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第二十七章人类白细胞抗原分型Chapter 27 Human Leukocyte Antigen Typing第一部分 教学内容和要求一、目的要求掌握：HLA血清学分型和细胞学分型的方法类型、原理和用途；熟悉：基因分型技术的方法类型、原理和用途；了解：HLA血清学分型的技术要点。二、教学内容1血清学分型法：原理，实验流程与结果判断，技术要点，方法评价。2细胞分型法：阴性分型法，阳性分型法。3基因分型技术：PCR-序列特异性引物分型法，PCR-序列特异性寡核苷酸探针杂交法，PCR-序列测定法，PCR-限制性片段长度多态性分析法。第二部分 测试题一、选择题（一） 单项选择题（A型题）1. 微量补体依赖的细胞毒试验中所用的补体为A豚鼠血清 B兔血清 C羊血清 D马血清 E人血清2HLA-类抗原血清学分型主要应用的试验A微量补体依赖的细胞毒试验 BT淋巴细胞增殖试验 CT细胞介导的细胞毒试验D溶血空斑试验 E混合淋巴细胞培养3不表达HLA类抗原的细胞是A 淋巴细胞 B成熟红细胞 C血小板 D脾细胞 E粒细胞4编码HLA -I类分子的基因位点有AHLAA、B位点 BHLAA、B、C位点 CHLADR位点 DHLADR、DP、DQ位点 EC4、C2、TNF位点5. 最容易发现HLA新基因的方法是ACDC试验 BMLR CPCR-SSP DPCR-SSO EPCR-测序6. CDC试验观察结果用 A分光光度计 B酶标仪 C光学显微镜 D相差显微镜 E倒置相差显微镜（二）多项选择题（X型题）1.HLA-I类抗原分布于如下细胞A.T细胞 B.B细胞 C.巨噬细胞 D. 血小板 E.红细胞2HLA-类抗原包括的抗原有AHLA-A BHLA-D CHLA-DP DHLA-DQ EHLA-DR3. HLA-类抗原主要表达于如下细胞A.B淋巴细胞 B. 巨噬细胞 C. 抗原提呈细胞 D.红细胞 E.T淋巴细胞4HLA抗体可来自A健康人血清 B产妇血清 C接受移植者血清 D单克隆抗体 E兔抗HLA血清5HLA血清学分型技术可用于检测AHLA-A抗原 BHLA-DP抗原 CHLA-DR抗原 DHLA-B抗原 EHLA-C抗原6可用混合淋巴细胞培养分型方法进行检测的位点有AHLA-A BHLA-B CHLA-DP DHLA-DR EHLA-D7下述哪些分子生物学方法可用作HLA定型APCR BPCR-SSP CPCR-RFLP D PCR-SSO EPCR-测序8下述哪些是MLC阴性定型法的特征A用已知的HTC作应答者 B用已知HTC作刺激者 D 需培养6天 D 仅需培养2天 E具有相同抗原时cpm不增高.9血清学分型法(微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)临上可应用于AHLA分型（供移植前配型、 疾病相关研究、 人类亲缘研究等） B抗体筛选 C鉴定和交叉配合试验 D测定T细胞免疫功能 EB细胞免疫功能10PCR-SSP(序列特异性引物)用于HLA分型具有的特点A分辨度高 B特异性强 C扩增后处理过程简单D只需借助琼脂糖凝胶电泳 E依据是否出现特异性条带判断结果二、填空题1检测HLA抗原的基本方法有_分型法、_ 分型法和_分型法。2CDC试验的分型血清可来自_或_。3CDC试验阳性时，抗原细胞应_。4检测HLA-类抗原时可用_细胞或_细胞 ，检测HLA类抗原时需用_细胞 。5检测HLA类抗原时，抗血清需用_吸收除去HLA_类抗体。6PCR-SSP分型法是目前最常用于_类基因分型三名词解释1PCR-序列特异引物分型技术（PCR-polymerase chain reaction with sequence specific primer，PCR-SSP ） 2同种免疫血清(isotype-immunoserum) 3 混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture，MLC）四问答题1检测HLA血清学分型法(微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)的原理2 用血清学分型法检测HLA-类抗原时，和检测类抗原比较有哪些主要的不同点？3CDC试验中兔补体为何需用多只兔的混合血清？4如何获取B淋巴细胞?5PCR-SSP用于HLA分型的原理第三部分 参考答案与题解一、选择题（一）单项选择题（A型题）1B 2.A 3B 4B 5E 6E（二）多项选择题（X型题）1.ABCD 2.BCDE 3.ABC 4BCD 5.ACDE 6. CE 7 .BCDE 8.BCE 9.ABC 10.ABCDE 二、填空题1血清学、 细胞学、 分子生物学。 2同种免疫血清、 单克隆抗体。3死亡。 4单个核、 T淋巴 、 B淋巴。 5混合血小板 、 。 6.HLA-。三名词解释1PCR -SSP ：编码各种HLA抗原表型的等位基因不尽相同,可用相应的序列特异性引物进行扩增。借助琼脂糖凝胶电泳观察是否存在特异性产物的电泳条带进行HLA基因分析。2同种免疫血清：存在于同种不同个体间的抗原免疫所诱导生成的抗体。如HLA抗体。3混合淋巴细胞培养：两个体淋巴细胞在一起培养，若HLA-D,HLA-DP抗原不同，可刺激发生淋巴细胞转化现象。用于HLA定型有阳性和阴性定型法。四问答题1。HLA分型采用微量补体依赖的细胞毒试验，其原理是HLA抗体与淋巴细胞表面的相应抗原结合后激活补体，导致细胞膜损伤，通透性增强，染料进入细胞，在倒置相差显微镜或倒置荧光显微镜下观察，着染的细胞为死亡细胞，视野下死亡细胞超过40%试验为阳性。如淋巴细胞膜上无相应的抗原，则不发生反应，为阴性，从而将HLA分型。2。要用B 淋巴细胞，抗体要用混合血小板吸收除去类抗体或用单克隆抗体，孵育时间需延长。3。避免因个别兔的补体缺陷造成误差。4。用尼龙毛法，E花环分离法，免疫磁珠分离法等从单个核细胞悬液中进行分离。5. PCR-SSP方法的原理是编码各种HLA抗原表型的等位基因不尽相同, 均可用相应的序列特异性引物（sequence specific primer，SSP）进行扩增，通过控制PCR反应条件，特异性引物仅扩增与其相应的等位基因特异片段，对扩增的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，根据是否出现特异性产物的电泳条带读取结果。本技术尚设有内对照以控制质量。(费櫻 刘若英)内容总结（1）第二十七章人类白细胞抗原分型Chapter 27 Human Leukocyte Antigen Typing第一部分 教学内容和要求一、目的要求掌握：HLA血清学分型和细胞学分型的方法类型、原理和用途（2）用于HLA定型有阳性和阴性定型法（3）本技术尚设有内对照以控制质量