以酸枣仁、天麻为主的复方口服液改善睡眠作用机制研究_王蒙蒙.pdf

68第25 卷 第 2 期 2023 年 2 月辽 宁 中 医 药 大 学 学 报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol.25 No.2 Feb.，2023以酸枣仁、天麻为主的复方口服液改善睡眠作用机制研究王蒙蒙1，李桦军2，李欣坪1，游燕2，王恒禹2，王京昆2，林玉萍1（1.云南中医药大学，云南 昆明 650500；2.云南省药物研究所，云南 昆明 650000）基金项目：国家重点研发计划项目（2017YFC1702506）作者简介：王蒙蒙（1995-），女，河南上蔡人，硕士，研究方向：中药资源开发与利用。通讯作者：林玉萍（1975-），女，云南崇明人，教授，博士在读，研究方向：中药、天然药物活性研究。摘要：目的 评价以酸枣仁、天麻为主的复方口服液改善睡眠的作用及机制。方法 以酸枣仁、天麻为主的复方口服液按照低（19.5 mL/kg）、中（39 mL/kg）、高（117 mL/kg）3个剂量每天给予小鼠灌胃，阴性对照物为生理盐水，连续给药30 d后通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验来观察小鼠睡眠相关指标，并采用ELISA法测定脑组织内GABA、5-HT、DA的水平。结果 与阴性对照组相比，复方口服液3个剂量组对小鼠体质量无影响，均无直接睡眠作用，可显著延长小鼠在戊巴比妥钠睡眠实验中的睡眠时间（P0.001或0.01），均能增加戊巴比妥钠阈下剂量诱导的小鼠睡眠发生率，均能显著缩短小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期（P0.001）。不同剂量组均能提高小鼠脑组织内神经递质GABA（P0.001或0.01）、5-HT（P0.001）的水平；低、中剂量虽能提高多巴胺的含量，但差异没有统计学意义，高剂量能显著提高和多巴胺（P0.001）的水平。结论 在实验条件和所设剂量下，实验结果显示该复方口服液对睡眠具有明显的改善作用，其作用机制可能与提高脑组织中GABA、5-HT、DA的水平有关。关键词：酸枣仁；天麻；改善睡眠；神经递质；复方口服液中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2023)02-0068-05Effect and Mechanism of Compound Oral Liquid Mainly Composed of Suanzaoren（Ziziphi Spinosae Semen）and Tianma（Gastrodiae Rhizoma）on Improving SleepWANG Mengmeng1，LI Huajun2，LI Xinping1，YOU Yan2，WANG Hengyu2，WANG Jingkun2，LIN Yuping1（1.Yunnan University of Chinese Medicine，Kunming 650500，Yunnan，China；2.Yunnan Institute of Materia Medica，Kunming 650000，Yunnan，China）Abstract：Objective To evaluate the sleep-improving effect and mechanism of compound oral liquid based on Suanzaoren（Ziziphi Spinosae Semen）and Tianma（Gastrodiae Rhizoma）.Methods The compound oral liquid based on Suanzaoren（Ziziphi Spinosae Semen）and Tianma（Gastrodiae Rhizoma）was administered orally to mice in three doses of low（19.5 mL/kg），medium（39 mL/kg），and high（117 mL/kg）every day.The negative control was physiological Saline，after 30 days of continuous administration，observe the sleep-related indicators of mice through direct sleep test，pentobarbital sodium sleep prolongation test，pentobarbital sodium subthreshold dose hypnosis test and barbital sodium sleep latency test.And the levels of GABA，5-HT，and DA in brain tissues were determined by ELISA.Results Compared with the negative control group，three doses of oral liquid for sleep improvement had no effect on the body weight of mice，none of them had a direct sleep effect；it can significantly prolong the sleep time of mice in the pentobarbital sodium sleep experiment（P0.001 or 0.01）；both can increase the incidence of sleep in mice induced by the subthreshold dose of pentobarbital sodium；both can significantly shorten the sleep latency of mouse barbital sodium（P0.001）.Different dose groups can increase the levels of neurotransmitters-aminobutyric acid（P0.001 or 0.01）and 5-hydroxytryptamine（P0.001）in mouse brain tissue.Low and medium doses could increase the level of dopamine，but the difference was not statistically significant.High doses could significantly increase the level of dopamine and dopamine（P0.001）.Conclusion Under the conditions of this experiment and the dose set，the results of this experiment showed that the sleep-improving oral liquid has a significant improvement effect on sleep，and its mechanism of sleep improvement may be related to increasing the levels of GABA，5-HT，and DA in brain tissue.Keywords：Suanzaoren（Ziziphi Spinosae Semen）；Tianma（Gastrodiae Rhizoma）；sleep improvement；neurotransmitters；compound oral liquidDOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2023.02.01569 25 卷 辽宁中医药大学学报 睡眠不仅影响人的身体健康，还关系人的生活质量。有研究表明，失眠是一些慢性疾病出现的征兆和源头，会增加患高血压病、冠心病、记忆衰退等心血管疾病、精神疾病的概率1。失眠是指在有足够睡眠时间的情况下产生入睡困难、浅眠易醒、彻夜不眠等症状，现已经从老年人群高发向成年人群高发转移2。世界卫生组织（WHO）的一项研究数据中表明全球约有27%的人遭受失眠的困扰，我国约40%成年人和35%老年人存在失眠现象3。青少年由于学习压力大、生活节奏快、竞争激烈等因素，出现难入睡、睡眠少、入睡浅（即睡眠障碍国际分类中的“失眠症”）的症状的人数在不断上升。随着人们养生、保健等意识的提高，失眠现象引起人们的高度重视，进而各式各样的改善睡眠类保健品进入市场，利用药食两用药材制作保健品具有一定的功效、适合特定人群，不仅可调节人体机能，且不良反应少，具有较好的前景4。本研究主要对中药复方口服液改善睡眠的作用进行研究，通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验评价其改善睡眠的作用，同时采用酶联免疫吸附实验检测小鼠脑组织中神经递质-氨基丁酸（GABA）、5-羟色胺（5-HT）和多巴胺（DA）的含量，揭示其改善睡眠的相关机制。1材料及方法1.1 实验药物复方口服液为褐色液体，由云南省药物研究所提供，以酸枣仁、天麻为主要成分，辅料加以百合、茯苓、三七花等。依据复方口服液人体临床服用量的5、10、30倍设为本实验中复方口服液低、中、高剂量，按照人与小鼠体表面积折算法计算出小鼠的等效剂量为：低剂量 19.5 mL/kg、中剂量 39 mL/kg、高剂量 117 mL/kg。将所需给药剂量浓缩至相应小鼠所需灌胃体积后进行灌胃，以小鼠灌胃容积 0.1 mL/10 g为标准，每日1次，连续灌胃30 d。1.2 实验动物SPF级健康雄性BALB/c小鼠120只（202）g，68周龄，饲养在云南中医药大学动物实验室（温度：1829；相对湿度：50%80%；照明：12 h明暗交替）。实验动物来源：湖南斯莱克景达实验动物有限公司生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004；质量检测单位：湖南斯莱克景达实验动物有限公司；实验动物使用许可证号：SYXK（滇）K2011-0011。1.3 主要试剂与仪器小鼠GABA ELISA试剂盒（批号：20092235M）、5-HT ELISA试剂盒（批号：20092238M）、DA ELISA试剂盒（批号：20092239M），均购自江苏酶免实业有限公司；1 mL一次性无菌注射器（批号：20191128），陕西龙康鑫医疗器械有限公司提供；500 mL 0.9%氯化钠注射液（批号：H20061609），广西裕源有限公司提供。SQP电子天平赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；SK3300LH 超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；TH：101B 机械温湿度计（衡水沈拓仪器仪表有限公司）；RT-6100 酶标仪（上海创萌生物科技有限公司）；KZ-II 高速组织研磨仪（武汉赛维尔生物科技有限公司）；H1850R 台式高速冷冻离心（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）。1.4 实验方法1.4.1 动物分组与给药动物到达后检查小鼠外观，然后适应性喂养1周，在此期间每日观察小鼠一般生理状态，自由摄食饮水。适应性喂养结束后根据体质量随机分为3个大组，每个大组内的小鼠以简单随机化法再次分为4 个小组，分别为阴性对照组，复方口服液低、中、高剂量组，每个小组10只。阴性对照组给予生理盐水，复方口服液3个剂量组（低剂量19.5 mL/kg，中剂量39 mL/kg，高剂量117 mL/kg）给予受试物药液，每日1次，每6 d称重1次，连续灌胃30 d后进行改善睡眠功效测试。3个大组小鼠分别进行不同功效实验验证，第1组：戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间实验；第2组：戊巴比妥钠阈下剂量小鼠催眠实验；第3组：巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期实验。1.4.2 直接睡眠实验观察末次给药后30 min内各组小鼠是否进入睡眠，以灌胃结束的时刻为开始时间、翻正反射消失（即将小鼠背卧式放置60 s不翻转，下同）为判断标准。1.4.3 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验末次给药 60 min 后，采用腹腔注射的方式注射戊巴比妥钠 45 mgkg-1bw-1，注射量为1 mL（100 g）-1bw-1，此剂量为预实验中保证100%小鼠进入睡眠但又不至于睡过长时间的剂量，观察该实验组小鼠是否进入睡眠并记录小鼠的睡眠潜伏期及睡眠时间。睡眠潜伏期（下同）：从注射戊巴比妥钠后开始计时，小鼠翻正反射消失为进入睡眠，此时间间隔即为睡眠潜伏期；睡眠时间（下同）：从小鼠翻正反射消失即进入睡眠开始计时，直至小鼠翻正反射恢复（即将小鼠背卧式放置60 s内翻转，下同），此时间间隔即为睡眠时间。比较不同剂量的复方口服液是否能延长戊巴比妥钠注射小鼠的睡眠时间。1.4.4 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验末次给药 60 min 后，采用腹腔注射的方式注射戊巴比妥钠 30 mgkg-1bw-1，注射量为1 mL（100 g）-1bw-1，此剂量为预实验中保证80%90%小鼠进入睡眠但又不至于睡过长时间的剂量，记录该实验组小鼠的入睡数量及入睡率（入睡率=入睡动物数量/动物总数量100%）。1.4.5 巴比妥钠睡眠潜伏期实验末次给药结束60 min后，采用腹腔注射的方式注射巴比妥钠260 mgkg-1bw-1，注射量为1 mL（100 g）-1bw-1，此剂量为预实验中保证100%小鼠进入睡眠但又不至于睡过长时间的剂量，记录该实验组小鼠是否进入睡眠以及睡眠潜伏期。1.4.6 小鼠脑组织-氨基丁酸、5-羟色胺、多巴胺的水平测定小鼠灌胃给药30 d后处死，快速取出脑组织。采用 ELISA法测定小鼠脑组织中-氨基丁酸、5-羟色胺、多巴胺的含量，严格按照试剂盒说明书的操作流程进行检测，在450 nm处用酶标仪测定吸光光度值，并根据标准曲线计算样品浓度。70 辽宁中医药大学学报 25 卷1.5 统计学分析采用统计学软件 SPSS 17.0和GraphPad Prism 5.0进行数据处理，所有样本数据组间显著性比较采用单因素方法分析（one-way ANOWA），以“xs”表示，以P0.05），说明该实验分组合理。而复方口服液低剂量组因小鼠间个体差异性不同，个别小鼠体质量较轻，导致该组在第30天时具有差异（P0.05），表明有不同剂量的复方口服液对小鼠体质量无影响。表1 各组小鼠延长戊巴比妥钠睡眠时间体质量变化比较（n=10，xs）单位：g时间对照组复方口服液低剂量组复方口服液中剂量组复方口服液高剂量组第0天21.811.1421.510.4722.100.5422.200.23第6天23.670.9122.930.4823.011.0223.051.15第12天24.001.3023.150.5324.180.5523.571.32第18天25.141.2024.330.3825.030.3924.631.31第24天25.171.2224.280.5624.990.6725.011.01第30天26.401.18 25.270.41*25.630.6826.491.01注：*与对照组比较，P0.05。表2 各组小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠体质量变化比较（n=10，xs）单位：g时间对照组复方口服液低剂量组复方口服液中剂量组复方口服液高剂量组第0天21.590.7621.450.5322.110.4123.050.88第6天23.790.9723.390.6823.411.0023.081.29第12天24.181.0624.220.8523.920.9323.331.02第18天25.561.1524.991.0724.800.7424.840.51第24天25.902.0524.970.9424.840.8724.920.41第30天26.691.9325.920.8425.750.6625.790.43 表3 各组小鼠缩短巴比妥钠睡眠潜伏期体质量变化比较（n=10，xs）单位：g时间对照组复方口服液低剂量组复方口服液中剂量组复方口服液高剂量组第0天21.750.6421.680.5522.080.7822.130.44第6天23.980.6623.360.9523.231.2423.800.92第12天24.120.6923.990.7223.471.3024.300.67第18天24.921.5324.450.4524.221.4124.410.56第24天26.050.7225.630.4925.530.9525.430.54第30天25.811.7725.860.6025.920.8925.900.502.2 复方口服液对小鼠直接睡眠的影响 各组小鼠在给予复方口服液60 min内，通过观察对照组和复方口服液各剂量组的实验结果见表4，入睡动物和睡眠时间均为0，表明复方口服液无直接睡眠作用，推测其需要与其他药物协同作用才能改善小鼠睡眠，其作用机制可能是通过中枢神经系统产生作用。表4 各组小鼠睡眠时间变化比较（xs）组别n入睡数量睡眠时间/min对照组1000复方口服液低剂量1000复方口服液中剂量1000复方口服液高剂量10002.3 复方口服液对小鼠睡眠的影响2.3.1 对小鼠戊巴比妥钠延长睡眠时间的影响 按照 保健食品检验与评价技术规范 进行复方口服液对戊巴比妥钠诱导睡眠时间影响的实验，研究复方口服液对小鼠睡眠时间的影响，其在戊巴比妥钠催眠的基础上，若睡眠时间延长，则说明受试药物与戊巴比妥钠具有协同作用。小鼠睡眠潜伏期时间结果见图1-1，小鼠睡眠时间结果见图1-2。实验小鼠睡眠潜伏期时间结果见图1-1，复方口服液低、中、高剂量组小鼠睡眠潜伏期时间分别为（5.250.85）min、（7.011.47）min、（6.420.86）min，与对照组（13.005.44）min比较，复方口服液各剂量组小鼠睡眠潜伏期时间分别出现很大程度地缩短，均具有极显著差异（P0.001），3个剂量组无明显差异。说明复方口服液与戊巴比妥钠具有协同作用，与戊巴比妥钠联合作用能够显著缩短小鼠的入睡时间。实验小鼠睡眠时间结果见图 1-2，复方口服液低、中、高剂量组的睡眠时间分别为（87.7522.22）min、（81.952.92）min、（58.9612.39）min，与对照组（57.3515.49）min比较，复方口服71 25 卷 辽宁中医药大学学报 液各剂量组小鼠睡眠时间分别延长53.01%、42.89%、2.81%，低、中剂量组具有极显著差异（P0.001），高剂量无显著性差异。说明复方口服液与戊巴比妥钠有协同作用，可以显著缩短小鼠的睡眠潜伏期并延长小鼠睡眠时间（P0.001）。目前国内外文献未见此复方口服液对睡眠作用研究的相关报道。收稿时间:2022-03-25基金项目:国家自然科学基金面上项目(编号:81774426);省自然科学基金联合引导项目(编号:LH2019H113);黑龙江中医药大学“优秀创新人才支持计划”科研项目(编号:2018RCL11)。作者简介:郑茹文(1996-),女,山东青岛人,2020 级针灸推拿学专业硕士研究生,研究方向:针灸治疗神经系统疾病。通讯作者:王东岩(1971-),女,黑龙江哈尔滨人,主任医师,博士研究生导师,博士,研究方向:针灸治疗神经系统疾病的研究。复方口服液各剂量组小鼠睡眠潜伏期时间分别出现很大程度地缩短,均具有极显著差异(P0.001),三个剂量组无明显差异。说明复方口服液与戊巴比妥钠具有协同作用,与戊巴比妥钠联合作用能够显著缩短小鼠的入睡时间。实验小鼠睡眠时间结果见图 1B,复方口服液低、中、高剂量组的睡眠时间分别为87.7522.22 min、81.952.92 min、58.9612.39 min,与对照组 57.3515.49 min 比较,复方口服液各剂量组小鼠睡眠时间分别延长 53.01%、42.89%、2.81%,低、中剂量组具有极显著差异(P0.001),高剂量无显著性差异。说明复方口服液与戊巴比妥钠有协同作用,可以极显著(P0.001)缩短小鼠的睡眠潜伏期并延长小鼠睡眠时间。目前国内外文献未见此复方口服液对睡眠作用研究的相关报道。05101520*时间Time/minA B C D020406080100*A B C D时间Time/min(1A)(1B)图 1 各组小鼠延长戊巴比妥钠睡眠时间变化(-s,n=10)1A:小鼠睡眠潜伏期变化;1B:小鼠睡眠时间变化注:A:对照组,B:复方口服液低剂量组;C:复方口服液中剂量组;D:复方口服液高剂量组;与对照组相比,*P0.01,*P0.0012.3.2 对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响按照保健食品检验与评价技术规范进行复方口服液对戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验,研究其对小鼠睡眠发生率的影响。由于戊巴比妥钠可通过肝酶代谢,若药物对肝酶具有抑制作用,也会延长戊巴比妥钠睡眠时间。为排除此影响,降低戊巴比妥钠的剂量,进行阈下催眠实验,结果见表 5。从表 5 可以看出,复方口服液低、中、高剂量组的睡眠发生率分别为 80%、40%、50%,均高于对照组的睡眠发生率(20%),睡眠发生率随剂量逐渐降低。与对照组相 1 2注：1：小鼠睡眠潜伏期变化；2：小鼠睡眠时间变化；A.对照组；B.复方口服液低剂量组；C.复方口服液中剂量组；D.复方口服液高剂量组；*与对照组比较，P0.01；*与对照组比较，P0.001。图1 各组小鼠延长戊巴比妥钠睡眠时间变化（n=10，xs）2.3.2 对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响 按照 保健食品检验与评价技术规范 进行复方口服液对戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验，研究其对小鼠睡眠发生率的影响。由于戊巴比妥钠可通过肝酶代谢，若药物对肝酶具有抑制作用，也会延长戊巴比妥钠睡眠时间。为排除此影响，降低戊巴比妥钠的剂量，进行阈下催眠实验，结果见表5。从表5可以看出，复方口服液低、中、高剂量组的睡眠发生率分别为80%、40%、50%，均高于对照组的睡眠发生率（20%），睡眠发生率随剂量逐渐降低。与对照组相比，复方口服液3个剂量组的睡眠发生率具有显著性差异（P0.05），其中低剂量组具有极显著性差异（P0.001）。以上结果表明，复方口服液与戊巴比妥钠的协同睡眠作用是通过影响戊巴比妥钠的代谢实现的，其与戊巴比妥钠协同睡眠实验结果类似，说明复方口服液与戊巴比妥钠对小鼠睡眠影响具有较好的协同作用。2.3.3 对小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期的影响 按照 保健食品检验与评价技术规范 对复方口服液进行巴比妥钠睡眠潜伏期实验，研究其对小鼠入睡时间的影响，结果见图2。从图2中可以看出，在巴比妥钠睡眠潜伏期实验中，复方口服液低、中、高剂量组的睡眠潜伏期分别为（30.024.15）min、（24.224.50）min、（38.051.95）min，与 对 照 组（40.225.52）min比较，复方口服液低、中剂量组能显著缩短小鼠睡眠潜伏期（P0.001），高剂量无显著性差异，表明复方口服液低、中剂量组与巴比妥钠具有较强的协同促睡眠作用。表5 各组小鼠戊巴比妥钠阈下剂量睡眠发生率变化比较（xs）组别n入睡数量/只 睡眠发生率/%对照组10220%复方口服液低剂量10880%*复方口服液中剂量组10440%*复方口服液高剂量组10550%*注：*与 对 照 组 比 较，P0.05；*与 对 照 组 比 较，P0.01；*与对照组比较，P0.001。收稿时间:2022-03-25基金项目:国家自然科学基金面上项目(编号:81774426);省自然科学基金联合引导项目(编号:LH2019H113);黑龙江中医药大学“优秀创新人才支持计划”科研项目(编号:2018RCL11)。作者简介:郑茹文(1996-),女,山东青岛人,2020 级针灸推拿学专业硕士研究生,研究方向:针灸治疗神经系统疾病。通讯作者:王东岩(1971-),女,黑龙江哈尔滨人,主任医师,博士研究生导师,博士,研究方向:针灸治疗神经系统疾病的研究。比,复方口服液三个剂量组的睡眠发生率具有显著性差异(P0.05),其中低剂量组具有极显著性差异(P0.001)。以上结果表明,复方口服液与戊巴比妥钠的协同睡眠作用是通过影响戊巴比妥钠的代谢实现的,其与戊巴比妥钠协同睡眠实验结果类似,说明复方口服液与戊巴比妥钠对小鼠睡眠影响具有较好的协同作用。表 5 各组小鼠戊巴比妥钠阈下剂量睡眠发生率变化(-s,n=10)单位:只组别动物数量入睡数量睡眠发生率对照组10220%复方口服液低剂量10880%*复方口服液中剂量组10440%*复方口服液高剂量组10550%*注:与对照组相比,*P0.05,*P0.01,*P0.0012.3.3 对小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期的影响按照保健食品检验与评价技术规范对复方口服液进行巴比妥钠睡眠潜伏期实验,研究其对小鼠入睡时间的影响,结果见图 2。从图 2 中可以看出,在巴比妥钠睡眠潜伏期实验中,复方口服液低、中、高剂量组的睡眠潜伏期分别为 30.024.15min、24.224.50min、38.051.95min,与对照组 40.225.52 min 比较,复方口服液低、中剂量组能显著缩短小鼠睡眠潜伏期(P0.001),高剂量无显著性差异,表明复方口服液低、中剂量组与巴比妥钠具有较强的协同促睡眠作用。01020304050*时间Time/min A B C D图 2 各组小鼠缩短巴比妥钠睡眠潜伏期时间变化(-s,n=10)注：A.对照组；B.复方口服液低剂量组；C.复方口服液中剂量组；D.复方口服液高剂量组；*与对照组比较，P0.001。图2 各组小鼠缩短巴比妥钠睡眠潜伏期时间变化（n=10，xs）2.3.4 复方口服液对-氨基丁酸、5-羟色胺、多巴胺的影响 复方口服液对小鼠脑组织中-氨基丁酸、5-羟色胺、多巴胺含量结果见表6。由表6可看出，与对照组相比，复方口服液低、中、高剂量组均可以显著提高小鼠脑组织内神经递质-氨基丁酸（P0.001或P0.01）、5-羟色胺（P0.001）的水平；低、中剂量虽能提高多巴胺的含量，但差异没有统计学意义，高剂量能显著提高和多巴胺（P0.001）的水平，差异具有统计学意义。各组小鼠神经递质的升高与剂量具有一定的量效关系。表6 各组小鼠脑组织GABA、5-HT、DA含量变化比较（n=6，xs）组别-氨基丁酸5-羟色胺多巴胺对照组 35.45.20 515.6180.54443.0982.25复方口服液低剂量42.624.79*827.7656.78*470.9085.58复方口服液中剂量组55.270.94*1129.65145.54*492.6556.10复方口服液高剂量组74.702.27*1158.04146.42*823.6359.27*注：*与对照组比较，P0.01；*与对照组比较，P0.001。3讨论内经类证治裁记载：“阳气自动而之静则寐；阴气自静而之动则寤，不寐者病在阳不交阴也”5。中医在治疗失眠症状方面历史悠久，讲究辨证论治、调节情志、阴阳平衡6，基于文献分析，用于改善人们入睡困难等失眠症状使用频率位居前列的中药主要有酸枣仁、天麻、五味子、茯苓等7-9，综合分析用于治疗失眠症状的单味中药或复方，均具有补心脾、调情志、安神补虚的功效，活性成分大多涉及皂苷、黄酮、生物碱及多糖类化学成分10，这也从另一方面预示改善睡眠的作用机制存在多样性。酸 枣 仁，即 酸 枣 核，是 鼠 李 科 植 物 酸 枣（Ziziphus jujuba Mill var.spinosa）的 干 燥 种 子。其味甘性平，归心、肝、胆三经，通过调节人心脾气血来治疗失眠多梦、体虚盗汗等睡眠障碍相关症72 辽宁中医药大学学报 25 卷状，最早在 金匮要略血脾虚劳病脉证 中记载其具有清热宁心、安神养肝之功效11-12。天麻又名鬼督邮、独摇、明天麻等，主产于云贵川等地，是中医治疗失眠症常用的一味中药。其味甘性平，入肝经，在中枢神经系统方面有镇静催眠、益智健脑的显著疗效13。本研究中以酸枣仁、天麻为主的复方口服液为受试药物，通过小鼠行为学评价其对睡眠的影响作用。研究结果表明：复方口服液无直接睡眠作用（表4）；可以显著缩短戊巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期时间（图1-1）和延长戊巴比妥钠睡眠时间（图1-2）；与戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验具有较好地协同作用（表5）；中、低剂量对巴比妥钠睡眠潜伏期具有显著缩短（图2），高剂量无显著性差异。实验中，3个实验结果呈现阳性，即可判定该复方口服液具有改善睡眠的作用。本研究根据 保健食品检验与评价技术规范进行直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验研究以酸枣仁、天麻为主的复方口服液具有改善睡眠的作用。并对戊巴比妥诱导睡眠作用小鼠脑组织中的神经递质进行检测，进而从行为学和中枢神经递质（多巴胺，5-羟色胺，-氨基丁酸）两重要途径着手进一步探讨复方口服液改善睡眠的效果及机制14-15。GABA是一种镇静、抗惊厥、抗焦虑的神经抑制性氨基酸，可通过神经内分泌途径抑制中枢神经系统兴奋，进而缓解焦虑或抑郁，起到改善睡眠的作用，因此是负责睡眠行为的主要分子之一16。研究发现人脑内GABA含量的高低与焦虑症、抑郁症、失眠症、阿尔兹海默症等精神疾病或中枢神经系统疾病的发生有一定的联系17。本实验结果显示（表6），复方口服液各剂量组小鼠脑组织中 GABA 水平均显著性高于对照组（P0.01或P0.05），高剂量显著提高DA水平。经组间比较发现神经递质提高水平与复方口服液剂量具有较好的量效关系。综合上述实验结果，该复方口服液显著缩短戊巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期时间和延长戊巴比妥钠睡眠时间、增加戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验入睡率和减少巴比妥钠睡眠潜伏实验睡眠潜伏时间。根据 保健食品检验与评价技术规范实施手册 改善睡眠评价方法表明该复方口服液各个剂量组均有明显的促睡眠作用，与戊巴比妥钠具有较好的协同作用，这种作用可能是通过调节小鼠脑组织中GABA、DA、5-HT的含量而产生。参考文献 1 ZHOU ES，RECKLITIS CJ.Internet-delivered insomnia intervention improves sleep and quality of life for adolescent and young adult cancer survivors J .Pediatr Blood Cancer，2020，67(9 )：e28506.2 ALWANDI AS，SHORBAGI SI.Sleep patterns and its relation to lifestyle habits：a study of second-ary high school students in Sharjah，United Arab Emirates J .AIMS Public Health，2020，7(3 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