血凝仪SOP文件希森美康CA500、510.doc

全自动血凝分析系统标准操作规程SOP编码： 页数：页制定人签名： 日期： 审核人签名： 日期： 批准人签名： 日期:生效日期： 颁发日期:周期性审查: 年一次修订登记：编码页码修订内容修订依据签名/日期审查登记：审查日期签名修订依据签名/日期文件編號：Lab。SOP-COA-0001版 次：01标准作业程序-全自动血凝仪CA500編修日期:05。09。15頁 次：第 1 頁共4頁使用单位：编 写:1 。原理CA500中具有具有2种检测原理方法的型号称CA530，同时具有：凝固法、发色底物法1。1.1 凝固法：基本测试原理是光学法的散射光检测（用660nm光电二极管检测散射光强度的变化）,还并用了百分比方式的测定原理：当试剂加入标本后,凝血开始启动,随之光学出现变化，仪器把这种光学的变化描绘成凝固曲线:把开始出现凝集的起始点作为0、把完全凝固的终点作为100、把50变化点处作为凝固时间（报告点），当测定含有干扰物（黄疸、溶血、高脂血症等）或低纤维蛋白原血症的特殊标本时，其作为起始点的0%的基线会随之上移或下移，相当于扣除本底干扰。以上凝固法检测原理所测定的项目包括了最常用的如PT、APTT、FIB、TT、内源凝血因子（F VIII、XI、XI、XII），外源凝血因子（F II、V、VII、X）等1.1。2. 发色底物法的检测原理：是通过测定产色物质的吸光度变化，以推算待测物的含量，这种方法属生物化学法，其基本原理是:试剂中为人工合成的含某种酶裂解位点的短肽，与产色物质如对硝基苯胺(pNA)连接，待检物品中含有活性酶或无活性的酶原被加入的激活剂活化，在检测过程中产色物质被解离下来，使被检物品出现颜色变化，其与被检物含量呈一定的数量关系。此方法以酶学方法为基础，可检测项目包括如：AT-III、Plg、PC、PS、FM、PAI，Tpa,2-AP等。2 .标本l 使用3.8或3。2(W/V）拘橼酸钠溶液作为抗凝剂；l 血样与抗凝剂的比例为9：1，如果血球压积20%或55%,则需调整这个比例，方法是：0。00185血液毫升数(100-压积)=抗凝剂毫升数；或不同比积血样可参考下表使用不同浓度的抗凝剂（仍按9：1比例抽血）此表参考丛玉隆血栓止血实验质量控制应注意的几个问题 红细胞压积 枸橼酸钠 (%） 溶液浓度(%） 红细胞压积 枸橼酸钠 (） 溶液浓度（%）70 1.57l 血浆分离（如果不能立即测试，应尽快分离血浆)；一采样后60分钟内进行；一分离血浆应在3000r/min 离心10分钟，务使血小板去除;l 盛血浆容器应加塞，防止PH改变;l 血浆应保存在28l 血浆存放时间不能太久:温度有效时间室温2hr284hr202Weeks706monthsl 低温保存的样品，要在37迅速解冻，减低凝血因子的消耗，并立即测试。3 试剂及配套消耗品3.1试剂3.1。1反应试剂： 采用CA500血凝仪配套Dade Behring试剂，具体见相应项目要求3。1。2 系统清洁液:厂家配套Sysmex Clean I清洁液，用于检测过程中样品针、试剂针的冲洗;3。1。3 系统冲洗液：蒸馏水，实验室自制,用于检测过程中系统管路的冲洗3。1.4 ：稀释液：配套Dade Behring的Owerns Veronal Buffer 和CA System Buffer，用于检测过程中样本的稀释或定标曲线制定中标准血浆的稀释;3。2 其它消耗品 3.2.1 反应杯:厂家配套Sysmx Reaction Tube反应杯 ，货号：SU4003.3。 检测环境要求: 3.3。1 温度： 10 - 30 C；湿度： 20 - 80% (无冷凝）3.3。2 电源： 交流电100240V，50/60Hz;最大输入电量: 最大250伏安，功率：720VA3.3。3 请勿将仪器直接置于水、直射阳光、冷凝或大风的环境中，这样会导致不正确的检测结果并导致仪器工作不正常而损坏3。3。4 仪器的背面和墙之间要始终保持20厘米以上的距离。否则，仪器会过热，连接导管和连接负载过大而可能引发火灾。4 校准4.1定期进行光学通道灵敏度校准检测 （半年一次，由厂家工程师进行）4。2 定期进行温度检测校准 （半年一次，或有相应温度错误报警时进行，由厂家工程师执行）4.3 定期进行机械位置检查调校 (半年一次，或有相应定位错误报警时进行，由厂家工程师执行）4。4 项目定标：入Fbg、FVIIII这些报告单位为含量浓度、活性单位的项目,原则上每更换一批号试剂就要进行定标曲线的重新制备,方法如下： 4。4.1 按要求溶解好定标血浆,放室温10分钟后使用 4.4。2 在主菜单选择选择项目（如Fbg)选按相应实验项目名称键 （如 PT 、APTT)， 输入此标本要测试项目则选中项目相应位置标记为 ”, 按 ENTER 确认； 用键，同样输入标本的编号、项目，至全部输入完, 仪器接受所输入的工作任务,将检体按编号顺序摆入样本架，放置好在进样器上，注意样本架左小角凹槽要插人固定位,在仪器Ready状态下,按START ，根据提示按 First Tube（从第一反应杯开始使用） 或Continue(从前一次剩下的杯开始使用）当“Replace Rack？显示为”YES“，可将进样架向前拉出，继续添加样本，如上述操作继续标本测试6.3。2急诊标本检测：在检测过程中如有紧急检体插入，按 INTERR ，选择 STAT ，当“Replace Rack？显示为”YES“，可将进样架向前拉出，用 ID No。 Entry输入相应急诊样本标号,将标本放在唯一的急诊位，推入进样架，如6.3。1一样按项目名称键为每标本选择要测试的项目，确认,按,开始急诊检测。6.3.3 查看结果:返回主屏幕，检测的项目如果由“”变为“”表明此试验已经完成，然后按下“StoredData(储存结果）键，屏幕会换到结果显示界面，按下边第一个菜单“Graph”，查看凝集曲线、吸光度、结果等，检查是否有Error错误信息，有错误报警的标本需考虑重测6。3。4关机前冲洗针:关机前需要洗针，在主屏幕上选“RinseProbe,然后按下“Execute”6。4 关机：回到主屏幕下，切断仪器电源。7 维护保养7.1 每日维护:7.1。1 清空已用过的反应杯:，从仪器右侧取出废杯箱-倒空废杯-清洁废杯箱并放回7.1.2 清洁试剂位:打开遮光盖把试剂架取出。 将试剂架连同试剂放入冰箱，-用棉纱布擦干净试剂 位冷凝水-盖好遮光盖7.2 每周维护7.2。1 液路冲洗：仪器在Ready”状态下,从主菜单按Special Menu-按Maintain键-按Rinse&Prepare键-按Execute键,运行此程序-完成后按Return键返回7。2.2 清洁仪器:定期用纱布、棉签等擦干净仪器内外；包括放试剂位置、放反应杯位置、检测通道和各处表面位置。7。3 需要时维护：定期清洁冲洗瓶盛蒸馏盛蒸馏水容器、清洁机械位置、清洁滤水器, 检查防逆流瓶，有液体要清倒，清洁检测部（预温孔和测量孔)8 健康和安全操作指南所有操作维护需注意以下:9 参考附件9.1CA500 OPERATORS MANUAL9.2 CA500常规操作流程9.3 CA500日常维护及常见故障处理文件編號:Lab.SOPCOA-0002版 次：01标准操作规程活化部分凝血活酶时间测定（APTT）編修日期：05.09。15頁 次：第 頁共 頁单位名称：编 写：1.项目名称: 活化部分凝血活酶时间（ActivatedPartialThromboplastinTime,APTT）2.检验原理： 2。1.检测原理：全自动血凝仪测定，散射光凝固法检测-血浆样本经过一定时间的温育后，加入反应试 剂，仪器采用波长为660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程（纤维蛋白原 转化为纤维蛋白）中的浊度变化，从散射光光强度的测定可得凝集曲线，再通过百分比原理方法求得凝血 时间。 2。2. 反应方法学溯源：37条件下，以鞣花酸激活因子和，以脑磷脂（部分凝血活酶)代替血小板， 在Ca+参与下，观察贫血小板血浆凝固所需时间，即为活化部分凝血活酶时间，是内源凝血系统较敏感和 常用的筛选试验。3。设备参数： 3。1。设备:仪器型号SysmexCA1500全自动血凝分析仪 3.2。分析和计算参数:报告单位 秒(S） 3.3。样本量：50l，试剂量:50ul激活剂，50ul CaCl2 3.4。检验时间:在最长检验时间之内测出结果,标准设置最长检验时间：190秒 3.5。重复性：CV24.试剂及配套品： 4.1.激活剂:Cephaloplastin试剂（DadeActinActivatedCephaloplastinReagent） 4.1。1.商标：德灵（DADEBEHRING) 4。1。2.包装规格: 1010ml 4.1。3。货号：B4218-12 4。1.4.成分:脑磷脂（从干燥兔脑粉中提取）加入含有缓冲液、稳定剂和防腐剂的1.0 104M的鞣花酸溶液 4。1.5.使用方法:液体试剂,直接使用. 4.1.6储存：没开盖试剂放28存放至包装有效期，开盖后28有效期7天4.2。氯化钙溶液(CalciumChlorideSolution）4。2.1。商标:德灵（DADEBEHRING）4。2.2.包装规格：1015ml4。2。3。货号：ORHO374。2.4。成分：0.025mol/L的氯化钙溶液 4。2。5。使用方法：液体试剂,直接使用. 4。2。6储存:没开盖试剂放28存放至包装有效期,开盖后28有效期7天4.3 清洗液(Clean I）:用于测定过程中的吸样针冲洗4.3.1。商标：希森美康（Sysmex)4。3.2.包装规格:50ml4。3.3.货号：GSA500A4。3。4。成分：1%次氯酸钠及活性成分 4。3.5.使用方法:液体试剂，直接使用。4.3.6储存：没开盖试剂放28存放至包装有效期,开盖后放于仪器上有效期仅24小时4.4。校准质控血浆（Ci-Trol）4。4.1.商标:德灵（DADEBEHRING)4。4。2货号： Level1(Normal），291070101mlLevel2(Abnormal），291071101mlLevel3(Abnormal)，291072101ml 4.4.3。使用方法:1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用 4.4。4储存: 室温： 2h， 28： 4h,冷冻分装保存：20C 2周，70C 6个月 5. 操作步骤:5.1。开机：开打印机电源开CA500仪器右侧电源开机后机器进行自检、预热，当屏幕上显示“Ready”时可以进行试验5。2。每日针冲洗:在主屏幕上选“RinseProbe”，然后按下“Execute”进行针冲洗5。3。准备试剂:按照仪器试剂位置设定,把上述每项的试剂准备好，放在相应的位置 5。4.准备反应杯：将杯架上每个位置排好反应杯5.5.准备标本：将室内质控和离心好的样本放在相应的样本架上（一个架子可放10 个样本），准备好放在进样器上5.6.输入试验项目：按下主菜单上的“WorkList”键，在试验项目键点击APTT，使 APTT项目下显示“变为“”,按“或将需要测试标本如上操作选择；5.7。输入样本号：按下“IDNo。Entry”，按顺序输入样本的序号或病人的病历号5。8。开始检测：待一切准备工作就绪，按下屏幕右上角“START键,仪器开始检测5。9.查看结果：返回主屏幕，检测的项目如果由“”变为“表明此试验已经完成，然后按下“StoredDate”（储存结果）键,屏幕会换到结果显示界面，按下边第一个菜单“Graph”，查看凝集曲线、吸光度、结果等，检查是否有Error错误信息,有错误报警的标本需考虑重测5.10.关机前冲洗针：关机前需要洗针，按下“RinseProbe”，然后按下“Execute”5.11。关机：回到主屏幕下，切断仪器电源,关闭打印机.6。参考范围：APTT（sec):2535s7。临床意义：常用来筛选内源性凝血系统(VIII、IX、XI、XII）及肝素抗凝治疗的监测7。1。APTT延长：见于先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接触因子XII、XI缺乏，VWF等)；多种凝血子缺乏(如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、纤溶亢进等);血液中有抗凝物存在7。2.对内源凝血途径因子(、）缺乏较CT敏感（血小板异常不影响APTT)能检出：C小于25%的轻型血友病。对凝血酶原、纤维蛋白原缺乏则不够敏感，故APTT延长的最常见疾病为血友病。此时可进一步做纠正试验，即于患者血浆中加入1/4量的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆或正常血清（试剂参见凝血酶原消耗试验的纠正试验），再做APTT，如正常血浆和吸附血浆能纠正延长的结果而血清不能纠正，则为因子缺乏；如吸附血浆不能纠正，其余两者都能纠正，则为因子缺乏；如三者都不能纠正，则为病理性循环抗凝物质。7.3。APTT缩短：见于DIC高凝期和妊娠高血压综合症等高凝状态7.4。是监测肝素治疗的首选指标:：在使用肝素治疗时,多用APTT监测药物用量，一般以维持结果为基础值的2倍左右8.标本要求：8.1.使用3。8%拘橼酸钠溶液作为抗凝剂；8.2。血样与抗凝剂的比例为9:1，如果血球压积55%，则需调整这个比例,方法是：0.00185血液毫升数（100压积）=抗凝剂毫升数；8.3。血浆分离（如果不能立即测试,应尽快分离血浆)；一采样后60分钟内进行；一分离血浆应在3000r/min 离心10分钟,务使血小板去除；8.4。血浆保存条件：温度有效时间室温2hr284hr-202Weeks706months8。5.低温保存的样品，要在37迅速解冻,减低凝血因子的消耗，并立即测试。8。6。所有与标本接触的试管、吸管等均采用用塑料或硅化处理的.8.7. 拒收标本：严重溶血、黄疸、脂血或出现凝块，距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的9。 参考依据：CA500全自动血凝仪使用手册,试剂使用说明书10. 附件:10。1 CA500常规操作流程10。2. APTT试剂使用说明书编写者：日期：科主任签字:文件編號:Lab.SOPCOA-0003版 次:01标准操作规程-凝血酶原时间测定(PT）編修日期：05。09.15頁 次:第 頁共 頁单位名称：编 写：1。项目名称：血浆凝血酶原时间测定（prothrombintime,PT）2。检验原理： 2。1.检测原理：全自动血凝仪测定，散射光凝固法检测原理-血浆样本经过一定时间的温育后，加入反应试剂，仪器采用波长为660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白)中的浊度变化，从散射光光强度的测定可得凝集曲线，再通过百分比原理方法求得凝血 时间。2.2. 反应方法学溯源: 凝血酶原时间（PT)测定是Quick于1935年创立的。在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶（人脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液）和钙离子,使凝血酶原变为凝血酶,后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需要的时间即凝血酶原时间.其凝固时间取决于凝血因子、的水平。该试验是反映外源凝血系统最常用的筛选试验。3.设备参数: 3.1。设备:仪器型号SysmexCA500全自动血凝分析仪 3。2。分析和计算参数:凝血酶原时间-秒（S), 国际标准化比值INR, 凝血酶原活动度%， 凝 血酶原比值-PTR 3。3。样本量：50l，试剂量:100ul0 3.4.检验时间：在最长检验时间之内测出结果，标准设置最长检验时间：120秒 3.5.重复性：CV24.试剂及配套品：4.1.反应试剂：凝血活酶含钙试剂（ThromborelS) 4.1.1商标:德灵（DADEBEHRING） 4.1.2包装规格：1010ml4。1.3使用方法：每瓶用10ml蒸馏水溶解，须放置室温或3730分钟后才使用保存：未溶解试剂28 至包装有效期，试剂溶解后28 ：7天 4.1.4货号: OUHP49 4。1.5参数：ISI(国际敏感度指数）1.02（每次更换试剂批号需将包装中所附ISI指数表中对应仪器型号的ISI值输入仪器中。(输入方法：主菜单STANDARD CURVESELECT TESTPTMANUAL ENTRY光标在ISI处输入ISI值4。1。5.成分：ThromborelSReagent中包含： a.冻干人胎盘促凝血酶原激酶(lyophilizedhumanplacentalthromboplastin） b。氯化钙（calciumchloride） c。稳定剂(stabilizers） d.防腐剂(Preservatives) 4。2 清洗液(Clean I）:用于测定过程中的吸样针冲洗 4.2。1.商标：希森美康（Sysmex） 4。2。2。包装规格：50ml 4.2.3.货号：GSA500A 4.2。4。成分：1次氯酸钠及活性成分 4。2.5。使用方法:液体试剂，直接使用。4.2.6储存：没开盖试剂放28存放至包装有效期， 开盖后放于仪器上有效期仅24小时4.3 标准血浆: (StandardHumanPlasma）-用于PT的定标校准4。3.1商标：德灵（DADEBEHRING)4。3。2货号：ORKL 13 4.3.3包装:6X1ml 4.3。4.使用方法：1ml蒸馏水溶解，放置15分钟后使用 4.3。5储存：没开配试剂放28存放至包装有效期, 开配后保存条件： 室温: 2h, 28： 4h， 20C分装冷冻保存：2周, 70C分装冷冻保存：6 个月4.4。质控血浆(CiTrol）4。4.1。商标：德灵（DADEBEHRING）4。4。2货号: Level1(Normal)，291070101mlLevel2（Abnormal），291071101mlLevel3(Abnormal)，291072101ml 4.4.3.使用方法:1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用 4。4.4储存: 没开配试剂放28存放至包装有效期， 开配后保存条件： 室温: 2h, 28： 4h,冷冻分装保存：20C 55，则需调整这个比例,方法是：0。00185血液毫升数（100-压积）=抗凝剂毫升数；8。3。血浆分离（如果不能立即测试，应尽快分离血浆）；一采样后60分钟内进行;一分离血浆应在3000r/min 离心10分钟，务使血小板去除;8。4.血浆保存条件:温度有效时间室温2hr284hr-202Weeks706months8。5。低温保存的样品，要在37迅速解冻，减低凝血因子的消耗，并立即测试。8.6.所有与标本接触的试管、吸管等均采用用塑料或硅化处理的。8。7。 拒收标本:严重溶血、黄疸、脂血或出现凝块，距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的9。 参考依据：CA500全自动血凝仪使用手册，试剂使用说明书10。 附件：10.1 CA500常规操作流程10.2。 PT试剂使用说明书文件編號:Lab。SOPCOA-0004版 次:01标准操作规程 血浆纤维蛋白原定量测定（Fib）編修日期：05。09.15頁 次：第 頁共 頁单位名称：编 写:1。项目名称: 纤维蛋白原（Fibinogen)2.检验原理： 2.1。检测原理：全自动血凝仪测定，散射光凝固法检测原理-血浆样本经过一定时间的温育后，加入反应试剂，仪器采用波长为660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白)中的浊度变化，从散射光光强度的测定可得凝集曲线，再通过百分比原理方法求得凝血时间。先用此方法分别测定不同FIB浓度的标准血浆制定横坐标为凝血时间,纵坐标为Fib浓度的Fib标准曲线,在测定病人血浆时测定的凝血时间与标准曲线上对应的时间浓度值一一对应，仪器则自动报告出Fib含量（g/L）。 2。2。 反应方法学溯源:纤维蛋白原测定（Clauss法）原理-37条件下，凝血酶将可溶性的血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性的多聚体纤维蛋白。当凝血酶浓度较高(约为100NIH/ml）且纤维蛋白原浓度较低（0。050.8g/L）时该反应决定于纤维蛋白原浓度，凝血酶凝血时间与纤维蛋白原浓度相比较呈线形关系。3。设备参数: 3.1。设备：仪器型号SysmexCA1500全自动血凝分析仪 3。2.分析和计算参数：报告单位 秒（S)，Fib定量g/L 3.3.样本量：1/10稀释标本100ul(10ul血浆+90ul缓冲液）,试剂量:50ul 3.4.检验时间：在最长检验时间之内测出结果,标准设置最长检验时间:190秒 3。5.重复性：CV44。试剂及配套品：4.1。反应试剂：凝血酶试剂（ThrombinReagent） 4。1.1商标：德灵(DADEBEHRING） 4.1.2包装规格：105ml 4。1.3货号：B4233-27 4.1.4成分： 牛凝血酶冻干粉（lyophilizedpreparationofbovinethrombin）(近似 100NIHunits/ml）4。1.5使用方法:5ml蒸馏水充分溶解后使用4.1.6储存： 没开配试剂放28存放至包装有效期, 开配后保存条件: 28: 5天 4。2缓冲液（DadeOwrenSVeronalBuffer或CA System Buffer）用于标本稀释 4.2.1商标：德灵(DADEBEHRING） 4。2.2包装规格： 1015ml或1X500ml 4。2。3货号：B423425或B426535 4.2。4成分： a.2.8410M的巴比妥钠(sodiumbarbital） b.1.2510M的氯化钠(sodiumchloride) c.PH7。350。14。2.5使用方法:每次倒出刚够当天使用的量放置于仪器上使用.4.2。6储存： 没开配试剂放28密封存放至包装有效期， 开盖后放置仪器上保存：24h,使用放置时间太长的缓冲液会导致凝血时间延长即Fib含量测定偏低! 4。3。清洗液(Clean I）:用于测定过程中的吸样针冲洗 4。3.1.商标：希森美康（Sysmex） 4.3.2.包装规格：50ml 4.3。3.货号:GSA500A 4。3.4.成分:1次氯酸钠及活性成分 4。3.5。使用方法：液体试剂,直接使用.4。4 标准血浆: （StandardHumanPlasma）-用于Fib的定标校准4.4.1商标：德灵（DADEBEHRING）4。4。2货号：ORKL 13 4.4。3包装:6X1ml 4.4。4。使用方法：1ml蒸馏水溶解,放置15分钟后使用 4.4.5储存：没开配试剂放28存放至包装有效期, 开配后保存条件： 室温： 2h， 28: 4h, 20C分装冷冻保存：2周， 70C分装冷冻保存：6 个月4。5。质控血浆（CiTrol)4.5。1。商标:德灵（DADEBEHRING)4.5.2货号： Level1(Normal),291070101mlLevel2，291071101mlLevel3,291072101ml 4.5。3.使用方法：1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用 4。5.4储存： 没开配试剂放28存放至包装有效期, 开配后保存条件: 室温: 2h, 28: 4h,冷冻分装保存：20C 2周，-70C 6个月 5。 操作步骤：5。1。开机:开打印机电源开CA150