标准）0.5不得检出不得检出0.01不得检出0.05（棉籽油）0.1（棉籽油）0.05（棉籽油）不得检出不得检出0.05（全果）0.10.50.50.50.5不得检出0.050.21（梨果）0.3（柑桔）1不得检出不得检出0.050.10.50.20.50.5不得检出0.050.21（叶菜）1不得检出不得检出0.10.50.020.10.050.10.50.20.15.00.020.050.10.1（成品粮）0.053（成品粮),80.1辛硫磷敌百虫亚胺硫磷甲胺磷乙酰甲胺磷二嗪磷杀螟硫磷甲拌磷倍硫磷敌敌畏呋喃丹久效磷甲基对硫磷毒死蜱乐果马拉硫磷对硫磷茶叶食用油水果蔬菜稻谷谷类摘自“农产品农药残留限量标准汇编”农业部农药检定所2001.9PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（二）基本程序前处理仪器分析预处理农残分析提取净化浓缩ECD、ELCDFPD、NPDAED、XSDGCHPLCGC/MSLC/MSEI、CI其它UV、FLD、DAD样品采集贮藏ESI、APCITLC、CEELISAPDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（三）农残分析结果计算与表述ululmlmlmlgmgmlgmg进样体积定容体积移取样液量溶剂量样品重分析样品量=1000111000)()()(ngng标样含量或峰高计算）标样响应值（以峰面积或峰高计算）样品响应值（以峰面积测定目的物量=（外标法，单点定量）（外标法，单点定量）PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/第二部分 农残检测技术综述PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介一一 样品予处理样品予处理n取样：均匀、代表性n处理：水样，过滤；土样，阴干、研细、过筛（40目）；动植物样：高水分（水果、蔬菜），切块、食品加工器中加工低水分（粮食）磨碎，过筛高脂肪（畜产品），切块，搅肉机中加工。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介二二 提取提取n用溶剂把分析目的物从样品中溶解抽提出来。n溶剂的选择：目的物溶解度大，基质干扰物溶解度小，纯度高（农残级、HPLC级、分析纯重蒸，浓缩200X，仪器检测）PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介二二 提取提取按溶剂类型分类乙腈法CDFA（US）Dr.Mill乙酸乙酯法欧盟法(Sweden)丙酮法FDA（US）Dr.Luke混合溶剂法（乙腈-丙酮-甲醇）FDA（US）（测定牛奶中有机磷、有机氯）PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/乙酸乙酯高丙酮乙腈农药回收率高较好高除脂肪一般好好好较好一般好一般低低除蛋白较好好好除糖份较好除水分一般一般较好GC 兼容性较好SPE 兼容性一般一般好GPC兼容性一般挥发性一般一般成本较高毒性低低较低较低有机溶剂提取效果比较PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介二二 提取提取按样品类型分类浸泡、振荡、索氏提取-土壤（非结合残留）匀浆外搅拌器：水果、蔬菜、茶叶、粮食，（脂肪2%）其它SFE，超声波提取PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介三三 净化净化1 液液萃取法（LLE）n分析目的物在两种不相溶的溶剂中进行分配。n利用目的物与干扰物在两种不相溶的溶剂中溶解度差异而达到分离目的。n根据目的物与干扰物性质，选择溶剂对。n传统方法多采用（如国标法）。n逐渐被取代（费时、费试剂、回收率易偏低）。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介三三 净化净化2 固相萃取法SPE 固相微萃取法 SPMEn分析目的物在键合硅吸附剂与溶剂中进行分配，而与干扰物分离。n原理：如图1，图2n适用范围广，各种不同结构类型的SPE商品柱适用于各种结构类型的农药分析。如表1n优点：如表2n已成为农残分析主要前处理手段，代替LLE。发达国家广泛应用，我国正在推广。NextPDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介图 1PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介图 2BackPDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介有机酸维生素脂肪酸磷酸盐（或酯）酸性缓冲溶液高离子强度缓冲溶液水基质：水碱性缓冲溶液生物流体阴离子：羧酸磺酸磷酸盐（或酯）SAX-Quaternary Amine(Strong)PSA-Primary/Secondary AmineNH2-Aminopropyl(Weak）DEA-Diethyl-aminopropyl(Weak)阴离子交换萃阴离子交换萃取取儿茶酚胺类除草剂药物碱性缓冲溶液高离子强度缓冲溶液水基质：水酸性缓冲溶液生物流体阳离子：胺类嘧啶类SCX-Benzenesulfonic Acid(Strong)PRS-Propylsulfonic Acid(Strong)CBA-Carboxylic Acid(weak)阳离子交换萃阳离子交换萃取取维生素D代谢物脂肪分离油类添加剂碳水化合物酚类甲醇异丙醇丙酮非极性基质：己烷油类氯仿脂肪类亲水基团：羟基胺基杂原子（S.O.N)CN-Cyanopropyl2OH-DiolSl-SilicaNH2-Aminopropyl极性萃取极性萃取滥用药物肽农药治疗类药物的监测甲醇乙腈乙酸乙酯氯仿酸化甲醇己烷水基质：水缓冲溶液生物流体疏水基：芳香环烷基链C18-OcatadecylC8-OctylC2-EthylCH-CyclohexylPH-PhenylCN-End-capped Cyanopropyl非极性萃取非极性萃取应用范围应用范围典型洗脱溶液典型洗脱溶液基质基质分析官能团分析官能团键合官能团键合官能团表 1PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介油、油脂、脂肪农药酚类多环芳烃己烷二氯甲烷水基质：水流体疏水基：芳香环烷基链EnvirElut酸性药物强酸强碱酸/碱性有机混合物水基质：水碱性缓冲溶液生物流体阴离子型滥用药物药物羧酸磺酸Bond Elut Certify II碱性药物中性药物强酸强碱酸/碱性有机混合物水基质：水酸性缓冲溶液生物流体阳离子型滥用药物药物Bond Elut Certify特殊相特殊相核苷酸类核苷类碳水化合物儿茶酚胺类酸性缓冲溶液酸化甲醇水基质：碱性缓冲溶液生物流体连位二醇PBA-Phenyl-boronic Acid共价萃取共价萃取应用范围应用范围典型洗脱溶液典型洗脱溶液基质基质分析官能团分析官能团键合官能团键合官能团续表 1PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介酚类甲醇乙酸乙酯水基质：水流体疏水基：芳香环烷基链PPL爆炸物农药乙腈甲醇乙酸乙酯水基质：水流体疏水基：芳香环烷基链ENV药物乙腈水基质：水流体疏水基：芳香环烷基链LMSTricyclicsBenzodiazepines甲醇碱性甲醇水基质：生物流体疏水基：芳香环烷基链TCA有机酸儿茶酚胺类碱性药物酸性/碱性缓冲溶液高离子强度缓冲溶液水基质：水生物流体缓冲溶液阴，阳离子AccuCAT特殊相特殊相应用范围应用范围典型洗脱溶液典型洗脱溶液基质基质分析官能团分析官能团键合官能团键合官能团续表 1BackPDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介有机溶剂用量有机溶剂用量操作时间操作时间省时，省溶剂、操作简单、易实现半自动化、自动化，结果准确度、精密度较高费时、费溶剂、设备复杂结果准确度、精密度较低优缺点优缺点1020分钟/样610小时/样总耗时间总耗时间不需净化过净化柱净化净化不需浓缩过键柱时100ml 1ml(100 x)100ml 1ml(100倍）20 分钟浓缩浓缩8ml/样510分钟（过柱，100ml)6分钟/样（转移、定容）100ml/样0.5小时/样（萃取），48小时（脱水）/样萃萃取取少量柱或溶剂（田间过柱、洗脱或实验室洗脱）大量水样包装运输贮藏包装运输贮藏2-200ml 41000ml 4取样量取样量固相萃取法固相萃取法(SPE)液液-液萃取法（液萃取法（LLE)项目项目方法方法表2 固相萃取法与液-液萃取法操作比较BackPDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介三三 净化净化3凝胶渗透法（GPC）.n原理：基于物质分子大小和形状不同来实现分离的。主要依据相对分子量的差别，通过GPC将农药与农药、农药与共提取物分开。从而使之得到分离和净化。（大多数农药分子量小于500）如图3n优点：净化容量大，适用于有机磷、有机氯农药的提取，去除脂肪和色素。大多数农药回收率较高。容易实现自动化。n缺点：凝胶柱成本较高，溶剂用量大。n欧洲应用的较多。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介图 3PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介三三 净化净化4超临界萃取法（SFE）n用超临界流体为萃取剂，从复杂组分中把目的物组分提取出来。n原理：依据超临界流体中不同物质的溶解度不同达到分离的目的。n优点：快速方便、选择性强；流体密度、溶解度、粘度都能通过压力控制；超临界流体常温下可自然挥发，省去了浓缩步骤；可与GC、LC及超临界色谱联机；样品用量少、回收率高等。n缺点：设备投资大、技术要求高；分析物质浓度过高干扰检测；基质对萃取过程影响较大；适用的农药和样品范围较窄nSFE是农药多残留分析中具有发展前景的技术。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介三三 净化净化5 其它：磺化法、冷冻法、凝结沉淀法。n磺化法：利用脂肪和蜡质能与浓硫酸进行磺化反应的原理，有效去除基质中的脂肪和蜡质（前提是测定的农药不与硫酸反应，常用于有机氯农药检测）。n冷冻法：低温下有机溶液里，动植物中脂肪、蜡质沉淀析出，而农药留在溶液中，达到分离目的。n凝结沉淀法：用凝结剂将脂肪和色素等杂质沉淀的净化方法，适用于极性较强，在水中有一定溶解度的农药。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（一）农残检测前处理技术简介四四 浓缩浓缩n真空旋转蒸发法：处理溶剂量大、速度快、损失率高。nKD浓缩器：处理量大、农药提取较充分、损失率较真空旋转蒸发器低、耗时较长。n氮吹仪：浓缩效率高，农药损失率低，溶剂处理量小，与SPE净化方法结合是理想的浓缩装置。n自然挥发法：浓缩慢，适于体积小，易挥发的溶剂。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（二）国外农残检测技术发展趋势一一 趋势趋势:对农产品,食品安全高度重视,表现在:-体系完备；法规、标准健全；机构、人员、设备完善-监控、检测及时有力；确保消费者身体健康和商品在国际市场上的竞争力为达到 ISO9000 和各国政府法律法规和标准（如GLP），要求检测技术：-检测能力大-方法指标严-样品处理量小-分析目的物种类,数量多-准确度精确度灵敏度要求高-数据文件处理量大PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（二）国外农残检测技术发展趋势二二 概况概况:GC-挥发性农药快速筛选HPLC-半挥发,不挥发,极性,热不稳定性农药确证(结构鉴定)-GC/MS,LC/MS分析目的物-母体,农药代谢物,降解产物,结合残留PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（二）国外农残检测技术发展趋势1 前处理技术(1)传统技术如液-液萃取(LLE);索式提取(Soxhlet Extraction);振荡-过滤(Shake-Filter);匀浆(blending)等仍在使用(参考文献1)。(2)最大进展是固取萃取(SPE)广泛用于农残分析,集萃取、净化、浓缩于一步,具有缩短分析时间,降低成本,节省有机溶剂,可实现半自动化,全自动化操作等优点(参考文献2,3)。(3)用活性碳柱和SPE柱净化,GC/MS和HPLC-FLD，检测水果,蔬菜中200多种有机氯、有机磷、含氮和氨基甲酸酯类农药残留方法已发表(参考文献7)。二二 概况概况:PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（二）国外农残检测技术发展趋势二二 概况概况:1 前处理技术(4)非极限萃取(nonexhaustive extraction)、用SPE拄(Cartridges)和膜(disks)结合GC和GC/MS方法，在线和非在线液体提取；固相微萃取(SPME)；超临界萃取(SFE)；基质固相分散萃取(Matrix solid-phase dispersion extraction)；苯乙烯-二乙烯基苯共聚物萃取；多孔碳柱和SPE拄或膜(特别是C8,C18)结合使用；加速溶剂萃取(accelerated solvant extraction)；微波萃取；钝化扩散聚合物膜(passive diffusion through polymeric membranes)；离心分离层析；自动液-液、索氏和SPE萃取；自动化凝胶渗透层析；液体样品经固相沉淀后，SFE萃取水中挥发和半挥发农药；顶空SPME等前处理技术，在制备液体和固体样品时如何应用均有报导(参考文献4,5,6)。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（二）国外农残检测技术发展趋势二二 概况概况:2 GC,GC/MS(1)高效毛细管柱(非极性和中等极性固定相）,双柱定性定量代替传统填充柱。(2)广泛使用元素选择捡定器(ECD,FPD,NPD等)。(3)GC/MS和GC/MS-MS作确证和结构鉴定。(4)SPE结合GC/MS，提供了有效和强有力的分析系统。(5)用原子发射捡定器(AED)可以筛选400多种农药残留。(6)手性高分辨率GC/MS用于选择性检测农药异构体和对映异构体。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（二）国外农残检测技术发展趋势二二 概况概况:3 HPLC，LC/MS(1)C8、C18 反相柱最常用于HPLC农残检测。(2)吸附柱(silica,gel)；极性键合柱(cyano,amino)；离子交换；离子色谱(IC)；离子对；混合官能度柱(multimodal)也用于特殊分析。(3)HPLC-SFC/MS 改善选择性,达到净化测定一体化(4)固定和可调波长UV-VIS 检定器常用于HPLC农残分析，二极管陈列UV-VIS检定器和MS，提供农药结构鉴定,其他如FLD和电化学检定器用于单个或多个检定器系统。(5)LC/MS和LC/MS-MS(ES)用于农药多残留分析已有报导。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（二）国外农残检测技术发展趋势二二 概况概况:4 CE(capillary electrophoresis),IC(ion chroniatography)和其他色谱(1)SFC(超临界色谱)结合SFE用于土壤中农药分析。(2)欧洲广泛应用高效自动化薄层层析(TLC)定量检测饮用水中污染物。(3)CE,CE/MS和IC分离,测定作物和其他基质中农药、农药代谢物残留和无机物残留是很大进展。用CE分析大豆中多种极性农药是一个典型例子。(4)CE,IC和AAS(原子吸收),ICP-AES,ICP-MS结合用于重金属分析PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（二）国外农残检测技术发展趋势二二 概况概况:5 生物技术方法(1)特异性抗体的开发，导致免疫分析方法(Immunoassay)用于实验室和田间农残分析。(2)免疫分析商品化检测试纸，在分析有机磷、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、氯代苯氧羧酸、均三氮苯、苯胺、有机氯等农药残留成为有价值的方法。(3)免疫分析用于大监测项目、农药登记、代谢物研究、亲合色谱(affinity chromatography)、食品调查、人类和环境对农药暴露研究等方面。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（三）国内农残检测面临任务形势:1.农药生产农药生产产量40万吨,居世界第二位(仅次于美国)，其中杀虫剂占总量70%；有机磷杀虫剂占杀虫剂产量70%；甲胺磷,甲基对硫磷,对硫磷,氧乐果，久效磷又占有机磷杀虫剂产量70%。2.农药使用农药使用年使用量27万吨 居世界前列；使用区域集中(江苏,浙江,山东等)；施用作物-蔬菜蔬菜,播种面积占农作物10%,单位面积施药量最大,年人均占有量最大(300公斤)PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（三）国内农残检测面临任务3.农药污染农药污染(蔬菜蔬菜)1)2001年 全国23个城市181种蔬菜检测,超标率47.5%。2)某省五个菜市场抽检48个菜样,44个不合格,高毒农药检出率达30%。3)北京部分市场检测超标率18%,自产有机磷超标率17%,进京菜农药超标率69%。4)上海,广西,天津相继发生甲胺磷污染蔬菜造成急性中毒事件,中毒人数达数百人。5)调查结果表明，有机磷(甲胺磷,乙酰甲胺磷,氧乐果,敌敌畏等)和氨基甲酸酯(克百威)是造成蔬菜中农残超标,引发急性中毒的主要农药品种。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（三）国内农残检测面临任务基于上述情况造成农产品(蔬菜),污染严重n国际市场-出口受阻(面临法规,标准;检测技术,方法的严重挑战)。n国内市场-消费者忧心重重(放心工程)。n农业部实施无公害食品行动计划，建立农药残留检测系统。n急需建立与国际接轨的农残检测技术,标准操作程序(SOP)和GLP 实验室,取代我国现有检测农药品种数量单一、前处理复杂、费时、灵敏度，准确度差的农残检测方法，以出具科学,公正,国际认可的农残检测数据。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/（四）CDFA-MRSM特点一一 简介简介nCDFA-MRSM是由California Department of Food and Agriculture(CDFA)下属Center of Analytical Chemistry(CAC)开发的农药多残留快速扫描技术(Multiresidue screen method-MRSM)n适用于新鲜蔬菜水果中四大类（有机磷、有机氯、拟除虫菊酯、氨基甲酸酯）200多种农药母体、代谢物、降解产物的检测n固相萃取代替液-液萃取,氮吹仪浓缩代替旋转蒸发仪,双毛细管柱、双检定器、GC、HPLC定性定量，GC/MS确证n是美国农业部(USDA)、FDA、EPA认可的官方方法在加州CDFA、佛罗里达州FDOACS(Florida Department of Agriculture and Consumer Services)和 Washington Department of Agriculture等实验室使用，质量保证和方法认证程序，遵从美国农业部农药数据库项目(USDA、PDP)和EPA、FDA的GLP规定n97年引入中国，在农业部环境监测总站（天津），Agilent实验室，北京锦绣大地农业股份有限公司检测中心验证和应用，即将批准为国家标准和农业行业标准检测方法。PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/二 CDFA-MRSM在中国实验室验证技术指标表0.005-0.220%70-120%CH:0.2 1.6OP:0.25CARB:0.25CDFACH:0.0001-0.0170(ECD)OP:0.0100-0.2000(FPD)CARB:0.0010-0.0020(FLD)20%70-120%CH:0.01-1.00OP:0.05-3.00CARB:0.05-0.50北京锦绣大地检测中心CH:0.0011-0.1154(ECD)OP:0.0065-0.1725(FPD)0.0104-0.8625(NPD)CARB:0.0051-0.0106(FLD)20%70-120%CH:0.01-4.25OP:0.05-2.00CARB:0.10-0.55农业部环境监测总站（天津）CH:0.0001-0.0480(ECD)OP:0.0250-0.6000(FPD)CARB:0.0010-0.0030(FLD)20%70-120%CH:0.01-1.00OP:0.05-3.00CARB:0.05-0.50Agilent实验室MDL（ppm）变异系数平均回收率（%）添加浓度范围（ppm）项目类别PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/三 方法评价CDFA-MRSR与传统方法比较MRSM（CDFA)传统方法(国标方法)萃取方式固相萃取液-液萃取溶 剂 用 量15ml 士/样100ml 士/样时间10-15分/样（不需脱水）60-120分/样（脱水）浓缩仪器氮吹仪旋转蒸发仪或K-D浓缩器时间3-5分/样15-20分/样损 失 率3%10-20%或10%净化时间不需净化柱层析（有机氯），30-60分/样溶 剂 用 量0ml/样50-100ml/样前处理总消耗时间0.5-1小时/样2-3小时/样（有机磷）8-12小时/样（有机氯）检测农药类型一次处理可同时检测有机磷、有机氯、菊酯、氨基甲酸酯类不同农药采用不同方法分别处理检测农药数量200种（一次处理）其中：有机磷80种、有机氯、菊酯100种氨基甲酸酯20种34种（分类处理）其中：有机磷20种有机氯11种菊酯3种检测准确度、灵敏度步骤简单、损失小；毛细管柱，双柱、双检定器同时定性、定量。检测准确度、灵敏度高。步骤多、易损失；一般用填充柱、单检定器定性、定量检测时间未知扫描200种（一次处理）1-1.5小时/样20种/类(一次处理)4-13小时/样方法特点省溶剂、省时、省工；前处理设备简单，一次处理检出农药多，适合于未知农药多残留快速扫描。用于果蔬批发市场和生产基地，进出口基地执法检测。溶剂、时间、人工消耗较多，前处理设备复杂（索氏提取器、K-D浓缩器、旋转蒸发器）；一次处理检出农药少，适于已知单残留检测。难以满足市场检测需要。方法项目PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/CDFA-MRSM与酶法比较较酶法慢，一个样品扫描200种农药需1.0-1.5小时。成本高。快速、简单、易操作、成本低检测时间与成本检测数据可直接作为执法依据通常检测数据不能直接作为执法依据，还需用化学法验证后方可生效检测数据的可靠性用双色谱柱双检定器同时定性定量，准确度均较高对残毒愈高的样品误差愈小检测准确度在实验室进行可在现场检测（便携式）检测方式对各类农药灵敏度均较高，如：甲胺磷可检出0.01-0.05ppm有的农药灵敏度很低，如：甲胺磷 感度为65.62ppm检测灵敏度适用于各类蔬菜（叶菜、果菜、根菜、茎菜等）叶菜类；不适于果菜及根菜类检测蔬菜品种约200多种（其中1类80多种，2类20多种，3、4类100多种）约20多种（仅1，2类）检测农药数量1.有机磷2.氨基甲酸酯3.有机氯4.拟除虫菊酯1.有机磷2.氨基甲酸酯检测农药类型MRSM法（CDFA)酶法检测方法PDF created with FinePrint pdfFactory trial version http:/FDA、CDFA、Canada方法比较成本较低快速简便（无LLE，少量CH2CL2)70-120%200F