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氯沙坦和辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏NF【摘要】 目的 观察链脲佐菌素诱导的糖尿病Wistar大鼠在糖尿病对照、糖尿病分别用氯沙坦、辛伐他汀以及用辛伐他汀和氯沙坦联合治疗的4种条件下肾脏NF-B、PKC 及 PDGF-B表达的情况，以阐明NF-B、PKC 及 PDGF-B 在糖尿病大鼠肾脏中的变化和药物作用的可能机制。方法 用放射免疫法测尿白蛋白并计算12h尿蛋白排泄率，同时测FBG、血胆固醇、血甘油三酯、血肌酐。肾组织切片HE染色镜下观察糖尿病肾脏常规病理变化。用SABC免疫组化方法检测各组肾小球、肾小管NF-B、PKC 及 PDGF-B三种蛋白的表达情况。用图像采集分析软件对免疫组化染色情况进行定量分析。结果 糖尿病8周末，NF-B、PDGF-B及PKC在肾组织的表达显着增高。HE染色未见糖尿病肾病特有的结节型或弥漫型肾小球硬化表现，但糖尿病对照组可见明显的肾小管上皮细胞的空泡样变性，而正常或药物治疗组未见相应改变。UAER高达90g/min以上，明显高于正常对照组。辛伐他汀和氯沙坦各自单独治疗均可使以上指标的表达显着抑制，而且辛伐他汀的治疗作用独立于其降脂作用，但均达不到正常对照水平，两药联合使用可使表达水平进一步下降和改善。结论 NF-B、PDGF-B及PKC的表达对糖尿病肾病起着重要的作用。氯沙坦的肾脏保护作用不同于脂类代谢的作用、氯沙坦和辛伐他汀的联合应用可以更好地保护肾脏，但它们真正的作用机制有待进一步的研究。 【关键词】 氯沙坦 辛伐他汀 糖尿病肾病 蛋白激酶C 血小板衍化生长因子-B链 . 【Abstract】 Objective The excessive expressions of TGF-，VEGF in renal tissue of diabetic rats has been reported recent years， and the changes could be inhibited with losartan and fluvastatin. But exact action mechanism is not very clear. To research the effects of NF-B、PKC and PDGF-B on the progression of diabetic nephropathy and the renoprotective mechanism of losartan and Simvastatin on Streptozotocin-induced diabetic Wistar rats， the study item wasThe 60 Wistar rats were randomly divided into following 5 groups： normal control (n=8，C group)， diabetes control (n=13， D group)， diabetic rats treated with losartan20mg/(kgd)， by gavage， n=13，D1 group， diabetic rats treated with simvastatin2mg/(kgd)， by gavage， n=13，D2 group and diabetic rats treated with losartan and simvastatin20mg/(kgd) and 2mg/(kgd)， by gavage， n=13，D3 group.All rats of diabetic groups were not treated with insulin or other anti-diabetes drugs. At the end of the 8th week of study， protein expressions of NF-B、PKC and PDGF-B in kidney were measured by immunohistochemistry， and 12-hour urine albuminuria excretion rate(UAER)，plasma cholesterol，plasma triglyceride and plasma creatinine were determined with biochemistry .Results After 8 weeks ，the expressions of NF-B，PKC and PDGF-B in diabetic renal tissue were significantly increased(P). The means of UAER in diabetic control group was also significant different from other groups and was more than 90g/min . The immunohistochemistry staining of NF-B，PKC and PDGF-B in kidney proximal tuble cytoplasma was more than that in glomeruler. Epithelial cells of kidney tuble were found vacuolar degeneration with hematoxylin-eosin staining(HE staining) by light microscopy . Both losartan and simvastatin could significantly inhibit the expressions of NF-B，PKC and PDGF-B in diabetic renal tissue(P)，but could not make it recovery. Combined treatment of losartan and simvastatin could inhibit the expressions of NF-B，PKC and PDGF-B further. In general， effects between losartan and simvastatin were not significantNF-B，PKC and PDGF-B play an important action on the progression of diabetic nephropathy. It shouldnt be ignored that they might injure kidney tuble . Both losartan and simvastatin have significant effect on diabetic nephropathy. The renoprotective effect of losartan is independent upon its effect of regulating lipoid metabolism. Combined treatment of losartan and simvastatin could further protect kidney from diabetic injury. But their exact mechanism remains to be further studied. 【Key words】 losartan simvastatin diabetes nephropathy nuclear factor-kappa B protein kinase C isoenzyme platelet derived growth factor-B chain 通过观察NF-B、PDGF-、PKC三种指标在STZ诱导的Wistar大鼠糖尿病对照、糖尿病用氯沙坦治疗、糖尿病用辛伐他汀治疗以及两药联合治疗4种条件下与正常对照大鼠肾小球、肾小管间质的免疫组化着色情况，进一步阐明肾脏局部RAS、PKC、NF-B、PDGF-之间的联系以及氯沙坦、辛伐他汀肾脏保护作用的可能机制。 1 材料与方法 材料与仪器设备 实验动物 正常健康Wistar大鼠60只雌雄各半，体重210230g，由山西医科大学实验动物中心提供。 试剂与相关药品 (1)链脲佐菌素在低温、酸性条件下进行，现配现用。氯沙坦、辛伐他汀由默沙东公司赞助。(2)免疫组化试剂：全套试剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。免疫组化试剂采用即用型SABC试剂盒，产品编号为SA1022。(3)放射免疫试剂盒：采用中国原子能科学研究院的白蛋白测定试剂盒查尿白蛋白排泄率。 仪器设备 (1)实验动物房、代谢笼及制模所需物品。(2)切片机、加样器、烤箱、医用微波炉、温箱等。(3)北京麦克奥迪图像技术有限公司的CMIAS系列-多功能真彩色病理图像分析系统，用于免疫组化切片图像分析。SAS 分析软件，用于数据统计学处理。(4)血糖测定采用德国乐康全血糖仪，血脂、血肌酐测定采用日立7170A全自动生化分析仪。 方法 动物分组、成模及用药 实验动物在分组前进行尿常规检查以除外实验前潜在的尿蛋白阳性情况。随机分为5组，正常对照组，糖尿病对照组、糖尿病氯沙坦治疗组、糖尿病辛伐他汀治疗组及糖尿病氯沙坦和辛伐他汀联合治疗组。除C组外，其余4组动物在空腹10h后按60mg/kg体重一次性腹腔注射链脲佐菌素溶液，72h后尾静脉采血，用血糖仪测定空腹全血血糖(FBG)，血糖/L并持续3天者确认为糖尿病大鼠1。实验期间大鼠自由饮水、进食，均不使用胰岛素及其他抗糖尿病药物治疗。每周查尿常规、尿酮体及空腹血糖1次。D1组每日每公斤体重20mg氯沙坦灌胃，D2组每日每公斤体重2mg灌胃，D3组两药合用，用量用法分别同D1、D2组。于成模后第8周末用代谢笼收集12h尿，放射免疫法测定尿白蛋白，同时查各组空腹血糖及血脂、血肌酐指标，全部动物逐个宰杀后取肾脏并反复用生理盐水灌洗后入10%的中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋。 HE染色及免疫组化染色 按常规程序进行HE染色。严格按SABC试剂盒要求进行免疫组化染色。NF-B及PKC按推荐条件行微波抗原修复。PDGF-B不用抗原修复直接进入下一步。选糖尿病对照组用PBS代替相应一抗作为阴性对照。 切片图像处理及原始数据采集2 免疫组化染色阳性结果判定标准：阳性组织呈棕黄色，阴性部分呈淡蓝色，分布于肾小球系膜细胞的细胞质、胞核、核膜及肾小管上皮细胞的细胞质等部位。用图像采集模块软件，每组切片随机采集30个视野，用组化分析模块软件对每个视野的肾小球及肾小管/间质进行阳性目标分割、视野编辑后，得出每个肾小球视野和肾小管/间质视野阳性目标面密度及阳性单位，而阳性面密度与阳性单位之乘积可以反映免疫组化阳性目标的总强度，即抗原的总量。为保证测定数据的准确性，对每个统计场的参数进行3次操作，最后取3次参数的均值作为统计场参数进入统计学分析的原始数据。 统计学分析 (1)成组设计的方法比较正常对照组与其他4组糖尿病鼠血脂及12h尿白蛋白排泄率指标，以确认血脂及UAER在实验过程中的变化。(2)NF-B、PDGF- B、PKC三种指标肾小球、肾小管/间质免疫组化阳性面密度、阳性单位及其乘积的变化。 数据均用均数标准差(xs)表示，使用SAS软件包进行方差分析、q检验、非参数2分布概率计算及t检验或t检验。 2 结果 整个实验过程未见糖尿病酮症酸中毒。 各组之间生化指标的变化 见表1。表1 各组血糖、血肌酐、血脂及UAER的变化 (xs)注：与C组比较：*P；与D组比较：P； D1、D2、D3组q检验：#P(方差分析F：，P) 由表1可知，成模后各糖尿病组大鼠空腹血糖水平明显高于正常对照组，而各糖尿病组之间血糖值差异无显着性。各组血脂指标及血肌酐比较差异无显着性。D组UAER在成模后第8周末明显高于正常对照组及糖尿病各处理组()。在成模后第8周末， D组的UAER水平已达临床微量白蛋白尿的水平3。同时糖尿病动物模型成模效果良好，无自然缓解倾向。糖尿病的3种处理方式均可使UAER水平明显下降()，且联合治疗组的疗效较单药疗效更好()。 HE染色镜下所见 普通光镜下各组大鼠的肾小球尚未见糖尿病肾病特有的结节型或弥漫型肾小球硬化表现，表明尚处于糖尿病肾病的较早期。但在糖尿病对照组可见明显的肾小管上皮细胞的空泡样变性，而正常或药物治疗组未见相应改变。 免疫组化染色结果 见表2。 整体免疫组化着色情况 在所有的糖尿病组染色强度及面积显着增强，其中肾小管着色明显强于肾小球，尤其是近曲小管。阴性对照未见非特异性着色，说明整个免疫组化实验中未受内源性过氧化物酶及生物素影响。糖尿病各处理组的着色面积及阳性单位均明显低于糖尿病对照组。 NF-B 在C组NF-B的着色主要分布于肾小球系膜细胞内皮细胞以及肾小管上皮细胞的细胞质中，着色强度微弱。D组的着色强度及面积明显增强，且核内着色明显增多。D1、 D2 、D3组的着色强度、面积均明显低于D组并接近C组(见表2)。表2 NF-B、PDGF-B与PKC在Wistar糖尿病大鼠肾脏的表达 (xs) 注：所有比较组的方差分析P，且非参数卡方分布作为近似分布所得概率值P=；q检验：a：与D组比P，b：与C组比P，c：与D3组比P，d：与D1组比P，e：与D2组比P PDGF-B 正常组可见着色主要集中在集合管、远端小管、近端小管细胞质中，肾小球系膜区表达极微量，糖尿病组着色面积及强度明显增大。氯沙坦治疗组优于辛伐他汀组，辛伐他汀对远曲小管PDGF-B表达的抑制较差(见表2)。 PKC 糖尿病对照组的阳性着色部位主要在近、远曲小管，肾小球系膜区也有明显染色。正常组在近曲小管刷状缘侧、肾小球系膜区亦有表达，但极微弱。糖尿病各服药组的表达强度明显低于糖尿病组并接近正常对照组，尤其是联合治疗组效果更显着(见表2)。3种抗原分子在各组肾组织表达的阳性面密度、阳性单位及面密度阳性单位数据及统计学处理结果(见表2)。 统计学分析 (1)表2所示各比较组内的C、D、D1、D2、D3 5个水平的方差分析有极显着性()。(2)q检验表明，几乎各比较组内D组的均数均明显高于其他组，糖尿病鼠的3种用药方式均可达到明显抑制肾组织NF-B、PDGF- B、PKC 3种指标表达的效果。D1与D2的效果基本相当，D2组的数据稍高，但大多数组无统计学意义。D3组的优势主要表现在肾小球PDGF-B阳性面密度与阳性单位乘积的明显抑制以及肾小管NF-B、PKC阳性面密度与阳性单位乘积的明显抑制(与D1、D2组比较)。(3)各比较组非参数检验用卡方分布作为其近似分布推算出的概率P=，表明无论肾小球或肾小管，在阳性面密度、阳性单位及二者乘积NF-B、PDGF- B、PKC指标在5个水平上的数据分布位置之间的差异具有非常显着性。 3 讨论 动物实验成模状况 STZ诱导的Wistar大鼠糖尿病动物模型的造模方法是糖尿病动物模型中较为成熟、稳定性好的方法之一4。在第8周末，不仅糖尿病成模良好无自然缓解而且12h UAER明显高于正常对照组及3个治疗组糖尿病肾病制模成功。光镜下糖尿病对照组可见明显的肾小管上皮细胞的空泡样变性，而肾小球未见结节样或弥漫型肾小球硬化表现，表明糖尿病肾小管损害更早且明显。 关于实验方法 免疫组化着色结果的判定是免疫组化技术的难题之一。传统的方法是半定量统计分析方法5。本研究采用北航图像处理系统，从图片的视野随机采集到最后的测量及计算，全部程序化工作，大大减少了主观失误的概率。阳性面密度描述了阳性目标的着色范围，阳性单位则描述了阳性目标的着色强度，二者乘积综合了面积与强度的综合效应。较以往的半定量结果更客观可靠。每个统计场参数均取3次的均值作为原始数据，强化了结果的稳定性和客观性。 关于结果的讨论 NF-B、PDGF- B、PKC在糖尿病肾损害中的变化及联系 高血糖主要通过3条途径引起细胞损伤。即：非酶糖基化、多元醇通路的激活和DAG-PKC途径的激活。Elisa法证实，在糖尿病大鼠520周时的蛋白质的非酶糖化终末产物在肾皮质中的含量增加1045倍6。糖化的肾小球基膜成分交联明显增多，交联使胶原纤维的直径增大，胶原纤维之间的孔隙增大，使滤过膜大小选择性丧失；另一方面交联的蛋白质与基膜中重要的阴离子蛋白聚糖成分硫酸乙酰肝素的亲和力下降，导致后者清除增多，造成基膜电荷屏障的破坏，所有这些因素均导致了尿蛋白排泄的增加，本研究UAER的结果已证实这一点。而滤过的白蛋白不仅堆积在系膜区可促进系膜细胞增殖及胞外基质的积聚，更重要的是进入肾小管的白蛋白在增加近曲小管上皮细胞重吸收的同时会增加溶酶体活性引起细胞损伤，本研究中的染色结果也证实了这一点。值得注意的是滤过的白蛋白可改变肾小管细胞生物学活性，诱导表达多种细胞因子和细胞介质，其中PDGF-B是重要的一员7。Nakagawa等学者的研究发现STZ诱导的糖尿病大鼠在成模后2周、4周及12周时，肾小球部位PDGF-B链及其受体的表达明显高于对照组和胰岛素治疗组，免疫组化染色表明其不仅分布于系膜细胞，而且也可见于脏层上皮细胞，同时糖尿病组肾小球的体积也明显增加。而且这种早期肾小球异常可以被PDGF系统抑制剂及胰岛素治疗所预防，说明PDGF系统在糖尿病肾病的早期损伤中占有十分重要的位置8。本研究糖尿病对照组PDGF-B的染色图片也强烈地证明了PDGF-B在近曲小管的大量沉积和表达，说明PDGF-B明确参与了肾小管间质纤维化的糖尿病损伤过程。余毅等学者的发现与本研究的结果完全一致，但其方法是ABC法，从理论上不如SABC的特异性和敏感性好9。 AGEs还可通过与巨噬细胞上特异性受体结合的途径激活细胞因子网络，主要是致炎性细胞因子和生长因子，其中也包括PDGF-B及TGF-。AGEs与其受体结合后导致细胞氧化张力增加，产生大量的氧自由基，而氧化张力的增高及高血糖引起的高渗透状态均是活化NF-B的重要因素。NF-B是一序列特异性的DNA结合蛋白，以非活性形成存在于细胞浆中，不具有细胞特异性。常态下NF-B的P65亚基与其抑制蛋白IB结合，覆盖了P50蛋白的核定位信号，形成NF-B与IB的复合体。NF-B在上述因素刺激下其复合物上IB先磷酸化，然后与NF-B解离发生核内转位。NF-B主要介导许多免疫炎性相关因子核转录和表达，导致肾脏局部单核淋巴细胞浸润。本研究中的一抗为P65亚基的抗体，免疫组化染色强烈提示糖尿病第8周末NF-B的激活状态，肾小球内可见阳性的核着色，近曲小管上皮细胞着色显着强于正常对照组。与文献报道一致10，11。这种NF-B的持续活化是肾小球及肾小管间质纤维化的重要原因。而Ag可直接诱导肾小管间质成纤维细胞的增殖与分化12，同时通过AT1受体活化NF-B，后者又可促进肾小管局部AgmRNA的表达，因此，NF-B本身的作用与正反馈刺激Ag合成的作用相互叠加共同造成肾小球及肾小管间质纤维化。大多的研究者多关注肾小球的硬化，而忽视肾小管的损伤，如前所述其实肾小管的损伤与AGEs介导的高滤过相伴随。本研究中HE染色结果和PKC、 NF-B及PDGF-B在近曲小管的大量着色提示细胞因子和蛋白激酶C系统对糖尿病肾脏肾小管损害的重要意义，近来较多的研究表明，肾小管间质纤维化比肾小球纤维化发生的更早，对肾功能损害意义更大。 NADH的大量产生是DAG-PKC途径活化的主要原因之一。持续血糖升高可激活多元醇通路中分布于肾小球系膜细胞、近曲小管上皮细胞及髓质集合管细胞的醛糖还原酶基因中的葡萄糖反应元件及渗透压反应元件，从而活化AR，使葡萄糖转变为山梨醇，山梨醇在脱氢酶的作用下转变为果糖，由于山梨醇不易透过细胞膜，而果糖很少进一步代谢，故造成细胞内果糖及山梨醇的堆积引起细胞内高渗状态，导致细胞肿胀破坏。在山梨醇脱氢变为果糖的过程中NAD+变为NADH的产生明显增多。范秋灵等学者的研究以PKC膜转移现象为观察目标13观察了糖尿病SD大鼠2周、4周及12周时PKC活性的动态变化情况，表明2周时PKC的细胞质活性低于正常对照，而细胞膜活性及细胞膜结合PKC的百分比却明显高于正常对照，4周时PKC细胞质活性及细胞膜活性均明显增加，膜结合PKC百分比无变化，而12周时细胞质、细胞膜及膜结合PKC百分比均显着增高，同时伴尿蛋白排泄率的显着增高。目前的问题是哪种PKC亚型在起主要作用，Ishii等在糖尿病肾组织中证实是PKC异构体增多，而且选择性阻断PKC可明显降低蛋白尿，高滤过及高TGF-表达，因而大多数学者认为PKC亚型可能起主要作用。 但Henry等在转染GluT1的系膜细胞上证实PKC转录增加达7倍之多，PKC蛋白表达增加40%，激活型的PKC增加63%14。事实上许多文献报道糖尿病大鼠肾脏的PKC、亚型的活性是增加的15，16。姚丽等发现STZ诱导的SD糖尿病大鼠成模后2周、4周、12周时肾小球PKC的表达均呈显着上升且逐渐递增的趋势，相反PKCI、在糖尿病2周时都低于正常对照，4周、12周时才逐渐上升接近正常水平但并未超过正常对照水平17。张莉等发现STZ诱导的SD糖尿病大鼠5周末时肾皮质内PKC mRNA水平增加倍，胞膜相关的PKC与总PKC的比值明显增高，细胞质的PKC也高于正常，免疫组化显示糖尿病组近曲小管刷状缘的表达增强尤为突出，系膜区的表达也有一定增强，而正常组PKC在近曲小管仅见少量表达。研究采用肾小球与近曲小管的混合统计场计算阳性面密度、阳性单位及二者乘积，发现糖尿病组中的PKC免疫组化染色的3项指标的均值明显高于正常对照。 本课题采用的是肾小球与肾小管分开统计的方法观察PKC的阳性面密度、阳性单位及乘积，结果支持PKC在糖尿病大鼠肾损害中活性明显增高的判断，尤其与张莉等学者的免疫组化结果相一致，提示PKC在糖尿病肾损害中的重要作用。活化后的PKC主要通过6方面参与糖尿病肾损害的发生：参与早期高滤过的形成。参与肾小球毛细血管基膜增厚和ECM进行性积聚(活化raf1磷酸化激酶活化激活有丝分裂原元件激酶MEK活化有丝分裂原活化蛋白激酶MAPKC-fos和C-jun表达AP1样转录因子TGF1转录)。增加肾小球毛细血管通透性。PKC活化后可促进一些生长因子的表达参与细胞增殖，如：VEGF、PDGF-B，STZ诱导的糖尿病大鼠5天就可见到肾组织内PDGF-B mRNA表达的明显增加；PKC系统活化后可引起NF-B与细胞质结合蛋白IKB的解离(通过IKB的磷酸化)，使NF-B活化。参与肾脏局部RAS系统的激活。 药物干预治疗对3种蛋白分子免疫组织化学染色结果的影响及可能机制的讨论 近年来AT1受体拮抗剂、他汀类药物的研究文献颇多，但氯沙坦、辛伐他汀对糖尿病肾脏PKC、 NF-B及PDGF-B表达影响的报道不多。尤其是两药联合治疗的免疫组化定量分析报道更为鲜见。 氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏PKC、 NF-B及PDGF-B表达的作用。氯沙坦的作用机制是明显扩张肾小球出、入球动脉，增加肾血流量，降低肾内压，并阻断因AT1受体后过度活化引起的病理生理过程。郑晓静的观察表明，氯沙坦15mg/灌胃的糖尿病SD鼠其肾小球内NF-B免疫组化的阳性细胞数、黏附分子-1的表达及单核细胞数均明显低于糖尿病对照组但未达到正常组水平。 本研究氯沙坦治疗组PKC表达的显着下降可能是通过抑制血管紧张素受体1活化后引起的G蛋白或酪氨酸蛋白激酶耦联的磷脂酶C/PLD激活所产生的二酰甘油的增多而达到抑制PKC进一步活化的效果。而NF-B、PDGF-B的下降继发于局部RAS的阻断及PKC活性的下降。 他汀类药物对糖尿病大鼠肾脏PKC、 NF-B及PDGF-B三指标表达的作用。他汀类药物在糖尿病肾病中的机制是基于其抗细胞增殖作用。由于血胆固醇浓度与肾功能减退呈正相关18，他汀类药可通过调脂作用改善肾损害的进程，然而该类药对本身无明显高脂血症的残余肾模型同样可延缓肾小球硬化的进展19， 表1的结果支持降脂以外的肾保护作用。早在10年前就发现辛伐他汀可抑制PDGF引起的人肾小球系膜细胞DNA合成和细胞增殖，且呈剂量依赖性20。李航等学者的观察表明，肾小球系膜细胞在脂多糖诱导下的NF-B的活化及其他炎性细胞因子mRNA的高表达可被洛伐他汀明显抑制，而加入甲羟戊酸及法呢醇则可解除抑制，说明洛伐他汀通过抑制NF-B活化途径达到抑制炎性细胞因子表达的作用21。陈丽萌等学者则观察了洛伐他汀对高糖作用下的人肾小管上皮细胞NF -B的作用，发现洛伐他汀可部分或全部逆转高糖对肾小管上皮细胞NF-B的活化并抑制高糖对肾小管上皮培养液中PAI-1活性及相应mRNA表达的刺激作用22。他汀类药物对PKC在糖尿病肾脏中的表达影响的文献尚未查到，但对TGF的影响已有大量文献报道，结果并不一致。Ghosh等学者证实辛伐他汀可抑制PDGF诱导的系膜细胞增殖的合成，同时下调系膜细胞表达C-myc、PDGF-B及其受体亚单位的mRNA，且抑制作用可被外加的甲羟戊酸所逆转23。 本课题对PDGF-B用辛伐他汀治疗的肾小球、肾小管免疫组化阳性面密度与阳性单位乘积的统计分析表明，辛伐他汀可明显抑制PDGF在肾小球及肾小管的表达，但均未达到正常对照水平。NF-B及PKC在糖尿病大鼠肾脏中的变化与单用氯沙坦的情形相仿。 氯沙坦与辛伐他汀合用的效果。氯沙坦与辛伐他汀合用使 NF-B在肾小球和肾小管的相应免疫组化指标进一步下降并接近于正常，提示在NF-B的过度活化问题上两种药物合用的乐观前景；PKC在肾小球、肾小管免疫组化的结果与NF-B相近。PDGF-B在肾小球表达的指标也得到进一步改善接近正常水平；提示两药合用在糖尿病肾病的发生发展中有协同作用，但仍达不到正常水平。 综上所述，NF-B 、PDGF-B 及PKC在糖尿病大鼠8周时在肾小球及肾小管的表达均明显增强，提示其参与了糖尿病肾病发生发展的过程，药物治疗表明，氯沙坦可明显抑制3种细胞介质的表达，说明局部RAS系统活化的意义，3种介质与肾脏局部的RAS系统过度活化密切相关。氯沙坦与辛伐他汀合用，3种介质的指标均可获进一步改善，说明两类药物具有协同作用。【参考文献】 1 于德民，吴锐，尹潍，等.实验性链脲佐菌素糖尿病动物模型的研究.中国糖尿病杂志，1995，3：105-109. 2 张莉，马骥，顾勇，等.糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C亚型蛋白表达和转录水平的变化.中华肾脏病杂志，2002，18：291-294. 3 Mogensen CE，Schmitz A，Christensenrenal pathophysiology relevant to IDDM and NIDDM patients. Diabetes Metab Rev，1998，4：453. 4 施新猷.现代医学实验动物学.北京：人民军医出版社，2000，82-93，482-483. 5 李甘地.组织病理技术.北京：人民卫生出版社，2002，2547. 6 Brownlee M. Glycation and diabetic complication. Diabetes，1994，43：836-844. 7 朱禧星.现代糖尿病学.上海：复旦大学出版社，2000，311-327. 8 Nakagawa H ，Sasahara M， Haneda M， et al . Immunohistochemical characterization of glomerular PDGF B-chain and PDGFbeta-receptor expression in diabeticRes Clin Pract，2000，48(2)：87-98. 9 余毅，吴永贵，林善锬，等.苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质血小板衍化生长因子-B及其受体表达的影响.中华肾脏病杂志，1999，15：207-210. 10 郑晓静，孙世澜.氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏核因子-B表达的影响.华中科技大学学报(医学版)，2002，31(2)：178-180. 11 忻菁，顾勇，陈靖，等.内皮素受体阻断剂在高血压糖尿病鼠中的肾脏保护作用及其可能机制.中华肾脏病杂志，2002，18：107-110. 12 Klahr S ， Morrissey JJ. Comparative study of ACE inhibitors and angiotensin II receptor antagonists in interstitial scarring. Kidney Int，1997，63(suppl)：s111-s114. 13 范秋灵，王力宁，周华，等.糖尿病肾病发病过程中肾小球蛋白激酶C活性变化的研究.中华肾脏病杂志，2000，16(5)：333-335. 14 Heiliy CW， Brosius ， Henrytransporters of the glomerulus and the implications for diabetic hephropathy. Kidney Int，1997，52(Suppl)：S91-S99. 15 King GL， Ishii H，KoyaVascular dysfunctions：a moelel of excessive activadion of protein KinaseInt，1997，52(Suppl60)：S77-S85. 16 Babazono T，Kapor-Drezgic J， Diugosz JA， etexpression and subcelluler localization of diacylglycerol-sensitive protein Kinase C isoforms in diabetic rat glomerular ，1998，47 ：668-676. 17 姚丽，周华，王力宁，等.蛋白激酶C同工酶在糖尿病肾病肾小球的表达.中华肾脏病杂志，2002，18(2)：127-130. 18 Mulec H，Johnson SA，Bjorckbetween serum cholesterol and diabetic nephropathy. Lancet，1990，1：1537-1538. 19 Tolins JP，Stone BG，Raizof hypercholesterolemia and hypertension in initiation of glomerularInt，1992，41：1254-1261. 20 Grandallano G，Biswas P，Choudhury GG，etinhibits PDGF-induced DNA synthesis in human glomerular mesangialInt，1993，44：503-509. 21 李航，李学旺，段琳，等.洛伐他汀对系膜细胞核因子-B活性及炎症细胞因子表达的影响.中华肾脏病杂志，2001，17：242-245. 22 陈丽萌，李学旺，林嘉友，等. 洛伐他汀对高糖时人肾小管上皮细胞核因子-B和组织纤溶酶原激活物及其抑制物的作用，中华肾脏病杂志，2001，17：399-403. 23 Ghosh PM，Mott GE，Ghosh-Choudhury N，et al. Lovastatin induces apoptosis by inhibiting mitotic and post-mitotic events in cultured mesangial cells. Biochim Biophys Acta，1997，1359：13-24.