碳青霉烯酶抑制剂增强试验检...菌碳青霉烯酶表型的临床应用_王璐.pdf

收稿日期 修回日期 基金项目 安徽省高校自然科学研究重点项目（）；安徽省六安市人民医院科研课题面上项目（）作者单位 安徽医科大学附属六安医院 检验科，安徽 六安；安徽省六安市人民医院 检验科，；皖西卫生职业学院 医学技术系，安徽 六安 作者简介 王 璐（），女，硕士，副主任检验技师通信作者 彭 成，副教授：文章编号（）检验医学碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测肠杆菌目细菌碳青霉烯酶表型的临床应用王 璐，黄新明，章 杰，彭 成摘要目的：评估碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测肠杆菌目细菌碳青霉烯酶表型的临床应用价值。方法：收集六安市人民医院 年分离自临床标本的耐碳青霉烯、非重复肠杆菌目细菌共 株。采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测菌株携带的碳青霉烯酶，并以 试验扩增常见 种碳青霉烯酶基因为金标准，评估碳青霉烯酶抑制剂增强试验对 菌株 类和 类碳青霉烯酶的检测价值。结果：碳青霉烯酶抑制剂增强试验结果显示，产 类酶菌株有 株，产 类酶菌株有 株，株肺炎克雷伯菌和 株产气肠杆菌未检出 类或 类酶。与 方法比较，碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测单独产 类酶的灵敏度为 （），特异度为 （），对于单独产 类酶的检测，灵敏度和特异度均为 ，两种检测方法之间一致性高。结论：碳青霉烯酶抑制剂增强试验操作简便、结果易判读，适合临床微生物实验室普遍应用。关键词 肠杆菌目细菌；碳青霉烯酶；碳青霉烯酶抑制剂增强试验中图法分类号 文献标志码 ：，（，；，；，）：（）：（）（）：，：，；碳青霉烯类抗菌药物通常用来治疗多重耐药肠杆菌目细菌（如产超广谱 内酰胺酶、酶等）造成的感染。但随着该类药物的广泛应用，耐碳青霉烯肠杆菌目细菌逐渐增多。肠杆菌目细菌对碳青霉烯类药物耐药的主要原因是产生水解碳青霉烯类药物的酶，从而导致药物失活。这些酶中最常见是 分类中的 类酶（以 为主）和 类酶（又称金属酶，如、等）。这两类酶不仅能够水解碳青霉烯类药物，引起治疗失败，同时还能够编码在转座子和 或整合子上传播给其他肠杆目细菌，引起流行爆发。因此，临床实验室迫切需要采取便捷、准确的试验方法以了解肠杆菌目细菌对碳青霉烯类药物耐药机制，从而及时采取相应防治措施。本研究以 方法检测耐药基因结果为金标准，评估 类酶抑制剂及 类酶抑制剂用于碳青霉蚌埠医学院学报 年 月第 卷第 期烯酶型别检测的应用价值。现作报道。资料与方法 菌株来源 收集六安市人民医院 年临床送检标本中，经 仪鉴定为肠杆菌目并且初步判断为耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌（，）的共 株菌株。剔除同一病人重复分离菌株。其中肺炎克雷伯菌 株，大肠埃希菌 株，阴沟肠杆菌 株，弗氏枸橼酸杆菌 株，黏质沙雷菌 株，植生拉乌尔菌 株，产气肠杆菌 株，布氏枸橼酸杆菌、产酸克雷伯菌及潘氏变形杆菌各 株。仪器鉴定质控菌株为霍氏肠杆菌 ，药敏质控菌株为大肠埃希菌 ，阳性菌株为经 测序验证菌株，、阳性对照及非产碳青霉烯酶阴性对照肺炎克雷伯菌 系浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室惠赠。仪器与试剂 全自动细菌鉴定药敏仪和革兰阴性菌鉴定药敏卡（和）均购自法国梅里埃公司，仪、电泳仪及凝胶成像系统购自美国 公司，试剂购自日本 公司，引物交由生工生物工程有限公司合成。厄他培南、亚胺培南及美罗培南药物纸片（）均购自英国 公司。平板、平板及 平板购自上海科玛嘉公司。乙二胺四乙酸盐（）溶液购自上海生工公司，硼酸（）购自美国 公司。方法 菌株鉴定与药敏复核试验采用 全自动细菌鉴定药敏仪与配套鉴定药敏卡（和）进行鉴定，采用纸片扩散法对厄他培南、亚胺培南及美罗培南药敏结果进行复核。根据美国临床实验室标准化研究所标准操作规程（）进行试验操作及折点判断。碳青霉烯酶抑制剂增强试验 类和 类碳青霉烯酶 依据 文件中纸片扩散法进行试验。将血平板上过夜培养的菌落制备成 麦氏浊度菌悬液，均匀涂布于 平板上，之后贴 片亚胺培南纸片。一片滴加 溶液 ，一片纸片滴加 溶液 ，第 片同时滴加 溶液和 溶液各 ，第 片不加任何溶液。过夜孵育后量取纸片的抑菌圈直径。结果判读：（）滴加 溶液的亚胺培南纸片与单药纸片相比抑菌圈直径之差，即该菌株产 类酶；（）滴加 溶液的亚胺培南纸片与单药纸片相比抑菌圈直径之差 ，即判断为该菌株产 类酶；（）如滴加 或 的亚胺培南纸片与单药纸片相比抑菌圈直径相差均 ，则判断该菌株不产 类或 类酶；（）如同时滴加 和 的亚胺培南纸片与单药纸片相比抑菌圈直径相差，则判断同时产 类和 类酶。试验检测碳青霉烯酶基因采用煮沸法提取待测菌株的基因组 作为模板。扩增基因包括：、及。引物合成及扩增条件参照文献进行（见表）。部分阳性扩增产物交由上海生工生物工程股份有限公司进行 双向测序，测序结果采用 数据库进行 比对。表 碳青酶烯酶基因引物序列基因引物序列（）片段大小退火温度 统计学方法以 结果为金标准，计算碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测 类酶和 类酶的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值，分别与基因检测结果进行一致性检验，计算 值：值 ，说明两种方法诊断结果一致性较好；值在 ，说明一致性一般；值 ，说明一致性较差。检验水准 。结果 菌株标本及科室 分布 株 菌株中，标本来源分别为：痰液 株（），尿液 株（），血液 株（），脓液 株（），腹水、导管及穿刺液各 株（），支气管肺泡灌洗液、直肠拭子各 株（），胸水 株（）。菌株来源科室分布：重症监护室 株（），神经外科 株（），呼吸内科 ，株（），急诊科 株（），普外科 株（），肾脏内科 株（），其余科室 株（）。菌株药敏试验结果 对替加环素耐药率低，为 ，对阿米卡星、复方新诺明耐药率分别为 、。对其他抗菌药物耐药率均（见表）。表 对常用抗菌药物的耐药率（）抗菌药物耐药敏感耐药率 头孢他啶头孢曲松头孢吡肟厄他培南亚胺培南美洛培南氨曲南哌拉西林 他唑巴坦阿莫西林 克拉维酸头孢哌酮 舒巴坦阿米卡星 环丙沙星左氧氟沙星复方新诺明 替加环素 株 碳青霉烯酶基因检测 经 扩增、测序后比对，产 株，产 株，产 株，产 株，同时产 和 株。株未检出常见碳青霉烯酶基因。部分电泳结果见图 。碳青霉烯酶抑制剂增强试验单产 类酶菌株有 株，单产 类酶菌株有 株，株同时产 类酶和 类酶。株肺炎克雷伯菌和 株产气肠杆菌未检出，株阴性肺炎克雷伯菌中，结果显示有 株未检测到常见耐药基因，株产 酶；株产气肠杆菌未检测出常见耐药基因（见图）。碳青霉烯酶抑制剂增强试验对于单独产 碳青霉烯酶的检测，灵敏度为 （），特异度为 （），阳性预测值为 （），阴性预测值为 （），值为 （），两种检测方法之间一致性高。对于单独产 类碳青霉烯酶的检测，灵敏度和特异度均为 ，阳性预测值、阴性预测值均为，值为 （），两种检测方法之间一致性高（见表 ）。表 两种方法检测单产 类碳青霉烯酶菌株结果比较（株）抑制剂增强试验 试验 阳性 阴性合计阳性阴性 合计 注：值；表 两种方法检测单产 类碳青霉烯酶菌株结果比较（株）抑制剂增强试验 试验 阳性 阴性合计阳性 阴性合计 注：值；表 碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测碳青霉烯酶性能评价碳青霉烯酶 抑制剂增强试验耐药基因（单产）灵敏度 特异度 阳性预测值 阴性预测值 阳性 阳性 类酶蚌埠医学院学报 年 月第 卷第 期 讨论 我国临床分离的肠杆菌目细菌以产 和 为主，肠杆菌目细菌产 和 是导致临床采用 内酰胺类药物治疗失败的主要原因之一。一直以来，酶和 类酶在全球各国独立传播流行，但有报道称发现同时携带 酶和 类酶的肺炎克雷伯菌株，二者同时存在可增强菌株对碳青霉烯类抗菌药物的水解活性，扩大菌株耐药谱范围，还可能共同在医院或社区中传播。同时，治疗 感染的新型抗菌药物对不同碳青霉烯酶型菌株的抗菌活性不同，治疗效果不同，例如头孢他啶 阿维巴坦对产 酶和 类酶（）菌株具有较好的抗菌活性，但对产 类酶菌株无效，体外研究认为对于后者，往往需要联合应用氨曲南。因此快速准确获得菌株碳青霉烯酶型别对临床治疗、感染控制都是至关重要的。过去实验室通常采用 技术进行检测，但成本高、操作复杂，需要专业技术人员和设备。本研究采用新型碳青霉烯酶检测技术，操作便捷，成本较低，对技术含量要求不高，结果易判读，对于临床治疗和流行病学调查具有重要意义。本研究结果显示，亚胺培南联合 检测肠杆菌目细菌单独产 酶，与 方法相比，灵敏度可达到 。有 株菌，抑制剂增强试验结果为阳性，但未检测到 酶，考虑菌株可能产生其他少见类型的 类酶，如、等，此外有研究发现，产 酶合并膜孔蛋白缺失时，抑制剂增强试验结果同样可出现阳性。后续我们可以采取扩增相应基因或全基因组测序的方法加以验证。对于单独产 类酶的检测，抑制剂增强试验灵敏度和特异度均为，试验结果显示，株 类酶中，株产，株产，亚胺培南联合 均可以检测出，与其他研究 结果相同。但采用 检测肺炎克雷伯菌产 类酶的特异性与吡啶二羧酸相比较低，考虑可能与本研究纳入产 类酶菌株数量、种类有限相关，因此该结果有待进步一验证。同时本研究发现，对于同时产 和 的菌株，使用亚胺培南单独联合 或 检测结果均为阴性。而在纸片上同时滴加 及 时，相较于亚胺培南纸片，抑菌圈有明显扩大，与其他研究者研究结果相同。可能任何一种抑制剂单独作用均不足以全部抑制 和 对亚胺培南的水解活性，只有两种抑制剂同时存在情况下，才能够完全抑制。但该方法无法检出产 的菌株，有报道称可利用大肠埃希菌 、亚胺培南纸片、及，采用的纸片扩散法进行简单的操作区分产 菌株。后续我们将继续收集产 菌株并加以验证。综上所述，采用 和 进行碳青霉烯酶抑制剂增强试验具有操作简便、结果易判读、准确性较高及成本低廉等优点，适合临床微生物实验室常规开展。参考文献，（）：，：，（）：王璐，高绪锋，张凤丽，等 耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因检测及其同源性分析 蚌埠医学院学报，（）：，（）：，收稿日期 修回日期 作者单位 中国科学技术大学附属第一医院（安徽省立医院）检验科，国家医学检验临床医学研究中心核心单位，安徽 合肥 作者简介 王章飞（），男，硕士，检验师文章编号（）检验医学术前检测 抗体阳性率和阳性病人群体特征分析王章飞，罗以勤摘要目的：分析中国科学技术大学附属第一医院术前检测病人 阳性情况和阳性病人的群体特征，为临床了解 感染情况提供数据支撑。方法：筛选 年术前检测病人 例，统计 阳性情况及病人的性别、年龄、职业、学历和就诊疾病信息。结果：术前检测病人总的阳性率为 ，年、年和 年阳性率比较差异无统计学意义（）。主要为男性病人，年龄集中在 岁，职业多为务农和待业，学历普遍在初中及以下，主要因循环、消化、呼吸系统疾病就诊。结论：术前检测病人 阳性率三年来未发生明显变化。临床应重视 的术前筛查结果，关注群体特征明显的病人，减少医源性感染的发生。关键词 获得性免疫缺陷综合征；人类免疫缺陷病毒；术前筛查；职业暴露中图法分类号 文献标志码 ：，（，）：（），：，：，（），：，：（），（）：，（），（）：，（），（）：，（）：，（）：张逸，朱钱迎，张青，等 纸片协同试验用于肠杆菌科细菌碳青霉烯酶检测的价值 浙江医学，（）：周银娣，郭燕，张琴，等 氨基苯硼酸联合乙二胺四乙酸碳青霉烯酶抑制增强试验检测肠杆菌目细菌产碳青霉烯酶的研究 中国感染与化疗杂志，（）：，（）：（本文编辑 刘璐）蚌埠医学院学报 年 月第 卷第 期