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第二十七章人类白细胞抗原分型
Chapter 27 Human Leukocyte Antigen Typing
第一部分 教学内容和要求
一、目的要求
·掌握：HLA血清学分型和细胞学分型的方法类型、原理和用途；熟悉：基因分型技术的方法类型、原理和用途；了解：HLA血清学分型的技术要点。

二、教学内容
1．血清学分型法：原理，实验流程与结果判断，技术要点，方法评价。
2．细胞分型法：阴性分型法，阳性分型法。
3．基因分型技术：PCR-序列特异性引物分型法，PCR-序列特异性寡核苷酸探针杂交法，PCR-序列测定法，PCR-限制性片段长度多态性分析法。

第二部分 测试题
一、选择题
（一） 单项选择题（A型题）
1. 微量补体依赖的细胞毒试验中所用的补体为
A．豚鼠血清 B．兔血清 C．羊血清 D．马血清 E．人血清
2．HLA-Ⅰ类抗原血清学分型主要应用的试验
A．微量补体依赖的细胞毒试验 B．T淋巴细胞增殖试验 C．T细胞介导的细胞毒试验
D．溶血空斑试验 E．混合淋巴细胞培养
3．不表达HLAⅠ类抗原的细胞是
A． 淋巴细胞 B．成熟红细胞 C．血小板 D．脾细胞 E．粒细胞
4．编码HLA -I类分子的基因位点有
A．HLA—A、B位点 B．HLA—A、B、C位点 C．HLA—DR位点
D．HLA—DR、DP、DQ位点 E．C4、C2、TNF位点
5. 最容易发现HLA新基因的方法是
A．CDC试验 B．MLR C．PCR-SSP D．PCR-SSO E．PCR-测序
6. CDC试验观察结果用
A．分光光度计 B．酶标仪 C．光学显微镜 D．相差显微镜 E．倒置相差显微镜

（二）多项选择题（X型题）
1.HLA-I类抗原分布于如下细胞
A.T细胞 B.B细胞 C.巨噬细胞 D. 血小板 E.红细胞
2．HLA-Ⅱ类抗原包括的抗原有
A．HLA-A B．HLA-D C．HLA-DP D．HLA-DQ E．HLA-DR
3. HLA-Ⅱ类抗原主要表达于如下细胞
A.B淋巴细胞 B. 巨噬细胞 C. 抗原提呈细胞 D.红细胞 E.T淋巴细胞
4．HLA抗体可来自
A．健康人血清 B．产妇血清 C．接受移植者血清 D．单克隆抗体 E．兔抗HLA血清
5．HLA血清学分型技术可用于检测
A．HLA-A抗原 B．HLA-DP抗原 C．HLA-DR抗原 D．HLA-B抗原 E．HLA-C抗原
6．可用混合淋巴细胞培养分型方法进行检测的位点有
A．HLA-A B．HLA-B C．HLA-DP D．HLA-DR E．HLA-D
7．下述哪些分子生物学方法可用作HLA定型
A．PCR B．PCR-SSP C．PCR-RFLP D． PCR-SSO E．PCR-测序
8．下述哪些是MLC阴性定型法的特征
A．用已知的HTC作应答者 B．用已知HTC作刺激者 D． 需培养6天
D． 仅需培养2天 E．具有相同抗原时cpm不增高.
9．血清学分型法(微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)临上可应用于
A．HLA分型（供移植前配型、 疾病相关研究、 人类亲缘研究等） B．抗体筛选
C．鉴定和交叉配合试验 D．测定T细胞免疫功能 E．B细胞免疫功能
10．PCR-SSP(序列特异性引物)用于HLA分型具有的特点
A．分辨度高 B．特异性强 C．扩增后处理过程简单
D．只需借助琼脂糖凝胶电泳 E．依据是否出现特异性条带判断结果

二、填空题
1．检测HLA抗原的基本方法有___________分型法、___________ 分型法和___________分型法。
2．CDC试验的分型血清可来自__________或____________。
3．CDC试验阳性时，抗原细胞应___________。
4．检测HLA-Ι类抗原时可用___________细胞或___________细胞 ，检测HLAⅡ类抗原时需用___________细胞 。
5．检测HLAⅡ类抗原时，抗血清需用___________吸收除去HLA___类抗体。
6．PCR-SSP分型法是目前最常用于___________类基因分型

三．名词解释
1．PCR-序列特异引物分型技术（PCR-polymerase chain reaction with sequence specific primer，PCR-SSP ）
2．同种免疫血清(isotype-immunoserum)
3． 混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture，MLC）

四．问答题
1．检测HLA血清学分型法(微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)的原理
2． 用血清学分型法检测HLA-Ⅱ类抗原时，和检测Ⅰ类抗原比较有哪些主要的不同点？
3．CDC试验中兔补体为何需用多只兔的混合血清？
4．如何获取B淋巴细胞?
5．PCR-SSP用于HLA分型的原理

第三部分 参考答案与题解
一、选择题
（一）单项选择题（A型题）
1．B 2.A 3．B 4．B 5．E 6．E
（二）多项选择题（X型题）
1.ABCD 2.BCDE 3.ABC 4．BCD 5.ACDE 6. CE 7 .BCDE
8.BCE 9.ABC 10.ABCDE

二、填空题
1．血清学、 细胞学、 分子生物学。 2．同种免疫血清、 单克隆抗体。
3．死亡。 4．单个核、 T淋巴 、 B淋巴。 5．混合血小板 、 Ⅰ。 6.HLA-Ⅱ。

三．名词解释
1．PCR -SSP ：编码各种HLA抗原表型的等位基因不尽相同,可用相应的序列特异性引物进行扩增。借助琼脂糖凝胶电泳观察是否存在特异性产物的电泳条带进行HLA基因分析。
2．同种免疫血清：存在于同种不同个体间的抗原免疫所诱导生成的抗体。如HLA抗体。
3．混合淋巴细胞培养：两个体淋巴细胞在一起培养，若HLA-D,HLA-DP抗原不同，可刺激发生淋巴细胞转化现象。用于HLA定型有阳性和阴性定型法。

四．问答题
1。HLA分型采用微量补体依赖的细胞毒试验，其原理是HLA抗体与淋巴细胞表面的相应抗原结合后激活补体，导致细胞膜损伤，通透性增强，染料进入细胞，在倒置相差显微镜或倒置荧光显微镜下观察，着染的细胞为死亡细胞，视野下死亡细胞超过40%试验为阳性。如淋巴细胞膜上无相应的抗原，则不发生反应，为阴性，从而将HLA分型。

2。要用B 淋巴细胞，抗体要用混合血小板吸收除去Ⅰ类抗体或用单克隆抗体，孵育时间需延长。
3。避免因个别兔的补体缺陷造成误差。
4。用尼龙毛法，E花环分离法，免疫磁珠分离法等从单个核细胞悬液中进行分离。
5. PCR-SSP方法的原理是编码各种HLA抗原表型的等位基因不尽相同, 均可用相应的序列特异性引物（sequence specific primer，SSP）进行扩增，通过控制PCR反应条件，特异性引物仅扩增与其相应的等位基因特异片段，对扩增的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，根据是否出现特异性产物的电泳条带读取结果。本技术尚设有内对照以控制质量。

(费櫻 刘若英)

内容总结

（1）第二十七章人类白细胞抗原分型
Chapter 27 Human Leukocyte Antigen Typing
第一部分 教学内容和要求
一、目的要求
·掌握：HLA血清学分型和细胞学分型的方法类型、原理和用途
（2）用于HLA定型有阳性和阴性定型法
（3）本技术尚设有内对照以控制质量