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拭子擦拭取样方法验证方案回收率研究

13
2020年4月19日
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修订记录/ Revision history:
1.0版：初始版本
Release 1.0 Initial Release

姓 名
Name
部 门
Function
签名及日期
Signature and Date
制定人
Author
Jay Sun
QA and Validation

审核人
Reviewer(s)
Wang Knight
QC and Validation

审核人
Reviewer(s)
Sandy Hou
Industrialization

批准人
Approver
Diao Yinzi
QA and Validation

1 目的 / PURPOSE
确认使用擦拭取样方法对特定材质的设备表面残留物进行取样时，其检测结果的重复性、再现性以及回收率是否能满足要求。
2 范围 / SCOPE
本验证用于适用于BSB所有需要使用擦拭取样法作为专属或非专属测试取样方法的验证。

3 职责 / RESPONSIBILITIES
- 验证部负责本验证方案的设计
- 工业化和QC部门负责参与本验证方案的执行
- 质量保证部门负责本验证方案的审核和批准

4 定义与缩写 / DEFINITIONS AND ABBREVIATION

缩写Short form
定义 Definition
清洁验证
有文件和记录证明所批准的清洁规程肯定能使设备符合污染残留限度产要求的试验及相关活动

5 系统简介 / SYSTEM DESCRIPTION
清洁验证中需要对不同设备最难清洁部位的表面进行直接取样，能够使用擦拭取样方法对有代表性的最难清洁部位的残留物进行取样检测，以评价整套生产设备的清洁状况。

经过选择适当的擦拭溶剂、擦拭工具和擦拭方法，可将清洗过程中未溶解的，已“干结”在设备表面或溶解度很小的物质擦拭下来，检验的结果能直接反映出各取样点的清洁状况，为确认残留浓度是否超过限度和是否需要进一步优化清洁规程提供依据。而不同设备表面材质特性是不一样的，因此不同表面材质的回收率研究一般会在清洁验证前完成，以确认取样方法对清洁验证中的残留物测试结果的影响。

6 影响分析 / IMPACT ANALYSIS
主要风险
可能导致的结果
对质量的影响程度
措施
取样方法失效

残留物无法按照设定要求转移至样品

高
擦拭取样方法验证
检测结果失效

检测结果合格但实际清洁效果没有达到预期标准
高
1. 回收率研究
2. 检测委托有资质的第三方进行化学检测

7 验证方案设计 / QUALIFICATION STRATEGY
在回收率研究是针对非专属性检测指标TOC的研究，将含有一定量TOC的标准储备液涂布在不同表面，进行擦拭取样后检测取样得到的TOC浓度，然后计算相对标准偏差和回收率。主要分为以下几个主要步骤：

Coupon的准备：取与设备表面比较近似的材料作为擦拭实验使用的Coupon，一般面积至少要比取样表面大，需要平整而且足够清洁。能够在清洁后用大量低TOC水冲洗表面以达到过度清洁的效果，新的不锈钢表面的coupon能够用硝酸进行浸泡过夜，以对其表面进行钝化。Coupon表面要充分晾干后才能进行储备液的涂布，晾干过程中需要注意防止外界的TOC对表面造成污染。

储备液制备：将已知含已知浓度TOC的储备液溶液，以受控的方式涂布在与清洁验证中材质像类似的样本上，为方便计算含碳量，TOC储备溶液的配制选取称取99%化学纯度的蔗糖(C12H22O11)进行配制，溶解的溶剂选取生产日常配液使用的纯化水。在擦拭以及冲洗取样的回收率研究中，在材质试样上涂布的残留物量浓度应尽量与残留限度一致。

储备液涂布：残留物的浓度选择为表面残留物限度的水平内的值，使得储备液中的TOC小于允许残留限度(TOC≤10ppm，即0.01g/L)。涂布与清洁验证中取样面积相近的表面积（25cm2或100cm2，或根据实际情况自己定义），然后自然晾干，晾干过程中需要注意防止外界的TOC对表面造成污染。

擦拭取样：采用清洁验证方案中的相同的擦拭方法进行取样，并用清洁验证中一样的溶剂和方法对拭子上的残留物进行提取，最后检测提取液中残留物的含量。实际测得的残留物含量（回收量）与材质试样上实现涂布的残留物含量之比就是取样百分回收率。
由于擦拭属于人工操作会有重复性和重现性误差，一般每人需要重复三次回收率研究，每个残留物和表面类型的组合至少需要两个人进行擦拭回收率研究。研究建立的回收率能够经过不同的方式定义，但一般定义为任意一个擦拭取样人员的最低平均回收率。
表面残留物的回收率还取决于拭子头部或擦拭巾的大小和形状以及把手的性质（例如弹性和长度），所有选取不同的拭子可能回收率会不同。

样品检测：TOC的检测由第三方有资质的实验室进行检测，并提供检测报告，故不涉及TOC检测方法的确认。
擦拭法取样的回收率一般至少达到50%或以上，但需要在清洁验证中对残留限度或分析结果用测得的回收率作为修正因子进行结果的修正；如果回收率能达到70%或者更高，则能够在清洁验证中不用测对残留限度或分析结果进行修正。

8 验证测试 / QULIFICATION TEST

见测试程序表格

9 合格标准 / ACCEPTANCE CRITERIA
- 同一涂布水平的回收率结果的允许误差一般是RSD<20%
- 擦拭取样法回收率≥50%，且≤120%
- 满足验证测试表中定义的其它标准

10 参考法规与文件 / DOCUMENT REFERENCES
文件编号 Reference No.
文件标题 Title
005037
Cleaning Validation Requirements
EU GMP Annex 15
Qualification and Validation
FDA 21 CFR Part 820.70
Production and process controls
Technical Report No. 29 (Revised )
Points to Consider for Cleaning Validation, FDA
《科技资讯》， (16): page 205-206
在清洁验证中不同材质容器回收率对比分析

序号No.
步骤
Step description
接受标准
Acceptance criteria
结果
Observed results
C/NC
备注
Remark
1
准备校验过的合适量程的容量瓶或者量筒
记录仪器的编号

确认使用日期在校验有效日期内

仪器编号：

………………………
校验有效期：

………………………

2
准备校验过的合适量程的天平
记录仪器的编号

确认使用日期在校验有效日期内

仪器编号：

………………………
校验有效期：

………………………

3
用天平在杯中称取约0.025g的化学纯蔗糖 ()，用量筒量取1L生产日常配液使用的超纯水(Sample Water)，加入烧杯用搅拌棒充分搅拌直至溶解，配制成储备液 (Sample Stock)
(储备液的TOC理论浓度约在10 ppm左右，即接近清洁验证允许的残留限度浓度)
附上使用的蔗糖的COA

记录实际称取蔗糖的重量

搅拌至目测烧杯底部无可见蔗糖颗粒
蔗糖的COA见：

………………………

蔗糖的重量：

………………………

目测烧杯底部………………
肉眼能够见的蔗糖颗粒

4
准备校验过的合适量程的移液枪
记录仪器的编号

确认使用日期在校验有效日期内
仪器编号：

………………………
校验有效期：

………………………

5
用移液枪吸取配制好的1ml的Sample Stock，直接加入处理过的低TOC取样瓶中，然后在瓶子中用量筒加入100ml Sample Water，迅速加盖轻轻晃动30s混匀，配制成对照液 (Sample Reference) ，操作中应防止外部TOC污染

再取1个低TOC取样瓶中仅量筒加入100ml Sample Water，迅速加盖后编号 Sample Water 作为空白

样品送第三方有资质的实验室进行TOC浓度检测

( Sample Reference的TOC浓度约为 0.1 ppm左右)
按照操作要求进行操作和编号
按照操作要求进行操作和编号

□ 是 □ 否

6
准备至少8块coupon，材质必须和清洁验证中设备表面材质相类似并尽可能的平整，清洁后用超纯水进行大量冲洗，然后置于超净层流工作台中放置目测完全晾干

（coupon的材质可能有玻璃、塑料、硅胶、不锈钢等）
记录选用coupon的材质
选用Coupon的材质：

…………………………

7
用移液枪吸取配制好的1ml的Sample Stock，尽量小滴并均匀的滴在清洗验证中设计点样面积大小的coupon表面，如下图：

共准备6个涂抹过储备液的coupon，置于超净工作台中直至晾干，晾干过程中注意保护coupon表面防止外部TOC污染

另外，准备2块洗净的没有涂抹过Sample Stock的coupon作为空白

准备至少6个处理好的coupon和2个空白coupon

记录实际点样的面积大小

共准备了………个处理好的coupon

和………个空白coupon

点样面积为：

□ 5cm×5cm=25cm2

□ 10cm×10cm=100cm2

□ 其它 ………………

8
准备至少8根新的低TOC无纺布取样拭子，和至少8个处理过的低TOC取样瓶
附上低TOC无纺布取样拭子的技术说明
低TOC无纺布取样拭子的型号：

…………………………
低TOC无纺布取样拭子的技术说明见：

…………………………

9
取出1个新的低TOC无纺布签，将拭子头稍稍用Sample Water 润湿，目测湿润即可，不要到饱和

将无纺布签的一面按在取样表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭表面数次，在向前移动的同时将其从一边移到另一边，擦拭过程应覆盖5cm×5cm的coupon表面；然后翻转TOC无纺布签，用同样的方法与前次擦拭移动方向垂直

涂抹完成后，在TOC瓶颈处折断拭子头，使拭子头掉入TOC取样瓶中，然后在瓶子中用量筒加入100ml Sample Water，迅速加盖轻轻晃动30s混匀，操作中应防止外部TOC污染

以上操作需要有2个操作人员，每个人分别重复3次对 6块处理过的coupon进行涂抹取样获取样本，和未处理过的2个coupon上擦拭获取空白，在TOC取样瓶上编号如下：
第1个操作员：Sample 1-1，1-2，1-3，Sample Blank 1
第2个操作员：Sample 2-1，2-2，2-3，Sample Blank 2

所有8个样本送第三方有资质的实验室进行TOC浓度检测

按示意图和操作方法进行涂抹取样，而且对低TOC取样瓶上已经按照要求进行编号

按照操作要求进行操作和编号

是 □ 否 □

10
获取第三方实验室出具的检测报告
附上第三方实验室检测报告
第三方实验室出具的报告见

…………………………

11
按照TOC检测报告上的结果，在表1中分别计算2个操作人员的人均回收率

计算总体RSD

计算最小的平均回收率

所有回收率 ≥50 % 且 ≤120 %

总体R S D < 2 0%
最小人均回收率：

…………………………

Overall RSD：

…………………………

步骤/No.
偏差/Anomaly Reference

测试操作人/Test performed by:
审核人/Reviewed by:
日期/Date

表1/Table 1
操作人
Operator
样本编号
Sample NO.
TOC测试值
TOC Test
(mg/L)
TOC空白值
TOC Blank
(mg/L)
TOC修正值
TOC Corrected
(mg/L)

(TOC测试修正值TOC Corrected = TOC测试值TOC Test – TOC空白值TOC Blank)
总体TOC平均修正值
Overall TOC Corrected Mean
(mg/L)
总体标准偏差
Overall SD
(mg/L)
总体相对标准偏差
Overall RSD
(%)
回收率
Recovery Rate
(%)

(回收率Recovery Rate = TOC修正值 TOC Corrected / （样本参考值 Sample Reference –超纯水 Sampler Water）* 100%)
人均回收率
Average Recovery Rate per Operator
(%)
1
Sample 1-1

Sample 1-2

Sample 1-3

2
Sample 2-1

Sample 2-2

Sample 2-3