药物分析知识点总结.doc

国家药品标准是中国药典(缩写Ch。P）和局颁标准。药品质量标准:是药品现代化生产和质量管理的重要组成部分，是药品生产、经营、使用和行政、技术监督管理各部门应共同遵循的法定技术依据。药典内容分：凡例、正文、附录、索引.药品质量管理规范（5个G）药品非临床研究质量管理规定GLP药品生产质量管理规范GMP药品经营质量管理规范GSP药品临床试验质量管理规范GCP中药材生产质量管理规范GAP。标准品：用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位计,以国际标准品进行标定.对照品除另有规定外，均按干燥品（或无水物质）进行计算后使用。药品检验工作的基本程序一般为取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告。杂质两个来源：一是由生产过程中引入，二是贮藏过程中引入.杂质按照来源分：一般杂质和特殊杂质；按毒性分:毒性杂质和信号杂质；按理化性质分：有机杂质、无机杂质和残留杂质。杂质限量：药物中含杂质的最大允许量.杂质限量=杂质最大允许量/供试品量*100杂质限量=标准溶液的浓度*标准溶液的体积/供试品量*100%即L=CV/S1001.氯化物检查,在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生成氯化银胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，浊度不得更大。加硝酸目的：避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银及氧化银沉淀的干扰，且可加速氯化银沉淀的生产并产生较好的乳浊，酸度以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。2.硫酸盐检查，在稀盐酸酸性条件下与氯化钡反应，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下产生的硫酸钡浑浊程度比较.3。铁盐检查，硫氰酸盐法,铁盐在盐酸酸性与硫氰酸盐作用生产红色可溶性硫氰酸铁配离子4。重金属检查，硫代乙酰胺法适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物；炽灼后的硫代乙酰胺法适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物；硫化钠法适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物；微孔滤膜法适用于重金属限量低的药物。常用热分析法有:热重分析、差热分析和差示扫描热分析。中国药典规定残留溶剂检查方法为GC（气相色谱法）特殊杂质检查一薄层色谱法1。杂质对照品法 适用于已知杂质并能制备得到杂质对照品2供试品溶液自身稀释对照法 适用杂质接受不确定或无杂质对照品二高效液相色谱法1。内标法加校正因子测定法 适用于有对照品并能够测定杂质校正因子2。外标法测定法 适用于有对照品且进样量能够精确控制3.加校正因子的主成分自身对照测定法 适用不用杂质对照品4。不加校正因子的主成分自身对照测定法 适用没有杂质对照品5.面积归一化法 适用粗略测量供试品中杂质含量.比旋度反映药物纯度，限定杂质含量.不经有机破坏的分析：直接测定法、经水解测定法、经还原分解测定法。经有机破坏分析：湿法破坏、干法破坏。湿法破坏适用于含氮有机合成药物分析前处理，在生物制品中用于氮、磷、硫柳汞即氯化钠测定法的前处理凯氏定氮法.干法破坏分1.高温炽灼法2.氧瓶燃烧法，含F药物选用水做吸收液,用银量法测含CL用水-氢氧化钠做吸收液，用银量法测含Br用水氢氧化钠做吸收液，测定含碘可用水氢氧化钠-二氧化硫做吸收液，含硫浓过氧化氢与水混合液做吸收液。容量分析应用于化学原料药的含量测定。滴定度：每1ml规定浓度的滴定液多相当的被测药物的质量，mg，T（mg/ml)=ma/bM,m为滴定液的摩尔浓度（mol/L）a为被测药物的摩尔数，b为滴定剂的摩尔数M为被测药物的毫摩尔质量（mg)。片剂的分析：1.容量分析法标示量%=V*TFD*平均片重/（W*标示量）100 F=实际摩尔浓度/规定摩尔浓度2.分光光度法 A=ECL 标示量=(A/EL）（1/1000)*D*平均片重/(W*标示量)*100%3。高效液相色谱法标示量=A样C对*D平均片重/（A对*W标示量)100%注射剂的分析:标示量%=VT*F*D/（Vs标示量）*100分光光度法：1。百分吸光系数法 标示量=A*D/（VsE*100*标示量)100%2.对照品比较法 标示量%=A样C对*D/（A对Vs标示量)100%色谱分析之高效液相色谱法，常用色谱柱填充剂有硅胶和十八烷基烷键键合硅胶，除另有规定外柱温为室温,检测器为紫外检测器，检测器不允许使用含不挥发盐组分的流动相，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，常用甲醇-水，间或加有乙腈、缓冲液、反离子物质等为流动相。色谱系统适应性试验通常包括理论板数、分离度（R1。5)、重复性（5次）、拖尾因子（0。951.05之间）四项指标.药品验证分析内容八条：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围、耐用性.准确度:用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度,一般用回收率表示。精密度:在规定测试条件下,同一个均匀供试品,经多次取样测定所得结果之间的接近程度。包括重复性、中间精密度、重现性。生物样品包括各种体液和组织，血样包括血浆、血清和全血，将血液置含抗凝剂的试管中，以25003000r/min离心5分钟时血浆与血细胞分离,短期保存可4冷藏，长期保存需20或80下冷冻贮藏.唾液以3000r/min离心10分钟，在4一下保存。采集的尿是自然排尿,包括随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿和时间尿五种。去除蛋白质常用方法：1。加入与水混溶的有机溶剂（常用水溶性溶剂:乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃等，比例1：1-3高速10000r/min离心12分钟可沉淀）2。加入中性盐（常用中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐、枸橼酸盐等，比例1:2，同上高速离心）3.加入强酸（PH低于蛋白质等电点，常用强酸:10%三氯醋酸、65%高氯酸、5偏磷酸等，比例1:0。6同上)4。加入含锌盐及铜盐的沉淀剂(PH高于等电点，常用：CuSO4-NaWO4、ZnSO4NaOH等,比例1:2同上）5。酶解法。液固粹取法LSE：一种柱色谱分离方法，将具有吸附、分配及离子交换性质的、表面积大的担体作为粹取剂填入小柱，以溶剂淋洗后，将生物样品通过，使其药物或内源性干扰物保留在担体上，用适当溶剂洗去干扰物后,再用适当溶剂将药物洗脱下来。填充柱分两类：1亲水性硅藻土2疏水性活性炭、聚苯乙烯或C18化学键合硅胶.粹取5步骤：（1）用有机溶剂如甲醇，预先湿润微型柱,使增加填料与待测物相互作用的表面积,并可除去可能干扰的填料残留物(2）用水或合适的缓冲液冲洗，除去残余的甲醇(3）进样，通过微型柱，废液弃去（4)用水或合适的缓冲液冲洗，选择性地除去将会干扰后面色谱分析的内源性杂质（5)用合适的溶剂如甲醇、乙腈等洗脱样品,收集，洗脱液用于后面的分析测定或进一步研究.【巴比妥类药物基本结构】分两部分,一母核巴比妥酸的环状丙二酰脲结构，此结构是巴比妥类药物的共同部分,决定巴比妥类药物共性;二取代基部分.微溶或极微溶水易溶于乙醇等有机溶剂，含1，3-二酰亚胺基团显弱酸性，能发生酮式烯醇式互变异构,在水中发生二级电离.含酰亚胺结构，与碱液共沸水解放出氨气使红石蕊变蓝。与重金属离子反应：1与银盐反应银量法：在碳酸钠碱性溶液中,生成钠盐溶解，再与硝酸银溶液反应，先生成可溶性一银盐，加入过量硝酸银则生成难溶性二银盐白色沉淀。2与铜盐反应：与铜吡啶试液反应形成稳定配位化合物，巴比妥类药物紫色沉淀,含硫巴比妥类药物绿色.3与钴盐反应4与香草醛反应生成棕红色物质司可巴比妥专属实验:与碘反应显棕黄色5分内消失，溴量法司可巴比妥与溴仅应使其褪色。巴比妥类与高锰酸钾反应在碱性中紫色还原为棕色二氧化锰。苯巴比妥专属鉴别反应:硝化反应、硫酸亚硝酸钠反应、甲醛硫酸反应。硫代巴比妥与铅白色沉淀.【巴比妥含量测定】1.银量法原理,先形成可溶性一银盐，过量滴加硝酸银形成难溶性二银盐；注意事项一，无水碳酸钠溶液要临用新配，二硝酸银滴定应新配制，三银电极在临用前需用硝酸浸洗。芳酸鉴别：水杨酸及盐在中性或弱酸性与三氯化铁缶成紫色配合物（反应适宜PH为46)（五种直接用FeCl3检测：双水杨酯、水杨酸、对乙酰氨基酚、二氟尼柳、对氨基水杨酸钠;两种间接：阿司匹林、贝诺酯）。苯甲酸盐中性或碱性与三氯化铁毛成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀【重氮化偶合反应】具潜在芳伯胺基加酸水解产生游离芳伯胺基结构，在酸性与亚硝酸重氮化反应（四种直接反应：对氨基水杨酸钠、盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺；三种间接：对乙氨基酚、醋氨苯砜、贝诺酯）。阿司匹林与碳酸钠加热水解，再加过量稀硫酸酸化生成白色水杨酸沉淀并有醋酸臭气。阿司匹林特殊杂质检查:溶液澄清度、水杨酸（主要检查杂质);对氨基水杨酸钠毛要检查杂质是间氨基酚。【芳胺类】（苯佐卡因、普鲁卡因、丁卡因等）具有对氨基苯甲酸酯的母体。【鉴别反应】重氮化偶合反应：分子结构具芳伯氨基或潜在芳伯氨基药物都可发生,生成的重氮盐可与碱性萘酚偶合成有色偶氮染料,苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普卡因、盐酸:普鲁卡因胺在盐酸条件下可直接与亚硝酸钠重氮反应；对乙酰氨基酚、醋氨苯砜在盐酸或硫酸中加热水解后才可与亚硝酸钠重氮反应;丁卡因不具芳伯氨基，无重氮反应,伹在酸性下与亚硝钠反应生成乳白色沉淀.对乙酰氨基酚与三氯化铁反应显蓝紫色。盐酸利多卡因在NaCO3中与CuSO4反应生成蓝紫色配合物，溶入三氯甲烷显黄色；苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普卡因、盐酸丁卡因无此反应.盐酸利多卡因在酸性下与氯化钴生成亮绿色钴盐沉淀【盐酸普鲁卡因鉴别】溶解后加氢氧化钠生成白色沉淀（普鲁卡因)加热变为油状物,继续加热产生蒸气使湿红石蕊变蓝。盐酸普鲁胺加过氧化氢再加三氯化铁显紫红色随后变棕。苯佐卡因加氢氧化钠加碘生成黄色沉淀放碘仿臭气【对乙酰氨基酚特殊杂质】检查对氨基酚,盐酸普鲁卡因注射液中检查对氨基苯甲酸。【芳胺类含量测定】亚硝酸钠滴定法、非水溶液滴定法、分光光度法、高效液相色谱法。含量测定之【亚硝酸钠滴定法原理】芳伯氨基或水解后生成放伯氨基的药物在酸性溶液中与亚硝酸钠发生重氮化反应,生产重氮盐，用永停滴定法指示终点,主要条件：1。加入适量溴化钾加快反应速度2。溴化钾与盐酸作用产生溴化氢与亚硝酸钠反应生成NOBr（目的)3。加过量盐酸加速反应(加入过量盐酸有利于：重氮化反应速度加快、重氮盐在酸性稳定、防止生成偶氮氨基化合物影响测定）可在室温(1030）下进行,其中15下结果较准确。指示终点方法：电位法、永停滴定法、外指示剂法、内指示剂法.中国药典芳胺类药物亚硝酸钠滴定法采用永停滴定法指示终点。【芳胺类苯乙胺类鉴别试验】三氯化铁、甲醛-硫酸、氧化、亚硝基铁氰化钠（脂肪族伯胺专属反应)。特殊杂质检查:肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素、盐酸甲氧明检查酮体。【杂环吡啶类药物弱碱性】尼可刹米分子除吡啶环上N原子外，吡啶环位被酰基取代，遇碱水解后释放碱性二乙胺【还原性】异烟肼分子中吡啶环位被酰肼取代,可被氧化也可与含羰基的缩合【杂环吡啶类鉴别试验】一、吡啶环开环反应适用于吡啶环的或被羧基衍生物取代的尼可刹米和异烟肼1.戊稀二醛反应（与苯胺缩合黄色至黄棕色，与异烟肼需显用高锰酸钾或溴水氧化为异烟酸再反应)2.二硝基氯苯反应（无水条件下与2,4-二硝基氯苯）。二、异烟肼与氨制硝酸银反应产生银镜，异烟肼的酰肼基与芳醛缩合成腙有固定熔点可鉴定.三、尼可刹米与硫酸铜及硫氰酸铵生成草绿色配合物沉淀，异烟肼、尼可刹米与氯化汞生成白色沉淀.四、尼可刹米与氢氧化钠加热有二乙胺臭味逸出，是湿红石蕊变蓝。异烟肼检查游离肼（在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点不得显黄色斑点）尼可刹米检查N-乙基烟酰胺【杂环喹啉碱性】季铵碱脂肪胺芳胺、N芳杂环酰胺。硫酸奎宁为左旋体,硫酸奎尼丁为右旋体,两者在稀硫酸中显蓝色荧光【绿奎宁反应】奎宁和奎尼丁经氯水氧化氯化再氨水处理成绿色二醌基亚胺铵盐，显翠绿色【Vitaili反应】杂环托烷类生物碱鉴别显深紫色【吩噻类】专属与钯离子配合显红色,其氧化产物砜和亚砜无此反应.苯并二氮杂卓类在硫酸下显不同荧光:地西泮为黄绿色，氯氮卓为黄色.【杂环含量测定之非水溶液滴定法】非水溶剂四种（酸性溶剂、碱性、两性、惰性如甲苯三氯甲烷丙酮）当杂环类药物pKb为810时适用冰醋酸为溶剂，碱性更弱pKb为1012时逘用冰醋酸与醋酐混合液，pKb12用醋酐。消除氢卤酸干扰是加入过量醋酸汞冰醋酸溶液,使生成在醋酸中难解离的卤化汞，再用高氯酸滴定。硫酸盐类在冰醋酸中只能滴定至硫酸氢盐可用高氯酸直接滴定。非水溶液滴定法常用电位滴定法（用玻璃电极为指示电极，饱和甘汞电极)和指示剂法(结晶紫酸式为黄色，碱式为紫色）。消除干扰：改用中性溶剂、电位法指示终点、加抗坏血酸。硝酸盐用电位法指示终点。磷酸与有机酸在冰醋酸中可直接滴定。杂环含量测定之氧伦还原滴定法:铈量法、溴酸钾法、碘量法、溴量法.铈量法（二氢吡啶类、吩噻嗪类)硫酸铈滴定先失去一电子形成红色自由基，达终点吩噻嗪失两电子红色消褪。溴酸钾法专属异烟肼【杂环含量测定之分光光度法】钯离子比色法吩噻嗪在pH2缓冲液与钯离子Pd2+形成红色配合物在500nm波长最大吸收。【维生素A】溶解于三氯甲烷、乙醚、环己烷、异丙醇。【维生素A鉴别】三氯化锑反应原理：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中显蓝色，渐变成紫红色,，机制为维生素A和三氯化锑中的亲电试剂绿化高锑作用形成不稳定的蓝色碳正离子.【维生素A含量测定】紫外分光光度法(三点校正法）:第一法（等波长差法）入1=328nm入2=316nm入3=340nm入=12nm，第二法（等吸收比法）入1=325nm入2=310nm入3=334nm。第一法（直接测定法，适用于纯度高等维生素A醋酸酯）在300、316、328、340、360五个波长点出测定吸光度，确定最大吸收波长应为328nm。第二法（皂化法，适用于维生素A醇）在300、310、325、334nm四个波长点测定吸光度，去顶最大吸收波长为325nm.【维生素B鉴别】维生素B1在碱性溶液中被铁氰化钾氧化生成硫色素溶于正丁醇中显蓝色荧光,地西泮显黄绿色荧光，加酸荧光消失，加碱又有荧光。与生物碱沉淀试剂反应生成恒定沉淀.【维生素B含量测定】【非水滴定】原理:维生素B1分子中含两个碱性成盐等伯胺和季铵基团，中非水溶液中（醋酸汞存在下）可于高氯酸作用，根据高氯酸量可计算维生素B1含量。有机碱等氢卤酸盐中用高氯酸滴定前需加入醋酸汞.【紫外分光光度法】原理：维生素B1分子中具有共轭双键结构，中紫外区有吸收，根据其最大吸收波长处吸光度可计算含量.维生素C一般表现为一元酸，有4个光学异构体，其中L（+）抗坏血酸活性最强，右旋【维生素C鉴别】与【2,6-二氯靛酚反应】原理：氧化性在酸性介质中为玫瑰红,在碱性介质中为蓝色，与维生素C作用后生成还原型无色酚亚胺【维生素C含量】碘量法、2,6二氯靛酚滴定法.【维生素E鉴别】【硝酸反应】原理:维生素E中硝酸酸性条件下水解生成生育酚，生育酚被硝酸氧化为邻醌结构等生育红而显橙红色【维生素E杂志检查】酸度、未酯化的生育酚(铈量法，吩噻嗪类、二氢吡啶类，指示剂为二苯胺，亮黄-灰紫，还原-氧化）【维生素E含量】【气相色谱法】测定时采用内标法。内标物为正三十二烷。系统适应性实验:理论板数(n)按维生素E峰计算不应低于500（填充柱）或5000（毛细管柱)，维生素E峰与内标物质峰等分离度R2。【甾体结构性质】肾上腺激素21C（12）雄性19C（13）孕21C(14)雌18C(567)，（1)43酮，紫外吸收、与羰基试剂反应（2)C1醇酮基,还原性（3）C17-羟基，可成酯（4)C17-甲酮基，与亚硝基铁氢化钠反应，专属性（5）C17羟基，可成酯(6)C17乙炔基，与硝酸银反应（7）A环为3OH苯环，紫外吸收、与重氮苯磺酸盐反应。【甾体鉴别】（一)与强酸呈色反应（二）官能团反应,皮质激素类，松之类如氢化可的松C17-醇酮基的四氮唑比色法【甾体特殊杂志检查】(一)有关物质检查，薄层色谱法用自身稀释对照法,高效液相色谱法用主成分自身对照法(二）硒的检查，用二氨基萘比色法（三）残留溶剂检查,甲醇和丙酮,气相色谱法用内标法加校正因子测定（四）游离磷酸盐的检查【甾体含量】【四氮唑比色法】用于皮质激素药物含量测定，C17醇酮基还原性，还原四氮唑盐味有色甲赞.氯化三苯四氮唑TTC、红四氮唑RT、蓝四氮唑BT。反应条件:无水乙醇溶解，干燥具塞试管、氢氧化四甲基铵试液、暗处放置。测定影响因素：集团、溶剂和水分、碱种类及加入顺序、空气中氧及光纤、温度时间【异烟肼比色法】中酸性条件无水甲醇和无水乙醇溶剂。反应专属性（具有43酮基的载体激素中室温下不到1h可定量与异烟肼反应，其他甾酮需长时间放置或加热才可反应,如，C20酮化合物黄体酮、可的松等，C17-酮化合物可反应成腙，C11-酮无此反应【柯柏反应比色法】雌激素类药物比色测定。【抗生素类含量】微生物检定（少量）、高效液相色谱法(量多）内酰胺抗生素具旋光性:青霉素汗3个手性碳C356、头孢菌素汗2个手性碳C67.内酰胺抗生素鉴别：羟肟酸铁反应（地西泮茚三酮)。氨基糖苷类抗生素链霉素结构为一分子链霉胍和一分子双糖胺结合成的碱性苷，具3个碱性中心；庆大霉素有绛红糖胺、脱氧链霉胺和加罗糖胺缩合成苷，具5个碱性中心。链霉素中230nm有紫外吸收,庆大霉素、奈替米星等无紫外吸收。【氨基糖苷抗生素鉴别】（一）茚三酮反应，羟基胺类和-氨基酸性质可与茚三酮缩合成蓝紫色化合物（二）Molisch试验（三）N-甲基葡萄糖胺反应，链霉素、庆大霉素最后生成樱桃红色缩合物(四)麦芽酚反应，紫红色配位化合物(五）坂口反应，链霉素水解产物链霉胍特有反应。【氨基糖苷抗生素特殊杂志检查】组分测定，用高效液相色谱法测定庆大霉素C各组分含量,需进行衍生化处理，采用归一化法测定庆大霉素含量，用峰高归一化法计算【氨基糖苷抗生素含量】微生物检定法和HPLC法。【四环素TC差向异构化】四环素累抗生素在弱酸性（Ph2。06。0）中发生差向异构化，四环素、金霉素产生差向四环素ETC和差向金霉素（具蓝色荧光）;土霉素、多西霉素、美他环素不发生。四环素在碱性产生异四环素。【四环素降解】在酸性条件下（PH2）四环素、金霉素生成脱水四环素ATC和脱水金霉素。脱水四环素可形成差向异构体称差向脱水四环素。