液相色谱定量基础知识3.pdf

1 11Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited第三部分定量基础知识2 22Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定性方法?色谱峰的定性鉴别通过保留值(通常是保留时间)进行定性需要指定保留时间误差范围（时间窗、时间带）?在相同的分析条件下保留时间相同并不肯定是同样的组份保留时间不同肯定不是同样的组份3 33Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定性确证仅仅通过保留时间并不能完全确证该物质?通过加入标准物确认?通过改变色谱条件确认?光谱和质谱信息也可以作为进一步确证手段?其他仪器方法确证4 44Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定量分析的基本要求?需要有纯物质作标准?被定量组分峰要与其它峰达到基线分离?符合定性参数要求?选择合适的定量方法5 55Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定量分析基本公式Ci=fiAiCi=fiHi在某些条件限定下，被测组分的浓度与检测器的响应值成正比的关系。（蒸发光散射检测器浓度与峰面积不成线性，分别取对数后成线性）Ci：组分浓度,fi:响应因子，与组分的物理化学性质和检测器的性质有关Ai：组分响应面积Hi：组分响应高度实际修饰公式：Y=aX+b实际修饰公式：Y=aX+b6 66Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited常用定量方法?面积归一化?外标法?内标法?标准加入法7 77Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited面积归一化法公式：%100%=AiAiCi特点：1.无需做校正，简便，快速2.进样量不严格要求3.要求所有组分都流出并且被检测到4.要求所有组分的响应因子相当不能作为准确定量的方法，仅在特定情况下使用8 88Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited外标法浓度C1C4C3C2浓度面积A1A2A3A4C1C2C3C4A1A2A3A4峰面积标准曲线9 99Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited外标法特点：1.不需所有峰都流出或被检测到，只对目标组分作校正2.需要标准样品3.进样量必须准确4.仪器必须有良好的稳定性是实验室最常用的定量方法，定量结果准确fii组分工作曲线的斜率iiiAfC=101010Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited单点校正法当被测试样中各组分浓度变化范围不大时，可不必绘制多点的标准曲线，而用单点校正法（比较法）。配制一个和被测组分含量接近的标准溶液，定量进样，根据被测组分和外标组分峰面积比或峰高比计算被测组分的含量。sisiAAww=当方法存在较大的系统误差,单点校正法的误差较大.111111Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited内标法目标C1C4C3C2浓度面积A1A2A3A4C1/CISC2/CISC3/CISC4/CISA1/AISA2/AISA3/AISA4/AIS浓度比:目标/内标面积比:目标/内标标准曲线内标CISCISCISCISAISAISAISAIS121212Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited内标法ssiisssiiisssiiiwAAfwAfAfwAfwAfw=fi为待测组分(i)对内标物(s)的质量相对校正因子试样配制：准确称取一定量的试样Wi，加入一定量内标物WS计算式：131313Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited内标法特点特点：1.进样量不严格要求2.只对所测组分作校正3.必须在样品中加一内标组分4.操作较为繁琐5.选择内标物比较困难多用在国际标准和规定比较严格的方法中141414Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited选择内标物应注意1.理化性质与待测物相近2.在样品中不存在且不与样品中组分发生化学反应3.内标物与待测物响应相近4.与待测物有良好的分离，但又不能相距太远5.与待测物的峰面积比为0.7-1.3最好，因此要根据待测物的浓度确定内标物的添加量151515Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited标准加入法iiiiiiiAfwwAfw=+=iiff=iiiiiAAwww=+1=iiiiAAww当难以选择合适的内标物或无空白样品时，以欲测组分的纯物质为内标物加入到待测样品中，然后在相同的色谱条件下，测定加入欲测组分前后的峰面积，从而计算待测组分的含量。161616Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited标准加入法特点1.不需另外选择内标物2.进样量不必十分准确，操作简单3.两次色谱条件完全相同以保证校正因子完全相等171717Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?Integration parameters：积分参数，规定计算出峰面积的方法。?Identification：定性参数，保留时间及允许误差?Quantification method：定量方法，选择定量方法(外标法,内标法等)?Curve fit Type：曲线拟合类型，包括线性、二次方程等?Compound table：化合物表，定义要进行定量计算的组分，其中包括定性和定量参数。定量计算常用术语1)Type：组分类型，指组分的分析类别Target：要计算的目标组分ISTD：指该组分为添加的内标组分Reference：指该组分为参比组分，用来对目标组分进行确认ISTD&Ref.：指该组分既是内标组分，又是参比组分2)Conc：浓度，指目标组分的计算结果181818Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定量计算常用术语?Sample Type：样品类型，规定该数据的计算类别Standard：标样，浓度已知的标准品，用来制作标准曲线Unknown：未知样，浓度待测的目标组分，?Sample Amt.：样品量,待测样品的原始称样量,在计算结果中会除以该数值?Dil.Factor：稀释因子,待测样品的稀释倍数，在计算结果中会乘以该数值?ISTD Amt.：内标量，内标组分的添加量?Level：样品浓度水平，规定数据的浓度级别，Unknown为0，Standard为整数，浓度由低到高依次为1、2、3、4、5?Peak Table：峰表，所有积分结果的列表191919Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited数据处理参数?积分参数：（Width,Slope,Drift,T.DBL等）?定性参数：保留时间及允许误差（时间窗，时间带）?定量参数：?1)定量方法：外标法、内标法、面积归一法等2)曲线点数：一点或多点3)曲线拟合：线性、折线、曲线202020Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited积分参数212121Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited积分参数222222Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited基本积分参数?Channel：通道，指定检测器检测信号的通道?Width：半峰宽，峰的半高宽，排除峰宽小于最小峰宽的峰?Slope：斜率，用来判断出峰起点、终点以及滤除低平噪声?Drift：漂移，判断相邻峰的积分方式设定值为0时，积分仪将自动判断如Drift与基线至峰谷连线较接近时，积分面积值可能变化较大?T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率?Minimum area：最小峰面积，排除面积小于该值的峰232323Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedSlope的设定Slope峰斜率，积分不稳定，须手动设定SlopeSlope峰斜率，作为噪声滤除SlopeSlopeSlope242424Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedDrift值的设定(手动校正)DriftDriftDriftDriftDriftDrift注：1)设定值为0时，积分仪将自动判断2)如Drift与基线至峰谷连线较接近时，积分面积值可能变化较大252525Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedDrift值的设定(自动校正)谷宽半峰高宽度T2半峰高宽度T2T1262626Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited.DBL的设定T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率?等度洗脱时，出峰时间越长，峰越宽?设定值为0时，根据宽度自动判断?默认值为1000，此时该参数不起作用?在实际使用中，一般使用默认设定272727Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedIntegration Off to On：锁定某一时间范围的峰，使之不计算积分积分锁定0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.5min0.00.51.01.52.02.5mAU(x10)202nm4nm(1.00)Integration Off to On282828Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定性参数292929Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定性参数?绝对保留时间?相对保留时间?保留时间允许误差时间窗：相对允差,一般设为5%时间带：绝对允差,一般设为0.050.25 min303030Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定量参数313131Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定量参数?定量方法：面积归一法、外标法、内标法等?工作曲线的制作：曲线点数：一点、两点及多点曲线计算：线性、折线、二次曲线、三次曲线323232Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited影响定量结果的因素?保留时间的重现性（对GPC影响很大）?样品问题（杂质、溶剂、稳定性、配制）?进样问题（准确度和精密度）?检测器的性能（影响线性、检出限、灵敏度）?方法的可靠性?积分参数的设定