学术讨论—T淋巴细胞结果的解读2014全国会吴铁军.ppt

T T细胞亚群结果细胞亚群结果(ji gu)(ji gu)的解的解读读 山东省聊城市人民医院山东省聊城市人民医院(yyun)ICU 吴铁军吴铁军第一页，共三十页。淋巴细胞分化淋巴细胞分化(fnhu)图图第二页，共三十页。u按按T T细胞所处细胞所处(su ch)(su ch)的活化阶的活化阶段段 初始初始T细胞（细胞（naive T cell）效应效应T细胞（细胞（effector T cell）记忆性记忆性T细胞（细胞（memory T cell）u按按T T细胞表面受体（细胞表面受体（TCRTCR）分）分类类 +T细胞细胞 +T细胞细胞u按按T T细胞细胞CD4CD4和和CD8CD8分子表型分子表型 CD4+T细胞细胞 CD8+T细胞细胞 u按按T T细胞的功能分类细胞的功能分类 Th（辅助（辅助(fzh)T细胞）细胞）TS（抑制（抑制T细胞）细胞）Tr（调节（调节T细胞）细胞）T T淋巴细胞的分类淋巴细胞的分类(fn li)(fn li)方法方法第三页，共三十页。外周血中各亚群占淋巴细胞总数外周血中各亚群占淋巴细胞总数(zngsh)的的比例比例60-80%27-51%15-44%T淋巴细胞CD4T淋巴细胞CD8T淋巴细胞第四页，共三十页。淋巴细胞监测淋巴细胞监测(jin c)注重数量、比例、功能相结合注重数量、比例、功能相结合血液分析常规血液分析常规(chnggu)检测检测依据白细胞、淋巴细胞比例依据白细胞、淋巴细胞比例(bl)及计数绑定机体免疫状及计数绑定机体免疫状况，无法精确判断。况，无法精确判断。T T淋巴细胞亚群比淋巴细胞亚群比例检测例检测临床常用，但较片面临床常用，但较片面T T淋巴细胞亚群数量淋巴细胞亚群数量观察免疫细胞数值变化，评估免疫状况，观察免疫细胞数值变化，评估免疫状况，通常采用流式细胞仪法，特别针对通常采用流式细胞仪法，特别针对CD4CD4的检测，已成为的检测，已成为“金标准金标准”。功能、数量、比例功能、数量、比例结合结合更精确评估机体免疫状更精确评估机体免疫状态态1234第五页，共三十页。目前临床主要可以目前临床主要可以(ky)做以下项目的检测做以下项目的检测n淋巴细胞亚群(T+B+NK)的比例(bl)和计数nT细胞亚群(CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+比值）nMHLA-DR（单核细胞HLA-DR)nCD4CD25Treg（调节细胞）及Th17细胞（我们工作）目前国内绝大多数医院没有开展淋巴细胞计数(j sh)项目第六页，共三十页。项项 目目百分含量百分含量（%淋巴淋巴细细胞）胞）Total B lymphocyte(CD19+)5-18%NK cell(CD3-/CD16+56+)7-40%Total T lymphocyte(CD3+)50-84%T helper/inducer cell(CD3+/CD4+)27-51%T supressor/cytotoxic cell(CD3+/CD8+)15-44%CD4/CD80.71-2.78(BD)(BD)健康中国健康中国(zhn u)(zhn u)人参考范围人参考范围项项 目目百分含量百分含量（%T淋巴淋巴细细胞）胞）绝对绝对含量含量（cells/L）Total T lymphocyte(CD3+)770-2041Thelper/inducer cell(CD3+/CD4+/CD8-)34-70%414-1123Tsupressor/cytotoxic cell(CD3+/CD4-/CD8+25-54%238-874CD3+CD4+CD8+cell0.5-4.0%6-56第七页，共三十页。CD4+CD4+、CD8+TCD8+T淋巴细胞的计数淋巴细胞的计数(j sh)(j sh)方法一（方法一（FCM)FCM)n取取100l100l全血，加三种不同全血，加三种不同(b tn)(b tn)荧光荧光素标记的鼠抗人素标记的鼠抗人CD3CD3、CD4CD4、CD8McAbCD8McAb，阴，阴性对照。性对照。n加红细胞裂解液，溶血，离心，弃上清。加红细胞裂解液，溶血，离心，弃上清。n用用PBSPBS洗洗1 1次，次，PBSPBS重悬细胞，上机检测。重悬细胞，上机检测。nFCMFCM分析分析 电子计算机自动计算出阳性电子计算机自动计算出阳性细胞百分率及总细胞计数。细胞百分率及总细胞计数。简单、快速、相对简单、快速、相对(xingdu)精确精确第八页，共三十页。nCD3+T细胞(xbo)正常范围为：50-84%nCD4+T细胞正常范围为：27-51%nCD8+T细胞正常范围为：15-44%nCD19+B细胞正常范围为：5-18%n与血细胞计数仪联用，得出各淋巴细胞百分比后乘以淋巴细胞数量，得出各淋巴细胞的绝对浓度。CD4TCD4T淋巴细胞的计数淋巴细胞的计数(j sh)(j sh)方法二（推算）方法二（推算）不精确不精确(jngqu)、繁、繁琐琐省钱省钱举例如下举例如下第九页，共三十页。患者血常规中淋巴细胞计数为患者血常规中淋巴细胞计数为0.63 109/L,0.63 109/L,淋巴细胞比例测定淋巴细胞比例测定(cdng)(cdng)结果结果CD3 CD3 为为64.9%,CD464.9%,CD4为为32.5%,CD832.5%,CD8为为31.1%31.1%CD3CD3细胞细胞(xbo)(xbo)计数为计数为0.63100.63109 9/L64.9%0.41 10/L64.9%0.41 109 9/L/LCD4CD4细胞计数为细胞计数为0.63109/L32.5%0.20 100.63109/L32.5%0.20 109 9/L/LCD8CD8细胞计数为细胞计数为0.63109/L31.1%0.19 100.63109/L31.1%0.19 109 9/L/L推推算算第十页，共三十页。第十一页，共三十页。单核细胞人类单核细胞人类(rnli)(rnli)白细胞抗原白细胞抗原DRDR（CD14/HLA-DRCD14/HLA-DR）nCD14CD14为为LPSLPS复合物受体复合物受体,主要分布在单核细胞，主要分布在单核细胞，HLA-DRHLA-DR为活化标志。为活化标志。nCD14/HLA-DRCD14/HLA-DR可反映人体细胞免疫功能，可反映人体细胞免疫功能，30%30%提示免疫麻痹。也有提示免疫麻痹。也有人认为人认为(rnwi)(rnwi)HLA-DRHLA-DR浓度如果连续两天浓度如果连续两天低于低于8000AB/C8000AB/C可认为存在可认为存在免疫麻痹免疫麻痹。n广泛应用于临床。广泛应用于临床。第十二页，共三十页。T T淋巴细胞亚群研究淋巴细胞亚群研究(ynji)(ynji)研究逐年研究逐年(zhnin)增多增多第十三页，共三十页。淋巴细胞亚群变化淋巴细胞亚群变化(binhu)(binhu)的常见临床意的常见临床意义义nCD4CD4淋巴细胞减少：淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷(quxin)(quxin)病、艾滋病、病、艾滋病、应用免疫抑制剂的患者应用免疫抑制剂的患者nCD8CD8淋巴细胞增多：淋巴细胞增多：见于自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮（见于自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮（SLESLE）、艾滋病）、艾滋病初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等nCD4CD4CD8CD8比值异常：比值异常：比值降低：比值降低：一般被称为一般被称为“免疫抑制免疫抑制”状态，常见于免疫缺陷病、恶性肿瘤、再状态，常见于免疫缺陷病、恶性肿瘤、再生障碍性贫血、白血病、某些病毒感染等生障碍性贫血、白血病、某些病毒感染等 比值增高：比值增高：表明细胞免疫功能处于表明细胞免疫功能处于“过度活跃过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应。此外状态，容易出现自体免疫反应。此外还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后CD4/CD8CD4/CD8较移植前明显增加，则可能发生排较移植前明显增加，则可能发生排异反应异反应第十四页，共三十页。15The shift from a pro-in-flammatory to an anti-inflammatory immune response predominant at the systemic level likely occurs before 24 h after diagnosis of shock.脓毒症休克脓毒症休克(xik)期存在免疫麻痹期存在免疫麻痹第十五页，共三十页。存在免疫存在免疫(miny)(miny)麻痹的麻痹的SepticSeptic患者死亡率大大增加患者死亡率大大增加100100名名septicseptic患者患者(hunzh)(hunzh)28天死亡天死亡(swng)无免疫麻痹无免疫麻痹免疫麻痹免疫麻痹第十六页，共三十页。脓毒症休克患者脓毒症休克患者(hunzh)(hunzh)T T淋巴细胞凋亡、存在免疫紊乱淋巴细胞凋亡、存在免疫紊乱第十七页，共三十页。存活存活(cn hu)(cn hu)与死亡与死亡SepticSeptic中中T T淋巴细胞亚群的变淋巴细胞亚群的变化化一项对院内感染的老年一项对院内感染的老年(lonin)(lonin)脓毒症患者的前瞻性对照研究脓毒症患者的前瞻性对照研究第十八页，共三十页。Injury,Int.J.Care Injured(2007)38,13461357严重多发伤患者免疫细胞的变化严重多发伤患者免疫细胞的变化(binhu)特点特点CD4/CD8降低降低(jingd)MHLA-DR降低降低(jingd)T细胞及单核细胞凋细胞及单核细胞凋亡增加亡增加第十九页，共三十页。烧伤患者早期外周血淋巴细胞亚群的变化烧伤患者早期外周血淋巴细胞亚群的变化(binhu)特特点点n烧伤患者白细胞低于正常组烧伤患者白细胞低于正常组n早期早期CD3CD3、CD4CD4、CD8CD8细胞计数细胞计数 均明显下降均明显下降(xijing)(xijing)。nHLA-DRHLA-DR表达降低。表达降低。nCD4/CD8CD4/CD8比值下降。比值下降。第二十页，共三十页。CD4T细胞细胞(xbo)亚群新分类：亚群新分类：Th1、Th2、Treg、Th17我们我们(w men)的研究的研究第二十一页，共三十页。抗炎细胞抗炎细胞(xbo)(xbo)TregTreg及其分泌的抗炎介质及其分泌的抗炎介质IL-10IL-10；促炎细胞；促炎细胞Th17Th17及分泌的促炎介质及分泌的促炎介质IL-17IL-17、IL-6IL-6在人体的炎性免疫稳态中发挥重在人体的炎性免疫稳态中发挥重要作用。要作用。第二十二页，共三十页。23中国呼吸与危重监护中国呼吸与危重监护(jinh)杂志杂志,2010,09(04):416-418.结论一：脓毒症患者中结论一：脓毒症患者中TregTreg明显升高明显升高(shn o)(shn o)，表明抗炎反应的增强表明抗炎反应的增强第二十三页，共三十页。24 结论二：结论二：在脓毒症患者中在脓毒症患者中Th17表达明显表达明显(mngxin)升高升高吴铁军吴铁军(ti jn),亢翠翠亢翠翠,中华急诊医学杂志中华急诊医学杂志,2012,21(04):378-380.脓脓毒毒症症组组对对照照组组脓毒症患者中脓毒症患者中Th17Th17表达表达(biod)(biod)明显升高，明显升高，提示促炎反应的增强。提示促炎反应的增强。第二十四页，共三十页。25重症脓毒症患者淋巴细胞增殖重症脓毒症患者淋巴细胞增殖(zngzh)能力低下、凋亡能力低下、凋亡淋巴细胞淋巴细胞Ag-NoR在健康在健康(jinkng)组中的表达组中的表达 淋巴细胞淋巴细胞Ag-NoR在在Sepsis组中的表达组中的表达(biod)吴铁军，张丽娜吴铁军，张丽娜 中国呼吸与危重监护杂志中国呼吸与危重监护杂志,2010,09(04):416-418.脓毒症组脓毒症组对照组对照组第二十五页，共三十页。重症脓毒症患者存在免疫重症脓毒症患者存在免疫(miny)麻痹麻痹中国中国(zhn u)急救医学杂志急救医学杂志,2011,31(9):836-838.CD14+单核细胞人类白细胞抗原单核细胞人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)表达表达(biod)情况情况对对照照组组脓脓毒毒症症组组第二十六页，共三十页。27第二十七页，共三十页。T T淋巴细胞亚群的研究越来越多淋巴细胞亚群的研究越来越多某种某种T T细胞亚群过高或过低，都提示存在免疫功能紊乱，主要用于了细胞亚群过高或过低，都提示存在免疫功能紊乱，主要用于了解恶性肿瘤、免疫缺陷、重症病毒感染、自身免疫病等患者机体的解恶性肿瘤、免疫缺陷、重症病毒感染、自身免疫病等患者机体的免疫功能是处于什么免疫功能是处于什么(shn me)(shn me)状态。状态。T T细胞亚群的表达受多种因素影响细胞亚群的表达受多种因素影响 常常“变幻莫测变幻莫测”，因此，因此T T细胞细胞亚群的解读应细胞比例结合计数和功能状态，连续动态监测更有意义。亚群的解读应细胞比例结合计数和功能状态，连续动态监测更有意义。严重脓毒症存在免疫紊乱，严重脓毒症存在免疫紊乱，T T淋巴细胞的凋亡，与预后有一定关系。淋巴细胞的凋亡，与预后有一定关系。创伤等应激状态同样导致免疫紊乱。创伤等应激状态同样导致免疫紊乱。总结总结(zngji)第二十八页，共三十页。第二十九页，共三十页。内容(nirng)总结T细胞亚群结果的解读。淋巴细胞亚群(T+B+NK)的比例和计数。淋巴细胞比例测定结果CD3 为64.9%,CD4为32.5%,CD8为31.1%。单核细胞人类白细胞抗原DR（CD14/HLA-DR）。CD14为LPS复合物受体,主要分布在单核细胞，HLA-DR为活化标志。CD14/HLA-DR可反映人体细胞免疫功能，30%提示免疫麻痹。比值增高：表明(biomng)细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应第三十页，共三十页。