枢经推拿对脊髓神经结扎大鼠模型炎症反应及SOCS1、TLR4蛋白表达的影响.pdf

基础研究枢经推拿对脊髓神经结扎大鼠模型炎症反应及S O C S 1、T L R 4蛋白表达的影响*吴丽萍1,梁英业2,唐宏亮3,陈玲女1,王天翊1,庞军2,王开龙2(1.广西中医药大学第一临床医学院,南宁 5 3 0 2 0 0;2.广西中医药大学第一附属医院推拿科,南宁 5 3 0 0 2 3;3.广西中医药大学附属防城港医院,广西 防城港 5 3 8 0 2 1)摘要:目的 本研究旨在探讨枢经推拿对神经病理性疼痛(N P)的抑炎镇痛机制。方法 3 0只S P F级S D大鼠随机分为正常组、模型组、推拿组、假推拿组、假手术组,每组6只。除了正常组不进行处理,假手术组暴露L5神经外,其余3组大鼠采用脊神经结扎(S N L)法建立N P大鼠模型。造模后第1天开始,推拿组给予枢经推拿治疗,假推拿组给予抚摸,持续干预7 d,在造模前1 d及造模后1 d、3 d、7 d检测各组大鼠热痛缩足反应潜伏期(PWL)和机械性刺激缩足反应阈值(PWT)。干预7 d后,采用W e s t e r n b l o t检测大鼠脊髓背角中细胞因子信号转导抑制因子1(S O C S 1)、T o l l样受体4(T L R 4)、核因子 B(N F-B)表达水平,采用E L I S A检测脊髓背角组织白细胞介素6(I L-6)水平。结果 造模前1 d,各组大鼠的PWT、PWL没有显著差异(P0.0 5);造模后1 d、3 d、7 d,与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的PWT、PWL均降低(P0.0 5),且造模后3 d和7 d,与模型组、假推拿组相比,推拿组大鼠的PWT、PWL均升高(P0.0 5)。与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的S O C S 1蛋白水平均明显升高(P0.0 5);推拿组大鼠与模型组、假推拿组相比,S O C S 1水平升高(P0.0 5)。与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的脊髓背角T L R 4、N F-B、I L-6水平明显增加(P0.0 5);与模型组相比,推拿组大鼠的T L R 4、N F-B、I L-6水平明显降低(P0.0 5).O n d a y s 1,3,a n d 7 a f t e r m o d e l i n g,c o m p a r e d w i t h t h e n o r m a l a n d s h a m s u r g e r y g r o u p s,t h e PWT a n d PWL o f t h e s h a m m a s s a g e g r o u p,m a s s a g e g r o u p,a n d m o d e l g r o u p w e r e a l l s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P0.0 5).A d d i t i o n a l l y,t h e PWT a n d PWL o f t h e m a s s a g e g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d o n d a y s 3 a n d 7 a f t e r m o d e l i n g a s c o m-p a r e d w i t h t h e m o d e l a n d s h a m m a s s a g e g r o u p s(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e n o r m a l a n d s h a m s u r g e r y g r o u p s,t h e l e v-53保健医学研究与实践2 0 2 4年1月第2 1卷第1期 H e a l t h M e d R e s&P r a c J a n.2 0 2 4 V o l.2 1 N o.1*基金项目:国家自然科学基金项目(8 2 0 7 4 5 7 4,8 2 2 0 5 3 0 5,8 2 2 6 0 9 6 1,8 2 2 6 0 9 7 6);广西高校青年教师项目(2 0 2 0 K Y 0 7 0 1 4)。第一作者:吴丽萍,E-m a i l:w u 1 1 7 2 5 2 1 2 1 3o u t l o o k.c o m。通信作者:梁英业,E-m a i l:7 9 1 5 0 1 6 7 4q q.c o m。e l s o f S O C S 1 p r o t e i n i n t h e s h a m m a s s a g e g r o u p,m a s s a g e g r o u p,a n d m o d e l g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l a n d s h a m m a s s a g e g r o u p s,t h e l e v e l s o f S O C S 1 i n t h e m a s s a g e g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e n o r m a l a n d s h a m s u r g e r y g r o u p s,t h e l e v e l s o f T L R 4,N F-B,a n d I L-6 i n t h e s p i n a l d o r s a l h o r n o f t h e s h a m m a s s a g e g r o u p,m a s s a g e g r o u p,a n d m o d e l g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e l e v e l s o f T L R 4,N F-B,a n d I L-6 i n t h e m a s s a g e g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P0.0 5).C o n-c l u s i o n T h e c h a r a c t e r i s t i c m a s s a g e c a n i m p r o v e N P i n d u c e d b y S N L,a n d i t s m e c h a n i s m m a y b e r e l a t e d t o t h e u p r e g u l a t i o n o f S O C S 1 p r o t e i n e x p r e s s i o n i n t h e s p i n a l d o r s a l h o r n,t h e d o w n r e g u l a t i o n o f T L R 4 a n d N F-B p r o t e i n e x p r e s s i o n t h r o u g h n e g a t i v e f e e d b a c k,a n d t h e r e d u c t i o n o f p r o-i n f l a mm a t o r y c y t o k i n e I L-6 p r o d u c t i o n.K e y w o r d s:C h a r a c t e r i s t i c m a s s a g e;S u p p r e s s o r o f c y t o k i n e s i g n a l i n g 1;T o l l-l i k e r e c e p t o r 4;N u c l e a r f a c t o r-B;I n t e r l e u k i n-6;N e u-r o p a t h i c p a i n 神经病理性疼痛(N P)是一种难以诊断和治疗的慢性、复杂的疼痛表现,以烧灼样或电击样感觉、不愉快的躯体感觉体验为特征,是影响中枢和外周躯体感觉系统病变或功能障碍的直接因素1。目前N P的发病机制尚未明确,其人群患病率为7%1 0%,N P患者占慢性疼痛患者的2 0%2 5%2。患者主要临床表现为自发性疼痛、痛觉过敏、痛觉超敏和诱发性疼痛、牵涉痛3。临床常用抗惊厥药、抗抑郁药、局部治疗等方式通过阻断神经传递改善症状4,但忽略了潜在的疼痛发病机制及其阶段进展,以上治疗方式都存在疗效有限、副作用大等不足,因此N P的治疗仍是一个有待突破的难题5。N P属中医“痛症”范畴,而中医推拿治疗痛症历史悠久。枢经推拿源于中医推拿,从六经“太阳为开,阳明为阖,少阳为枢”思想发展而来。少阳是疾病顺逆转折点,因此调和少阳枢机作为治疗之关键不言而喻。近年来枢经推拿治疗N P的疗效逐渐获得认可,其机制与抑制T o l l样受体4(T L R 4)信号通路的激活有关6-8。但枢经推拿如何通过调控T L R 4信号通路治疗N P需进一步研究。细胞因子信号转导抑制因子1(S O C S 1)是细胞因子反应 的 重 要 调 节 因 子,S O C S 1通 过 调 节 驱 动T L R 4途径的反应在以过度炎症反应为特征疾病中的治疗潜力已经被发现9,但在N P中尚未明确。因此,本研究重点观察枢经推拿对S O C S 1、T L R 4信号通路蛋白表达的影响,以期为阐明枢经推拿的抑炎镇痛机制提供新思路。1 材料与方法1.1 实验动物 S P F级雌性S D大鼠,体质量1 8 02 2 0 g,81 0周龄,购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司 生产许可证号:S C X K(湘)2 0 1 9-0 0 0 4;使用许可证号:S Y X K(桂)2 0 1 9-0 0 0 1。所有动物均在标准条件下(1 21 2 h光暗循环)饲养,所有大鼠分笼饲养,在(2 41)条件下自由进食和饮水。适应性喂养7 d后进行实验。本动物实验方案经过广西中医药大学伦理委员会批准,符合动物保护、动物福 利 和 伦 理 原 则(动 物 实 验 伦 理 审 批 号DW 2 0 2 2 0 6 2 1-1 2 9)。1.2 实验药品与试剂兔抗核因子 B(N F-B)、S O C S-1(美国A f f i n i t y公司,货号分别为A F 5 0 0 6、A F 5 3 7 8)、兔抗T L R 4(武汉三鹰生物技术有限公司,货号1 9 8 1 1-1-A P);超敏E C L化 学 发 光 试 剂 盒(碧 云 天 生 物 技 术,货 号P 0 0 1 8 S);S D S-P A G E蛋白上样缓冲液(上海碧云天公司,货 号P 0 0 1 5);Q u i c k B l o c kTMW e s t e r n封 闭 液(上海碧云天公司,货号P 0 2 5 2);大鼠白细胞介素6(I L-6)酶联免疫吸附测定(E L I S A)试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司,货号E-E L-R 0 0 1 5 c)。1.3 主要仪器凝胶扫描成像系统(美国B i o-R a d公司,型号C h e m i D o c X R S);全自动酶标仪(美国B i o-R a d公司,型号E l x 8 0 0);超低温冰箱(美国T h e r m o公司,型号9 0 2-U L T S);电泳槽及电泳仪(美国B i o-R a d公司,型号1 6 5 8 0 3 4);高速低温离心机(美国赛默飞世尔科技公司,型号S T 1 6 R);V o n F r e y纤维丝(美国I I T C公司,型号N C 1 2 7 7 5);按摩推拿手法 模 拟 仪(中 华 人 民 共 和 国 发 明 专 利 号Z L 2 0 0 7 1 0 1 8 7 4 0 3.1)。1.4 方法1.4.1 脊神经结扎(S N L)模型制备 S N L模型是外周N P的代表性动物模型。将3 0只S D大鼠适应性饲养7 d后,随机分为正常组(6只)、假手术组(6只)、造模组(1 8只)。造模组大鼠常规麻醉后,定位两侧髂后上棘及横突后备皮,采用7 5%酒精消毒后在左侧髂后上棘与脊柱之间,切开一条长度约2 c m的和脊柱平行的纵行切口。将软组织钝性分离,暴露并小心取出L6脊椎左侧的横突,剔除与之连结的软组织及骨板,暴露L4、L5脊神经,将左侧L5脊神经用5-0的可吸收性羊肠线双层结扎。手术创口用3-0可吸收性线闭合,生理盐水清洗及碘伏消毒1 0。63保健医学研究与实践2 0 2 4年1月第2 1卷第1期 H e a l t h M e d R e s&P r a c J a n.2 0 2 4 V o l.2 1 N o.1造模后可以观察到模型大鼠手术侧后肢稍呈外翻状,避免患肢着地,会在无任何刺激的情况下发生自发性的抬足反射、跛行、趾间距变窄、轻微热刺激下(热板热度设定为2 5)即出现长时间舔足及不停甩足情况,提示S N L模型造模成功。假手术组大鼠则被切除L6横突,然后只暴露并分离L5脊神经,不进行神经结扎。正常组不给予处理。1.4.2 分组及干预将造 模 成 功 的 大 鼠 随 机 分 为3组:模 型 组(n=6)、假推拿组(n=6)、推拿组(n=6)。从造模后第1天开始,推拿组用布袋束缚大鼠后,采用按摩推拿手法模拟仪依次刺激双侧足少阳胆经上环跳、阳陵泉、悬钟三穴;手法模拟为点法、拨法、揉法;刺激力量为4 N。按摩推拿手法模拟仪按摩头选用直径1 0 mm的圆形光滑接触面。每法每穴3 m i n,每只大鼠每日治疗三穴三法总计1 8 m i n(双侧),连续干预7 d(图1)。假推拿组:从造模后第1天开始,该组大鼠采用布袋每天束缚并轻轻抚摸大鼠双后肢1 8 m i n,连续干预7 d。模型组不进行干预。正常组和假手术组不进行干预。图1 推拿组大鼠穴位推拿1.4.3 机械性刺激缩足反应阈值(PWT)测定PWT定义为大鼠通过V o n F r e y纤维丝对物理刺激的反应阈值。在造模前1 d、造模后1 d、3 d和7 d检测大鼠PWT。大鼠在基线测试前至少2 d每天适应测试环境,所有实验环境保持温度和湿度 稳 定。检 查 前 将 大 鼠 放 入 网 筛 中 适 应3 0 m i n。将大鼠放置到高架网筛上的单个有机玻璃室中,用一系列递增强度的V o n F r e y纤维丝刺激大鼠左后足底中部。每种强度重复刺激5次,每次间隔3 s。同一V o n F r e y纤维丝强度刺激下,大鼠出现3次或以上自发缩足,即为阳性。实验重复3次,取3次实验平均值即为大鼠的PWT,根据PWT评估大鼠自发疼痛严重程度。1.4.4 热痛觉过敏测定通过测量辐射热刺激时大鼠的缩足反应潜伏期(PWL)来观察大鼠热痛情况。在造模前1 d、造模后1 d、3 d和7 d时检测大鼠PWL。将每只大鼠放置在一个含有透明玻璃地板的塑料小室中,并允许其适应环境1 h。室温设为2 5,足底测痛仪调至5 5,将大鼠放置于测试仪的封闭且透明的玻璃盒内并启动计时器,辐射热源通过玻璃地板传递并聚焦到爪子的无毛表面,当大鼠出现频繁抬爪、舔足等阳性行为时则停止计时并做好记录。热刺激以5 m i n为间隔向每只大鼠后爪传递3次,取3次平均值为大鼠PWL。1.4.5 W e s t e r n b l o t检测脊髓背角S O C S 1、T L R 4、N F-B蛋白表达水平 大鼠干预7 d后,给予水合氯醛麻醉后无痛处死,迅速取出L4L6脊髓背角组织,立即放入液氮冷却后-8 0 C 保存。将组织加入适量的R I P A裂解液和蛋白酶抑制剂进行裂解,分离上清液,用B C A试剂盒进行蛋白定量测试。将样品在9 9 加热5 m i n后,经S D S-P AG E电泳,将分离蛋白上样到P V D F膜上,用Q u i c k B l o c kTMW e s t e r n封闭液封闭。将膜与以下相应抗体在4 孵育1 2 h以上:S O C S 1(12 0 0 0)、T L R 4(11 0 0 0)、N F-B(12 0 0 0)。第2天将这些印迹与抗兔二抗孵育。T B S T缓冲液充分漂洗后使用增强化学发光系统检测蛋白条带,并用I m a g e J软件进行分析。1.4.6 E L I S A检测运用E L I S A试剂盒检测L3L5脊髓背角I L-6的表达水平,检测步骤严格按照说明书进行。检测终止反应后,立即使用酶标仪在4 5 0 n m波长下读取吸光度值。1.5 统计学分析采用S P S S 2 6.0统计软件对数据进行处理,计量资料以xs表示,多组间的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用L S D-t。以P0.0 5);造模后1 d,与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的PWT明显降低(P0.0 5);造模后3 d,与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大 鼠的PWT均降 低(P0.0 5),与模型组、假推拿组相比,推拿组大鼠的PWT升高(P0.0 5);造模后73保健医学研究与实践2 0 2 4年1月第2 1卷第1期 H e a l t h M e d R e s&P r a c J a n.2 0 2 4 V o l.2 1 N o.17 d,与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的PWT降低(P0.0 5),推拿组与假推拿组、模型组大鼠相比,PWT升高(P0.0 5),详见表1、图2。表1 各组大鼠不同时间点PWT比较(xs,g)组别造模前1 d造模后1 d造模后3 d造模后7 d正常组(n=6)5 8.1 14.1 95 9.4 74.4 96 0.3 22.9 35 9.6 96.7 7假手术组(n=6)5 9.1 75.1 04 2.2 32.7 44 7.7 33.6 45 0.6 53.2 7假推拿组(n=6)6 0.4 84.5 51 2.1 72.4 0a1 5.9 55.6 0a2 0.4 12.2 3a推拿组(n=6)5 8.4 75.7 41 8.3 66.5 2a2 4.7 26.3 9a b3 7.9 31.3 4a b模型组(n=6)6 0.0 46.1 31 0.9 82.5 4a1 2.0 53.4 7a1 6.8 53.5 0a a:与正常组、假手术组相比,P0.0 5;b:与模型组、假推拿组相比,P0.0 5);造模后1 d,与正常组和假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的PWL明显降低(P0.0 5);造模后3 d,与正常组和假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组的PWL降低,而与假推拿 组、模 型 组 相 比,推 拿 组 大 鼠PWL升 高(P0.0 5);造模后7 d,假推拿组、推拿组、模型组大鼠与正 常 组、假 手 术 组 相 比,PWL降 低(P0.0 5),而推拿组大鼠与假推 拿组、模型组 相比,PWL升高(P0.0 5),详见表2、图3。表2 各组大鼠不同时间点PWL比较(xs,s)组别造模前1 d造模后1 d造模后3 d造模后7 d正常组(n=6)2 8.5 21.0 92 8.2 70.9 62 9.1 71.3 62 9.1 60.8 1假手术组(n=6)2 8.4 51.2 61 8.5 61.5 01 9.2 21.0 02 4.0 22.1 1假推拿组(n=6)2 7.4 51.1 91 0.8 01.2 7a1 0.9 30.9 1a1 3.7 51.8 0a推拿组(n=6)2 8.2 80.9 31 1.8 60.8 5a1 3.2 11.4 6a b1 8.1 51.0 2a b模型组(n=6)2 9.2 91.3 91 0.6 51.1 7a1 0.8 61.1 5a1 2.2 31.3 5a a:与正常组、假手术组相比,P0.0 5;b:与模型组、假推拿组相比,P0.0 5。图3 各组大鼠不同时间点PWL比较2.3 各组大鼠脊髓背角S O C S 1蛋白表达水平比较与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大 鼠 的S O C S 1蛋 白 水 平 均 明 显 升 高(P0.0 5);与模型组相比,推拿组大鼠S O C S 1蛋白水平升高(P0.0 5);与假推拿组相比,推拿组大鼠的S O C S 1蛋白水平也明显升高(P 0.0 5),详见图4。图4 各组大鼠脊髓背角中S O C S 1蛋白表达水平比较2.4 各组大鼠脊髓背角T L R 4、N F-B蛋白表达水平比较 与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、83保健医学研究与实践2 0 2 4年1月第2 1卷第1期 H e a l t h M e d R e s&P r a c J a n.2 0 2 4 V o l.2 1 N o.1模型组大鼠的脊髓背角T L R 4、N F-B蛋白水平明显升高(P0.0 5);与模型组相比,推拿组大鼠的脊髓背角T L R 4、N F-B蛋白水平明显降低(P0.0 5),详见图5。图5 各组大鼠脊髓背角中T L R 4、N F-B蛋白表达水平比较2.5 各组大鼠脊髓背角I L-6水平比较与正常组、假手术组比较,假推拿组、推拿组、模型组大 鼠 脊 髓 背 角 中I L-6水 平 明 显 升 高(P0.0 5);与假推拿组、模型组比较,推拿组大鼠脊髓背角中I L-6水平均明显降低(P 0.0 5),详见图6。图6 各组大鼠脊髓背角I L-6水平比较3 讨论枢经推拿基于 黄帝内经 将人体经脉分为“开、阖、枢”3类,若将开、阖2类经脉比作门的开与关,则枢经就是门轴。众所周知,门轴的好坏关系到门是否可以正常开、关。历代医家对3类经脉功用的论述浩若烟海,“开阖统百病,枢统开阖”是比较有代表性的论述之一,枢经共有4条:手少阴心经、足少阴肾经、手少阳三焦经和足少阳胆经,每条经都具有统领机体其余经络脏腑之功能,如心为君主之官,心经主血脉,是血之大主;肾乃先天之本,主藏精纳气;三焦者,总领五脏、六腑、荣卫、经络、内外左右上下之气;胆为中正之官,决断出焉。凡十一脏皆取决于胆,而足少阳胆经为少阳枢经,有“四两拨千斤”之用,能够协调疏通各脏腑经络,调和气血,消除诱发疼痛的“不通”“不荣”,是治疗N P的关键经络。因此本研究选择我们前期研究中所选的足少阳胆经上的环跳穴、阳陵泉穴、悬钟穴进行干预1 1-1 4。环跳穴是足少阳与足太阳交会穴,而两经均为多气少血之经,针灸甲乙经阴受病发痹 有云:“腰胁相引痛急,髀筋瘈胫,肱痛不可屈伸,痹不仁,环跳主之。”故施术于环跳穴可起到益气活血通经络之效。阳陵泉是足少阳胆经的合穴,胆的下合穴,为少阳胆经气血汇聚之所。针灸大成 记载:“阳陵泉,主治下肢经筋病症之要穴”。据此,干预阳陵泉穴可以促进局部血液循环,改善局部炎症和渗出,缓解神经痛症状。悬钟穴是足三阳之大络,为八会穴之髓会,是人体髓气汇聚的地方,针灸甲乙经 曰:“痠痛甚,按之不可,名曰胕髓病,以镵针针绝骨出血,立已。”可见干预悬钟穴具有疏调肝胆气机、通经活络、祛风止痛、补髓壮骨之功效。由此可见,枢经推拿改善S N L诱导的N P的作用与疏通局部气血、调整经络、抑制炎症反应、调节免疫平衡密切相关。N P是由外周或中枢神经系统的原发性病变、功能障碍或暂时性扰动导致伤害性感觉神经元发生不适应性改变引起的疼痛1 5。N P的发生机制主要包括C纤维、A 纤维和髓鞘低阈值纤维(L T-MR s)改变1 6;脊髓环路中兴奋性神经元、抑制性神经元、兴奋-抑制平衡和下行通路的激活1 7;分子中介体、离子通道、免疫细胞、代谢物、缺氧和线粒体因素、表观遗传调控的改变1 8-2 2。来自伤害性和热感受性传入的信息输入相关主要突触主要见于脊髓背角浅层(和层),而来自机械刺激感受器和本体感觉纤维传入的信息输入相关主要突触在脊髓背角深层(层)2 3。S O C S是细胞因子介导的信号通路的关键调节因子,分为S O C S17和C I S,这些蛋白相对较小,含有一个中央的s r c同源性2 结构域和一个C末端的S O C S盒2 4。S O C S 1主要由巨噬细胞表达,通过在细胞内水平调节细胞因子信号来限制炎症反应的相关蛋白,其表达 与J AK 2和S T AT 3信 号 蛋 白 的 磷 酸 化 有关2 5,可能通过调节N P下神经元的敏化以及星形胶质细胞和小胶质细胞的激活缓解疼痛2 6。T L R s特别是T L R 4近年来已成为驱动炎症的有前途的潜在治疗分子靶点,T L R 4是小胶质细胞膜受体,在介导炎症的信号通路中发挥重要作93保健医学研究与实践2 0 2 4年1月第2 1卷第1期 H e a l t h M e d R e s&P r a c J a n.2 0 2 4 V o l.2 1 N o.1用2 7。当T L R 4激活后,可以激活M y D 8 8非依赖途径,参 与S T AT 1的 激 活2 8,这 也 最 终 导 致p 3 8 MA P K信 号 传 导 和 信 号 级 联 反 应 转 录 因 子N F-B的激活,促进下游趋化因子和促炎细胞因子的释放2 9。促炎因子I L-6作为神经免疫和炎症反应的关键介质,通过激活J AK/S T AT 3和E R K信号通路参与R N神经元的可塑性调节和胶质细胞的激活3 0,当I L-6过度表达可激活S O C S 1。在p 5 3突变型或野生型胶质瘤细胞中,S O C S 1可通过抑制T AK 2 4 2或其s i R NA介导的T L R 4信号通路导致S O C S 1表达和启动子活性增加或降低3 1。既往研究3 2表明,热补针法干 预可调节S O C S 1 mR NA及蛋白的表达,降低T L R 4、N F-B水平,减少促炎因子白细胞介素1(I L-1)的产生,抑制炎症反应。本研究结果显示,大鼠S N L后,可导致大鼠PWL和PWT降低,以及脊髓背角中T L R 4、N F-B蛋白表达的增加和I L-6炎症因子的释放,同时也导致S O C S 1因子激活。而枢经推拿干预后,大鼠脊髓背角中S O C S 1信号因子蛋白表达高于模型组,大鼠脊髓背角中T L R 4、N F-B和I L-6水平明显降低,大鼠PWL和PWT均升高。这说明S O C S 1是枢经推拿调控炎症的关键效应负调控因子,枢经推拿可以通过S O C S 1改善脊髓背角周围组织炎症微环境,缓解大鼠疼痛,从而减轻N P。但是枢经推拿是否能使升高 的S O C S 1表 达 水 平 回 归 至 正 常 水 平,并 且S O C S 1如何靶向调控T L R 4信号通路减轻炎症反应,还缺乏中后期的观察和研究。综上 所 述,枢 经 推 拿 通 过 上 调S N L大 鼠S O C S 1因子水平,调控T L R 4信号通路中T L R 4、N F-B表达水平,减少I L-6的生成,改善组织炎症微环境,改善S N L大鼠机械痛和热痛觉过敏的行为,从而达到抑炎镇痛的目的。作者贡献声明:吴丽萍负责论文的构思、数据汇总和撰写;王天翊、陈玲女负责数据的收集和整理;梁英业负责论文的设计及可行性分析指导;王开龙负责数据的收集及统计学分析;唐宏亮负责论文数据的结果分析及解释,绘制图表;庞军负责文章的整体质量控制与审查,监督管理。利益冲突声明:文章所有作者均声明在课题研究和文章撰写过程中不存在利益冲突。参考文献1 K I M K,N A N G H,B A K H,e t a l.I n s u l a r c o r t e x s t i m u l a-t i o n a l l e v i a t e s n e u r o p a t h i c p a i n t h r o u g h c h a n g e s i n t h e e x p r e s s i o n o f c o l l a p s i n r e s p o n s e m e d i a t o r p r o t e i n 2 i n-v o l v e d i n s y n a p t i c p l a s t i c i t yJ.N e u r o b i o l D i s,2 0 2 4,1 9 4:1 0 6 4 6 6.D O I:1 0.1 0 1 6/j.n b d.2 0 2 4.1 0 6 4 6 6.2MA L E T M,B R UMOV S KY P R.V G L UT s a n d g l u t a-m a t e s y n t h e s i s-f o c u s o n D R G n e u r o n s a n d p a i nJ.B i o m o l e c u l e s,2 0 1 5,5(4):3 4 1 6-3 4 3 7.D O I:1 0.3 3 9 0/b i o m 5 0 4 3 4 1 6.3C OHE N S P,MAO J R.N e u r o p a t h i c p a i n:m e c h a n i s m s a n d t h e i r c l i n i c a l i m p l i c a t i o n sJ.BM J,2 0 1 4,3 4 8:f 7 6 5 6.D O I:1 0.1 1 3 6/b m j.f 7 6 5 6.4N I C K E L F T,S E I F E R T F,L AN Z S,e t a l.M e c h a-n i s m s o f n e u r o p a t h i c p a i nJ.E u r N e u r o p s y c h o p h a r-m a c o l,2 0 1 2,2 2(2):8 1-9 1.D O I:1 0.1 0 1 6/j.e u r o n e u-r o.2 0 1 1.0 5.0 0 5.5OHA S H I N,UT A D,OHA S H I M,e t a l.Om e g a-c o n o t o x i n MV I I A r e d u c e s n e u r o p a t h i c p a i n a f t e r s p i-n a l c o r d i n j u r y b y i n h i b i t i n g N-t y p e v o l t a g e-d e p e n d e n t c a l c i u m c h a n n e l s o n s p i n a l d o r s a l h o r nJ.F r o n t N e u-r o s c i,2 0 2 4,1 8:1 3 6 6 8 2 9.D O I:1 0.3 3 8 9/f n i n s.2 0 2 4.1 3 6 6 8 2 9.6MA YQ,CHE N Y R,L E N G Y F,e t a l.T a n s h i n o n e I I A d o w n r e g u l a t e s HMG B 1 a n d T L R 4 e x p r e s s i o n i n a s p i n a l n e r v e l i g a t i o n m o d e l o f n e u r o p a t h i c p a i nJ.E v i d B a s e d C o m p l e m e n t A l t e r n a t M e d,2 0 1 4,2 0 1 4:6 3 9 5 6 3.D O I:1 0.1 1 5 5/2 0 1 4/6 3 9 5 6 3.7C HU R C H J S,K I G E R L K A,L E R C H J K,e t a l.T L R 4 d e f i c i e n c y i m p a i r s o l i g o d e n d r o c y t e f o r m a t i o n i n t h e i n-j u r e d s p i n a l c o r dJ.J N e u r o s c i,2 0 1 6,3 6(2 3):6 3 5 2-6 3 6 4.D O I:1 0.1 5 2 3/J N E U R O S C I.0 3 5 3-1 6.2 0 1 6.8MO R A E S T R,V E R A S F P,B A R CHUK A R,e t a l.S p i n a l HMG B 1 p a r t i c i p a t e s i n t h e e a r l y s t a g e s o f p a-c l i t a x e l-i n d u c e d n e u r o p a t h i c p a i n v i a m i c r o g l i a l T L R 4 a n d R AG E a c t i v a t i o nJ.F r o n t I mm u n o l,2 0 2 4,1 5:1 3 0 3 9 3 7.D O I:1 0.3 3 8 9/f i mm u.2 0 2 4.1 3 0 3 9 3 7.9HA N XW,MA TM,W A N G Q,e t a l.T h e m e c h a n i s m o f o x y m a t r i n e o n a t o p i c d e r m a t i t i s i n m i c e b a s e d o n S O C S 1/J A K-S T A T3 p a t h w a yJ.F r o n t P h a r m a c o l,2 0 2 3,1 3:1 0 9 1 0 9 0.D O I:1 0.3 3 8 9/f p h a r.2 0 2 2.1 0 9 1 0 9 0.1 0K I M S H,CHUN G J M.A n e x p e r i m e n t a l m o d e l f o r p e r i p h e r a l n e u r o p a t h y p r o d u c e d b y s e g m e n t a l s p i n a l n e r v e l i g a t i o n i n t h e r a tJ.P a i n,1 9 9 2,5 0(3):3 5 5-3 6 3.D O I:1 0.1 0 1 6/0 3 0 4-3 9 5 9(9 2)9 0 0 4 1-9.1 1梁英业.基于M i R NA-1 4 6 a调控T L R 4信号通路探讨枢经推拿对神经病理性疼痛大鼠的镇痛机制D.南宁:广西医科大学,2 0 1 9.1 2李宇翔.基于E R K/N r f 2抑制S N L大鼠脊髓背角细胞凋亡探讨枢经推拿抑炎镇痛机制的基础研究D.南宁:广西中医药大学,2 0 2 3.1 3王雄将,梁英业,卢栋明,等.枢经推拿对慢性神经病理性疼痛大鼠V G L UT 2及炎症因子表达的影响J.04保健医学研究与实践2 0 2 4年1月第2 1卷第1期 H e a l t h M e d R e s&P r a c J a n.2 0 2 4 V o l.2 1 N o.1广西中医药大学学报,2 0 2 2,2 5(