第二十二章-细胞周期及其调控.ppt

细胞周期及其调控(dio kn)徐朝阳徐朝阳(choyng)细胞生物学教研室细胞生物学教研室第一页，共八十一页。前言(qin yn)细胞周期及其调控细胞周期及其调控(dio kn)(dio kn)的重要性的重要性细胞周期及其调控的复杂性细胞周期及其调控的复杂性第二页，共八十一页。细胞周期细胞周期调控(dio kn)细胞周期与医学(yxu)通过(tnggu)三部分的学习了解细胞周期第三页，共八十一页。细胞周期第四页，共八十一页。基本概念第五页，共八十一页。1.细胞周期的基本概念细胞周期（cell cycle）细胞周期是细胞增殖周期的简称，指细胞从分裂结束后开始生长(shngzhng)，到再次分裂终了所经历的全过程。第六页，共八十一页。2.细胞周期的基本(jbn)阶段第七页，共八十一页。3.机体(jt)细胞的状态Cycling cellsDividing continuouslyStem cellsG0 cellsDo not divide normally,but divide when given an appropriate stimulus:liver cells,lymphocytesTerminally Differentiated cellsHighly specialized,have lost the ability to divide until they die:muscle cells,red blood cells,nerve cells 第八页，共八十一页。细胞周期 的主要(zhyo)事件第九页，共八十一页。1.G1期动态(dngti)早早G1G1期：细胞生长期：细胞生长R R点：分裂点：分裂(fnli)(fnli)决定决定晚晚G1G1期：复制准备期：复制准备细胞周期时间的长短主要细胞周期时间的长短主要(zhyo)(zhyo)由由G1G1期决定期决定第十页，共八十一页。2.S期动态(dngti)DNADNA合成合成(hchng)(hchng)染色质组装染色质组装中心粒复制中心粒复制第十一页，共八十一页。中心(zhngxn)体的复制和分离第十二页，共八十一页。3.G2期动态(dngti)复制检查复制检查(jinch)(jinch)分裂准备分裂准备第十三页，共八十一页。G1-G2G1-G2期主要物质期主要物质(wzh)(wzh)的合成的合成第十四页，共八十一页。4.M期动态(dngti)染色体分离染色体分离(fnl)(fnl)胞质分裂胞质分裂第十五页，共八十一页。细胞周期调控(dio kn)第十六页，共八十一页。分裂期细胞（左）与分裂期细胞（左）与G1G1期期细胞（右）融合后产生的细胞（右）融合后产生的混合细胞。混合细胞。来自分裂期细胞的因子引起来自分裂期细胞的因子引起间期细胞的核膜收回进入内间期细胞的核膜收回进入内质网（图中可见核膜消失）。质网（图中可见核膜消失）。这些因子也造成这些因子也造成(zo chn)(zo chn)了了G1G1期细胞染色体凝聚。期细胞染色体凝聚。中期细胞(xbo)内可扩散因子的存在可以诱导间期细胞(xbo)进入有丝分裂第十七页，共八十一页。Entry into the Cell CycleCell Growth:increase in massCell Proliferation:cell divisionThe“growth cycle”and the“cell division cycle”are inextricably linkedCheckpoints and sensors monitor growth cycle第十八页，共八十一页。The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2001Fred Hutchinson Cancer Research CenterSeattle,WA,USAImperial Cancer Research FundLondon,United KingdomImperial Cancer ResearchFundLondon,United Kingdom第十九页，共八十一页。The Nobel Assembly at Karolinska Institutethas awarded the Nobel Prize in Physiology orMedicine jointly to Leland Hartwell,TimHunt and Paul Nurse for their discoveries ofkey regulators of the cell cycle.Usinggenetic and biochemical methods,theyidentified the molecules CDK and cyclin thatcontrol the cell cycle in eukaryotic organisms.These fundamental discoveries have aprofound impact on many aspects of biologyand medicine.CDK and cyclin are key molecules that control and coordinate DNA-synthesis,chromosome separation and cell division.CDK and cyclin together drive the cell from one cell cycle phase to the next.第二十页，共八十一页。细胞周期驱动力细胞周期驱动力第二十一页，共八十一页。1.原动力：周期性基因(jyn)表达第二十二页，共八十一页。第二十三页，共八十一页。2.引擎(ynqng)：周期性蛋白质磷酸化第二十四页，共八十一页。2.1 Cyclin-Cdk的类型(lixng)第二十五页，共八十一页。2.2 Cylin-CDK的激活(j hu)第二十六页，共八十一页。Cdk activating kinase(CAK)Cdk7Cdk7和和CyclinH CyclinH 一起形成一起形成(xngchng)(xngchng)CAK;CAK;催化催化cdk2cdk2和和cdk4cdk4分子第分子第161161位苏氨酸的磷酸位苏氨酸的磷酸化，从而激活这些蛋白激酶的活性。化，从而激活这些蛋白激酶的活性。第二十七页，共八十一页。Cdk抑制(yzh)因子（CKI）Ink4 family P15,p16,p18,p19；与Cdk4/6结合,抑制cyclinD-cdk4/6复合物激酶活性；表达时会通过pRB蛋白依赖性方式阻滞细胞周期。Waf/Kip family P21,p27,p57；与Cdk2结合，抑制cyclinE/A-cdk2复合物激酶活性；表达时会通过p53蛋白依赖途径阻滞细胞周期。第二十八页，共八十一页。2.3 Cdk/Cyc在细胞周期中的调控(dio kn)作用第二十九页，共八十一页。A.G1期第三十页，共八十一页。B.S期和G2期CyclinACyclinA与与Cdk2Cdk2结合结合磷酸化磷酸化DNADNA合成相关蛋白，促进合成相关蛋白，促进DNADNA合成；合成；磷酸化磷酸化CyclinD/E-CdkCyclinD/E-Cdk使其失活使其失活,防止复制在细胞防止复制在细胞周期完成前再次启动。周期完成前再次启动。CyclinBCyclinB在在S S晚期开始在细胞质内合成，核膜晚期开始在细胞质内合成，核膜崩解前进入细胞核内崩解前进入细胞核内Cdk1Cdk1此时被此时被Wee1Wee1磷酸化而处于失活状态，磷酸化而处于失活状态，cyclinA/B-Cdk1cyclinA/B-Cdk1无活性。无活性。第三十一页，共八十一页。C.M期磷酸酶Cdc25c解除Cdk1的磷酸化抑制CyclinA/B-Cdk1与酵母菌的成熟促进因子（matruring-promoting factor,MPF)功能相似磷酸化核纤层蛋白，使核膜解聚；磷酸化核纤层蛋白，使核膜解聚；磷酸化磷酸化RNARNA聚合酶，抑制转录，便于核仁解体；聚合酶，抑制转录，便于核仁解体；磷酸化组蛋白磷酸化组蛋白H1H1，使其相互结合，使核小体聚集；，使其相互结合，使核小体聚集；磷酸化凝集蛋白，促使染色体形成高级结构；磷酸化凝集蛋白，促使染色体形成高级结构；第三十二页，共八十一页。Cdc25近来的研究资料表明,3种Cdc25 亚型在G1/S、G2/M 转变和M 期中都有作用。3 种亚型能协同启动细胞(xbo)进入S 期和调控G2/M 的转变。Cdc25A 对于有效地促进细胞进入S 期是必需的,其表达量的增加可促进G1/S和G2/M 检验点之间的转变。Cdc25B和Cdc25C 在控制进入M 期和G2/M 检验点具有重要的作用。然而,Cdc25B 在G2/M 检验点早期阶段似乎具有更突出的作用,而Cdc25C控制G2/M 检验点的后期阶段。第三十三页，共八十一页。Cdc25 的作用(zuyng)机制Cdk 激酶活性通过Thr-14 和Tyr-15(在Cdk1中)的磷酸化作用(zuyng)而被负调控。Cdk1 的抑制性激酶在高等真核细胞中是wee1 和myt1 蛋白激酶。这些激酶通过Cdc25 磷酸酶的催化作用而发生去磷酸化,导致Cdk1/cyclin B 发生活化作用。第三十四页，共八十一页。3.清道夫：周期性蛋白质降解(jin ji)泛素介导的细胞周期调控蛋白泛素介导的细胞周期调控蛋白(dnbi)的降解的降解泛素被称为蛋白质降解标泛素被称为蛋白质降解标签，结合了泛素的蛋白质签，结合了泛素的蛋白质能被能被26S26S蛋白酶体识别并蛋白酶体识别并分解成短肽；分解成短肽；这是短命这是短命(dun mn)(dun mn)蛋白质和蛋白质和一些异常蛋白质降解的普一些异常蛋白质降解的普遍途径。遍途径。第三十五页，共八十一页。第三十六页，共八十一页。3.1 蛋白质的泛素化修饰(xish)过程泛素先被合成为一种没有活泛素先被合成为一种没有活性的前体，之后在性的前体，之后在C C端水解酶端水解酶的作用下暴露双的作用下暴露双GlyGly位点而进位点而进行成熟化。行成熟化。此后泛素依次被泛素激活此后泛素依次被泛素激活酶酶E1E1活化，转移至结合活化，转移至结合(jih)(jih)酶酶E2E2的半胱氨酸残基上，的半胱氨酸残基上，被连接酶被连接酶E3E3连接到靶蛋白表连接到靶蛋白表面的赖氨酸残基上。面的赖氨酸残基上。第三十七页，共八十一页。E3 activity complexSCF(Skp1+Cullin+F-box)complex Active from late G1 to early mitosis Mediates the destruction of G1 cyclins,Cdk inhibitors,et al.APC(anaphase promoting Complex)Degrade a nubmer of key mitotic proteins,including the mitotic cyclins.Destruction of them allows a cell to exit mitosis and enter a new cell cycle.第三十八页，共八十一页。SCFDegrade CyclinD/E in S phase,preventing the repetitive start of replication.第三十九页，共八十一页。The function of APCSeparation of sister chromatids.In anaphase,accumulation of the APC activator（Cdc20），activates the APC toward its substrates securin to release separase,which can hydrolize cohesion between the 2 sister chromatids,leading Eventual exit from mitosis APC bind to Cdh1,hydrolize cyclinB in cyclinB/Cdk1 complex.第四十页，共八十一页。Unlinking of sister chromatids initiates anaphaseModel for control of entry into anaphase by APC-regulated degradation of the cohesin link between sister chromatids.第四十一页，共八十一页。3.2 蛋白质的泛素化修饰(xish)作用S S期期SCF降解降解CycD/E，避免，避免DNA重复复制；重复复制；后期后期 APC降解降解cohesin，使姐妹染色单体分离，使姐妹染色单体分离末期末期 APC与与Cdh1结合后活化，降解结合后活化，降解CycA/B,启动启动M期退出机制期退出机制G1期期Cdh1启动自我降解，使启动自我降解，使CycD/E积累起来；积累起来；第四十二页，共八十一页。4.细胞周期检查点检查点是检查和控制细胞周期进程的信号通路。检查点是检查和控制细胞周期进程的信号通路。主要是检查和控制细胞周期中的一些关键转换。主要是检查和控制细胞周期中的一些关键转换。在细胞周期程序出现问题或者环境条件变化时被在细胞周期程序出现问题或者环境条件变化时被激活，通过增强对激活，通过增强对CdkCdk的结合抑制和磷酸化来阻的结合抑制和磷酸化来阻滞滞(z zh)(z zh)细胞周期进程，同时启动细胞周期进程，同时启动DNADNA修复、细胞修复、细胞凋亡等应对机制。凋亡等应对机制。第四十三页，共八十一页。细胞周期检控(jin kn)点的作用主要是调节细胞周期的时序转换，以确保DNA复制、染色体分离等细胞重要生命活动的高度精确性，并对DNA损伤、DNA复制受阻、纺锤体装配和染色体分离异常等细胞损伤及时做出反应，阻滞细胞周期的运行，诱导相关基因表达(biod)，使细胞有充分的时间对损伤进行修复，以防止突变和遗传不稳定的发生。如细胞损伤过大而无法修复，检控系统则启动相应的细胞凋亡机制将损伤细胞加以清除，以确保细胞基因组的完整性和遗传的稳定性。第四十四页，共八十一页。第四十五页，共八十一页。4.1 R点R R点是点是G G1 1期细胞能否期细胞能否(nn fu)(nn fu)顺利进入顺利进入S S期的关键。期的关键。R R点受细胞体积、接触抑制、营养条件、生长点受细胞体积、接触抑制、营养条件、生长因子、发育、药物、因子、发育、药物、DNADNA损伤情况等多方面因素损伤情况等多方面因素的影响，其中生长因子的存在是细胞越过的影响，其中生长因子的存在是细胞越过R R点的点的必要条件。必要条件。第四十六页，共八十一页。生长因子是一大类与细胞增殖有关的信号物生长因子是一大类与细胞增殖有关的信号物质，目前发现的生长因子多达几十种，多数质，目前发现的生长因子多达几十种，多数有促进有促进(cjn)(cjn)细胞增殖的功能。细胞增殖的功能。生长因子不由特定腺体产生，主要通过旁分泌生长因子不由特定腺体产生，主要通过旁分泌作用于邻近细胞。作用于邻近细胞。细胞在生长因子的刺激下，细胞在生长因子的刺激下，G1G1期期cyclin Dcyclin D表达表达。第四十七页，共八十一页。表皮生长因子表皮生长因子 转化生长因子转化生长因子/骨形成蛋白骨形成蛋白(dnbi)(dnbi)神经生长因子神经生长因子 成纤维细胞生长因子成纤维细胞生长因子 粒细胞集落刺激因子粒细胞集落刺激因子 粒细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子巨噬细胞集落刺激因子 血小板衍生生长因子血小板衍生生长因子 红细胞生成素红细胞生成素 血小板生成素血小板生成素 肝细胞生长子肝细胞生长子 .第四十八页，共八十一页。生长因子的分类(fn li)促进细胞周期促进细胞周期表皮生长因子，神经生长因子表皮生长因子，神经生长因子抑制细胞周期抑制细胞周期抑素，肿瘤坏死因子抑素，肿瘤坏死因子双重调节双重调节转化生长因子转化生长因子第四十九页，共八十一页。Checkpoints第五十页，共八十一页。4.2 DNA损伤(snshng)检控点Two such checkpoints:One in late G1:provents entry into S phase;One in late G2:provents entry into mitosis;第五十一页，共八十一页。DNA损伤(snshng)ATM/ATR细胞周期检测点激酶(jmi)1/2 Cdc25激活(j hu)激活磷酸化出核降解，不能解除细胞核内Cdk2的磷酸化抑制，防止细胞进入S期Mdm2磷酸化不能结合p53，p53留在细胞核内被磷酸化P21表达抑制cdk2/4/6活性，使细胞停滞在G1期非p53依赖途径P53依赖途径DNA损伤检控的两个途径第五十二页，共八十一页。P53:gene regulatory protein.DNA damage activates p53 by an indirect mechanism.Mdm2 acts as a ubiquitin ligase that targets p53 for destruction by proteasomes.Phosphrylated p53 reduce its binding to Mdm2.P21(CKI protein)binds to G1/S-Cdk and S-Cdk and inhibits their activities,thereby helping to block entry into S phase.第五十三页，共八十一页。p53 gene,cancer risk and aging in micep53 alleles in this mouse strain:+=wild type-=loss of functionm=mutationGood news!The m allele appears to confer resistance to tumors(6%vs 45%)Bad News!The m allele appears to have a cost in terms of aging(die off sooner than p53+/+wild types)第五十四页，共八十一页。4.3 DNA4.3 DNA复制复制(fzh)(fzh)检控点检控点DNA差错(chcu)信号ATM/ATR细胞周期检测点激酶(jmi)1/2 Cdc25激活激活磷酸化出核降解，防止Cdk1磷酸化抑制的解除Waf1/Cip1磷酸化激活Cdk1磷酸化抑制第五十五页，共八十一页。4.44.4中期中期/后期后期(huq)(huq)：分裂检控点：分裂检控点 第五十六页，共八十一页。An overview of the cell-cycle control system第五十七页，共八十一页。G1aG1bG1cG1dSG2MG0PDGFREGFRp53p16,p15p21p27pRBp21p27Cyclin DCDK4,6Cyclin ECDK2Cyclin ECDK2Cyclin ACDK2Cyclin A,BCDK1E2F第五十八页，共八十一页。Appendix:细胞周期调控(dio kn)蛋白Protein kinases and protein phophatases that modify Cdks.CAK and Cdc25 phosphatasesCdks inhibitory proteins.Ink4 family and Cip/Kip family Ubiquitin ligases and their activators.SCF(skp1-cullin-F box protein)APC(anaphase promoting complex)Gene regulatory proteins.E2F and p53第五十九页，共八十一页。细胞周期与医学(yxu)第六十页，共八十一页。1.周期蛋白(dnbi)表达异常Cyclin D over-expressed or amplified in a variety of human cancers.Breast 50%Head&Neck 43%*Esophageal 30%Bladder 15%Liver 10%S.C.Lung 10%*over-expression at time of surgery associated with increased risk of recurrence第六十一页，共八十一页。2.周期蛋白降解(jin ji)异常Over-expression of Cyclin A or Cyclin E may result from failure to undergo ubiquitin-mediated degradation.第六十二页，共八十一页。Insertional Mutagenesis of Cyclin A in Liver CancerCurr.Opin.Genet.Dev.3:11,1993Consequence:Protein is not degradedCyclin A over-expressed第六十三页，共八十一页。3.磷酸酶过表达(biod)cdc25A,cdc25B mRNA and protein over-expressed in:Aggressive Lymphomas(40-100%)Head and Neck tumorsNo over-expression in indolent lymphomas.cdc25C levels relatively low in all cancers.Deactivation of CDK activity by phosphorylation of ATP binding site or reactivation by phosphatases.Cancer Res.57:2366,1997Int.J.Cancer 89:148,2000第六十四页，共八十一页。4.CAK活性异常(ychng)Cdk7 moderately elevated in a variety of human tumor cell lines and biopsy specimens.Retinoblastoma Fibrosarcoma Osteosarcoma Cervix Soft Tissue SarcomaInt.J.Cancer 66:732,1996第六十五页，共八十一页。5.CKI缺失(qu sh)p16 Deletion(9p21)Most common deletion in Glioblastoma(GBM)More common in primary than secondary GBMAssociated with EGFR amplificationNot associated with p53 mutationConfers significantly higher rates of proliferation,and poor prognosis第六十六页，共八十一页。Science 264:436,1994第六十七页，共八十一页。p27-/-Increased animal size and organ overgrowth(particularly spleen and thymus)Female infertility,Disorganization of retina Pituitary hyperplasia(adenoma)No defect in response to TGF-B第六十八页，共八十一页。p27 Knockout MouseLittermates at 12 weeks Thymus GlandsCell 85:710,1996p27+/+p27-/-第六十九页，共八十一页。6.生长因子及其受体突变(tbin)第七十页，共八十一页。细胞周期研究(ynji)方法第七十一页，共八十一页。1.细胞周期同步化诱导同步化诱导同步化代谢抑制法代谢抑制法中期阻断法：秋水仙素中期阻断法：秋水仙素选择同步化选择同步化细胞分裂收获法细胞分裂收获法细胞沉降分离法细胞沉降分离法 第七十二页，共八十一页。1.1 代谢(dixi)抑制法原理：原理：选用选用DNADNA合成的抑制剂，可逆地抑制合成的抑制剂，可逆地抑制DNADNA合成，合成，而不影响其他时期细胞的运转，最终可将细胞群阻断而不影响其他时期细胞的运转，最终可将细胞群阻断在在S S期或期或G/SG/S交界处。交界处。优点：优点：同步化程度同步化程度(chngd)(chngd)高，适用于任何培养体系。高，适用于任何培养体系。可将几乎所有的细胞同步化。可将几乎所有的细胞同步化。缺点：缺点：容易产生非均衡生长，个别细胞体积增大。容易产生非均衡生长，个别细胞体积增大。第七十三页，共八十一页。1.2 细胞分裂收获(shuhu)法 方法：方法：使单层培养的细胞处于对数增殖期，此时分裂活跃，使单层培养的细胞处于对数增殖期，此时分裂活跃，有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性低，此时轻轻有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性低，此时轻轻振荡，振荡，M M期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收集培养期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续液，再加入新鲜培养液，依法继续(jx)(jx)收集，则可获收集，则可获得一定数量的中期细胞。得一定数量的中期细胞。优点：优点：操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害。害。缺点：缺点：获得的细胞数量较少。（分裂细胞约占获得的细胞数量较少。（分裂细胞约占1%1%2%2%）第七十四页，共八十一页。2.1 有关(yugun)名词 TG1TG1：G1G1期的持续时间期的持续时间 TG2TG2：G2G2期的持续时间期的持续时间 TSTS：S S期的持续时间期的持续时间 TMTM：M M期的持续时间期的持续时间 TCTC：一个细胞周期的持续时间一个细胞周期的持续时间 PLMPLM：标记的有丝分裂：标记的有丝分裂(yu s fn li)(yu s fn li)细胞所占的比例细胞所占的比例 TDRTDR：胸腺嘧啶核苷（：胸腺嘧啶核苷（Thymine Deoxyriboside,TDR），是，是DNADNA的特异前体，能被的特异前体，能被S S期细胞摄入，而掺进期细胞摄入，而掺进DNADNA中。通常使用的是中。通常使用的是3 3H H或者或者1414C C标记的标记的TDRTDR。第七十五页，共八十一页。2.细胞周期时间(shjin)的测定细胞周期时间的长短因细胞的类型、状态和环细胞周期时间的长短因细胞的类型、状态和环境而异。境而异。标记有丝分裂百分率法（标记有丝分裂百分率法（percentage percentage labeled mitoseslabeled mitoses，PLMPLM）是一种常用的测定细）是一种常用的测定细胞周期时间的方法胞周期时间的方法(fngf)(fngf)。其原理是对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、其原理是对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影技术显示标记细胞，通过统计利用放射自显影技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周期。期。第七十六页，共八十一页。2.1 有关(yugun)名词 TG1TG1：G1G1期的持续时间期的持续时间 TG2TG2：G2G2期的持续时间期的持续时间 TSTS：S S期的持续时间期的持续时间 TMTM：M M期的持续时间期的持续时间 TCTC：一个细胞周期的持续时间：一个细胞周期的持续时间 PLMPLM：标记的有丝分裂细胞：标记的有丝分裂细胞(xbo)(xbo)所占的比例所占的比例 TDRTDR：胸腺嘧啶核苷，是：胸腺嘧啶核苷，是DNADNA的特异前体，能被的特异前体，能被S S期细胞期细胞摄入，而掺进摄入，而掺进DNADNA中。通常使用的是中。通常使用的是3H3H或者或者14C14C标记的标记的TDRTDR。第七十七页，共八十一页。2.2 PLM法原理(yunl)待测细胞经待测细胞经3 3H-TDRH-TDR标记后，所有标记后，所有S S期细胞均被期细胞均被标记。标记。S S期细胞经期细胞经G2G2期才进入期才进入M M期，所以一段时间内期，所以一段时间内PLM=0PLM=0。开始出现标记开始出现标记M M期细胞时，表示期细胞时，表示(biosh)(biosh)处于处于S S期最期最后阶段的细胞，已渡过后阶段的细胞，已渡过G2G2期，所以从期，所以从PLM=0PLM=0到出到出现现PLMPLM的时间间隔为的时间间隔为TG2TG2。第七十八页，共八十一页。S S期细胞逐渐进入期细胞逐渐进入M M期，期，PLMPLM上升，到达上升，到达(dod)(dod)最高最高点的时候说明来自处于点的时候说明来自处于S S最后阶段的细胞，已完最后阶段的细胞，已完成成M M并进入并进入G1G1期。所以从开始出现标记的期。所以从开始出现标记的M M期细期细胞到胞到PLMPLM达到最高点（达到最高点（100%100%）的时间间隔就是）的时间间隔就是TMTM。当当PLMPLM开始下降时，表明处于开始下降时，表明处于S S期最初阶段的细期最初阶段的细胞也已进入胞也已进入M M期，所以出现期，所以出现LMLM到到PLMPLM又开始下降又开始下降的一段时间等于的一段时间等于TSTS。第七十九页，共八十一页。从从LMLM出现到下一次出现到下一次LMLM出现的时间间隔就等于出现的时间间隔就等于TCTC，根据，根据TC=TG1+TS+TG2+TMTC=TG1+TS+TG2+TM即可求出的即可求出的TG1TG1长度长度事实上由于一个细胞群体中事实上由于一个细胞群体中TCTC和各时相不尽和各时相不尽相同，第一个峰常达不到相同，第一个峰常达不到100%100%，以后的峰会，以后的峰会发生衰减，发生衰减，PLMPLM不一定会下降到零，所以不一定会下降到零，所以(suy)(suy)实实际测量时，常以（际测量时，常以（TG2+1/2TMTG2+1/2TM）-TG2-TG2的方式求出的方式求出TMTM。第八十页，共八十一页。内容(nirng)总结细胞周期及其调控。CyclinB在S晚期开始在细胞质内合成，核膜崩解前进入细胞核内。Cdk1此时被Wee1磷酸化而处于失活状态，cyclinA/B-Cdk1无活性。这是短命蛋白质和一些异常蛋白质降解(jin ji)的普遍途径。不能结合p53，p53留在细胞核内被磷酸化。抑制cdk2/4/6活性，使细胞停滞在G1期。p27+/+。2.2 PLM法原理第八十一页，共八十一页。