血清游离DNA_ATM启动...鳞癌患者放射抗性的预测价值_章伟玲.pdf

东南大学学报(医学版)J Southeast Univ(Med Sci Edi)2023，Feb;42(1):116-124 收稿日期2022-10-28修回日期2022-11-22 基金项目南通市卫生和计划生育委员会科研课题(QA2019027)作者简介章伟玲(1983 )，女，江苏如皋人，副主任医师，医学硕士。E-mail:dunwei77731163 com 通信作者张羽E-mail:zayio9745132163 com 引文格式章伟玲，张璨，韩晴，等 血清游离 DNA ATM 启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌患者放射抗性的预测价值J 东南大学学报(医学版)，2023，42(1):116-124 论著 血清游离 DNA ATM 启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌患者放射抗性的预测价值章伟玲，张璨，韩晴，张羽(南通大学附属肿瘤医院 妇瘤科，江苏 南通226000)摘要目的:探讨血清游离 DNA(cfDNA)共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌(CSCC)患者放射抗性的预测价值。方法:选取 2016 年 3 月至 2020 年 7 月在本院完成调强放疗的 144 例局部晚期 CSCC 患者作为研究对象。采用定量甲基化特异性聚合酶链反应法检测血清 cfDNA ATM启动子甲基化水平，并收集随访数据。放疗完成 1 个月后根据实体瘤疗效评价标准评估患者治疗反应。结果:局部晚期 CSCC 患者治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平为 66 15%(51 28%，76 28%)，与主要临床特征无关(P 0 05)。抵抗组局部晚期 CSCC 患者治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平显著低于敏感组(P 0 001)。血清 cfDNA ATM 启动子甲基化预测局部晚期 CSCC 患者放射抗性的 OC 曲线下面积为 0 798(95%CI:0 723 0 873)。Logistic 回归分析显示，治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平是局部晚期 CSCC 患者放射抗性的独立预测因子(P 0 05)。预后分析显示血清 cfDNA ATM 启动子甲基化是局部晚期 CSCC 患者的独立有利预后因素(P 0 05)。局部晚期 CSCC 患者血清 cfDNA ATM 启动子甲基化高水平组术后无进展生存期、总生存期、远处无转移生存期和局部无进展生存期均显著优于低水平组(P 0 05)。结论:治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化状态可能是预测局部晚期 CSCC 患者放疗后预后的有用生物标志物。关键词血清游离 DNA;共济失调毛细血管扩张突变基因;甲基化;局部晚期宫颈鳞癌;调强放疗 中图分类号737 33 文献标志码A 文章编号1671-6264(2023)01-0116-09doi:10 3969/j issn 1671-6264 2023 01 017Value of ATM promoter methylation in serum cell-free DNA inpredicting radioresistance in patients with locally advancedcervical squamous cell carcinomaZHANG Weiling，ZHANG Can，HAN Qing，ZHANG Yu(Department of Gynecologic Oncology，Cancer Hospital Affiliated to Nantong University，Nantong 226000，China)AbstractObjective:To investigate the predictive value of serum cell-free DNA(cfDNA)ataxia-telangiectasiamutated gene(ATM)promoter methylation for radioresistance in patients with locally advanced cervical squamous611cell carcinoma(CSCC)Methods:A total of 144 patients with locally advanced CSCC who completed intensitymodulated radiotherapy in our hospital from March 2016 to July 2020 were selected as the research objects Quanti-tative methylation-specific polymerase chain reaction was used to detect the methylation level of ATM promoter inserum cfDNA，and follow-up data were collected One month after the completion of radiotherapy，the treatment re-sponse was evaluated according to response evaluation criteria in solid tumours esults:The serum cfDNA ATMpromoter methylation level in patients with locally advanced CSCC before treatment was 66 15%(51 28%，76.28%)，which was not related to the main clinical characteristics(P 0 05)The methylation level of ATMpromoter of cfDNA in the resistant group was significantly lower than that in the sensitive group before treatment(P 0 001)The area under the OC curve of serum cfDNA ATM promoter methylation in predicting radioresis-tance in patients with locally advanced CSCC was 0 798(95%CI:0 723 0 873)Logistic regression analysisshowed that serum cfDNA ATM promoter methylation level before treatment was an independent predictor of radiore-sistance in patients with locally advanced CSCC(P 0 05)Prognostic analysis showed that methylation of serumcfDNA ATM promoter was an independent prognostic factor in locally advanced CSCC patients(P 0 05)Theprogression-free survival，overall survival，distant metastasis-free survival and local progression-free survival of pa-tients with locally advanced CSCC were significantly better in the high level of serum cfDNA ATM methylation groupthan in the low level group(P 0 05)Conclusion:The methylation status of serum cfDNA ATM promoter beforetreatment may be a useful biomarker for predicting the prognosis of locally advanced CSCC patients after radiotherapy Key wordsserum cell-free DNA;ataxia telangiectasia-mutated gene;methylation;locally advanced cervicalsquamous cell carcinoma;intensity modulated radiotherapy宫颈癌(CC)是全世界女性最常见的致命性癌症之一，在我国以宫颈鳞状细胞癌(CSCC)为最常见的组织学亚型1-2。放疗多年来一直是 CC 的主要治疗手段，尤其是局部晚期 CC3-4。然而，放疗患者对电离辐射的反应有显著差异，这直接影响他们的治疗效果和生存率5。放射敏感性和生存率可能受到特定基因改变的影响，如表观遗传学变化6。DNA 甲基化是一种常见的表观遗传修饰，被认为是恶性肿瘤的标志，在恶性肿瘤的放射抗性机制中发挥重要作用7-8。共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)编码的蛋白是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可调控 DNA 损伤反应和细胞凋亡9。而 ATM 启动子的高甲基化已在不同类型的癌症中被报道，且被证明与放射敏感性有关9-10。最近，有研究表明 ATM 启动子甲基化可作为肝细胞癌患者的放射治疗结果的预测生物标志物11。然而对于血清游离 DNA(cfDNA)ATM 启动子甲基化与 CSCC治疗反应的关系尚未见报道。因此，本研究旨在评估血清 cfDNA ATM 启动子甲基化对局部晚期 CSCC 患者放射抗性的预测价值。1对象与方法1 1研究对象根据 赫尔辛基宣言 的原则，选择2016 年3 月至2020 年 7 月在本院完成放疗的 144 例 CSCC 患者作为研究对象，年龄 23 85 岁，平均(57 79 14 21)岁。研究方案由医院伦理审查委员会批准，所有参与者都签署由伦理审查委员会批准的知情同意书。纳入标准:组织学证实的 CSCC;国际妇产科学联合会(FIGO)分期为b a 期;东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态评分为 0 2 分;无主动脉旁淋巴结转移;无放疗、化疗、手术史;临床资料完整。排除标准:对放疗不耐受;既往存在其他抗癌治疗史;宫颈残端癌或合并其他恶性肿瘤;神经系统疾病;影响治疗的严重并发症，包括结缔组织疾病;入组前 3 个月出现严重慢性心力衰竭或脑血管疾病;感染性或代谢性疾病;预计生存期短于3 个月。另外，在初始治疗前，患者没有接受过放疗或化疗。1 2血清样本收集及处理入组时收集 5 ml 静脉血样本，以 16 000 rmin1离心 3 min，收集上清液于 80 下储存，直到 DNA提取。血清 cfDNA 通过改良的苯酚 氯仿技术提取。cfDNA 颗粒用无菌去离子水溶解，总体积为 25 l，并储存于 20。1 3血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平检测12 使用 EZ DNA Methylation-Gold Kit(美国 Zymoe-search 公司)对血清 cfDNA 进行亚硫酸氢盐变性修饰。每个定量甲基化特异性 PC(Q-MSP)反应都是使用2 l DNA 模板在 20 l 反应体积中进行的，每个反应711章伟玲，等 血清游离 DNA ATM 启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌患者放射抗性的预测价值体积包含 1 l 使用 MethPrimers 设计的正向和反向引物(浓度 10 molL1)、0 4 l MSP DNA 聚合酶、1 7 l 10 MSP PC 缓冲液和1 4 l dNTPs。PC 反应条件为:95 变性 5 min;94 20 s，57 30 s，72 20 s，循环 35 次;72 下延伸 5 min。用 1%琼脂糖凝胶电泳分析 PC 产物，若甲基化样品凝胶中有一条清晰可见的条带则视为甲基化阳性。MSP 结果通过亚硫酸氢盐测序 PC(BSP)检测进行验证，该检测由专业测序公司(中国上海通用化学公司)进行。1 4调强放疗方案放疗前，计算机断层摄影机用于模拟定位。从第一腰椎上缘到坐骨下结节，以 5 mm 的切片厚度描绘临床目标体积(CTV)，包括原发性肿瘤病变和颈旁组织。根据血管方向确定盆腔淋巴引流区。CTV 向外扩张 0 5 cm 以获得计划目标体积(PTV)，PTV 由 100%等剂量曲线包裹。然后，使用 6 mV-X 直线加速器(山东新华医疗设备有限公司，型号:XHAl400)进行 25 28 次等中心照射(外部照射:45 50 Gy，每次 1 8 2.0 Gy)。同时进行顺铂(30 40 mg m2)单药化疗。1 5随访放疗完成 1 个月后根据实体瘤疗效评价标准13 评估患者的治疗反应。完全缓解和部分缓解的患者纳入敏感组;疾病进展或疾病稳定的患者纳入抵抗组。主要终点为放疗反应，次要终点为无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)、局部无进展生存期(PPFS)和远处无转移生存期(DMFS)。OS 定义为从开始放疗到死亡或随访截止的时间。PFS 定义为从开始放疗到骨盆进展、远处转移或因 CSCC 死亡的间隔时间。DMFS定义为从开始放疗到远处转移、死亡或随访截止的时间。PPFS 定义为从开始放疗到局部区域进展、死亡或随访截止的时间。局部进展、淋巴结转移和远处转移的诊断基于体格检查、血液化学特征、胸片、CT、MI、18F 氟脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描/CT 和活检。1 6统计学处理使用 SPSS 26 0 统计软件处理数据。二分类变量以率(频率)表示，行卡方检验。偏态分布数据以中位数(四分位值 IQ)表示，行 Mann-Whitney U 检验。采用二元 Logistic 回归模型和受试者工作特征(OC)曲线分析血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平对放射抗性的预测价值。使用单因素和多因素 Cox 风险比例回归模型分析血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平与生存预后的关系。Kaplan-Meier 法绘制生存曲线并进行 Log-rank 检验。所有检验均为双侧检验，P 0 05为差异有统计学意义。2结果2 1治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化与患者临床病理特征的关系大多数患者(82 64%)每周接受顺铂治疗，总剂量为 40 350 mgm2，持续 3 7 个疗程。经 Q-MSP法检测，局部晚期 CSCC 患者治疗前血清 cfDNA ATM启动子甲基化水平为 66 15%(51 28%，76 28%)。根据中位值，将 CSCC 患者分为低甲基化水平组(66 15%)和高甲基化水平组(66 15%)。CSCC 患者血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平与患者年龄、体质量指数、肿瘤直径、PS 评分、FIGO 分期、盆腔淋巴结肿大、有无化疗、血红蛋白、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、载脂蛋白 C-(ApoC-)水平、全程放疗时间均无关(P 0 05，表 1)。2 2血清 cfDNA ATM 启动子甲基化与放射抗性的关系抵抗组(n=80)患者治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平显著低于敏感组(n=64)52 80%(40.55%，69 85%)vs 74 70%(68 40%，85 55%)，Z=5 569，P 0 001。血清 cfDNA ATM 启动子甲基化预测局部晚期 CSCC 患者放射抗性的 OC 曲线下面积为 0 798(95%CI:0 723 0 873)，对应截断值为 65 05%，特异度为 61 2%，敏感度 85 4%，见图 1。23单因素和多因素 Logistic 回归分析血清 cfDNAATM 启动子甲基化与放射抗性的关系单因素 Logisitc 回归分析后，将 P 0 05 的变量进一步纳入多因素模型，结果显示血清 cfDNA ATM 启动子低甲基化是局部晚期 CSCC 患者放射抗性的独立预测因子(P 0 05)，见表 2。2 4血清 cfDNA ATM 启动子甲基化与生存预后的关系在单变量 Cox 模型中，肿瘤直径、PS 评分、FIGO分期、盆腔淋巴结肿大、SCC-Ag 以及血清 cfDNA ATM启动子甲基化是局部晚期 CSCC 患者 PFS、OS、DMFS的独立影响因素(P 0 05);此外，全程放疗时间亦是影响患者 PFS 和 PPFS 的独立因子(P 0 05)。见表3。校正表 3 中 P 0 05 的混杂因子后，多变量 Cox 比例风险分析表明，血清 cfDNA ATM 启动子甲基化是局部晚期 CSCC 患者的独立有利预后因素(P 0 001，表 4)。811东南大学学报(医学版)2023 年 2 月，42(1)表 1治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化与 CSCC 患者临床病理特征的关系例Tab 1The relationship between the replacement of the cfDNA in the ATM and the clinical features of CSCCpatients before the treatmentcases临床特征n治疗前血清 cfDNA ATM 甲基化高水平(n=72)低水平(n=72)Z 或 2值P 值年龄60 岁7540(55 6)35(48 6)60 岁6932(44 4)37(51 4)0 6960 404体质量指数23 9 kgm210352(72 2)51(70 8)23 9 kgm24120(27 8)21(29 2)0 0340 854肿瘤直径50 mm7943(59 7)36(50 0)50 mm6529(40 3)36(50 0)1 3740 241PS 评分0 分11456(77 8)58(80 6)1 分2816(22 2)12(16 6)2 6070 2722 分202(2 8)FIGO 分期b1178(11 1)9(12 5)b2188(11 1)10(13 8)a64(5 5)2(2 7)b4932(44 4)17(23 6)9 2540 160a62(2 7)4(5 5)b4216(22 2)26(36 1)a62(2 7)4(5 5)盆腔淋巴结肿大否8945(62 5)44(61 1)是5527(37 5)28(38 9)0 0290 864化疗无2515(20 8)10(13 9)有11957(79 2)62(86 1)1 2100 271血红蛋白12 ngml16935(50 7)34(47 2)12 ngml17537(49 3)38(52 7)0 0280 868治疗前 SCC-Ag2 5 ngml13617(47 2)19(52 7)2 5 ngml110855(50 9)53(49 0)0 1480 700治疗前 ApoC-16 gml18740(45 9)47(54 0)16 gml15732(56 1)25(43 8)1 4230 233全程放疗时间47 d7232(48 4)40(51 2)47 d7234(51 5)38(48 7)0 1120 738注:括号内为百分比2 5Kaplan-Meier 生存曲线分析随访患者 36 个月，中位随访时间为 18 5 个月。经 Kaplan-Meier 生存曲线分析，局部晚期 CSCC 患者治疗前血清 cfDNA ATM 启动子高甲基化与更长的PFS(Log-rank 2=21 135，P 0 001，图 2A)、OS(Log-rank 2=6 394，P=0 011，图 2B)、PPFS(Log-rank2=7 218，P=0 007，图 2C)和 DMFS(Log-rank 2=13 804，P 0 001，图 2D)有关(表 5)。911章伟玲，等 血清游离 DNA ATM 启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌患者放射抗性的预测价值图1血清 cfDNA ATM 启动子甲基化预测 CSCC 放射抗性的OC 曲线Fig 1OC curve on the prediction of serum cfDNA ATMpromoter methylation for the radiation resistance in CSCC3讨论DNA 甲基化是众所周知的表观遗传变化之一，通过多种机制对基因表达产生沉默作用1，3。肿瘤抑制基因的甲基化有助于识别可作为癌症诊断和预后敏感和特异标志物的生物标志物。ATM 是一种 DNA 损伤修复基因，调节 DNA 损伤反应以及细胞存活、增殖、代谢和分化14。在本研究中，治疗前血清 cfDNA ATM启动子甲基化与患者 OS、PFS、PPFS、DMFS 均相关。尽管之前的研究描述了 ATM 表达与癌症(包括乳腺癌、胶质瘤、肝细胞癌、结直肠癌)发生或进展风险之间的相关性 8-10，但本研究重在评估血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平对接受放疗 CSCC 患者的预后价值。最近，越来越多的证据支持表观遗传修饰，特别是DNA 甲基化失调在恶性肿瘤的放射抗性机制中的重要性7-8。启动子区域 CpG 岛 DNA 甲基化在某些基因(尤其是肿瘤抑制基因)的转录沉默中起主要作用 8。表 2单因素和多因素 Logistic 回归分析血清 cfDNA ATM 启动子甲基化与放射抗性的关系Tab 2elation between serum cfDNA ATM promoter methylation and the radiation resistance by univariate ormultivariate Logistic regression analysis指标单因素分析多因素分析H95%CIP 值H95%CIP 值年龄1 0080 982 1 0340 544体质量指数0 9100 823 1 0070 067肿瘤直径1 0561 027 1 0860 0011 0451 007 1 0840 018PS 评分2 5011 161 5 3870 0192 3250 639 8 4670 201FIGO 分期2 9861 406 6 2630 0040 8270 270 2 5300 739盆腔淋巴结肿大2 2271 064 4 6640 0342 0850 750 5 7910 159Hb0 8970 738 1 0900 273SCC-Ag1 0321 014 1 0500 0011 0230 998 1 0500 073ApoC-1 0080 990 1 0270 382化疗0 8150 321 2 0690 668全程放疗时间1 0350 990 1 0810 129血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平0 4860 051 0 7230 0010 5040 059 0 7490 001ATM 启动子甲基化已经在许多肿瘤类型中被报道9-11，15，并证实与肝细胞癌放射敏感性相关16。目前已经开发了多种基于基因座的方法来确定亚硫酸氢盐处理 DNA 的甲基化状态，如 MSP、Q-MSP12，17。MSP 是一种基于亚硫酸氢盐反应的简单、快速、低成本的基因甲基化检测方法，但只能用于定性分析。Q-MSP021东南大学学报(医学版)2023 年 2 月，42(1)表 3单因素 Cox 回归分析血清 cfDNA ATM 启动子甲基化与生存预后的关系Tab 3elation between serum cfDNA ATM promoter methylation and survival prognosis by univariate Coxregression analysis指标PFSOSPPFSDMFSH95%CIP 值H95%CIP 值H95%CIP 值H95%CIP 值年龄1 0070 985 1 0290 5411 0140 981 1 0480 3981 0000 971 1 0310 9751 0070 982 1 0330 573体质量指数0 9190 841 1 0030 0590 9520 843 1 0760 4300 9620 859 1 0790 5110 9100 822 1 0080 071肿瘤直径1 0501 030 1 0700 0011 0821 050 1 1140 0011 0501 024 1 0760 0011 0411 018 1 0650 001PS 评分12 0121 157 3 4980 0132 5191 032 6 1510 0421 1500 457 2 8920 7662 3031 213 4 3710 011FIGO 分期期2 4741 333 4 5910 0043 1661 224 8 1920 0171 5760 669 3 7120 2982 6521 285 5 4740 008盆腔淋巴结肿大1 8581 006 3 4290 0482 6491 027 6 8350 0441 5340 651 3 6130 3272 3601 146 4 8610 020血红蛋白0 9040 766 1 0660 2300 8120 643 1 0270 0820 8920 710 1 1210 3280 9320 766 1 1330 479SCC-Ag1 0171 009 1 0250 0011 0161 004 1 0280 0070 9990 982 1 0170 9241 0231 015 1 0320 001ApoC-1 0090 994 1 0230 2381 0110 990 1 0330 2971 0160 999 1 0330 0680 9970 975 1 0190 790化疗0 8710 402 1 8850 7260 6070 216 1 7050 3430 6620 243 1 8080 4210 7140 306 1 6650 436全 程 放 疗时间1 0451 008 1 0840 0161 0360 994 1 0800 0931 0661 022 1 1120 0031 0390 993 1 0870 101血清 cfDNAATM 启动子甲基化0 4490 031 1 7660 0010 2420 016 0 8690 0010 4400 015 0 8640 0010 4400 020 0 8600 001是从 MSP 开发而来的，除了具备 MSP 定性信息外，还可以量化给定靶基因的实时甲基化状态，通常用于定量甲基化分析12。与标准 PC 相比，该方法具有更高的特异性和灵敏度，因为它提供了 10 000 倍丰度的未甲基化等位基因的甲基化分析，因此其是 cfDNA 甲基化常规分析的一种合适和有效的方法17。本研究中，我们应用 Q-MSP 法对血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平进行了定量分析，结果发现治疗前血清 cfD-NA ATM 启动子甲基化水平与局部晚期 CSCC 患者放射抗性和生存预后相关。电离辐射诱导的 DNA 损伤可导致复杂的细胞反应，包括 DNA 损伤修复、细胞周期调节和细胞凋亡18。DNA 损伤修复能力是影响癌细胞放射敏感性的主要因素之一19。ATM 蛋白激酶是参与细胞对DNA 双链断裂反应的中心激酶之一，其表达越低，个体对放射治疗越敏感9，14。据报道，ATM 激酶在介导细胞周期阻滞和 DNA 损伤修复中起着核心作用以确保基因组稳定性和维持细胞活力10。而本研究中，ATM121章伟玲，等 血清游离 DNA ATM 启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌患者放射抗性的预测价值表 4多因素 Cox 回归分析血清 cfDNA ATM 启动子甲基化与生存预后的关系Tab 4elation between serum cfDNA ATM promoter methylation and survival prognosis by multivariate Coxregression analysis指标PFSOSPPFSDMFSH95%CIP 值H95%CIP 值H95%CIP 值H95%CIP 值肿瘤直径1 0461 021 1 0720 0011 0811 043 1 1210 0011 0481 021 1 0750 0011 0200 990 1 0500 191PS 评分11 4130 760 2 6290 2751 9050 734 4 9400 1851 2020 603 2 3940 601FIGO 分期期0 8220 387 1 7470 6100 8130 284 2 3240 6991 2050 518 2 8000 665盆腔淋巴结肿大1 0690 532 2 1490 8521 3490 493 3 6910 5601 5810 707 3 5330 264SCSCC-Ag1 0050 996 1 0150 2641 0030 989 1 0180 6511 0151 004 1 0250 005全程放疗时间1 0290 992 1 0670 1311 0571 012 1 1030 0111 0230 980 1 0680 301血清 cfDNAATM 启动子甲基化0 4470 029 0 8650 0010 5380 014 0 9630 0020 5340 011 0 9580 0040 3350 015 0 9550 001表 5血清 cfDNA ATM 启动子甲基化与生存预后的关系Tab 5elation between serum cfDNA ATM promoter methylation and survival prognosis分组nPFSOSPPFSDMFS累积率/%中位时间/d累积率/%中位时间/d累积率/%中位时间/d累积率/%中位时间/d高水平组7288 9(64/72)86094 4(68/72)86493 1(67/72)86091 7(66/72)835低水平组7254 2(39/72)83580 6(58/72)86077 8(58/72)84466 7(48/72)740启动子甲基化与更高的辐射敏感性相关，这可能是表观遗传沉默的结果。ATM 启动子甲基化可能靶向ATM 基因组的特殊区域，并受到甲基 CpG 结合蛋白的调节，这有助于抑制转录活性10。经 OC 曲线分析，ATM 启动子甲基化水平对局部晚期 CSCC 患者放射抗性的预测价值较高。考虑到几个因素(如年龄、TNM分期、放疗时间、联合化疗和 ATM 启动子甲基化)对生存预后的影响9，11，19，采用多变量 Cox 比例风险分析来调整这些因素，结果证实，ATM 启动子甲基化对最初接受放疗的局部晚期 CSCC 患者是一个独立的有利预后因素，但这需要通过多中心临床试验来证实。总之，本研究证实治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化状态可能是预测局部晚期 CSCC 患者放疗后预后的有用生物标志物。然而，由于研究的局限性，本研究的发现可能不能推广到其他人群。为了进一步验证这些发现，可能需要对更大的 CC 患者队列进行研究，将其他人群与长期生存结果评估相结合。治疗前血清生物标志物检测为临床医生和患者提供了方便、无创的样本采集方法，并促进了个性化治疗，以确定治疗局部晚期 CC 的最佳治疗方案和临床策略改进。221东南大学学报(医学版)2023 年 2 月，42(1)图 2Kaplan-Meier 生存曲线Fig 2Kaplan-Meier survival curve 参考文献 1潘思琼，陆奉科，张雪梅，等 子宫颈细胞蜡块 p16/Ki-67 双染在子宫颈癌早期筛查中的应用J 临床与实验病理学杂志，2021，37(1):106-107 2黄巧红，秦锦龙，吕冰峰 术前淋巴细胞和嗜酸粒细胞水平对早期宫颈鳞状细胞癌患者预后的预测价值J 现代医学，2020，48(11):1404-1408 3秦小航，王聪，尹勇 宫颈癌同步放化疗中骨髓保护研究进展 J 中华肿瘤防治杂志，2022，29(5):307-315 4WANG W，ZHANG F，HU K，et al Image-guided，intensity-modulated radiation therapy in definitive radiotherapy for 1433patients with cervical cancer J Gynecol Oncol，2018，151(3):444-448 5HAIMA Y，AIGA T，KANEYASU Y，et al Clinical value ofserum biomarkers，squamous cell carcinoma antigen and apoli-poprotein C-II in follow-up of patients with locally advancedcervical squamous 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