中药青蒿抗氧化活性的谱效关系研究 (1).pdf

论著 中药青蒿抗氧化活性的谱效关系研究赖立勇1a,1b，夏天爽1a，徐圣焱1a，蒋益萍1a，岳小强2，辛海量1a（1.海军军医大学：a.药学系生药学教研室,b.中医系,上海 200433,2.海军军医大学第二附属医院中医科,上海 200003）摘要目的通过考察 11 批青蒿的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱与体外抗氧化活性的谱效关系，筛选出青蒿体外抗氧化作用的药效物质基础成分。方法色谱柱为 Aglient C18（250 mm4.6 mm,5 m）色谱柱，流动相为 0.2%磷酸水-甲醇，流速为 1 ml/min；柱温为室温；检测波长为 220 nm；进样量为 10 l。以异绿原酸 A 为参照，采用中药指纹图谱相似度评价系统（2012 版）确定并记录 11 批青蒿样品的共有峰。检测不同青蒿样品对 DPPH 自由基和 ABTS 自由基的清除效率，作为其抗氧化评价，利用 SIMCA14.1 软件构建 PLSR 模型并分析谱效关系。结果11 批青蒿样品中共检测出 48 个共有峰，鉴定 11 个成分，分别为东莨菪内酯、滨蒿内酯、异绿原酸 B、异绿原酸 A、异绿原酸 C、木犀草素、芹菜素、猫眼草黄素、青蒿素、艾黄素和青蒿酸。检测 11 批青蒿样品的 DPPH 自由基和 ABTS 自由基的清除能力，谱效关系显示，异绿原酸 A、B、C 和滨蒿内酯峰面积与青蒿的 DPPH 自由基和 ABTS 自由基清除能力正相关，且变量投影值大于 1，表明这些成分在青蒿的体外抗氧化方面有显著贡献。结论本研究考察了青蒿中不同物质的体外抗氧化能力，证明异绿原酸 A、B、C 和滨蒿内酯为青蒿的体外抗氧化活性的药效物质基础。关键词 青蒿；高效液相色谱法；抗氧化；谱效关系；药效物质基础文章编号 2097-2024（2024）05-0203-08DOI 10.12206/j.issn.2097-2024.202211012Studyonspectrum-effectrelationshipbasedonantioxidantactivityofArtemisiaeAnnuaeHerbaLAI Liyong1a,1b,XIA Tianshuang1a,XU Shengyan1a,JIANG Yiping1a,YUE Xiaoqiang2,XIN Hailiang1a（a.Department ofPharmacognosy,School of Pharmacy,b.School of Traditional Chinese Medicine,Naval Medical University,Shanghai 200433,China,2.Department of Traditional Chinese Medicine,Second Affiliated Hospital of Naval Medical University,Shanghai 200003,China）AbstractObjectiveTo screen the pharmacodynamic material basic components of Artemisiae Annuae Herba and studyits antioxidant activity in vitro by investigating the spectrum-effect relationship between the HPLC fingerprints of 11 batches ofArtemisiae Annuae Herba(dried aerial part of Artemisia annua L.).Methods The determination was performed on Aglient C18column(250 mm4.6 mm,5 m)with mobile phase consisted of 0.2%phosphoric acid solution-Methanol(gradient elution)at theflow rate of 1.0 ml/min.The column temperature was indoor temperature,and detection wavelength was 220 nm,with sample sizeof 10 l.Using isochlorogenic acid A as reference,HPLC fingerprints of 11 batches of samples were determined.The commonpeaks of 11 batches of samples were identified and recorded through TCM chromatographic fingerprint similarity evaluation system（2012 edition）.Using scavenging rate of DPPH and ABTS free radical as pharmacodynamic indicators of antioxidant effects,SIMCA 14.1 analysis software was used for PLSR to establish the spectra-effect relationship.Results There were 48 commonpeaks on 11 batches of sample,11 components were identified as scopoletin,scoparone,isochlorogenic acid B,A,C,luteolin,apigenin,chrysosplenetin,artemisinin,artemisetin and artemisinic acid.The scavenging activity of 11 batches of samples to DPPHand ABTS free radicals was detected.The spectrum-effect relationship showed that isochlorogenic acid A,B,C and scoparone werepositively associated with its antioxidant capacity,and variable projection value was greater than 1.It was suggested that thesecomponents were the material basis of antioxidant effect in Artemisiae Annuae Herba.Conclusion This study investigates theantioxidant capacity of different substances in Artemisiae Annuae Herba in vitro,and proves that isochlorogenic acid A,B，C andscoparone play a major role for the antioxidant capacity.基金项目国家自然科学基金（82174079，U1603283）作者简介赖立勇，博士研究生，Email：通信作者岳小强，博士，教授，研究方向：中西医临床与科研，Email：；辛海量，博士，教授，研究方向：中药资源、品质评价、药理学研究，Email： 药学实践与服务2024 年 5 月 25 日第 42 卷第 5 期 Journal of Pharmaceutical Practice and Service，Vol.42，No.5，May 25，2024203 Keywords Artemisiae Annuae Herba；HPLC；antioxidant；spectrum-effect relationship；pharmacodynamic material basis中药青蒿为植物菊科黄花蒿(Artemisia annuaL.)的干燥地上部分，味苦、辛，性寒，归肝、胆经，具有清虚热等功效1。现代研究表明，青蒿及其所含有关单体成分除了在抗疟疾方面有效外，在抑菌抗炎、免疫调节和缓解热应激等方面也有效果2，特别是在抗氧化方面，青蒿亦表现出良好作用3。现有研究表明，氧化应激与许多疾病关系密切，过度氧化应激可导致骨质疏松症等疾病4。目前，对青蒿所含活性成分青蒿素研究较多，特别是其抗疟、抗氧化等作用受到关注5，但青蒿素之外的其他成分在抗氧化方面亦有活性6-9，应受到重视。本研究进行青蒿抗氧化活性的谱效关系研究，分析色谱特征峰与 DPPH 和 ABTS 自由基清除能力的关联性10，探究青蒿所含不同化学成分的抗氧化活性，以阐明青蒿体外抗氧化活性的药效物质基础，为青蒿的质量评价和资源开发等提供依据。1材料 1.1 仪器岛津 LC-20AD 型高效液相色谱仪，包括四元泵、PAD 检测器、自动进样器（日本岛津株式会社）；BT285S 型电子分析天平（德国 Sartorius 公司）；DL-1000B 型超声波清洗仪（上海之信仪器有限公司）；ELx 800 型多功能酶标仪（美国 Biotek公司）。1.2 试剂东莨菪内酯（批号：20 220 215）、芹菜素（批号：20 220 216）、木犀草素（批号：20 220 216）购自上海历鼎生物技术有限公司；异绿原酸 A（批号：DSTDY054701）、异绿原酸 B（批号：DST210625-037）、异绿原酸 C（批号：DSTDY003802）、滨蒿内酯（批号：DSTDB003101）、艾黄素（批号：DST220119-004）、青蒿素（批号：DSTDQ004702）、青蒿酸（批号：DST210919-048）购自成都德思特生物技术有限公司；所有对照品纯度均98%。DPPH 自由基清除能力试剂盒（批号：20 220 223）、ABTS 自由基清除能力试剂盒（批号：20 220 224）购自上海励瑞生物科技有限公司。1.3 样品11 批青蒿药材样品信息见表 1，经海军军医大学药学系生药教研室辛海量教授鉴定为 Artemisiaannua L.的干燥地上部分。表1药材样品来源信息 序号产地序号产地S1河北邯郸S7安徽亳州S2安徽亳州S8江西赣州S3河南驻马店S9四川自贡S4安徽亳州S10河南南阳S5湖北恩施S11重庆市S6安徽亳州 2方法与结果 2.1 色谱条件采用 Agilent C18（250 mm4.6 mm,5 m）色谱柱；流动相为 0.2%磷酸水溶液（A）-甲醇（B），梯度洗脱（05 min，90%82.5%A；510 min，82.5%75%A；10 30 min，75%62%A；30 38 min，62%58.3%A；3843 min，58.3%A；4348 min，58.3%55%A；4858 min，5540%A；5868 min，40%20%A；68 72 min，20%18.5%A；7280 min，18.5%5%A；8090min，5%90%A）；流速：1 ml/min；柱温：室温；检测波长：220 nm；进样量：10 l。2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液精密称取青蒿素、艾黄素、青蒿酸、猫眼草黄素、芹菜素、木犀草素、异绿原酸 C、异绿原酸 A、异绿原酸 B、滨蒿内酯、东莨菪内酯对照品适量，用甲醇溶解得到浓度分别为 300、31、96、78、16、12、52、134、28、18、86 g/ml 的混合对照品溶液11。2.2.2 供试品溶液药材粉末过 50 目筛后，精密称取 1.5 g，加入甲醇 50 ml，记录重量后超声（600 W，40 kHz，50）提取 50 min，取出放置冷却至室温后加甲醇至之前的重量，混匀，过 0.45 m 微孔滤膜。2.3 方法学考察 2.3.1 精密度实验取“2.2.2”项下编号为 S10 的供试品溶液适量，按“2.1”项所述条件连续运行 6 次，计算得到 RSD（色谱峰保留时间）均小于 0.49%，RSD（峰面积）均小于 1.93%，表明本研究所用设备精密度良好。2.3.2 稳定性实验取“2.2.2”项下编号为 S10 的供试品溶液适量，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、16、24 h 时按 药学实践与服务2024 年 5 月 25 日第 42 卷第 5 期 204Journal of Pharmaceutical Practice and Service，Vol.42，No.5，May 25，2024“2.1”项所述条件运行，计算得到 RSD（色谱峰保留时间）均小于 0.69%，RSD（峰面积）均小于 4.67%，说明配制的溶液在 1 d 内具有稳定性。2.3.3 重复性实验取编号为 S10 的青蒿样品粉末 1.5 g，共 6 份，精密称定，按“2.2.2”项和“2.1”项下制备供试品溶液并运行，计算得到色谱峰保留时间均小于0.72%，峰面积均小于4.76%，表明该方法重复性良好。2.4 HPLC 指纹图谱的建立和共有峰指认 2.4.1 HPLC 指纹图谱的建立分别取 11 批青蒿样品，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液 10 l，按“2.1”项下色谱条件进样检测后，将获得的 HPLC数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版），得到 11 批青蒿样品的指纹图谱，指认出 48 个共有峰，见图 1、图 2。2 4002 3002 2002 1002 0001 9001 8001 7001 6001 5001 4001 3001 200信号(U/mV)1 1001 00090080070060050040030020010000510152025303540时间(t/min)455055606570758085S11(48)S10(48)S9(48)S8(48)S7(48)S6(48)S5(48)S5(48)S5(48)S5(48)S1(48)图 111 批中药青蒿样品的 HPLC 叠加指纹图谱 信号(U/mV)0510152025303540时间(t/min)45505560657075808516012345689101112131415171819202122232425262728293031333537383940414243444546474834363215515014514013513012512011511010510095908580757065605550454035302520151050图 211 批中药青蒿样品的 HPLC 对照图谱 药学实践与服务2024 年 5 月 25 日第 42 卷第 5 期 Journal of Pharmaceutical Practice and Service，Vol.42，No.5，May 25，2024205 2.4.2 共有峰指认11 批青蒿样品共有 48 个共有峰，共有峰占总峰比在 0.7760.864 之间。选择 S10 为参照图谱，时间窗宽度设置为 0.1 min，采用平均数法，以指纹图谱中峰形较好的色谱峰进行多点校正后生成叠加图谱，即为对照图谱。通过与混合对照品的HPLC 分析结果对比，指认出 9 号峰为东莨菪内酯、14 号峰为滨蒿内酯、15 号峰为异绿原酸 B、16 号峰为异绿原酸 A、23 号峰为异绿原酸 C、31 号峰为木犀草素、35 号峰为芹菜素、38 号峰为猫眼草黄素、39 号峰为青蒿素、40 号峰为艾黄素、48 号峰为青蒿酸（图 3）。图谱显示，异绿原酸 A 峰面积大且稳定，分离度良好，故对比其保留时间（峰面积），其他峰的相对保留时间（峰面积）=其他峰的保留时间（峰面积）/异绿原酸 A 的保留时间（峰面积），见表 2、表 3。信号(U/mV)0510152025303540时间(t/min)45505560657075808514091615142331353938404813513012512011511010510095908580757065605550454035302520151050图 3混合对照品的 HPLC 图 表211 批中药青蒿样品 HPLC 图谱共有峰的相对保留时间 编号S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11RSD（%）峰10.0710.0710.0710.0710.0700.0700.0700.0710.0700.0720.0721.060峰20.0750.0750.0750.0750.0750.0740.0750.0750.0740.0750.0750.540峰30.3030.3080.3080.3090.3090.3090.3100.3110.3100.3100.3090.680峰40.3960.4010.4010.4010.4000.4010.4010.4020.4020.4030.4020.450峰50.4180.4230.4230.4240.4240.4230.4240.4250.4240.4250.4250.460峰60.4330.4370.4370.4370.4360.4360.4360.4370.4370.4390.4380.340峰70.4680.4720.4720.4720.4720.4720.4720.4730.4730.4730.4730.300峰80.6620.6670.6670.6670.6670.6660.6670.6680.6670.6680.6680.250峰90.7170.7230.7230.7230.7230.7220.7240.7240.7240.7240.7240.280峰100.7310.7390.7380.7380.7410.7370.7380.7380.7380.7380.7400.340峰110.7940.7960.7960.7960.7960.7950.7970.7970.7960.7970.7970.120峰120.8100.8150.8150.8150.8090.8140.8150.8150.8140.8170.8170.310峰130.8230.8250.8250.8250.8250.8240.8260.8270.8250.8260.8260.130峰140.9120.9120.9120.9130.9110.9120.9140.9140.9130.9130.9140.110峰150.9830.9820.9830.9830.9820.9820.9830.9850.9820.9840.9830.100 药学实践与服务2024 年 5 月 25 日第 42 卷第 5 期 206Journal of Pharmaceutical Practice and Service，Vol.42，No.5，May 25，2024（续表2）编号S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11RSD（%）峰161.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0000峰171.0381.0371.0371.0371.0371.0371.0371.0381.0371.0381.0380.050峰181.0581.0561.0581.0581.0601.0601.0611.0621.0601.0591.0590.160峰191.0781.0791.0781.0781.0751.0741.0781.0791.0751.0781.0790.170峰201.1331.1311.1311.1311.1311.1291.1301.1311.1291.1321.1320.110峰211.1571.1541.1571.1551.1551.1561.1561.1571.1541.1581.1560.110峰221.1901.1901.1891.1891.1901.1921.1881.1891.1871.1891.1920.130峰231.1991.1981.1981.1981.1981.1981.1991.1991.1971.1981.1980.050峰241.2151.2141.2141.2141.2131.2131.2131.2151.2121.2141.2140.070峰251.2461.2441.2441.2441.2431.2421.2431.2441.2421.2441.2450.100峰261.3071.3061.3061.3071.3061.3051.3061.3081.3061.3061.3080.070峰271.4521.4531.4501.4501.4501.4501.4501.4531.4491.4481.4490.110峰281.4641.4621.4631.4631.4641.4631.4641.4651.4611.4611.4600.110峰291.4971.4931.4951.4951.4921.4921.4951.5001.4921.4941.4940.160峰301.6561.6551.6561.6531.6481.6451.6481.6491.6471.6581.6590.300峰311.6651.6651.6721.6631.6591.6571.6571.6581.6561.6671.6670.320峰321.7181.7181.7171.7161.7111.7091.7101.7111.7081.7191.7210.270峰331.7521.7521.7511.7481.7431.7381.7381.7401.7391.7541.7560.400峰341.7701.7701.7691.7671.7621.7581.7581.7591.7581.7721.7750.360峰351.8331.8341.8331.8301.8251.8211.8211.8221.8201.8351.8380.360峰361.8931.8941.8931.8901.8841.8791.8791.8801.8791.8961.9000.420峰371.9421.9431.9421.9391.9321.9271.9271.9281.9281.9451.9490.430峰381.9501.9501.9491.9461.9391.9341.9341.9351.9351.9531.9560.430峰392.0272.0272.0262.0232.0152.0102.0092.0112.0112.0302.0340.460峰402.0362.0362.0322.0312.0242.0192.0182.0162.0202.0392.0430.470峰412.1022.1022.1012.0972.0902.0842.0842.0852.0852.1052.1090.450峰422.1172.1162.1142.1112.1032.0972.0972.0972.0982.1192.1220.470峰432.1562.1552.1532.1492.1412.1352.1342.1352.1362.1572.1610.490峰442.2262.2242.2232.2192.2112.2042.2042.2052.2052.2262.2300.470峰452.2332.2322.2302.2262.2182.2122.2112.2132.2122.2342.2380.470峰462.2672.2652.2632.2592.2502.2432.2432.2442.2442.2652.2700.490峰472.3292.3272.3252.3212.3122.3062.3042.3062.3062.3282.3320.480峰482.3632.3622.362.3552.3462.3392.3382.3402.3402.3632.3670.490共有峰/总峰0.8370.8150.7780.8210.8110.8340.8640.7760.8230.8060.838 2.5 抗氧化作用考察 2.5.1 DPPH 自由基和 ABTS 自由基清除能力标准曲线制作将试剂盒中 Trolox 溶液按说明书稀释成梯度浓度，加入反应液、不同浓度的 Trolox 溶液，并设置空白对照。反应结束后，在相应波长下测出测定孔吸光度 Ac、空白孔吸光度 Ak，自由基清除率（%）=（1（AcAk）Ak）100%，以浓度（Y）对 DPPH 自由基清除率（X）进行线性回归，获得标准回归曲线方程，见表 4，以标准回归曲线方程计算得出自由基清除能力。2.5.2 DPPH 自由基清除能力测定取 11 批供试品溶液（编号：S111，按“2.2.2”项下方法制备）各 1 ml，加无水甲醇 9 ml 稀释 药学实践与服务2024 年 5 月 25 日第 42 卷第 5 期 Journal of Pharmaceutical Practice and Service，Vol.42，No.5，May 25，2024207 表311 批中药青蒿样品 HPLC 图谱共有峰的相对峰面积 编号S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11RSD(%)峰10.2210.7180.1670.2156.00118.6150.1340.0370.5450.0460.033232.240峰20.5392.0420.5390.50511.73536.1240.3370.0551.5710.1920.041223.380峰30.0650.1020.0600.1310.3000.3560.0500.0350.0700.0320.028100.170峰40.0660.0610.0590.0880.1210.4760.0330.0150.0640.0210.026139.490峰50.1340.0560.1040.1300.1830.3390.1450.0840.0800.0540.07364.820峰60.3910.3380.2880.3440.2430.4080.3210.1690.2710.1310.07739.430峰70.9870.2010.2140.5140.3850.3150.8500.4050.3080.2510.48257.330峰80.3750.2950.2170.5840.6860.9030.3760.1500.3380.1430.30559.310峰90.5330.6460.3160.7662.6474.6100.2010.1300.6740.1120.332139.510峰100.2230.0580.0240.1370.2590.4640.1890.0080.0510.0390.023104.800峰110.2250.2030.2020.2360.3650.9520.0790.1200.1450.1120.069101.160峰120.1190.2130.2340.2450.5160.8720.1160.0720.1170.0550.049105.050峰130.1970.1810.2070.2140.3761.1060.0850.1070.1430.1110.061116.600峰140.0550.1510.0810.0960.1320.2420.0640.1290.0670.0470.05857.120峰150.1250.3150.1860.2260.2950.4770.1090.1380.1790.0620.12658.660峰161.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0001.0000峰171.1300.7240.6671.1180.8790.8911.1750.3560.9430.4660.84931.770峰180.1040.1010.1850.1150.2410.0600.0890.2240.0530.1080.08751.150峰190.5510.4650.4060.4971.4411.6100.2650.5660.2910.2530.22979.600峰200.0500.0930.2220.0770.0800.1710.0410.2140.0470.0790.02969.220峰210.0860.1690.2060.1380.0950.2480.0850.0790.1200.0660.05850.140峰220.0960.0980.0810.1200.1300.1770.1050.0500.1120.0690.07833.720峰230.2510.8420.3210.5300.6260.5940.2060.2560.4180.1210.35352.610峰240.2370.2800.1470.2860.3240.2640.2440.1380.2890.1220.17630.790峰250.4450.5650.4410.7300.7250.6190.4860.1210.5580.2430.30640.560峰260.1750.2110.2430.2790.4270.8320.1210.1070.1990.0930.12083.960峰270.0500.0450.0300.0900.1610.2450.0560.0060.0710.0280.02795.860峰280.0630.2430.0540.1770.1700.1230.0490.0360.1270.0180.08068.020峰290.1070.1250.0920.1770.3610.4280.0910.0150.1090.0530.04190.430峰300.0800.3900.0630.2981.3731.3120.0650.0190.1130.0260.030148.400峰310.0710.2160.0660.1630.2440.2160.0650.0230.1000.0300.15864.710峰320.0270.0710.0190.0540.3030.2100.0300.0140.0320.0170.018131.430峰330.1600.4450.2340.3801.8522.8010.1460.0360.2610.0870.075151.790峰340.1140.2800.1660.3120.7771.2950.1170.0190.1590.0540.055128.230峰350.3361.6300.3991.2676.1025.4690.4230.1170.6030.1230.317141.670峰360.0700.3300.0420.2601.4211.8750.0630.0040.1160.0130.021167.530峰370.1530.9990.2690.7743.7995.3040.1950.0880.3990.0710.106159.420峰380.3040.7020.2210.5343.1393.0990.3030.0680.4000.1010.143140.610峰390.0900.4470.1480.3311.8012.5130.1230.0220.1940.0420.033159.710峰400.0840.2850.0910.1991.1021.3650.0430.0760.1220.0210.016151.000峰410.1900.3660.2320.1721.1312.1010.0680.0330.2260.0550.039152.190峰420.1570.3220.1850.2291.6722.2730.1210.0280.2310.0470.052155.930 药学实践与服务2024 年 5 月 25 日第 42 卷第 5 期 208Journal of Pharmaceutical Practice and Service，Vol.42，No.5，May 25，2024 10 倍；对照孔加入供试品 100 l、无水甲醇 150 l，测定孔加入供试品 100 l、DPPH 工作液 150 l，空白孔加入供试品 100 l、DPPH 工作液 150 l 后混匀，避光室温下静置 0.5 h，于 540 nm 波长处测得对照孔吸光度 Ad，测定孔吸光度 Ac，空白孔吸光度Ak，DPPH 自由基清除率（%）=（1（Ac-Ad）Ak）100%，供试品 DPPH 自由基清除能力（mmol/LTrolox）=带入标准回归曲线方程所得 Trolox 的浓度10，结果见表 5。11 批青蒿样品中，样品 8（编号：S8）清除 DPPH 自由基的能力最强。表5青蒿抗氧化活性检测(mmol/L Trolox)编号DPPH清除能力ABTS清除能力S12.7256.243S21.3362.025S32.7654.521S43.1107.190S51.6172.848S60.9700.853S75.0578.641S86.47710.453S92.0252.575S104.7318.313S115.3219.848 2.5.3 ABTS 自由基清除能力测定取 11 批供试品溶液（编号：S111，按“2.2.2”项下方法制备）各 1 ml，加无水甲醇 9 ml 稀释10 倍；对照孔加入供试品 100 l、无水甲醇 150 l，测定孔加入供试品 100 l、ABTS 工作液 150 l，空白孔加入无水乙醇 100 l、ABTS 工作液 150 l，混匀置于室温反应 6 min，于 405 nm 波长处测得对照孔吸光度 Ad，测定孔吸光度 Ac，空白孔吸光度 Ak，DPPH 自由基清除率（%）=（1（AcAd）Ak）100%，供试品 ABTS 自由基清除能力（mmol/L Trolox）=代入标准回归曲线方程所得 Trolox 的浓度10，结果见表 5。11 批青蒿样品中，样品 8（编号：S8）清除 ABTS 自由基的能力最强。2.6 谱效关系分析将表 5 青蒿抗氧化活性结果和表 3 的相对峰面积数据导入 SIMCA 14.1 软件构建 PLSR 模型。结果显示，峰 3峰 8、峰 10峰 27、峰 29、峰32峰 34、峰 38、峰 40、峰 42峰 43、峰 46 与DPPH 自由基清除率呈正相关；峰 3峰 29、峰31峰 35、峰 38、峰 40、峰 42峰 44、峰 46、峰48 与 ABTS 自由基清除率呈正相关，结果见图 4。变量投影（VIP）用于评估每个自变量对因变量的重要性，VIP1 表明自变量对因变量的贡献有显著性。筛选出对自由基清除能力呈正相关，且VIP1 的峰。结果显示，青蒿药材样品已明确成分中对 DPPH 自由基清除能力的贡献大小依次为异绿原酸 A（16 号峰）异绿原酸 B（15 号峰）滨蒿内酯（14 号峰）异绿原酸 C（23 号峰）；青蒿药材样品已明确成分中对 ABTS 自由基清除能力的贡献大小依次为异绿原酸 A（16 号峰）异绿原酸 B（15 号峰）异绿原酸 C（23 号峰）滨蒿内酯（14 号峰），提示相应成分与青蒿抗氧化能力呈正相关，结果见图 5。3讨论利用 HPLC 法测定青蒿药材样品的图谱，能准确、稳定地检测青蒿中的多种有效成分。实验前期研究发现，在乙腈-0.1%磷酸水、甲醇-0.1%磷酸水等流动相中，甲醇-0.1%磷酸水为流动相的分离效果最优，但青蒿素和艾黄素的分离度不佳；随后将水相改为 0.2%磷酸水后，分离度得到了提高。研究前期考察了多个波长下各成分的显峰情况，发现在高波长下青蒿素不显峰，故最后选择 220 nm 为（续表3）编号S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11RSD(%)峰430.0650.1370.0910.1090.5351.0370.