子宫内膜癌微卫星不稳定性分析：微小微卫星变换的意义_梁丽.pdf

论著子宫内膜癌微卫星不稳定性分析:微小微卫星变换的意义梁丽*，李鑫*，农琳，董颖，张继新，李东，李挺(北京大学第一医院病理科，北京100034)摘要目的:对比结直肠癌(colorectal cancer，CC)，评估子宫内膜癌(endometrial cancer，EMC)微卫星不稳定性(microsatellite instability，MSI)改变的特点。方法:收集 228 例 EMC 和 770 例 CC 进行对比分析。采用免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)方法检测错配修复缺陷(deficient mismatch repair，dMM)蛋白表达缺失，采用PC 及毛细管电泳片段分析法检测 MSI(MSI-PC)，MSI-PC 采用 5 个单核苷酸位点(BAT-25、BAT-26、N-21、N-24 和 MONO-27)。结果:EMC 中，27 19%(62/228 例)为 dMM，显著高于 CC(7 79%，60/770 例)，且 4 例dMM-EMC 和 2 例 dMM-CC 呈错配修复(mismatch repair，MM)蛋白亚克隆表达。MSI-PC 检测依据显著微卫星变换判读标准，EMC 的结果显示:16 23%(37/228 例)为高度 MSI，2 63%(6/228 例)为低度 MSI，8114%(185/228 例)为微卫星稳定型，MM-IHC 与 MSI-PC 两种评估方法的不一致率为 11 84%(27/228 例);CC 的结果显示:8 05%(62/770 例)为高度 MSI，0 13%(1/770 例)为低度 MSI，91 82%(707/770 例)为微卫星稳定型，两种评估方法的不一致率仅为 0 52%(4/770 例)。而依据微小微卫星变换结果判读，12 例 EMC 发现微小微卫星变换(8 例 dMM/微卫星稳定型和 4 例 dMM/低度 MSI)，被评估为 dMM/高度 MSI，因此，高度 MSI 型 EMC 为21 49%(49/228 例)，两种方法的不一致率降至 6 58%(15/228 例)。CC 中未见微小微卫星变换。与显著微卫星变换 EMC 组相比，微小微卫星变换 EMC 组的患者年龄偏小，肿瘤分化更好，国际妇产科联盟(International Fede-ration of Gyne-cology and Obstetrics，FIGO)分期更早。两组间组织学类型及 FIGO 分期的差异有统计学意义(P 0 001，P=0 006)。结论:EMC 易发生微小微卫星变换，MSI-PC 检测结果的判读不应忽视微小微卫星变换，MM-IHC 和 MSI-PC 互补联合检测是捕获 dMM 肿瘤最敏感和特异的方法。关键词子宫内膜癌;微卫星不稳定性;生物标志物，肿瘤;结直肠肿瘤 中图分类号737 33 文献标志码A 文章编号1671-167X(2023)02-0254-08doi:10 19723/j issn 1671-167X 2023 02 008Analysis of microsatellite instability in endometrial cancer:The significance of mini-mal microsatellite shiftLIANG Li*，LI Xin*，NONG Lin，DONG Ying，ZHANG Ji-xin，LI Dong，LI Ting(Department of Pathology，Peking University First Hospital，Beijing 100034，China)Corresponding author s e-mail，lixiaoting12 hotmail com*These authors contributed equally to this work网络出版时间:2023-2-1315:14:58网络出版地址:http:/kns cnki net/kcms/detail/114691 202302131358 012 htmlABSTACTObjective:To analyze the differences and characteristics of microsatellite instability(MSI)in endometrial cancer(EMC)，by using colorectal cancer(CC)as control Methods:In the study，228 cases of EMC were collected For comparative analysis，770 cases of CC were collected Mismatchrepair(MM)expression was detected by immunohistochemistry(IHC)，and microsatellite instability(MSI)was analyzed by PC and capillary electrophoresis fragment analysis(MSI-PC)MSI-PC wasdetected using five mononucleotide repeat markers:BAT-25，BAT-26，N-21，N-24，and MONO-27esults:In EMC，we found 27 19%(62/228)of deficient mismatch repair(dMM)using IHC，sig-nificantly higher than CC(7 79%，60/770)Meanwhile，subclonal expression of MM protein wasfound in 4 cases of dMM-EMC and 2 cases of dMM-CC According to the criteria of major micro-satellite shift，we found 16 23%(37/228)of MSI-high(MSI-H)，2 63%(6/228)of MSI-low(MSI-L)，and 81 14%(185/228)of microsatellite stability(MSS)in EMC using MSI-PC The discor-dance rate between MM-IHC and MSI-PC in EMC was 1184%(27/228)In CC，we found 8 05%(62/770)of MSI-H，0 13%(1/770)of MSI-L，and 91 82%(707/770)of MSS The discordancerate between MM-IHC and MSI-PC in CC was only 0 52%(4/770)However，according to thecriteria of minimal microsatellite shift，12 cases of EMC showed minimal microsatellite shift including 8cases of dMM/MSS and 4 cases of dMM/MSI-L and these cases were ultimately evaluated as dMM/452北京大学学报(医学版)JOUNAL OF PEKING UNIVESITY(HEALTH SCIENCES)Vol55No 2Apr 2023MSI-H Then，21 49%(49/228)of EMC showed MSI-H and the discordance rate MM-IHC and MSI-PC in EMC decreased to 6 58%(15/228)No minimal microsatellite shift was found in CC Com-pared with EMC group with major microsatellite shift，cases with minimal microsatellite shift showedyounger age，better tumor differentiation，and earlier International Federation of Gynecology and Obstet-rics(FIGO)stage There were significant differences in histological variant and FIGO stage between thetwo groups(P 0 001，P=0 006)Conclusion:EMC was more prone to minimal microsatellite shift，which should not be ignored in the interpretation of MSI-PC results The combined detection of MM-IHC and MSI-PC is the most sensitive and specific method to capture MSI tumorsKEY WODSEndometrial cancer;Microsatellite instability;Biomarkers，tumor;Colorectal neoplasms微卫星是遍布人类基因组的短串联重复序列，由单、双或更多核苷酸重复序列组成。由于 DNA 复制过程中重复单元的插入或删除，以及错配修复(mismatch repair，MM)系统缺陷(deficient MM，dMM)可引起微卫星等位基因长度改变，这种分子表型称为微卫星不稳定性(microsatellite instability，MSI)。MSI 肿瘤其基因组不稳定性增加并出现高频突变。dMM 涉及相关基因胚系突变(Lynch 综合征)或体系突变(MLH1、MSH2、MSH6 和 PMS2 突变频率最高)或启动子甲基化(MLH1 最常见)等遗传或表遗传学机制1 3。具有 dMM/MSI 分子特征的肿瘤因高频基因突变致肿瘤抗原负荷增高，诱导杀伤 T 淋巴细胞浸润及相应免疫抑制分子高表达，而对相应免疫治疗反应良好4。多种实体肿瘤可发生 MSI，其中子宫内膜癌(endometrioid cancer，EMC)最常见(约占 30%)，这种 MSI 型 EMC 是目前认识到的4 种分子类型之一，预后相对较好5，因此 dMM/MSI 检测对 EMC 分子分型、Lynch 综合征筛查及免疫治疗预测至关重要，目前美国病理学家协会(College of American Pathologists，CAP)的指南建议对所有 EMC 均应进行 dMM/MSI 检测6 7。目前广泛采用的 MSI 特异和敏感分析技术包括免 疫 组 织 化 学(immunohistochemistry，IHC)和PC 方法，IHC 通过识别 MM 基因缺陷检测 dM-M，PC 则直接检测 MSI 情况8 9。两种方法有很好相关性，但实践中仍有不一致的情况10，尤其在EMC。此外，最近有研究发现 MSI-PC 检测核苷酸移位数目大小不一，可出现微小(1 2 个)或显著(3个以上)核苷酸变换8，11 12。本研究通过将 EMC与结直肠癌(colorectal cancer，CC)相比较，探讨分析 IHC 和 PC 检测不一致的情况及原因，以及EMC 中微卫星移位的特点。1资料与方法1 1病例收集回顾性收集北京大学第一医院 20192022 年连续性病理存档的228 例 EMC 和770 例 CC 标本及患者相关资料。所有病例均行 MM-IHC 及 MSI-PC检测，由两名专业病理医生双盲独立复查阅片。1 2IHC 染色采用 4 m 厚石蜡切片、PV-8000 免疫组织化学试剂 盒(ZSGB-BIO，北 京)、Dako 自 动 染 色 仪。MM 蛋白一抗为:MLH1(OT14H4，1 100)、PMS2(A16-4，工作液)、MSH2(ED2，1 100)、MSH6(EP49，1 150)。染色结果判读13:肿瘤细胞核任何程度及比例着色为阳性表达，即完整表达;间质、非肿瘤上皮或炎细胞等内对照细胞核阳性，而肿瘤细胞核无表达为阴性，即表达缺失。一种或多种蛋白阴性为 dMM，反之为完整表达 MM(proficientMM，pMM)，亚克隆表达指部分区域表达丢失、部分表达完整的异质性情况。1 3DNA 提取选择肿瘤组织丰富区域(比例 30%)的 10 张5 m 切片，DNA 提取(QIAGEN，Germany)依照试剂盒说明书进行，检测 DNA 浓度及质量(Nanotrop2000)，采用正常组织或外周血为对照。1 4MSI-PC 检测采用 MSI 检测试剂盒(MSI Analysis System，version 1 2，Promega，USA)、荧光多重 PC 及毛细管 电 泳(ArktikThermalCycler，ThermoFisher3500Dx)。荧光标记引物同时扩增 7 个标志物:单核苷酸重复标志物(BAT-25、BAT-26、N-21、N-24和 MONO-27)测定 MSI，五核苷酸重复标志物(PentaC 和 Penta D)鉴定样品唯一性(待测样品和对应正常样品来自同一个体)。数据分析软件采用 Gene-Mapper 5 0(Applied Biosystem，Germany)。结果判定:依照试剂盒定义，每个位点出现3个核苷酸或碱基变化(即显著微卫星变换)时为该位点发生改变;与对照组相比，5 个位点均未改变为微卫星稳定(microsatellite stability，MSS)，仅 1 个改变为低度 MSI(MSI-low，MSI-L)，2 个为高度 MSI(MSI-high，MSI-H);微小微卫星变换指每个位点出现 1 2 个核苷酸或碱基变化。1 5统计学分析552梁丽，等子宫内膜癌微卫星不稳定性分析:微小微卫星变换的意义采用 SPSS 25 0 统计软件，两组间组织学类型及国际妇产科联盟(International Federation of Gyne-cology and Obstetrics，FIGO)分期的比较采用卡方检验，P 0 05 为差异有统计学意义。2结果2 1临床病理学特征228 例 EMC 均为根治标本，患者中位年龄 56岁(27 89 岁)，见表 1。型癌 199 例(高、中、低分化子宫内膜样癌分别为 67、96 及 35 例，胃型黏液腺癌 1 例)，型癌 17 例(浆液性癌 7 例，透明细胞癌 8 例，浆液性癌/透明细胞癌2 例)，混合性癌5 例(型/型)，去分化癌 1 例，未分化癌 3 例，癌肉瘤 3 例。FIGO 分期:A 期 148 例，B 期 49 例，期 24 例，A 期 1 例，B 期 1 例，C1 期 2 例，C2 期 2 例，期 1 例。表 1EMC 与 CC 的 MM-IHC 与 MSI-PC 检测结果一致性比较Table 1Comparison of consistency of MM-IHC and MSI-PC results between EMC and CCItemsEMC(n=228)CC(n=770)Age/years，range(media)27 89(56)24 94(63)GenderMale0508(6597%)Female228(10000%)262(3403%)MM-IHC62(2719%)60(779%)MLH1()1(044%)0PMS2()3(132%)3(039%)MSH2()4(175%)2(026%)MSH6()9(395%)5(065%)MLH1/PMS2()40(1754%)41(532%)MSH2/MSH6()5(219%)9(117%)MSI-PC(major microsatellite shift)MSI-H37(1623%)62(805%)MSI-L6(968%)1(013%)MSS185(81 14%)707(9182%)MSI-PC(minimal microsatellite shift)MSI-H49(2149%)MSI-L2(088%)MSS177(77 63%)Discordance(major microsatellite shift)27(1184%)4(052%)Discordance(minimal microsatellite shift)15(658%)4(052%)EMC，endometrial cancer;CC，colorectal cancer;MM，mismatch repair;IHC，immunohistochemistry;MSI，microsatellite instability;MSI-H，MSI-high;MSI-L，MSI-low;MSS，microsatellite stability770 例 CC 中男性508 例，女性262 例，中位年龄 63 岁(24 94 岁)，见表 1。根治标本 699 例，活检标本 71 例。位于直肠 308 例，左半结肠 215 例，右半结肠 247 例。非黏液腺癌 760 例(高、中、低分化腺癌分别为 125、566 和 65 例，低黏附性癌 4 例)，黏液腺癌 10 例。2 2MM-IHC 分析如表 1 和 图 1 所 示，228 例 EMC 中 62 例(27 19%)dMM，166 例(72 81%)pMM;770 例CC 中 60 例(7 79%)dMM，710 例(92 20%)pMM。dMM 中 MLH1/PMS2 同时表达缺失在两种肿瘤中都最常见(CC 中 41/60 例，68 33%;EMC 中 40/62 例，64 52%);其次为 MSH6(CC 中5/60 例，0 65%;EMC 中 9/62 例，14 52%)、MSH2/MSH6(CC 中 9/60 例，1 17%;EMC 中 5/62 例，2 19%);MLH1 表达缺失最少见(CC 中0 例，EMC中 1 例)。此外，dMM 型 EMC 中有 4 例呈亚克隆表达(2652北京大学学报(医学版)JOUNAL OF PEKING UNIVESITY(HEALTH SCIENCES)Vol55No 2Apr 2023例 MLH1/PMS2 和 2 例 MSH6)，即大部区域表达缺失而局部阳性，阴性与阳性区域截然区分(图 2)。60 例 dMM 型 CC 中有 2 例呈亚克隆表达，为MLH1/PMS2 型和 MSH2/MSH6 型各 1 例。上述结果显示，EMC 比 CC 的 dMM 检出率略高，其他特征相似。Both cases showed the loss expression of MLH1/PMS2 and the intact ex-pression of MSH2/MSH6;Internal positive control was detected(HE 200，IHC 200)EMC，endometrial cancer;CC，colorectal cancer;dMM，deficient mismatch repair;HE，hematoxylin-eosin;IHC，immu-nohistochemistry图 1dMM 型子宫内膜癌及结直肠癌病例Figure 1Two cases of dMM-EMC and dMM-CC2 3MSI-PC 检测依据显著微卫星变换标准，228 例 EMC 中 37例(16 23%)为 MSI-H，185 例(81 14%)为 MSS，6例(2 63%)为 MSI-L;770 例 CC 中62 例(8 05%)为 MSI-H，707 例(91 82%)为 MSS，仅 1 例(0 13%)为 MSI-L，见表 1。若依据微小微卫星变换标准，EMC 中另有 12例(12/228 例，5 26%)单核苷酸位点出现微小微卫星变换，并呈多位点情况。据此调整为 MSI-H 49 例(21 49%)，MSS 177 例(77 63%)，MSI-L 2 例(0 88%)，见表 1。如图 3 所示，与对照组相比，EMC 组中位点BAT-25、BAT-26、N-21 可见 2 个核苷酸或碱基移位(微 小 微 卫 星 变 换)，另 两 个 位 点 N-24 和MONO-27 无差异。The positive expression of MLH1 and PMS2 were detected in some tumorcells，while no positive expression was found in the other region in onecase of EMC Similarly，the subclone expression of MSH6 was found inone case of CC Internal positive control was detected(IHC 200)Abbreviations as in Figure 1图 2MM-IHC 的亚克隆表达Figure 2Subclone expression of MM-IHC如图 4 所示，BAT-25 位点发生微小微卫星变换的频率最高(83 33%)，其次是 N-21(75 00%)和BAT-26(58 33%)，N-24 的频率最低(8 33%)。CC 组未见微小微卫星变换。上述结果显示，EMC 中有 1886%发生了显著微卫星变换，526%发生了微小微卫星变换;CC 中有818%发生了显著微卫星变换，无微小微卫星变换。2 4MM-IHC 与 MSI-PC 检测的一致性分析依据 显 著 微 卫 星 变 换 标 准，EMC 的 62 例dMM 中有 36 例 MSI-H、6 例 MSI-L、20 例 MSS，而166 例 pMM 中仅 1 例 MSI-H，其余 165 例均为MSS(图 5)，即 27 例 MM-IHC 与 MSI-PC 的检测结果不一致(11 84%)，包括 6 例 dMM/MSI-L、20例 dMM/MSS、1 例 pMM/MSI-H。两种方法的一致率为88 16%，检测敏感性 MM-IHC 为98 41%，MSI-PC 为 58 73%。依据微小微卫星变换标准，EMC 的 12 例微小微卫星变换者均为 dMM(8 例 dMM/MSS、4 例dMM/MSI-L)，评估为 dMM/MSI-H(图5)。15 例752梁丽，等子宫内膜癌微卫星不稳定性分析:微小微卫星变换的意义MM-IHC 与 MSI-PC 的检测结果不一致，包括 12例 dMM/MSS、2 例 dMM/MSI-L、1 例 pMM/MSI-H，不一致率降至 6 58%(15/228 例)，MSI-PC 检测敏感性升至 77 78%。A，a representative result of MSI-PC from dMM-EMC with the discordance between MM-IHC and MSI-PC Compared with its paired normal con-trol，tumor group showed minimal microsatellite shift(+2 bp)in the mononucleotide site BAT-26，BAT-25 and N-21(red arrow)B，a representa-tive result of MSI-PC from dMM-EMC with the consistency between MM-IHC and MSI-PC Compared with its paired normal control，tumor groupshowed major microsatellite shift(+3 5 bp)in the mononucleotide site BAT-25 and MONO-27 C，a representative result of MSI-PC from dMM/MSI-H CC Compared with its paired normal control，tumor group showed major microsatellite shift(+5 8 bp，major peak)in the mononucleotidesite BAT-25 and MONO-27 The title of the ordinate axis is relative fluorescence units The title of the abscissa axis is fragment size(bp)EMC，endo-metrial cancer;CC，colorectal cancer;dMM，deficient mismatch repair;MM，mismatch repair;IHC，immunohistochemistry;MSI，microsatelliteinstability;MSI-H，MSI-high图 3MSI-PC 检测结果Figure 3epresentative results of MSI-PCCC 组 60 例 dMM 中有 59 例 MSI-H、1 例MSI-L，710 例 pMM 中有 707 例 MSS、3 例 MSI-H，仅 4 例 MM-IHC 与 MSI-PC 结 果 不 一 致(0 52%)，包括 1 例 dMM/MSI-L、3 例 pMM/MSI-H。MM-IHC与MSI-PC的 一 致 率 为99 48%，MM-IHC 检测敏感性 为 9524%，MSI-PC 检测敏感性为 98 41%。上述结果显示，EMC 的 MSI-PC 若依据微小微852北京大学学报(医学版)JOUNAL OF PEKING UNIVESITY(HEALTH SCIENCES)Vol55No 2Apr 2023卫星变换评估可以提高 PC 的检测敏感性及其与IHC 的一致率。2 5EMC 微小微卫星变换的临床意义如表 2 所示，与显著微卫星变换相比，微小微卫星变换 EMC 病例组的中位年龄更小(55 岁 vs 57岁)。高/中 分 化 子 宫 内 膜 样 癌 多 见(41 67%/33 33%)，未见型癌。FIGO 分期早，91 67%(11/12 例)为A 期，仅 1 例为B 期。统计学分析显示，两组间组织学类型及 FIGO 分期差异有统计学意义(P 0 001，P=0 006，表 3)。另外，dMM/微小微卫星变换 EMC 组中，表达丢失 9 例(75 00%)为 MLH1/PMS2，2 例为 MSH6，1 例为 PMS2，即微小微卫星变换的 MSI-H 型 EMC 中 MLH1 和 PMS2 蛋白联合丢失最常见，其次是 MSH6。图 4微小微卫星变换在 5 个单核苷酸位点(BAT-26、N-21、BAT-25、MONO-27、N-24)的发生频率Figure 4Frequency of minimal microsatellite shiftin five mononucleotide sites(BAT-26，N-21，BAT-25，MONO-27，and N-24)EMC，endometrial cancer;dMM，deficient mismatch repair;pMM，proficient mismatch repair;IHC，immunohistochemistry;MSI，microsatellite in-stability;MSI-H，MSI-high;MSI-L，MSI-low;MSS，microsatellite stability图 5228 例子宫内膜癌 MM-IHC 及 MSI-PC 检测结果分布图Figure 5Profile of MM-IHC and MSI-PC results from 228 cases of endometrial cancer3讨论目前多数 MSI-PC 检测试剂盒的评估标准为，与正常组相比，肿瘤组微卫星位点差异为3 个核苷酸移位和/或出现新的移位主峰(即显著微卫星变换)，但是，最近发现也可出现 1 2 个核苷酸或碱基移位的微小微卫星变换8，11 12。本研究 EMC 组中，dMM 型占 27 19%，依据显著微卫星变换标准，MSI-H 型占 16 23%，显著高于 CC 组(dMM 占 7 79%，MSI-H 占 8 05%);MM-IHC 和 MSI-PC 检 测 结 果 的 不 一 致 率 达11 84%，显著高于 CC 组(0 52%)，其中大部分为dMM/MSS 及 dMM/MSI-L。12 例 EMC 出现微小微卫星变换，且均为两种检测方法不一致组，将这12 例调整为 dMM/MSI-H 后，MM-IHC 与 MSI-PC 检测的不一致率降至 658%。最初评估 MM-IHC 和 MSI-PC 检测一致的 EMC 和所有 CC 中均未见微小微卫星变换。以往研究报道，应用标准 MSI-PC 及二代测序两种方法检测 dMM 时，EMC 及前列腺癌等非胃肠952梁丽，等子宫内膜癌微卫星不稳定性分析:微小微卫星变换的意义道肿瘤的敏感性较低，两种方法的不一致率为5 90%18 18%，而 CC 的不一致率仅为0 4%1 6%14 15。有研究发现 21%的 MM-IHC 缺陷型EMC 为 MSI-PC MSS16，但也有研究得出不同结果17。Wang 等12 比较了 EMC 和 CC 的 MSI 检测发现，53%的 MSI-H 型 EMC 平均出现 1 2 个小核苷酸变换，而约 80%的 MSI-H 型 CC 平均出现 6个核苷酸变换。因此，EMC 的 MSI 中更易发生微小微卫星变换，在判读 MSI-PC 结果时，微小微卫星变换引起的细微变化容易被忽视，导致假阴性结果。微小微卫星变换是 MM-IHC 和 MSI-PC 在 EMC中检测不一致率高的主要原因。表 2子宫内膜癌 dMM/微小微卫星变换组与dMM/显著微卫星变换组的比较Table 2Comparison between dMM/minimal microsatellite shiftgroup and dMM/major microsatellite shift group in endometrial cancerItemsdMM/minimalmicrosatellite shift(n=12)dMM/majormicrosatellite shift(n=36)Age/years，range(media)48 68(55)41 89(57)HistologyWell differentiated EMC5(41 67%)2(5 56%)Moderately differentiated EMC4(33 33%)17(47 22%)Poorly differentiated EMC3(25 00%)11(30 56%)Serous carcinoma01(2 78%)Clear cell carcinoma01(2 78%)Mixed carcinoma00Dedifferentiated carcinoma01(2 78%)Undifferentiated carcinoma01(2 78%)Carcinosarcoma02(5 56%)FIGO stageA11(91 67%)20(55 56%)B1(833%)10(27 78%)04(11 11%)C101(2 78%)C201(2 78%)dMMMLH1()01(2 78%)PMS2()1(833%)0MSH2()04(11 11%)MSH6()2(16 67%)2(5 56%)MLH1/PMS2()9(75 00%)24(66 67%)MSH2/MSH6()05(13 89%)dMM，deficient mismatch repair;EMC，endometrial cancer;FIGO，International Federation of Gynecology and Obstetrics表 3子宫内膜癌 dMM/微小微卫星变换组与 dMM/显著微卫星变换组的组织学类型及 FIGO 分期比较Table 3Comparison of histology and FIGO stage between dMM/minimal microsatellite shift group and dMM/major microsatelliteshift group in endometrial cancerItemsdMM/minimalmicrosatelliteshiftdMM/majormicrosatelliteshiftPHistology，nWell differentiated group1120001Poorly differentiated group1534FIGO stage，nA23200006B/C/C2316dMM，deficient mismatch repair;FIGO，International Federationof Gynecology and ObstetricsEMC 易出现微小微卫星变换可能包含肿瘤细胞生物学、MM 机制上的差异，以及肿瘤发展临床分期不同等复杂原因。与 EMC 比较，MSI-H 型 CC的细胞可能有更多、更快的细胞转录和 DNA 复制周期，因此导致更显著的微卫星变换18 19。与晚期肿瘤比较，早期肿瘤的 DNA 复制可能更少，表现更小的微卫星变换，本组 dMM/微小微卫星变换 EMC中91 67%为早期肿瘤。EMC 比 CC 更常见 MSH6胚系突变20 21。本研究显示，EMC 中 MSH6 蛋白丢失比例在 dMM/微小微卫星变换组(16 67%)明显高于显著微卫星变换组(5 56%)和 dMM/MSI-H 型 CC 组(8 33%)。有研究报道，MSH6 突变常导致肿瘤出现 MSI-L 或 MSS，并且 EMC 比 CC更常 见12。Hampel 等22 的 研 究 报 道，50%的MSH6 突变型 EMC 经 MSI-PC 检测并不显示 MSI-H，这可能与 MSH6 蛋白在错配修复中的功能有关。当 MSH6 蛋白发生突变时，MSH2/MSH3 异源二聚体仍然起作用，DNA 的错配错误得到部分纠正23。另外，有研究还发现检测样本中肿瘤比例低于 30%时，更易出现微小微卫星变换;MSI-PC 标记的双核苷酸位点(如 D2S123、D17S250、D5S346)比单核苷酸位点(如 BAT-25、BAT-26、MONO-27 等)更易出现微小微卫星变换24。目前的 MSI-PC 检测试剂盒检测位点阈值多定义为 3 个以上核苷酸或碱基发生移位，源于其主要基于 CC 肿瘤，而非 EMC。未来针对 EMC 的 MSI-PC 检测标准应积累数据以进一步完善。本研究发现，微小微卫星变换主要发生于dMM 型 EMC，该组患者平均年龄低于 CC 组，肿瘤分化更好，FIGO 分期更早。两组间组织学类型及FIGO 分期差异有统计学意义。微小微卫星变换组062北京大学学报(医学版)JOUNAL OF PEKING UNIVESITY(HEALTH SCIENCES)Vol55No 2Apr 2023肿瘤的恶性程度和侵袭性低，预后好，但尚需增加病例以深入分析。MM-IHC 结果的判读参照