斯钙素2的表达与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后不良相关_邓丽.pdf

第 卷 第 期 年 月川北医学院学报（：.）.，.：.基础研究基金项目：四川省南充市应用技术研究与开发专项（）作者简介：邓丽（），女，硕士，住院医师。：通讯作者：刘钧。：斯钙素 的表达与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后不良相关邓丽，刘钧，唐林红（川北医学院第二临床医学院南充市中心医院病理科；川北医学院病理学教研室；南充市高坪区人民医院甲乳外科，四川 南充）【摘要】目的：探讨斯钙素（）在宫颈鳞状细胞癌（）的表达，并分析宫颈 组织中 与斯钙素（）表达的相关性，分析其与临床病理特征的关系，宫颈 化疗前后表达的变化，以及其表达与预后的关系。方法：采用免疫组化法（二步法）检测 例宫颈（其中包括 例化疗处理前后对照，例未进行任何治疗的根治性手术切除病例）、例高度上皮内病变（）、例低度上皮内病变（）、例慢性宫颈炎组织中 蛋白的表达水平，检测宫颈 例（其中包括 例化疗处理前宫颈活检，例未进行任何治疗的根治性手术切除病例）组织中 和 的表达，分析 的表达与临床病理特征的关系及 与 表达的相关性。结果：蛋白在宫颈、慢性宫颈炎阳性表达率依次降低，阳性率分别为.（）、.（）、.（）、.（），宫颈 与 表达水平比较，差异无统计学意义（.），其余指标比较，差异均有统计学意义（.）。宫颈 组织中 阳性率高于（.），且两者的表达正相关（.，.）。的表达与淋巴结转移相关（.）；与患者年龄、分化程度、分期、癌组织浸润深度均无关（.）。同一宫颈 患病群体化疗后 的表达降低（.），在有化疗反应的宫颈 组织中的表达均低于无化疗反应（.）。表达水平与生存率负相关（.）。结论：在宫颈 组织中高表达，其表达与淋巴结转移、化疗耐受以及预后相关，有望成为宫颈 新的治疗靶点。【关键词】宫颈鳞状细胞癌；斯钙素；斯钙素；化疗；预后【中图分类号】.【文献标志码】，（，；，；，）【】：（）（）（），：（）（，），（），（）（，），：，.（），.（），.（）.（），（.），邓丽，等 斯钙素 的表达与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后不良相关 （.）（.），（.，.）（.），（.）（.），（.）（.）：，【】；宫颈癌居全球女性高发恶性肿瘤的第 位，疾病负担严重，发病率和死亡率居高不下。宫颈癌的发生、发展、转归过程涉及多种基因的异常表达，早发现、早诊断及早治疗需要更准确、更敏感的肿瘤标志物。斯钙素（，）是一种糖蛋白激素，最早在硬骨鱼中发现，由鱼类独有的内分泌腺斯坦尼小体所分泌，是鱼类的钙磷代谢调节因子。广泛表达于人类和其他哺乳动物的各种组织中，目前包括 和 两个亚型。基因位于染色体 上，包含 个外显子，可编码 个氨基酸，主要见于肌肉、肝脏、肾脏、前列腺、甲状腺、胰腺、神经、卵巢等组织中。基因位于染色体 上，含有 个氨基酸残基，主要在肾脏、心脏、胰腺和脾脏表达。多以自分泌和 或旁分泌的形式参与机体钙磷代谢、骨发育、氧化应激、抗炎、血管生成、妊娠、哺乳、神经保护等一系列过程，且与多种肿瘤的发生、发展及预后相关。以及 在肿瘤中的表达不一致，多数在肿瘤中表达上调，少数在肿瘤中表达降低，在乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌等肿瘤中的作用还有争议。目前 和 联合检测鲜见报道，与化疗的关系报道则更少。本研究拟探讨两者在宫颈 的联合检测，探索宫颈 新的生物标志物以及治疗靶点。资料与方法 一般资料选取 年 月至 年 月川北医学院附属医院收集的 例根治性手术切除后经病理确诊的宫颈 病例，患者未同时存在其他原发性肿瘤，其中 例是术前活检证实宫颈，经化疗治疗后再手术切除并有癌组织残存的病例（化疗前后对照），另外 例术前术后均未经任何处理。例宫颈上皮内病变组织，其中高度鳞状上皮内病变（，）、低度鳞状上皮内病变（，）各 例；例因子宫肌瘤切除全子宫并诊断为慢性宫颈炎。所有病例苏木精伊红染色法（，）染色后均由两位资深病理医师诊断。例宫颈 患者中，年龄（.）岁。以中位年龄 岁为界，例 岁，例 岁；病理组织学分型（术前化疗的患者根据术前活检组织分型）例角化型，例非角化型；根据宫颈癌 年国际妇产联盟（）分期，分 例早期（期）、例晚期（期）；例有淋巴结转移，例无淋巴结转移；浸润深度 组（例），组（例）。根据住院病历所留的联系方式，以电话对患者或其家属进行随访，随访时间 个月，主要询问患者是否存活，死亡时间及死亡原因等，排除意外死亡。本研究获得川北医学院附属医院伦理委员会批准。免疫组化方法及判读标准所有蜡块均切 厚切片 张，分别进行 染色、免疫组化染色。应用 二步法进行免疫组化，兔多克隆抗体（美国 公司）稀释浓度为 ，兔多克隆抗体（美国 公司）稀释浓度为 ，染色步骤按试剂盒说明书严格操作。乳腺非特殊型浸润性癌组织设置为 阳性对照，人肾组织设置为 阳性对照，阴性对照用磷酸缓冲盐溶液（）代替一抗。判读标准：、蛋白以细胞浆和细胞膜出现淡黄、棕黄或棕褐色颗粒为阳性表达。免疫组化评分方法：（）阳性染色范围：以阳性染色细胞的百分比划分，分（无任何细胞着色）、分（）、分（）、分（）、分（）（）着色强度：分（无着色）、分（淡黄色）、分（棕黄色）、分（棕褐色）。结果将两者分数相乘。切片观察由两位资深病理医师进行评分，最后取两者平均分，分阴性，分阳性。统计学分析采用 .软件进行统计分析。等级资料以频数表示，组间比较使用 检验；计数资料以（）表示，组间比较采用 检验，相关性采用 等级相关性分析，生存分析 第 卷 第 期 年 月 川北医学院学报（：.）.，.采用 检验，影响因素采用 比例风险回归模型分析。.为差异具有统计学意义。结果 不同宫颈组织中 的表达 蛋白阳性定位于细胞质和细胞膜中。蛋白在宫颈、慢性宫颈炎组织中阳性表达率依次降低，阳性率分别为.（）、.（）、.（）、.（），宫颈 与 表达水平比较，差异无统计学意义（.），其余表达水平比较，差异均有统计学意义（.）。见图 及表。图1STC蛋白在不同宫颈病变组织中的表达A.宫颈SCC组织HE染色（200）；B.宫颈SCC组织中STC1的表达（200）；C.宫颈SCC组织中STC2的表达（200）；D.HSIL组织中STC2的表达（200）；E.LSIL组织中STC2的表达（200）；F.慢性宫颈炎组织中STC2的表达（200）。ABCDEF表 在不同宫颈病变组织中的表达（）病变类型阳性率（）值 值宫颈（）（）（）（）（）（）慢性宫颈炎（）（）为宫颈 与 表达水平比较；为宫颈 与 表达水平比较；为宫颈 与 表达水平比较；为 与 表达水平比较；为 与慢性宫颈炎表达水平比较；为 与慢性宫颈炎表达水平比较。宫颈 组织为 例化疗前活检组织和 例未接受化疗的术后病例。宫颈 组织中 与 表达的相关性 蛋白在宫颈 组织中阳性表达率为.（），宫颈 组织中 阳性率高于，差异具有统计 学 意 义（.，.）。例 阳性的宫颈 组织中 例存在 阳性表达，相关性分析得出，在宫颈 组织中、表达正相关（.，.），差异有统计学意义。见图 及表。表 宫颈 组织中、表达的相关性阳性阴性合计 值 值阳性阴性合计 宫颈 组织中 的表达与临床病理特征的关系 的表达与淋巴结的转移相关，差异具有统计学意义（.）；而与患者年龄、分化程度、分期、癌组织浸润深度均无关（.）。见表。表 宫颈 组织中 的表达与临床病理特征的关系（）特征例数阳性率（）值 值年龄（岁）（）（）分化程度 角化型（）非角化型（）分期 早期（）晚期（）淋巴结转移 有（）无（）浸润深度（）（）（）宫颈 组织化疗前后 的表达差异性变化 化疗后在宫颈 组织中的表达阳性率是.（），低于化疗前.（），差异具有统计学意义（.）。在有化疗反应（肿瘤胞质减少伴嗜酸性变及空泡化、胞核增大多形性明显、肿瘤细胞坏死、慢性炎细胞浸润、泡沫样组织细胞或异物巨细胞聚集、间质纤维化）的宫颈 组织中阳性率为.（），低于无化疗反应的阳性率.（），差异具有统计学意义（.）。见表 及表。邓丽，等 斯钙素 的表达与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后不良相关表 宫颈 组织化疗前后 的表达化疗前化疗后阳性阴性合计 值阳性阴性合计表 的表达与宫颈 组织化疗反应的关系化疗反应阳性阴性合计值 值有无合计 宫颈 组织中 的表达与患者生存率的关系对宫颈 患者进行术后随访 个月，共获访 例宫颈 患者，其中 例术前术后未进行化疗（年 月至 年 月），总生存率.（），生存时间（.）个月。阳性表达生存率.（），生存时间（.）个月，阴性表达生存率.（），生存时间（.）个月。例术前进行化疗（年 月至 年 月），总生存率.（），生存时间（.）个月。阳性表达生存率.（），生存（.）个月，阴性表达生存率.（），生存（.）个月。生存曲线显示在术前未进行化疗和术前进行化疗的宫颈 组织中 的表达与患者的生存率均有相关性（.）。见表、图 及图。表 与术后随访资料术前无化疗总人数 生存人数 生存率（）术前化疗总人数 生存人数 生存率（）阳性阴性合计生存函数累积生存函数1.00.80.60.40.20.00.0020.0040.0060.0080.00100.00时间（月）组别阳性阴性阳性-删失阴性-删失图2STC2在术前无化疗宫颈SCC组织中的表达与患者生存率的关系（P=0.040）生存函数1.00.80.60.40.20.00.0020.0040.0060.0080.00100.00组别阳性阴性阳性-删失阴性-删失图3STC2在术前化疗宫颈SCC组织中的表达与患者生存率的关系（P=0.045）累积生存函数时间（月）讨论我国宫颈癌的死亡率仍呈上升趋势，因此仍需寻找更准确、更敏感的肿瘤标志物以指导临床诊疗及预后判断。是一种糖蛋白激素，目前有两个亚型，和，多以自分泌和 或旁分泌的形式参与机体的多种代谢过程，并且其表达与人类多种恶性肿瘤具有相关性，与肿瘤的增殖、侵袭转移密切相关。等通过体外和体内实验，发现 在头颈部鳞状细胞癌的过表达使细胞周期停滞在 期，促进细胞增殖、侵袭和迁移；相反，沉默 可以抑制这些过程；并且 通过 信号通路控制肿瘤的转移。肿瘤的侵袭和转移与上皮间质转化（，）密切相关。等研究显示外源性 的稳定表达促进了 的发生，钙黏蛋白表达上调，而 钙黏蛋白的表达降低，细胞获得高度的侵袭性。通过激活 和 信号通路，促进 进展，增加结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。在恶性肿瘤中表达上调，且促进肿瘤的侵袭转移。本研究发现 从 慢 性 宫 颈 炎.阳 性 率 到 宫 颈.阳性率，符合慢性宫颈炎、上皮内病变进展为宫颈癌的演变过程，提示 可作为肿瘤标记物用于宫颈 的早期诊断。同时，本研究还显示 的表达与淋巴结转移相关，而与年龄、分化程度、分期、浸润深度无相关性，与 等研究结果基本一致。究其原因可能为：受缺氧和炎性刺激，核因子（，）上调 的表达，激活下游缺氧诱导因子（，）、信号通路，增加肿瘤相关因子的转录活性基质金属蛋白酶 第 卷 第 期 年 月 川北医学院学报（：.）.，.（，）、细胞周期蛋白（）、淋巴细胞瘤（，）、钙黏蛋白等，促进肿瘤的发生发展。本研究发现，蛋白在宫颈 组织中阳性表达率为.，低于 阳性率，推测 的敏感性优于，但还需进一步研究证实这一推测，目前有研究证实胃癌患者血清中、的敏感性优于 和，但还未见、在肿瘤组织中敏感性方面两者的比较研究。和 虽是同构体，但它们在染色体定位、结构、分子量、体内分布和功能等方面都有所不同，但本实验进一步分析发现，宫颈 组织中 与 的表达强度呈正相关，与 等在胃癌的研究结果类似，提示 与 在宫颈 的发展过程中可能受到相同的调控机制。肿瘤细胞生长迅速会导致内部血供不足而缺氧，糖代谢途径由有氧氧化转变为糖酵解，乳酸和丙酮酸增加，从而刺激 的表达，直接与、的启动子结合，促进表达。实体肿瘤的生长有赖于血管网的建立和形成，而 和 均可通过 通路介导新生血管的形成，促进肿瘤的生长。本研究中对比同一患病群体化疗前后 的表达发现，化疗可明显降低其表达。化疗反应疗效好的宫颈 组织 低表达，反之，化疗反应疗效差的宫颈 组 高表达，提示 可能参与化疗耐受。等发现在顺铂耐药的宫颈癌细胞中，的表达水平明显升高，且 通过调节 信号通路活性改变顺铂的敏感性和耐药性；另有研究发现 通过 信号通路上调 糖蛋白诱导结直肠癌细胞对奥沙利铂的耐药；等发现 诱导的 糖蛋白和 蛋白表达水平升高，导致了肝癌的化疗耐药，而通过 阳离子聚酯可以克服 介导的耐药；的缺氧保护作用可能在实体肿瘤的放化疗耐受中发挥效应。参与多种恶性肿瘤的化疗耐药，抑制 的表达可能为化疗耐受的患者带来新的治疗方向。本研究结果显示宫颈 组织中 蛋白表达与术前有无化疗患者的生存率均有相关性，提示 与宫颈 的预后有关，可能是影响宫颈 的独立的预后因素。与多种恶性肿瘤患者的预后相关，高表达提示患者预后较差，多因素 回归分析 显 示，是 结 直 肠 癌 患 者 总 生 存 期、子宫内膜癌患者无复发生存期、男性乳腺癌患者无病生存期 的独立预后因素。等对实体肿瘤的 分析结果显示 表达升高提示肿瘤患者预后不良，可作为一种新的肿瘤标志物监测肿瘤的发生发展。综上，的表达促进宫颈 的发生发展，参与宫颈 的化疗耐药，与宫颈 的预后负相关，可能成为宫颈 诊断的新的肿瘤标志物以及治疗的潜在的新靶点。参考文献 李道娟，师金，靳晶，等 宫颈癌的流行病学趋势 中华肿瘤杂志，（）：，（）：，：，（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）：丁晶晶，刘欣艳 在宫颈癌中的表达及其在预后判断中的价值 临床与病理杂志，（）：，（）：程瑜，胡长美，高敏，等 宫颈癌术后患者生活质量及延续性护理的需求分析 成都医学院学报，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：邓丽，等 斯钙素 的表达与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后不良相关 ，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，：沈小健 在宫颈癌表达的功能研究及其临床意义南京：南京医科大学，：，：，（）：，（）：，：（），（）：（收稿日期：修回日期：）（上接第 页），（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：王亦如，杜二球 宫颈癌组织中、及 的表达水平及意义 中国妇幼健康研究，（）：，（）：，（）：（收稿日期：修回日期：）本刊网址：.作者投稿系统：.邮箱：