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基因工程概论【实用文档】doc
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一、简述基因研究所取得主要成就，及其与基因工程创立与发展的关系。
1、基因学说的创立
孟德尔提出遗传因子学说到后来的摩尔根染色体理论,揭示了在染色体上基因的线性排列.
2、DＮA是遗传物质
从Avery的细菌转化实验到沃森和克里克揭示了ＤＮA的双螺旋模型及半保留复制机理，表明DＮA是遗传物质。
3、DNA是基因的载体
4、基因是细胞中ＲＮA及蛋白质的“蓝图”。
5、随着中心法则的提出和64种密码子的破译，基因碱基顺序与蛋白质氨基酸顺序得到对应。
6、随着基因克隆和DNA序列分析技术的发展,人们对基因的分子结构有了进一步的认识。
7、随着操纵子模型的提出,人们对基因的表达调控有了进一步的认识。
8、随着基因分离与克隆技术的不断改良与发展，基因组文库、ｃDＮA文库、分子探针、PCＲ等技术不断被人们运用。
9、目前，不仅能够分离天然基因,还能结合化学合成等方法，在实验室内进行基因的合成、构建，并进行相应的表达分析。
基因工程是在分子生物学和分子遗传学等学科综合发展的基础上诞生的一门新兴学科,它的创立和发展,直接依赖于基因及其分子生物学研究的进步,基因及其研究为基因工程的创立奠定了坚实的理论基础。
二、基因工程建立的三大理论基础和技术条件是什么？并简述其在基因工程中的应用.
1、三大理论基础：
（1）1940年艾弗里（Ｏ。Ａvery)等人通过肺炎球菌的转化试验证明了生物的遗传物质是DNA，而且证明了通过DNＡ可以把一个细菌的性状转移给另一个细菌;
(2）1９50年沃森(J。Ｄ。Watｓon)和克里克（Ｆ.Cｒicｋ）发现了ＤNＡ分子的双螺旋结构及DNA半保留复制机理;
(３）１960年关于遗传信息中心法则的确立。
2、三大技术条件:
(１）限制性内切核酸酶和ＤNA连接酶的发现;
（2)基因工程载体；
（3)大肠杆菌转化体系的建立。
3、应用：
通过限制性内切核酸酶和DNA连接酶，可以将切割得到的目的基因与载体连接在一起，经由大肠杆菌转化体系增值复制,为基因工程的后续研究提供基础材料。

三、什么是植物基因工程?什么是转基因植物?两者的关系如何?转基因作物对社会和经济发展的意义主要有哪些?
1、植物基因工程：用人工的方法，从不同生物中提取外源基因片段及载体ＤNA,经过体外切割、拼接和重组,然后采取某种方法，把重组后的带有外源基因的载体DNA引入植物细胞，并使其在植物细胞内进行复制和表达，以达到预期的改变受体植物细胞遗传特性的目的，此种过程即称为植物基因工程。
2、转基因植物：转基因植物是拥有来自其他物种基因的植物。该基因变化过程可以来自不同物种之间的杂交，但今天该名词更多的特指那些在实验室里通过重组DNA技术人工插入其他物种基因以创造出拥有新特性的植物。通过植物基因工程中的重组DNA技术可以获得多种类型的转基因植物。
3、利用现代基因工程培育的转基因作物不仅克服了传统育种技术的种种局限性，大大提高了转基因的效率,加快了种质改良进程,而且打破了物种间的遗传壁垒,拓展了新品种研发可选择的特征范围，同时人工设计加工基因的应用则更进一步扩大了可利用的种质资源。转基因作物是人类按自己的主观意愿有目的、有计划、有根据、有预见地进行遗传修饰过的生物体,是现代生命科学发展的结晶，是人类从认识自然到改造自然的跃迁，标志着人类社会已经步入定向驾驭生物遗传改良的新时代。转基因作物将在彻底解决资源匮乏、环境恶化、顽症肆虐、粮食短缺等诸多威胁人类生存的难题上成为关键技术和支柱产业.

四、植物基因工程的主要环节有哪些？每个环节的主要任务是什么？
１、从供体生物分离克隆目标基因  
(1） 目标基因的遗传学研究、分子标记定位，或目标基因编码蛋白的纯化与测序； 
（2）构建基因组或ｃDNＡ文库； 
（3） 获得目标基因的探针或引物信息； 
（4） 标记探针,筛选文库获得目标基因，或直接通过PCR扩增目标基因; 
（5）目标基因克隆到质粒载体，转化大肠杆菌,目标基因的测序和分析；
（6）目标基因及其编码蛋白的进一步功能验证和分子鉴定。
２、构建工程载体
（1）采用特定的限制酶切割，从克隆载体上切下并回收目标基因;
（2）选取合适的转基因载体，并完成启动子、终止子等元件的亚克隆装载；
(3）采用相同的限制酶切割载体，使其末端与目标基因的末端相匹配;
(4)将目标基因与载体进行连接，形成重组表达载体。
3、转化大肠杆菌和重组载体的分子鉴定
(１）制备大肠杆菌感受态细胞;
(2）将重组载体转化大肠杆菌;　
（3)通过抗生素筛选获得大肠杆菌阳性菌落;　
（4）通过PＣR、限制酶切图谱分析、测序验证等，确认重组载体.
4、植物转化
一般采用农杆菌介导的二元载体转化法，将含有目标基因的T-DＮＡ片段导入受体植物细胞中，并整合到其染色体上；或采用基因枪法,直接将含有目标基因的ＤNA转化受体植物的器官；或采用病毒接种侵染方式,将目标基因转化受体植物的活体植株。针对标记基因进行筛选,通过组织培养获得再生植株,或收获活体转化母株上的种子。
5、鉴定和筛选转基因植株
（1)对再生植株进行分子鉴定,如PCR扩增、GＵＳ染色或GFＰ荧光检测和Southern杂交检测,得到确认外源基因转入并整合的阳性植株;
（２)对阳性植株进行ＲT－ＰＣR、Nｏrｔhern杂交、Westeｒn杂交等检测，得到外源基因高水平表达的转基因植株；　
(３)对转基因植株进行生物学鉴定与检测，确认背景性状是否改变和目标性状的改良程度，选择和保留最符合要求的转基因植株；
(4）繁殖转基因植株,并跟踪进行分子检测和生物学检测,获得目标性状和背景性状均稳定遗传的株系。
6、 转基因植物的安全性评价和产业化
（1）中间试验：向国家申请，在控制系统内或者控制条件下进行小规模试验,并取得合格。
（2)环境释放：向国家申请,在自然条件下采取相应安全措施进行中规模的试验,并取得合格。
（３)生产性试验：向国家申请,在生产和应用前进行较大规模的试验，最终取得安全证书.
（4)大规模推广种植转基因植物。

五、结合植物基因工程的实际应用，谈谈发展植物基因工程的潜力,及植物基因工程发展中应注意的问题。
１、21世纪植物基因工程的发展前景将是非常美好和令人鼓舞的.从研究进展和发展趋势来看，其热点将突出表现在以下几个方面：
（１）对基因功能的认识
目前，许多国家纷纷投入巨资针对主要的农作物(如水稻)构建其突变体库,然后利用转座子标签（Ｔｒａｎsposｏn taggiｎg）、T—ＤNA标签(Ｔ ＤNA ｔaｇginｇ)或图位克隆（ｍap ｂaｓed　clｏniｎｇ）技术分离和克隆基园，完成对基因功能的认识，从而全面获得功能性新基因并占有新基因的知识产权.现在，谁先了解基因的功能，谁就拥有了该基因的知识产权。因此，世界各国对基因的争夺日趋白热化。
（2）单基因抗性向多基因抗性转化
分子标记辅助选择育种可以实现多种基因的累加，将不同的抗性基因组合到同一品种中,培育出多抗或广谱的种质或品种。
（3)品质性状改良
包括：水果蔬菜的延熟保鲜；有益于健康的植物油（如不饱和脂肪酸）；增加营养价值（如维生素）；富含抗癌蛋白质的大豆;高营养的饲料(如高赖氨酸、表达植酸酶的玉米)；作物加工品质、外观、蒸煮食味品质和营养品质等方面。
（4）由质量性状向数量性状的转移
目前，科学家们正在通过分子标记等技术寻找与重要数量性状（如产量、品质等)相关的数量性状基因座(ＱＴL）,最终有可能通过育种程序将这些ＱTL集中起来加以利用。作物大多数重要的农艺性状均表现为数量遗传的特点，如产量、熟性和品质等。数量性状是传统育种的难点,是育种效率的重要制约因素。近年来,由于分子标记技术的迅速发展特别是完整遗传连锁图谱的建立，人们能够将数量性状分解成易为遗传育种工作者操作的单个位点即QTL进行研究。
（５)转基因技术的改进与提高
目前,在植物基因工程研究中还存在许多技术问题，如受体系统中普通存在的转基因沉默、转化频率低、转化植株后代遗传不稳定、转基因工程作物的生态风险性以及操作简便，费用低廉的转化系统的研制等，这将是今后基因工程研究中的热点问题。
2、植物基因工程发展中应注意以下问题:
(1）安全性问题,即转入的某一特性对最终产品使用的影响,特别是作为食品，对人体有无不良影响。
(2）转基因 DＮA的移动性,即这种 ＤNA是否会转至其他作物或杂草,因而引起环境及生态问题。
（3)对其他农业措施的后效应，对发展中国家农业及农产品出口的影响等。
(4)公众的接受性,即心理因素。

基因工程的利与弊
王丽君 32130０3964
基因工程是一项很精密的尖端生物技术。可以把某一生物的基因转殖送入另一种细胞中，甚至可把细菌、动植物的基因互换。当某一基因进入另一种细胞，就会改变这个细胞的某种功能。基因工程对于人类的利弊一直是个争议的问题,主要是这项技术创造出原本自然界不存在的重组基因.但它为医药界带来新希望,在农业上提高产量改良作物，也可对环境污染、能源危机提供解决之道，甚至可用在犯罪案件的侦查.但它亦引起很大的忧虑与关切.当此科技由严谨的实验室转移至大规模医药应用或商业生产时,我们如何评估它的安全性？此项技术是否可能因为人为失控,反而危害人类健康并破坏大自然生态平衡?
观点：辨证的看待基因工程的利与弊
一.基因工程可用来筛检
遗传疾病乃是由于父或母带有错误的基因。基因筛检法可以快速诊断基因密码的错误；基因治疗法则是用基因工程技术来治疗这类疾病。产前基因筛检可以诊断胎儿是否带有遗传疾病,这种筛检法甚至可以诊断试管内受精的胚胎，早至只有两天大,尚在八个细胞阶段的试管胚胎。
二。基因治疗法
目前医学界正在临床试验多种遗传病的基因治疗法。最早采用基因治疗的是一种先天免疫缺乏症,又称气泡男孩症,患病婴幼童因为腺脱胺基因有缺陷，骨髓不能制造正常白血球发挥免疫功能，必须生活在与外界完全隔离的空气罩内.最新的治疗法是由病人骨髓分离出白血球的干细胞，把正常的酵素基因接在经过改造不具毒性的反录病毒，藉此病毒送入白血球干细胞，再将干细胞送回病人体内,则病人可产生健康的白血球获得免疫功能。这项临床试验,在美国的女病童证明很成功.
三.对农业界的贡献
基因转殖的细菌用处也很大,如改造细菌可以消化垃圾废纸,而这些细菌又可成为一种蛋白质的营养来源。基因转殖的细菌可带有人类基因，以生产医疗用的胰岛素及生长激素等。其实基因工程在农业上的应用，在某些方面而言并不稀奇.自古以来,人们即努力而有计划地进行育种,譬如一个新种小麦,乃是经过上千代重复杂交育成的.目前的小麦含有许多源自野生黑麦的基因。农人早在基因工程技术发明以前，就知道将基因由一种生物转移至另一生物。传统的育种也可大量提高产量。但是传统的育种过程缓慢,结果常常难以预料.基因工程可选择特定基因送入生物体内,大大提高育种效率，更可把基因送入分类上相差很远的生物，这是传统的育种做不到的。不久,在美国即将有基因工程培育出来的西红柿要上市了.这种西红柿含有反意基因（anｔisｅｎse geｎe)，能使西红柿成熟时不会变软易烂。
基因工程的弊端：
一.农林渔牧的应用-—生态环保的顾虑
目前全世界正重视发展永续性农业,希望农业除了具有经济效益,还要生生不息，不破坏生态环境。基因工程正可帮忙解决这类问题。基因工程可以改良农粮作物的营养成分或增强抗病抗虫特性。可以增加畜禽类的生长速率、牛羊的泌乳量、改良肉质及脂肪含量等。
二.基因转殖动物——爱护动物人士的关切
基因转殖动物对于生物医学研究，真是一大恩赐。科学家现在可将基因送入实验室的老鼠，以研究基因的表达调控功能.也可以把实验动物的某个基因刻意破坏，培育出患有类似人类遗传疾病的动物,以利治疗方法的探讨。美国一家公司已经培育出一种基因转殖老鼠，它在数个月大时会长出癌瘤,此项发明正在申请专利.但是爱护动物人士已表示严重关切，他们认为应该限制基因工程技术如此折磨虐待实验动物。
不久的将来，基因工程技术仍只限于转殖少数的基因，如此培育出来的生物仍将是我们熟悉的生物。但是有很多疾病及生物特征是由多数基因决定的，而且基因常常不是独立行使功能,它们会受环境的影响。譬如一组基因会造成某人罹患气喘，但症状受生活的环境影响很大。一个人罹患糖尿病的机率,也与环境因子（饮食条件)息息相关。一个天才钢琴家的音乐天赋包括听力及灵敏的双手巧妙地配合，这跟他的遗传基因、童年音乐的启发、生活环境等都有关连.所以我们在还未了解基因与环境因子的互动关系前，还不能奢望创造出具有超高智商的人,或是利用基因筛检法筛选出具有特殊天赋的孩子。
２1世纪是基因工程技术蓬勃发展的时代，基因工程的兴起是生物革命的必然结果,尽管基因工程的隐忧及争论众说纷纭,但其给人带来的好处是显而易见的。希望随着生物界的不断发展,使基因工程的安全性得到保证，让人们在生活的各个方面都能感受基因工程给人类带来的利益。
不久的将来,基因工程技术仍只限于转殖少数的基因，如此培育出来的生物仍将是我们熟悉的生物.但是有很多疾病及生物特征是由多数基因决定的，而且基因常常不是独立行使功能,它们会受环境的影响.譬如一组基因会造成某人罹患气喘，但症状受生活的环境影响很大。一个人罹患糖尿病的机率，也与环境因子(饮食条件）息息相关。在这个时代，基因工程的兴起是生物革命的必然结果,尽管基因工程的隐忧及争论众说纷纭，但其给人带来的好处是显而易见的.希望随着生物界的不断发展,使基因工程的安全性得到保证,让人们在生活的各个方面都能感受基因工程给人类带来的利益。
第一章 　基因工程
第一节 基因工程概述
基因工程的诞生和发展和基因工程的工具
学习目标
⑴简述基因工程的概念含义
⑵简述基因工程诞生历程
⑶认同基因工程的诞生和发展离不开理论突破和技术创新
⑷简述基因工程的原理
⑸说出DＮA重组技术的基本工具及其作用、特点
课前导学
一、基因工程的诞生和发展
1。理论基础
（1）艾弗里:证明了。
（2）沃森和克里克：阐明了。
(3）尼伦贝格等破译了。
2．工具基础
（1）酶:和、逆转录酶。（2)载体:等.
３．发展
(1)1９73~1976年为。 　　 　 　 　（２）19７7～１981年为.
(3）19８2年以后为。
４。诞生:科恩等将两种不同来源的ＤNA分子进行，并首次实现了在大肠杆菌中的表达，创立了改造生物的新技术——基因工程。
二、基因工程的概念
方法
在体外通过人工和等方法
原理
对生物的基因进行改造和
操作水平
水平
过程
包括基因的、___＿＿____＿_＿转移及在受体细胞内的
和等.．
目的
获得人类需要的。
三、基因工程的工具
ﻩ1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
（1）功能：只能特定的核苷酸序列，并在合适的反应条件下使每条链特定部位的之间的断开，从而切割DＮA分子。
（2）作用结果
①产生黏性末端：通过错位切，在两条链的部位切割形成.
②产生平口末端:通过平切，在两条链的部位切割形成。
2.ＤNＡ连接酶——“分子针线”
（1）功能：把DＮA分子这把“梯子”的扶手连接起来。
(２）结果：用限制性核酸内切酶切割质粒和外源DNA分子,并通过的连接,形成＿_____＿＿__＿___分子。
3．载体——运载工具
（１)功能：将导入受体细胞。
（2)种类:质粒、以及一些.
(3）质粒：来自于细胞中的一种很小的分子，是最早应用的载体。

质疑探究
1。切断和形成磷酸二酯键的酶分别有哪些？

2．原核生物中限制酶有何意义？细菌是如何防止自身ＤNA被限制酶降解?

3。在基因工程中,为什么要用同一种限制性核酸内切酶(如ＥcoＲⅠ）切割两种ＤNA分子呢？P１2实践中的图示切割后的片段可以连接成几种DNＡ分子?

4．从结构上分析为什么不同生物的ＤNA能够重组？

5。不同限制酶切割产生的黏性末端一定不同吗？

６。要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口?可产生几个黏性末端?

7．作为载体应具备什么条件？

8．天然的质粒都可以直接用做基因工程载体吗？为什么？

例题精讲
1．最早创立基因工程技术的科学家是 　 　　 　 　 　 　 　 　　 　
A．沃森和克里克 　 B.帕米特 C．科恩　 　D．穆里斯
2。科学家们经过多年的努力，创立了一种新兴生物技术-—基因工程，实施该工程的最终目的是( ）
A．定向提取生物体的DNA分子 ﻩＢ。定向地对DＮA分子进行人工“剪切”
C。在生物体外对DＮA分子进行改造 D．定向地改造生物的遗传性状
3．下列关于限制酶的说法正确的是 　 　 　 　 　 　 　　 　 　
Ａ．限制酶广泛存在于各种生物中,但微生物中很少
Ｂ．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
C.不同的限制酶切割ＤNA后都会形成黏性末端
D．限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键
4．下图所示是限制酶切割某DＮA分子的过程，从图中可知,该限制酶能识别的碱基序列及切点是
A．CTTAＡG，切点在C和T之间
B.CTTAAG，切点在G和Ａ之间
C．GＡAＴTC，切点在G和A之间
D。GAATTＣ，切点在Ｃ和T之间

5。在基因工程中,科学家所用的“剪刀”、“针线"和“运载体”分别是指
A.大肠杆菌病毒、质粒、ＤNA连接酶
Ｂ.噬菌体、质粒、DNA连接酶
C.限制性核酸内切酶、RNＡ连接酶、质粒
D.限制性核酸内切酶、DNＡ连接酶、质粒
6．作为基因的运输工具——载体,必须具备的条件及理由是　 　 　　 　 　　
A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制,以便提供大量的目的基因
B．具有多个限制酶切点,以便于目的基因的表达
Ｃ．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件
D．能够在宿主细胞中复制并稳定保存,以便于进行筛选
7。下图为DＮA分子的切割和连接过程。　
（1）ＥcoＲI是一种酶，其识别序列是，切割位点是与之间的键。切割结果产生的DNA片段末端形式为。
(2)不同来源DNA片段结合,在这里需要的酶应是酶，此酶的作用是在之间形成键，而起“缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是。

反馈矫正
1．在基因工程中,切割质粒和含有目的基因的DNA片段，需要使用（　 　 ）
A。同种限制性核酸内切酶 ﻩ ﻩ B．两种限制性核酸内切酶
Ｃ.同种DNＡ连接酶 　ﻩﻩ ﻩﻩＤ.两种DＮA连接酶
２．下列黏性末端中，属于同一种限制性核酸内切酶切割而成的是 　 ( )

A．①②Ｂ.①③C．①④D．②③
3．要使目的基因与对应的载体重组,所需的两种酶是　 　 　 　 　 　 　 ( 　　)
（１）限制酶(２）连接酶(3)解旋酶（4)还原酶
A、（1）(2）(3） 　B、（1）(2)(4) C、(１）(2) 　　D、（１）（3)
4．在受体细胞中能检测出目的基因是因为 　 　 　 　 　 　 　 　 （ ）
A、目的基因上有标记 　 　　　　 B、质粒具有某些标记基因
ﻩC、重组质粒能够复制　 　 D．以上都不正确
5．质粒是基因工程最常见的载体,它的主要特点是　 　 （ 　　 ）
①能自主复制ﻩ②不能自主复制 ③结构很小 ④是蛋白质ﻩ⑤是环状ＲＮAﻩ
⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居”
A、①③⑤⑦ B、②④⑥ C．①③⑥⑦　 D.②③⑥⑦
６．下列各项中，a、ｂ、c、ｄ代表的结构正确的是( ）

A．a一质粒RNA B。b一DNA连接酶 C．c一限制性内切酶Ｄ.ｄ——外源基因
7．下图为DＮA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核酸内切酶、ＤＮA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是

A．①②③④B.①②④③Ｃ．①④②③D。①④③②
8．限制酶是一群核酸切割酶，可辨识并切割DNA 分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI　, ＥcｏRI ， HindⅢ以及BgIⅡ的辨识序列： 　　　　 　　 　 ( )

箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNＡ片段末端，可以互补结合？其正确的末端互补序列为何?
Ａ.BａmＨI和BgIⅡ;末端互补序列—GＡTC－　
B．BaｍHI和ＥcoＲＩ;末端互补序列－ＡAＴT—
C．BａｍＨＩ和Hind Ⅲ；末端互补序列-GATC-
D.EcｏRI和Hind　Ⅲ;末端互补序列-AATＴ—
迁移创新
1．基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒,便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—Ｇ↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是
-↓GＡTC－.根据图示，判断下列操作正确的是( 　 )

A.质粒用限制酶Ⅰ切割,目的基因用限制酶Ⅱ切割
B。质粒用限制酶Ⅱ切割,目的基因用限制酶Ⅰ切割
C.目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割　 　
D。目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
2．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,圈l、圈２中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问

(１）一个图1所示的质粒分子经Ｓma　Ⅰ切割前后，分别含有个游离的磷酸基团。
（2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越。
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna Ⅰ切割，原因是.
（4）与只使用ＥｃｏR Ｉ相比较，使用BaｍＨ Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源ＤＮA的优点在于可以防止。
（5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入酶。
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。
（7）为了从ｃDＮＡ文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

第一章基因工程
第一节基因工程概述
基因工程的诞生和发展和基因工程的工具答案
课前导学:
一、基因工程的诞生和发展
1.ＤＮA是遗传物质 DＮＡ分子的双螺旋结构遗传密码
2.限制性核酸内切酶　　 ＤNA连接酶质粒
3．开始期发展期迅猛发展和实际运用期
4．体外重组定向
二、基因工程的概念
剪切拼接修饰 ＤNA分子分离复制表达基因产物的技术
三、基因工程的工具
识别 　 2个核苷酸磷酸二酯键不同相同断口处同种
DＮA连接酶重组DNＡ 　 外源基因噬菌体动植物病毒细菌环状DNＡ　 遗传标记基因目的基因插入位点低分子量
质疑探究

例题精讲 1-6 　Ｃ D B　　Ｃ 　D Ａ 　7。 （1）限制 　 GAATTC G A 　磷酸二酯键黏性末端　 (2）　E·colｉ DNA连接酶互补的黏性末端断口磷酸二酯键 　T4DＮＡ连接酶
反馈矫正 A B C B C D 　C A
迁移创新 1. A 2．（1）０、2（2)高(3）SmａⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因(4）质粒和含目的基因的外源DＮA片段自身环化(５）DNＡ连接（6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞（7)蔗糖为唯一含碳营养物质

当我被上帝造出来时，上帝问我想在人间当一个怎样的人,我不假思索的说,我要做一个伟大的世人皆知的人。于是,我降临在了人间。
我出生在一个官僚知识分子之家,父亲在朝中做官,精读诗书,母亲知书答礼,温柔体贴，父母给我去了一个好听的名字：李清照。
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“兴尽晚回舟,误入藕花深处。争渡，争渡,惊起一滩鸥鹭。”青春的我如同一只小鸟,自由自在,没有约束，少女纯净的心灵常在朝阳小，流水也被自然洗礼，纤细的手指拈一束花,轻抛入水，随波荡漾,发髻上沾着晶莹的露水，双脚任水流轻抚。身影轻飘而过，留下一阵清风。
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最后，香消玉殒，我在痛苦和哀怨中凄凉的死去。
在天堂里,我又见到了上帝。上帝问我过的怎么样，我摇摇头又点点头，我的一生有欢乐也有坎坷，有笑声也有泪水，有鼎盛也有衰落。我始终无法客观的评价我的一生。我原以为做一个着名的人，一生应该是被欢乐荣誉所包围，可我发现我错了。于是在下一轮回中,我选择做一个平凡的人。
我来到人间，我是一个平凡的人，我既不着名也不出众，但我拥有一切的幸福：我有温馨的家,我有可亲可爱的同学和老师,我每天平凡而快乐的活着,这就够了。
天儿蓝蓝风儿轻轻，暖和的春风带着春的气息吹进明亮的教室，我坐在教室的窗前，望着我拥有的一切，我甜甜的笑了。我拿起手中的笔，不禁想起曾经作诗的李清照,我虽然没有横溢的才华，但我还是拿起手中的笔,用最朴实的语言，写下了一时的感受：
人生并不总是完美的，每个人都会有不如意的地方。这就需要我们静下心来阅读自己的人生,体会其中无尽的快乐和与众不同。
“富不读书富不久,穷不读书终究穷.”为什么从古到今都那么看重有学识之人?那是因为有学识之人可以为社会做出更大的贡献。那时因为读书能给人带来快乐。
自从看了《丑小鸭》这篇童话之后，我变了，变得开朗起来，变得乐意同别人交往，变得自信了……因为我知道：即使现在我是只“丑小鸭"，但只要有自信,总有一天我会变成“白天鹅"的，而且会是一只世界上最美丽的“白天鹅"……
我读完了这篇美丽的童话故事，深深被丑小鸭的自信和乐观所折服，并把故事讲给了外婆听，外婆也对童话带给我们的深刻道理而惊讶不已。还吵着闹着多看几本名着。于是我给外婆又买了几本名着故事,她起先自己读,读到不认识的字我就告诉她,如果这一面生字较多，我就读给她听整个一面.渐渐的，自己的语文阅读能力也提高了不少,与此同时我也发现一个人读书的乐趣远不及两个人读的乐趣大,而两个人读书的乐趣远不及全家一起读的乐趣大。于是，我便发展“业务”带动全家一起读书……现在，每每遇到好书大家也不分男女老少都一拥而上，争先恐后“抢书”，当我说起我最小应该让我的时候，却没有人搭理我。最后还把书给撕坏了,我生气地哭了，妈妈一边安慰我一边对外婆说：“孩子小，应该让着点。”外婆却不服气的说：“我这一把年纪的了，怎么没人让我呀？”大家人你一言我一语，谁也不肯相让……读书让我明白了善恶美丑、悲欢离合，读一本好书,犹如同智者谈心、谈理想，教你辨别善恶，教你弘扬正义。读一本好书，如品一杯香茶，余香缭绕。读一本好书，能使人心灵得到净化。书是我的老师,把知识传递给了我;书是我的伙伴，跟我诉说心里话;书是一把钥匙，给我敞开了知识的大门;书更是一艘不会沉的船,引领我航行在人生的长河中.其实读书的真真乐趣也就在于此处，不是一个人闷头苦读书；也不是读到好处不与他人分享,独自品位;更不是一个人如痴如醉地沉浸在书的海洋中不能自拔。而是懂得与朋友，家人一起分享其中的乐趣。这才是读书真正之乐趣呢！这所有的一切,不正是我从书中受到的教益吗？
我阅读，故我美丽；我思考，故我存在。我从内心深处真切地感到：我从读书中受到了教益。当看见有些同学宁可买玩具亦不肯买书时,我便想到培根所说的话:“世界上最庸俗的人是不读书的人，最吝啬的人是不买书的人，最可怜的人是与书无缘的人。”许许多多的作家、伟人都十分喜欢看书,例如毛泽东主席，他半边床上都是书,一读起书来便进入忘我的境界。
书是我生活中的好朋友，是我人生道路上的航标,读书，读好书，是我无怨无悔的追求。

基因工程试题A
一、名词解释(每题2分,共２0分）
１、转染:

２、质粒不亲和性:

３、cDNA 文库:

4、RACＥ：

5、基因工程：

６、RT—PCＲ

7、插入失活:

８、S-Ｄ 序列：

９、穿梭质粒载体:

1０、多克隆位点:

二、选择题(每题1分,共15分）
1（ 　）基因工程操作的三大基本元件是:（I　供体　ＩI 受体 IＩI 载体 IV 抗体　V 配体）
A　I +　ＩＩ +　ＩＩＩ
Ｂ　I + ＩII ＋ ＩV
C II + ＩIＩ + IＶ
D II　＋　IV +　Ｖ
Ｅ III + IＶ + V
２（ )基因工程的单元操作顺序是
A 增，转，检，切,接
B 切，接，转,增，检
C 接，转,增，检，切
Ｄ 检,切，接，增，转
E 切，接，增，转，检
3( 　）生物工程的上游技术是
Ａ 基因工程及分离工程
Ｂ　基因工程及发酵工程
C 基因工程及酶工程
Ｄ　基因工程及细胞工程
E　基因工程及蛋白质工程
4（　 ）下列对逆转录酶描述正确的是：
Ａ 依赖于ＲNA的ＤNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶
B 依赖于cDNＡ的ＤNA聚合酶或称为cDNA指导的ＤNA聚合酶
C 依赖于ＤNＡ的DＮA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶
Ｄ 依赖于RNA的ＲNA聚合酶或称为rNA指导的RＮA聚合酶
５( ）下列对限制性内切酶描述正确的是
Ａ限制性内切酶可识别任一的DNA序列
B 使用限制性内切酶时，有时可出现星活性
Ｃ 限制性内切酶可识别碱基数不超过5个
D　限制性内切酶切割碱基序列产生都是黏性末端
6 （ ）Ｔ　4　—DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是
A 2＇ —OH 和 5' －Ｐ
Ｂ　２'　-ＯＨ　和 3'　－P
C 3' －OH 和　2' －P
Ｄ 3＇ -OH 和 5' -P
E 5＇ —ＯＨ 和 3＇ -Ｐ
7（ 　 )下列有关连接反应的叙述,错误的是
Ａ 连接反应的最佳温度为1２—1６℃
Ｂ 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 １0％
C　连接反应缓冲体系的 ATＰ 浓度不能高于 1mM
D 连接酶通常应过量 ２-5 倍
E DTT 在反应中可加也可不加
８( )下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?
A质粒
B黏粒
C酵母人工染色体(YAC）
Dλ噬菌体

9(　 ）载体的功能是（I 运送外源基因高效进入受体细胞　ＩI 为外源基因提供复制能力 IＩI 为外源基因提供整合能力）
A Ｉ
B Ｉ ＋　ＩI
C I +　III
Ｄ IＩ　+　III
E I +　ＩI　＋　IIＩ
10（ 　 ）考斯质粒（coｓmｉd)是一种
A 天然质粒载体
Ｂ 由入-DＮA　的 cos 区与一质粒重组而成的载体
C 能裂解受体细胞的烈性载体
Ｄ 具有溶原性质的载体
Ｅ 能在受体细胞内复制并包装的载体
１1( ）下列有关基因的描述，错误的是
A 蛋白质是基因表达唯一的产物
B 基因是DNＡ链上具有编码功能的片段
Ｃ 基因也可以是RNＡ
D基因突变不一定导致其表达产物改变结构
１2（　 )关于ｃＤNA的最正确的提法是:
Ａ　同mRNA互补的单链DＮA 　 Ｂ 同mRNA互补的双链ＤNA
Ｃ　以mRNA为模板合成的双链DNA　 　　 Ｄ以上都正确

1３( )某一重组 ＤNA （　6。2 ｋb ) 的载体部分有两个 SｍaI 酶切位点。用 ＳmaI 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合,该重组分子插入片段上的 SｍaI　酶切位点共有
A　5 个
Ｂ　4　个
C 3 个
D ２ 个
14（ 　） 同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在,电泳时，它们的迁移速率是：
　 A　OC DNA>SC DNP>LＤNＡ 　　 B　　ＳC DNA〉L DNA>OC DＮA
C　　L　ＤNA>OC DNA〉SＣ DNＡ D 　SＣ DNＡ＞ＯＣ DＮA〉L　DNA

１５（ ) cDNA　法获得目的基因的优点是
A 成功率高
Ｂ 不含内含子
C　操作简便
D 表达产物可以分泌
Ｅ 能纠正密码子的偏爱性
三、简答题（每题5分,共２5分）
1、什么是包涵体?

2、PCR反应体系包括哪些内容?基本反应过程是什么？

3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响?

４、作为基因工程载体必须具备的基本条件是什么？

5、基因工程诞生的理论基础是什么?

四、论述题（每题10分，共40分）
1简述载体构建的一般过程

2大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么？

3如何有效地提高外源基因的表达效率？

４试述３′ＲACE技术原理和方法

基因工程试题标准答案及评分标准A
一、选择题（每题1分,共15分）
1、A　2、A 3、 Ａ 4、A　 5、B 6、D　7、Ｅ 8、C 9、 E　 1０、B
１１、A 12、C 　１3、D １4、Ｂ 15、B
二、名词解释(每题2分，共２0分）
1、转染:专指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体ＤＮA分子的生命过程。
2、质粒不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象.
3、cＤNA文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDＮA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。
4、RACE：是一种通过PCR进行ｃDNＡ末端快速克隆的技术,是以mRNA为模板反转录成cDNＡ第一链后用ＰCR技术扩增出某个特异位点到3，或5,端之间未知序列的方法。
5、基因工程：在分子水平上的进行的遗传操作,指将一种或多种微生物的基因或基因组提取出来,或人工合成基因，按着人们的愿望,进行严密的设计，经过体外加工重组,转移到另一种生物体的细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。
６、RT-PCR:先用逆转录酶作用于mRNA,以寡聚ｄT为引物合成cDNA第一链,然后用已知一对引物,扩增嵌合分子,这种方法称为逆转录PＣR
7、Ｉｎsert iｎactｉon：即插入失活，基因工程载体上的某些选择标记基因常常含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点，在该位点用相应的限制性内切酶处理，并将外源DNA片段插入该位点，则插入的外源DNA片段将破坏原有基因的读码框,往往导致原有的选择标记基因无法翻译表达，或即使翻译表达,形成的也是丧失了原有生物活性的蛋白质，这一现象称为插入失活。。
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