银杏叶色素类化合物的提取分离及结构鉴定_沈红.pdf

第 43 卷第 1 期2023 年 2 月林产化学与工业Chemistry and Industry of Forest ProductsVol 43 No 1Feb 2023收稿日期:2021-12-07基金项目:江苏省生物质能源与材料重点实验室基本科研业务费项目(JSBEM-S-202008);国家自然科学基金资助项目(32101473);中国林科院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(CAFYBB2020SY039)作者简介:沈 红(1992)，女，河南信阳人，博士生，从事天然产物的研究工作;E-mail:2978963446 qq com*通讯作者:王成章，研究员，博士生导师，主要从事天然产物研究与利用;E-mail:wangczlhs sina com。doi:10 3969/j issn 0253-2417 2023 01 010银杏叶色素类化合物的提取分离及结构鉴定SHEN Hong沈 红1，2，张昌伟1，3，陈虹霞1，陶 冉1，3，蒋建新2，王成章1，3*(1中国林业科学研究院 林产化学工业研究所;江苏省生物质能源与材料重点实验室;国家林业和草原局林产化学工程重点实验室;林木生物质低碳高效利用国家工程研究中心;江苏省林业资源高效加工利用协同创新中心，江苏 南京 210042;2北京林业大学 材料科学与技术学院，北京 100083;3中国林业科学研究院 林业新技术研究所，北京 100091)摘要:以银杏鲜叶(样品 1)、银杏干叶(样品 2)和银杏陈叶(样品 3)为原料，制备了 3 个样品的乙醇提取物，采用 HPLC-DAD-MS 法分析 3 个样品中银杏叶色素类化合物的组成;通过液液萃取、硅胶柱层析和 HPLC 制备色谱等技术手段对样品 2 和样品 3 的银杏叶色素类化合物进行了分离纯化和结构鉴定。从 3 个样品中初步推测出24 种银杏叶色素类化合物，其中叶绿素类化合物 17 种，类胡萝卜素类化合物 7 种。从样品 2 和样品 3 的乙醇提取物浸膏中分离纯化出 10 种银杏叶色素单体化合物，通过质谱、紫外光谱、红外光谱和核磁共振氢谱数据分析，并结合文献对照鉴定化合物分别为:-胡萝卜素(A)、脱镁叶绿素 a(B)、脱镁叶绿素 b(C)、叶黄素(D)、植基紫红素 18a(E)、焦脱镁叶绿素 a(F)、132-羟基脱镁叶绿素 a(G)、132-羟基脱镁叶绿素 a(H)、132-羟基脱镁叶绿素 b(I)、132-羟基脱镁叶绿素 b(J)，其中 E、F、G、H、I、J 为首次从银杏叶中分离得到。关键词:银杏叶;色素;提取;分离;结构鉴定中图分类号:TQ35文献标志码:A文章编号:0253-2417(2023)01-0079-10引文格式:沈红，张昌伟，陈虹霞，等 银杏叶色素类化合物的提取分离及结构鉴定 J 林产化学与工业，2023，43(1):7988Extraction，Isolation and Structure Identification of Pigment Compounds fromGinkgo biloba LeavesSHEN Hong1，2，ZHANG Changwei1，3，CHEN Hongxia1，TAO an1，3，JIANG Jianxin2，WANG Chengzhang1，3(1Institute of Chemical Industry of Forest Products，CAF;Key Lab of Biomass Energy and Material，Jiangsu Province;KeyLab of Chemical Engineering of Forest Products，National Forestry and Grassland Administration;National Engineering esearchCenter of Low-Carbon Processing and Utilization of Forest Biomass;Jiangsu Co-Innovation Center of Efficient Processing andUtilization of Forest esources，Nanjing 210042，China;2College of Materials Science and Technology，Beijing ForestryUniversity，Beijing 100083，China;3esearch Institute of Forestry New Technology，CAF，Beijing 100091，China)Abstract:Ethanol extracts of three samples were prepared from Ginkgo biloba L fresh leaves(sample 1)，dry leaves(sample 2)and old leaves(sample 3)HPLC-DAD-MS method was used to analyze the pigment compounds in three G biloba leavessamples The separation，purification and structure identification of ginkgo leaf pigment compounds in sample 2 and sample 3were conducted by liquid-liquid extraction，silica gel column chromatography，HPLC preparative chromatography，etc From thethree samples，24 kinds of pigment compounds in Gbiloba leaves were preliminarily speculated，including 17 kinds ofchlorophyll compounds and 7 kinds of carotenoid compounds Ten monomer pigment compounds in G biloba leaves were isolatedand purified from ethanol extract of sample 2 and sample 3 They were identified as-carotene(A)，pheophytin a(B)，pheophytin b(C)，lutein(D)，phy-purpurin 18a(E)，pyropheophytin a(F)，132-OH-pheophytin a(G)，132-OH-pheophytina(H)，132-OH-pheophytin b(I)，and 132-OH-pheophytin b(J)，respectively，by mass spectrometry，ultraviolet80林产化学与工业第 43 卷spectroscopy，infrared spectroscopy and proton nuclear magnetic resonance spectroscopy combined with literature comparisonAmong them，E，F，G，H，I and J were isolated from G biloba leaves for the first timeKey word:Ginkgo biloba leaves;pigments;extraction;separation;structure identification银杏是古老的孓遗植物之一，素有“活化石”之称，是中国传统的经济林树种之一，中国的银杏资源占世界总量的 70%以上1。银杏叶富含黄酮类、内酯、多酚类、聚戊烯醇、色素等多种生物活性成分2 4，其中色素因在呈色和光合作用中起重要作用，且色素及其衍生物在抗氧化、抗炎、抗癌以及预防老年痴呆等方面展现出良好的生物活性而备受关注5 7。工业上一般采用银杏干叶为原料进行精深加工，原料储藏期限为一年左右。然而，色素类化合物稳定性比较差，在干燥和储藏的过程中可导致其降解转化成相应的衍生物8 10。因此，银杏叶色素及其衍生物的开发利用可为银杏类产品附加值的提高开辟新途径。目前，银杏叶色素主要是通过对提取完黄酮类、内酯和聚戊烯醇等活性物之后的下脚料进行皂化后得到，而银杏叶中色素组成和分离纯化，特别是经过干燥处理后以及储藏一段时间后的银杏叶中色素组成和分离纯化的相关研究鲜见报道8。高效液相-二极管阵列-质谱(HPLC-DAD-MS)法因分离效果好、光谱信息全、灵敏度高等优点，在色素类化合物定性结构鉴定和定量分析等领域得到广泛应用。因此，本研究根据色素化合物光谱吸收特征、保留时间、质谱信息(分子离子峰和碎片离子峰)结合相关文献报道的数据，首先采用 HPLC-DAD-MS 法分析银杏叶中色素类化合物的组成，然后通过液液萃取、硅胶柱层析和 HPLC 制备色谱等技术分离纯化银杏叶色素类化合物，以期为银杏叶色素类化合物的高值化开发利用奠定基础。1材料与方法1 1原料、试剂与仪器银杏(Ginkgo bicoba L)叶于 2020 年 6 月采自江苏省邳州市国家银杏良种种植基地。丙酮、石油醚、甲醇(色谱纯)、异丙醇(色谱纯)、乙酸铵、二氯甲烷、氢氧化钠、盐酸等，均购于阿拉丁化学试剂有限公司。LC-MS129-6460 液质联用仪，安捷伦科技(中国)有限公司;KH5200E 型超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司;Brucker Avance 500 MHz 超导核磁共振波谱仪，瑞典 Bruker 公司;半制备高效液相色谱仪，北京赛谱瑞思公司;Nicolet 550 红外光谱仪，美国赛默飞世尔公司。1 2HPLC-DAD-MS 定性分析方法的构建采用液质联用仪对样品进行质谱分析，在 Thermo C18色谱柱(250 mm 4 6 mm，5 0 m)上进行梯度洗脱，流动相 A 由 85%甲醇和 15%10 mmol/L 的醋酸铵水溶液组成，流动相 B 由异丙醇/甲醇体积比11 组成。梯度洗脱:100%A(0 5 min)，100%0%A(5 15 min)，0%A(15 45 min)，0100%A(45 47 min)和100%A(47 60 min)。流速0 8 mL/min，进样量10 L，柱温为(30 1)。根据文献11 报道的方法，采用正离子模式下进行质谱分析，配有大气压化学电离(APCI)源。1 3提取与分离方法13 1不同样品的制备取银杏鲜叶(样品 1)于液氮中磨成粉末;将银杏鲜叶平铺于托盘内，每片银杏叶之间应有间隙，在真空干燥箱(100 kPa)中 60 干燥4 h，即得银杏干叶(样品2)，然后用粉碎机磨成粉末，过 0 178 mm 筛;将银杏干叶样品 2 于室温条件下放置 1 年，即得银杏陈叶(样品 3)，然后用粉碎机磨成粉末，过 0 178 mm 筛。1 3 2银杏叶色素类化合物的提取称取 4 g 样品 1 样品 3 粉末加入 20 mL 乙醇，超声波提取10 min。所得提取液过 0 45 m 有机膜，然后按照 1 2 节方法进样分析。称取银杏干叶(样品 2)和银杏陈叶(样品 3)粉末 1 kg，按料液比 1 5(g mL)加入 95%乙醇，在45 的水浴锅中浸提 2 h，提取 3 次，合并提取液;提取液一部分过滤后按 1 2 节方法进行分析;一部分经过滤，减压浓缩，分别得到浸膏 S1 和 S2。第 1 期沈 红，等:银杏叶色素类化合物的提取分离及结构鉴定8113 3银杏叶色素类化合物的分离取 200 g 浸膏 S1 加入 500 mL 丙酮超声波处理使其充分溶解，加入等量乙醚混匀，轻轻振摇2 min，然后加入等体积的水，溶液分层，上层为脂溶性色素的乙醚层，下层为水溶性杂质丙酮和水层，弃去下层，再加入等体积的水萃取 3 次，收集乙醚层减压浓缩得到精制软膏76 7 g。取 50 g 精致软膏，用少量二氯甲烷溶解，上硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯体系(体积比 100 0 7030)进行梯度洗脱，通过薄层色谱(TLC)合并极性相同组分，经减压浓缩得到 4 个组分 Fr 1 Fr 4。取浸膏 S2 同上操作，得组分 Fr 5 Fr 8。Fr 1 用石油醚/乙酸乙酯(体积比 964)洗脱得到化合物 A;Fr 2 用石油醚/丙酮(体积比 9010)洗脱得到化合物 B;Fr 3 用石油醚/丙酮(体积比 85 15)洗脱得到化合物 C;Fr 4 用石油醚/乙酸乙酯(体积比 70 30)洗脱得到化合物 D;Fr 5 用石油醚/丙酮(体积比955 9010)洗脱得到化合物 B、E 和 F;Fr 6 用石油醚/丙酮(体积比8812)洗脱得到化合物 G 和 H;Fr 7 用石油醚/丙酮(体积比 8515 8020)洗脱得到化合物 C、I 和 J;Fr 8 用石油醚/乙酸乙酯(体积比 7030)洗脱得到化合物 D。色素类化合物 A J 通过高效液相制备色谱进一步分离纯化得到相应的单体化合物。色谱条件如下:XB-C18 色谱柱(250 mm 10 mm，5 0 m)，流动相为甲醇/异丙醇，检测波长根据文献设置为 409、437 和 473 nm，流速 3 mL/min6，9。1 4银杏叶色素类化合物的结构鉴定取 1 3 3 节分离纯化得到的 10 种色素单体化合物，进行 I 和1H NM 分析。核磁共振氢谱采用氘代氯仿作溶剂，在 400 MHz 的条件下进行扫描;红外光谱采用溴化钾压片法，测量波数范围 500 4 000 cm1，分辨率 2 cm1。2结果与讨论2 1银杏叶色素类化合物的组成分析采用 HPLC-DAD-MS 对银杏叶乙醇提取物的主要色素类化合物进行全面分析。根据色素的出峰时间、光谱特征吸收、质谱信息以及文献数据，初步推断出 24 种色素化合物，高效液相色谱图见图 1。所用的液相分离条件使银杏叶色素化合物的分离度良好，有利于进一步质谱检测。a 银杏鲜叶(样品 1)G biloba fresh leaves(sample 1);b 银杏干叶(样品 2)G biloba dry leaves(sample 2);c 银杏陈叶(样品 3)G biloba old leaves(sample 3)图 1不同样品乙醇提取物的 HPLC-DAD 图谱Fig 1The HPLC-DAD diagrams of ethanol extracts of different samples化合物1，根据 DAD 光谱扫描信息可知，在431、620、665 nm 处都有吸收，尤其 S 带的431 nm 处的最大吸收和 Q 区的 665 nm 处的最大吸收判断化合物 1 为叶绿素 a 类化合物;根据准分子离子峰m/z 615 4 M+H+，推断分子式为 C35H34MgN4O5，碎片离子峰 m/z 593 3 是化合物 1 丢失一个 Mg 然后增加两个 H 所产生，该现象由叶绿素类化合物的卟啉大环对 Mg 的结合能力弱容易丢失而对 H 的结合能力较强所导致，结合相关文献推断化合物 1 为脱植基叶绿素 a11 12。化合物 2，UV-vis:410、507、538、609、665 nm，最大吸收波长为 410 nm，根据叶绿素脱镁螯合后其S 带吸收会发生蓝移，推断化合物2 为脱镁叶绿素 a 类化合物。根据准分子离子峰 m/z 593 3 M+H+，82林产化学与工业第 43 卷推断分子式为 C35H36N4O5，结合相关文献推断化合物 2 为脱镁叶绿酸盐 a11 12。化合物 3，UV-vis:465、602、650 nm。根据准分子离子峰 m/z 907 7M+H+，推断分子式为C55H70MgN4O6，碎片离子峰 m/z 885 7 是准分子离子丢失一个 Mg 增加两个 H 所产生，碎片离子峰m/z 607 3 是准分子离子丢失一个 Mg 增加两个 H 和一个植基长链所产生。结合相关文献推断化合物 3 为叶绿素 b10 11。化合物 4 和化合物 3 具有相同的光谱和质谱信息，根据叶绿素类化合物在 13位碳上是手性结构，产生 S 型和 型手性异构体，叶绿素类化合物 S 型与 型异构体具有相同的分子离子峰和相似的紫外吸收，型极性比 S 型的极性小，因此推断化合物 4 为 型叶绿素 b，即叶绿素 b12 13。化合物 5，UV-vis:431、617、665 nm。根据准分子离子峰 m/z 893 7M+H+，推断分子式为C55H72MgN4O5，碎片离子峰 m/z 871 6 是准分子离子丢失一个 Mg 增加两个 H 所产生，结合相关文献推断该化合物为叶绿素 a11 13。化合物 6 和化合物 5 具有相同的光谱和质谱信息，因此推断化合物 6 为叶绿素 a11 13。化合物 7，UV-vis:437、525、598、654 nm，S 带的吸收发生蓝移，最大吸收波长为 437 nm，推断为脱镁叶绿素 b 类化合物。根据准分子离子峰 m/z 902 M+H+，推断分子式为 C55H72N4O7，结合相关文献推断该化合物为 132-羟基脱镁叶绿素 b12。化合物 8 和化合物 7 具有相同的光谱和质谱信息，因此推断化合物 8 为 132-羟基脱镁叶绿素 b12。化合物 9，UV-vis:437、525、598、654 nm，根据质谱的准分子离子峰 m/z 885 6 M+H+，推断分子式为 C55H72N4O6，结合相关文献推断该化合物为脱镁叶绿素 b10 12。化合物 10 和化合物 9 具有相同的光谱和质谱信息，因此推断化合物 10 为脱镁叶绿素 b10 12。化合物 11，UV-vis:408、504、532、608、665 nm，根据准分子离子峰 m/z 887 8 M+H+，推断分子式为 C55H74N4O6，碎片离子峰 m/z 609 3 是准分子离子丢失一个植醇基长链所产生。结合相关文献推断该化合物为 132-羟基脱镁叶绿素 a10，12。化合物 12 和化合物 11 具有相同的光谱和质谱信息，因此推断化合物 12 为 132-羟基脱镁叶绿素 a10，12。化合物 13，UV-vis:408、504、532、608、665 nm，根据质谱的准分子离子峰 m/z 903 9 M+H+，推断分子式为 C55H74N4O7，结合相关文献推断该化合物为 151-羟基脱镁叶绿素 a10。化合物 14，UV-vis:407、506、537、608、667 nm，根据质谱的准分子离子峰 m/z 871 7 M+H+，推断分子式为 C55H74N4O5，碎片离子峰 m/z 593 3 是准分子离子丢失一个植基长链所产生，结合相关文献推断该化合物为脱镁叶绿素 a11。化合物 15 和化合物 14 具有相同的光谱和质谱信息，因此推断化合物 15 为脱镁叶绿素 a11。化合物16，UV-vis:406、476、506、545、640、696 nm。根据质谱的准分子离子峰m/z 8443 M+H+，推断分子式为 C53H70N4O5，结合相关文献推断化合物 16 为植基紫红素 18a10。化合物 17，UV-vis:408、504、532、608、665 nm，根据准分子离子峰 m/z 813 9 M+H+，推断分子式为 C53H72N4O3，碎片离子峰 m/z 535 1 是准分子离子丢失一个植基长链所产生。结合相关文献推断化合物 17 为焦脱镁叶绿素 a11。化合物 18 和 19，UV-vis 分别为 415、437、464 nm 和 417、440、469 nm，根据光谱吸收判断化合物18 和 19 为类胡萝卜素;根据化合物 18 和 19 的准分子离子峰都是 m/z 601 6 M+H+，推断分子式为C40H56O4。结合相关文献推断化合物 18 和 19 分别为紫黄质和新黄质13 14。化合物 20，UV-vis:423、445、473 nm，根据光谱吸收特征判断化合物20 为类胡萝卜素;根据准分子离子峰 m/z 569 4 M+H+，推断分子式为 C40H56O2，碎片离子峰 m/z 551 5 是准分子离子丢失一个H2O所产生，结合相关文献推断该化合物为叶黄素13 14。化合物 21 和 22 具有共同准分子离子峰 m/z 551 M+H+H2O，根据出峰时间和紫外光谱特征吸收即类胡萝卜素的顺式异构体的主吸收峰与全反式的主吸收峰之比，其电子吸收光谱发生“紫移”;第 1 期沈 红，等:银杏叶色素类化合物的提取分离及结构鉴定83同时，顺式异构体在 330 348 nm 处会出现一个特征吸收峰，被称为“顺式峰”，因此判断化合物 21 为9-顺式-叶黄素，化合物 22 为 13-顺式-叶黄素13 14。化合物 23 和 24，UV-vis 分别为 335、445、472 nm 和 451、477 nm，根据光谱吸收特征判断化合物23 和 24 为胡萝卜素;根据化合物 23 和 24 的准分子离子峰 m/z 536 8 M+H+，推断分子式为C40H56。结合相关文献推断化合物 23 和 24 分别为-胡萝卜素和-胡萝卜素13 14。银杏叶色素类化合物的结构见图 2。图 2银杏叶色素化合物结构(PT:植基)Fig 2Structure of pigment compounds in G biloba leaves(PT:phytyl)根据液相色谱图 1 结合数据分析，推测样品 1(银杏鲜叶)中有 14 种色素类化合物，样品 2(银杏干叶)中有 14 种色素类化合物，样品 3(银杏陈叶)中有 12 种色素类化合物，3 种银杏叶样品中共含有24 种色素类化合物，其中叶绿素类化合物有 17 种，类胡萝卜素类化合物有 7 种。1 号样品的叶绿素主要以叶绿素 a 和叶绿素 b 的形式存在，2 号样品主要以脱镁叶绿素 a 和脱镁叶绿素 b 的形式存在，而 3号样品不仅含有大量脱镁叶绿素，同时还含有叶绿素衍生物如 132-羟基脱镁叶绿素 a、132-羟基脱镁叶绿素 a、132-羟基脱镁叶绿素 b、132-羟基脱镁叶绿素 b、焦脱镁叶绿素 a、植基紫红素18a。以上分析结果与文献报道一致，加热会导致银杏叶细胞受到破坏，细胞内的有机酸被释放出来，从而促进叶绿素卟啉环中间镁离子脱螯合;同时加热给该反应提供能量促进叶绿素脱镁螯合产生脱镁叶绿素9。高温能够促进叶绿素脱镁螯合同时去甲氧基产生焦脱镁叶绿素，因此银杏叶经过加热干燥处理后有微量的焦脱镁叶绿素产生。3 号银杏叶样品由于长期储藏在室温空气暴露条件下，没有放入冰箱冷藏处理，从而84林产化学与工业第 43 卷使得银杏叶部分脱镁叶绿素被氧化产生相应的叶绿素衍生物。2 2银杏叶色素类化合物鉴定结果从样品 2 银杏干叶中提取分离纯化出 A、B、C 和 D 这 4 种色素单体化合物，HPLC 和 I 分析见图3;从样品 3 银杏陈叶中提取分离纯化出 B、C、D、E、F、G、H、I 和 J 这 9 种单体化合物，其中化合物 E J 的 HPLC 和 I 分析见图 4。化合物 A，橘红色粉末，根据色谱图(图 3(a)面积归一法，其纯度达到 90%以上。UV-vis()max:423、445、473 nm;MS(APCI)5368(M+H)+，推测分子式 C40H56;I(KBr，cm1):3 028 为=CCH的伸缩振动峰，2 950 为CH3的特征峰，2 846 为CH2的特征峰，1 621 为=CC 的伸缩振动峰。化合物 A 的氢谱图分析发现，6 71 6 13 处的 m 峰为胡萝卜素链上双键氢特征峰。1H NM(400 MHz，CDCl3):6 71 6 61(m，4H，H-15，H-15，H-12，H-12)，6 38(m，2H，H-11，H-11)，6 27(m，2H，H-7，H-7)，6 23 6 13(m，6H，H-10，H-10，H-14，H-14，H-8，H-8)，2 05(m，4H，H-4，H-4)，1 99(12H，CH3，H-91，H-91，H-131，H-131)，1 74(6H，CH3，H-51，H-51)，1 65 1 62(4H，CH2，H-3，H-3)1 06(12H，CH3，H-11，H-12，H-11，H-12)。将化合物 A 的1H NM数据与文献对照基本一致，确定化合物 A 为-胡萝卜素13 15。化合物 B，黑色胶状物，根据色谱图(图 3(a)面积归一法，其纯度达到 90%以上。UV-vis()max:408、504、532、608、665 nm;MS(APCI)871 7(M+H)+，推测分子式 C55H74N4O5;I(KBr，cm1):3 391为吡咯环上 NH 的伸缩振动峰，2 956(CH3)，2 846(CH2)，1740、1695 为=CO 拉伸振动峰。1H NM 谱显示出典型的叶绿素类卟啉化合物的特征:低场区3 个单峰 9 47(s，1H，H-5)，9 32(s，1H，H-10)，8 54(s，1H，H-20)。1H NM(400 MHz，CDCl3):9 47(s，1H，H-5)，9 32(s，1H，H-10)，8 54(s，1H，H-20)，7 95(dd，J=17 6，11 5 Hz，1H，H-31)，6 26(d，J=17 8 Hz，1H，H-32a)，6 26(s，1H，H-132)，6 15(d，J=11 4 Hz，1H，H-32b)，5 13(t，J=6 9 Hz，1H，植基-2-H)，4 46(m，J=7 0 Hz，3H，植基-1-H，H-18)，3 88(s，3H，CH3)，3 68 3 57(m，2H，CH2，H-81)，3 38(s，3H，CH3)，3 18(s，3H，CH3)，2 69 2 56(m，1H，H-171a)，2 54 2 41(m，2H，H-172a，H-171b)，2 40 2 26(m，1H，H-172b)，2 25 2 11(m，2H)，1 88(t，J=8 6 Hz，3H，H-181)，1 81(d，J=7 2 Hz，3H，H-82)。1H NM 数据和文献报道的脱镁叶绿素 a 的信息一致，因此确定化合物 B 为脱镁叶绿素 a16。化合物 C，黑色胶状物，根据色谱图(图 3(a)面积归一法，其纯度达到 90%以上。UV-vis()max:436、522、560、596、653 nm;MS(APCI)885 6(M+H)+推测分子式 C55H72N4O6;I(KBr，cm1):3 643(NH)，2 954(CH3)，2 848(CH2)，1 743、1 702(=CO)。1H NM 谱图和化合物 B 基本一致，比较两者1H NM 数据，化合物 C 比化合物 B 多了一个醛基质子信号 11 12(s，1H，H-71)。1H NM(400 MHz，CDCl3):11 12(s，1H，H-71)，10 33(s，1H，H-5)，9 60(s，1H，H-10)，8 56(s，1H，H-20)，8 01(dd，J=17 4，11 5 Hz，1H，H-31)，6 39(d，J=17 8 Hz，1H，H-32a)，6 26(s，1H，H-132)，6 25(d，J=11 3 Hz，1H，H-32b)，5 18(t，J=7 1 Hz，1H，植基-2-H)，5 00 4 90(m，2H，植基-1-H)，4 54(m，J=8 4 Hz，1H，H-17)，4 40(m，J=6 8 Hz，1H，H-18)，3 94(s，3H，CH3)，3 70(s，3H，CH3)，3 40(s，3H，CH3)。将化合物 C 的1H NM 数据与文献对照基本一致，确定化合物 C 为脱镁叶绿素 b17 18。化合物 D，橘黄色粉末，根据色谱图(图 3(a)面积归一法，其纯度达到 90%以上。UV-vis()max:423、445、473 nm;MS(APCI)5694(M+H)+推测分子式C40H56O2;I(KBr，cm1):3 032(=CCH)，3 304为OH 上的强伸缩振动，2 918(CH3)，2 852(CH2)，1 664(=CC);1H NM(400 MHz，CDCl3):6 65(m，4H，H-15，H-15，H-12，H-12)，6 38(m，2H，H-11，H-11)，6 28(m，2H，H-7，H-8)，6 17(m，5H，H-10，H-10，H-14，H-14，H-8)，5 57(m，H，H-7)，5 45(m，1H，H-4)，4 27(m，1H，H-3)，402(m，1H，H-3)，244 239(2H，H-6，H-4)，199 1 93(12H，CH3，H-91，第 1 期沈 红，等:银杏叶色素类化合物的提取分离及结构鉴定85H-91，H-131，H-131)，1 76(3H，CH3，H-51)，1 65(3H，CH3，H-51)1 28(12H，CH3，H-11，H-12，H-11，H-12)。将化合物 D 的1H NM 数据与文献对照基本一致，确定化合物 D 为叶黄素19。A-胡萝卜素-carotene;B 脱镁叶绿素 a pheophytin a;C 脱镁叶绿素 b pheophytin b;D 叶黄素 lutein图 34 种色素的 HPLC(a)和红外图谱(b)Fig 3HPLC diagrams(a)and Infrared spectra(b)of the four pigments化合物 E，黑色粉末，根据色谱图(图 4(a)面积归一法，其纯度达到 90%以上。UV-vis()max:406、476、506、545、640、696 nm;MS(APCI)844 3(M+H)+，推测分子式 C53H70N4O5;I(KBr，cm1):3 473(NH)，2 954(CH3)，2 853(CH2)，1 728(=CO)，1 527 为卟啉骨架的特征峰，1 378为CN 键的特征峰，1 728 为酸酐上两个=CO 的特征吸收峰，低波数强峰，表明为环状酸酐;1H NM(400 MHz，CDCl3):9 50(s，1H，H-5)，9 38(s，1H，H-10)，8 55(s，1H，H-20)，8 01(dd，J=17 3，11 2 Hz，1H，H-31)，6 29(d，J=19 0 Hz，1H，H-32a)，6 17(d，J=11 1 Hz，1H，H-32b)，4 52(m，2H，植基-1-H)，4 13(m，2H，H-17)，3 67(s，3H，CH3)，3 41(s，3H，CH3)，3 24(s，3H，CH3)，1 81(d，J=7 4 Hz，3H，H-181)，1 72 1 61(m，3H，H-82)。将化合物 E 的1H NM数据与文献对照基本一致，确定化合物 E 为植基紫红素 18a20 22。化合物 F，黑色胶状物，根据色谱图(图 4(a)面积归一法，其纯度达到 90%以上。UV-vis()max:410、507、538、608、665 nm;MS(APCI)813 9(M+H)+，推出分子式 C53H72N4O3;I(KBr，cm1):3 395(NH)，2 967(CH3)，2 920(CH2)，1 724(=CO)，1 663(=CC);1H NM(400 MHz，CDCl3):9 44(s，1H，H-5)，9 12(s，1H，H-10)，8 53(s，1H，H-20)，8 01(dd，J=16 1，9 9 Hz，1H，H-31)，642(d，J=17 7 Hz，1H，H-32a)，6 17(d，J=11 5 Hz，1H，H-32b)，5 30(d，1H，J=11 4 Hz，H-132 a)，5 15(d，1H，J=12 3 Hz，H-132 b)，4 52(m，2H，植基-1-H)，4 11(m，4H，H-17，H-18，H-81)，3 67(s，3H，CH3)，3 50(s，3H，CH3)，3 41(s，3H，CH3)，3 24(s，3H，CH3)，2 80(m，2H，CH2，H-172)，2 55(m，2H，CH2，H-171)。将化合物 F 的1H NM 数据与文献对照基本一致，确定化合物 F 为焦脱镁叶绿素 a23。化合物 G，黑色胶状物，根据色谱图(图 4(a)面积归一法，其纯度达到 90%以上。UV-vis()max:408、504、532、608、665 nm;MS(APCI)887 8(M+H)+，推测分子式 C55H74N4O6;I(KBr，cm1):3 381(OH)，2 955(CH3)，2 846(CH2)，1748、1 706(=CO)。1H NM 谱图和化合物 B 基本一致，但在 5 46 处的宽单峰信号为 132位的 OH 信号，该峰区别于脱镁叶绿素 a 处的 H 信号。C132的构型根据氢谱中的 132-OH 信号(5 46)、17-H 信号(4 12 4 06)和171-H(2 90 2 74)确定化合物 G 为132-羟基脱镁叶绿素 a。1H NM(400 MHz，CDCl3):9 50(s，1H，H-5)，9 35(s，1H，H-10)，8 55(s，1H，H-20)，7 92(dd，J=17 8，11 5 Hz，1H，H-31)，6 20(d，J=17 6 Hz，1H，H-32a)，6 10(d，J=11 0 Hz，1H，H-32b)，5 46(s，1H，brs，OH-132)，5 13(t，J=7 0 Hz，1H，植基-2-H)，4 50 4 42(m，3H，H-18，植基-1-H)，4 41(dd，J=14 0，6 5 Hz，1H，H-18)，4 10 4 05(m，1H，H-17)，3 64(s，3H，CH3)，3 58(q，J=12 7，6 4 Hz，3H，H-82)，3 56(s，3H，CH3)，3 33(s，86林产化学与工业第 43 卷3H，CH3)，3 13(s，3H，CH3)。1H NM 数据和文献报道的 132-羟基脱镁叶绿素 a 的信息一致，因此确定化合物 G 为 132-羟基脱镁叶绿素 a24 25。化合物 H，黑色胶状物，根据色谱图(图 4(a)面积归一法，其纯度达到 90%以上。UV-vis()max:408、504、532、608、665 nm;MS(APCI)887 8(M+H)+，推测分子式 C55H74N4O6;I(KBr，cm1):3 383(OH)，2 955(CH3)，2 846(CH2)，1 747、1 706(=CO)，1 365(CN)，721(植基);1H NM(400 MHz，CDCl3):9 49(s，1H，H-5)，9 35(s，1H，H-10)，8 54(s，1H，H-20)，7 90(dd，J=17 4，11 5 Hz，1H，H-31)，6 20(d，J=17 8 Hz，1H，H-32a)，6 09(d，J=11 3 Hz，1H，H-32b)，5 27(s，1H，brs，OH-132)，5 09(t，J=7 1 Hz，1H，植基-2-H)，5 00 4 80(m，2H，植基-1-H)，4 60(m，J=8 4 Hz，1H，H-17)，4 40(m，J=6 8 Hz，4H，H-18)，3 66(s，3H，CH3)，3 56(s，3H，CH3)，3 34(s，3H，CH3)，3 15(s，3H，CH3)。1H NM 谱图和化合物 G 基本一致，比较两者1H NM 数据，化合物 H 中 17-H 信号(4 60)明显低场位移，确定化合物 H 为 132-羟基脱镁叶绿素 a26 27。化合物 I，黑色胶状物，根据色谱图(图 4(a)面积归一法，其纯度达到 90%以上。UV-vis()max:436、522、560、596、