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药物分析归纳作者：张倩炎（福医大药学3班）第一章 绪论及药典概况1、5P标准 GLP药物非临床研究质量管理标准 GCP药物临床试验质量管理标准 GMP药品生产质量管理规范 GSP药品经营质量管理规范 GAP中药材生产质量管理规范2、 ChP组成 药品=中药+化学药品+生物制品 药典=凡例+索引+正文+附录3、 溶解度等级（溶质1g在溶剂中的溶解度）10000ml极易溶易溶溶解略溶微溶极微溶不溶4、 贮藏条件 遮光：容器不透光 密闭：容器密闭，防止尘土进入 密封：容器密封防止风化、吸潮、挥发 熔封：防止空气和水分进入 阴凉处：不超过20 凉暗处：避光并不超过20 冷出：210 常温：10305、 温度冷却至室温约021010304050708098100放冷冰浴冷水室温温水热水水浴温度6、 精确度 精密称定：重量准确至千分之一 称定：重量准确至百分之一 精密量取：符合移液管的精度要求 量取：符合量筒的量取要求“约”若干：不得超过规定量的10%7、 比旋度的计算 （见P33）为比旋度；D为钠光谱的D线；l为测定管的长度，dm；为测得的旋光度；d为液体的相对密度。第二章 药物的鉴别试验1、 性状鉴定 性状：外观、溶解度、物理常数（熔点、比旋度、吸光度）2、 一般鉴别试验 有机氟化物：氧瓶燃烧法，加茜素氟蓝试液，显蓝紫色。 水杨酸盐：加三氯化铁试液，在中性时呈红色，弱酸性时呈紫色。 酒石酸盐：加氨制硝酸银试液，水浴加热，试管壁成银镜。 芳香第一胺：加稀盐酸和碱性-萘酚试液，生成由橙黄至猩红色沉淀。 托烷生物碱类：加发烟硝酸，水浴蒸干得黄色残渣，放冷加乙醇和氢氧化钠，显深紫色。 金属盐：焰色反应，钠黄钾紫钙砖红。 铵盐：加过量氢氧化钠，加热分解产生氨气，遇润水的红色石蕊试纸变蓝。 氯化物：滴加硝酸银试液，生成白色沉淀，加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化，沉淀又生成。 硫酸盐：加氯化钡试液，生成白色沉淀。 硝酸盐：加等量的硫酸混合，冷却后加硫酸亚铁试液，溶液分层，界面层显棕色。3、 化学鉴别法 呈色反应、沉淀反应、荧光反应、气体生成反应、试剂褪色鉴别、测定生成物的熔点等等。4、光谱鉴别法 紫外光谱：采用两种浓度的供试液分别测定其最大吸收波长。 红外光谱：适用于组分单一，结构明确的原料药，ChP采用标准图谱对照法，USP采用对照品法。 原子吸收光谱：适用于金属元素。 核磁共振：用于各种分子物理和化学结构的研究。 质谱：广泛应用于药物的定性鉴别和定量测定。5、 色谱鉴别法 薄层色谱TLC鉴别法、高效液相色谱和气相色谱HPLC-MC鉴别法。6、 其他鉴别法 显微鉴别、生物学法、指纹图谱法。第三章 药物的杂质检查1、 杂质的来源 生产过程：原料或辅料不纯、反应中间体、副产物； 贮藏过程：在外界条件影响下发生水解、氧化、分解、异构、聚合、潮解、发霉等。2、 杂质的分类 一般杂质：自然界分布广泛，在药物生产贮藏过程中易引入的杂质。 特殊杂质：特定药物生产贮藏过程中引入的杂质，也称有关物质。杂质限量L的计算 （见P100）C为杂质标准液的浓度；V为体积；S为供试品杂质最大允许量。3、 杂质的检查方法 化学方法：显色法、沉淀法、生成气体法、滴定法。 色谱方法：薄层色谱法（杂质对照品法、供试液自身稀释对照法、两者并用、对照药物法） 高效液相色谱法（外标法或对照品法、自身对照法、面积归一化法） 气相色谱法（标准溶液加入法）、毛细管电泳法 光谱方法：紫外分光光度法、红外分光光度法 其他方法：热分析法、酸碱度检查法、物理性状检查法4、 一般杂质的检查 氯化物：在酸性条件下与硝酸银反应，生成白色沉淀。 （注：加硝酸可避免弱酸银盐沉淀的干扰；供试品液如带颜色，可采用内消色法解决。） 硫酸盐：在酸性条件下与氯化钡反应，生成白色沉淀。 铁盐：在酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红色可溶性配合物。 （注：加过硫酸铵的目的是使Fe2+转换成Fe3+，酸性条件下反应可以防止Fe3+的水解。） 重金属盐：硫代乙酰胺在酸性条件下水解产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的混悬液。或者在碱性溶液中以硫化钠为显色剂，与铅溶液生成硫化铅沉淀（如磺胺类、巴比妥类药物）。 （注：该比色法用到3支比色管，分别为对照管、供试管、监控管。） 砷盐：采用古蔡法或二乙基二硫代氨基甲酸银法检查。金属锌与酸作用生成氢气，与药物中的砷离子生成易挥发的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的深斑。后者的方法可产生红色胶态银。 a.加入Zn的作用是产生H2； b.SnCl2与KI的作用是将As5+还原为As3+，I-与Zn2+的配位作用，还可抑制锑化氢的生成； c.醋酸铅棉花的作用是吸收H2S气体，起到过滤的作用。（注：Sb吸电子给电子）、水解性（酯键、酰胺键）、紫外/红外特性。2、 鉴别实验1） 三氯化铁反应 水杨酸反应：水杨酸加三氯化铁试液，生成紫堇色配位化合物。 酚羟基反应：对乙酰氨基酚的水溶液加三氯化铁试液，显蓝紫色。2） 缩合反应 酮洛芬（二苯甲酮）：酸性条件下与二硝基苯肼缩合，生成橙色偶氮化合物。3） 重氮化-偶合反应 芳伯氨基：在稀盐酸加热条件下，与亚硝酸钠试液反应，再与碱性-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。4） 氧化反应 甲芬那酸：溶于硫酸后，与重铬酸钾反应显深蓝色，随即变为棕绿色。 吲哚美辛：在硫酸存在下，与重铬酸钾共热，应显紫色；在盐酸中与亚硝酸钠反应显绿色，渐变黄色。5） 水解反应 阿司匹林与Na2CO3试液加热水解后，加过量稀硫酸酸化，生成白色沉淀，并产生醋酸臭气。6） 光谱法（略）、7）色谱法（略）。3、 特殊杂质及检查1） 阿司匹林中游离水杨酸的检查 检测方法：稀硫酸铁铵溶液显色反应。 注：药典采用1%冰醋酸溶液制备供试品溶液，以防阿司匹林水解，同时采用HPLC检查，C18作填充剂。 有关物质：除游离水杨酸外的合成原料（苯酚）及其他合成副产物，如醋酸苯酯、水杨酸苯酯、水杨酸苷、水杨酰水杨酸、乙酰水杨酸苯酯等。 注：除水杨酸峰外，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积。4、 含量测定a. 直接滴定法：药物溶于中性乙醇，以酚酞为指示剂，用NaOH滴定液直接滴定。b. 剩余量滴定法：用定量过量的NaOH滴定液溶解后，用盐酸滴定液回滴定剩余的NaOH滴定液。c. 水解后剩余量滴定法：加入定量过量的NaOH，加热使酯键水解后，再用硫酸回滴剩余的NaOH滴定。d. 两步滴定法：第一步中和制剂中酸性水解产物及稳定剂，以消除干扰；第二步为水解后剩余量滴定。（注：阿司匹林原料药采用酸碱滴定法，而阿司匹林片剂采用两步滴定法。）e. 非水溶液滴定法：吡罗昔康具有吡啶环，显碱性，可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定。第七章 苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析1、 性质 用途：收缩血管、升血压、散瞳、舒张支气管、迟缓胃肠肌、加速心率、加强心肌收缩等作用。 结构：邻苯二酚、苯乙胺（3个取代基团）。 典型药物：肾上腺素、异丙R、重酒石酸去甲R、盐酸去氧R、盐酸多巴胺、盐酸甲氧明、麻黄碱等。 理化性质：酚羟基特性、弱碱性（NH2）、旋光性、紫外吸收特性。2、 鉴别试验 a.三氯化铁反应：酚羟基与Fe3+配位显绿色；在碱性条件为紫红色。 b.甲醛-硫酸反应：肾上腺素显红色，异丙显暗紫色，重酒石酸显淡红色。 c.还原反应：略。 d.氨基醇的双缩脲反应：（鉴别盐酸麻黄碱）加CuSO4与NaOH即显蓝紫色；加乙醚后分层，乙醚层显紫红色，水层显蓝色。 e.脂肪伯胺的rimini试验：略。3、 特殊杂质与检查 项目：酮体杂质（紫外分光法）、光学纯度ee（色谱法和电泳法）、有关物质（TLC盐酸去氧肾素；纸色谱盐酸苯乙酸胍；HPLC其他药物）。4、 含量测定1） 非水溶液滴定法 对象：有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐及金属盐类药物。 非水溶剂种类：酸性R如冰醋酸；碱性R如二甲基甲酰胺；两性R如甲醇；惰性R如甲苯、三氯甲烷。 基本原理：强酸置换出与弱碱结合的弱酸，即BH+A- + HClO4 BH+ClO4- + HA。（注：有机弱碱的盐均用高氯酸滴定。）（注：加入定量的醋酸汞-冰醋酸溶液的目的是消除氢卤酸对滴定的干扰。） 终点指示：常用电位法和指示剂法。指示剂为结晶紫，酸式色为黄色，碱式色为紫色。2） 溴量法 对象：盐酸去氧肾素、重酒石酸间羟胺原料药药典ChP2010 原理：苯酚结构在酸性条件下与溴定量发生反应，再以碘量法滴定剩余的溴。3） 亚硝酸钠法 方法：芳伯氨基在酸性溶液中与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，用永停法指示终点。4） 紫外分光法与比色法（略） 5） 高效液相色谱法（略）第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药的分析1、 性质 用途：局部可逆性地阻断神经冲动发生与传导。 结构：亲脂性芳香环、中间连接功能基（酯键-对氨基R；酰胺键-酰苯胺R）、亲水性胺基。 典型药物：对氨基类（苯佐卡因、普鲁卡因、丁卡因）、酰苯胺类（利多卡因、布比卡因、罗哌卡因）。 理化性质：芳伯氨基特性、水解特性（酯键）、弱碱性（叔胺氮）、与重金属反应特性、吸收光谱特性。2、 鉴别试验1） 重氮化-偶合反应 原理：芳伯氨基在酸性溶液中与亚硝酸钠反应，加入减小-萘酚溶液显猩红色沉淀。芳仲胺在酸性溶液中与亚硝酸钠反应，生成乳白色沉淀。2） 与金属离子反应a. 鉴别盐酸利多卡因：在Na2CO3试液中与CuSO4反应生成蓝紫色配位化合物。再溶入CHCl3中显黄色。b. 鉴别盐酸普鲁卡因胺：被浓H2O2氧化成羟肟酸，再与FeCl3反应显紫红色，随即变为棕黑色。3） 水解产物反应a. 鉴别苯佐卡因：加NaOH试液煮沸，再加入碘加热，生成黄色沉淀，并产生碘仿的臭气。b. 鉴别盐酸普鲁卡因：加NaOH溶液即生成白色沉淀，加热变为油状物，继续加热，产生的蒸汽能使红色石蕊试纸变蓝，热至油状物消失后，加盐酸即析出白色沉淀。3、 特殊杂质与检查 项目：盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查（HPLC，C18为填充剂，反向）； 盐酸普鲁卡因中有关物质和光解产物的检查（LC/MS联用）； 盐酸利多卡因中2，6-二甲基苯胺的检查（HPLC）； 盐酸罗哌卡因的光学纯度检查（毛细管电泳）。4、 含量测定1） 亚硝酸钠滴定法 原理：重氮化反应，用永停法指示终点。 注：在不同无机酸中，重氮化反应速度不同，HBrHClHNO3、H2SO4。 注：重氮化反应的速度与温度成正比，但是生成的重氮盐又随温度升高而分解。2） 非水溶液滴定法 方法：将供试品溶于冰醋酸-醋酐溶液中，用高氯酸滴定至终点；以电位法指示滴定终点。 注：加入醋酐的目的是增强布比卡因的碱性，使滴定突跃明显。3） 紫外分光光度法（外标一点法）4） 高效液相色谱法（略）第九章 二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析1、 性质 用途：钙通道阻滞药，用于缺血性心血管疾病、高血压、脑血管疾病的治疗。 结构：苯基、1，4-二氢吡啶母核。 典型药物：硝苯地平、尼莫地平、氨氯地平、尼索地平、非洛地平等。 理化性质：还原性（吡啶环）、氧化性（硝基）、解离性、稳定性（光化作用）、旋光性、光谱特性。2、 鉴别试验a. 亚铁盐反应：苯环硝基具有氧化性，可与Fe(OH)2发生氧化反应，生成红棕色沉淀。b. NaOH试液反应：药物在丙酮溶液中与NaOH试液反应，显橙红色。c. 沉淀反应：二氢吡啶可与重金属盐类形成沉淀。（如尼莫地平与HgCl生成白色沉淀）d. 重氮化-偶合反应：苯环硝基在酸性条件下被锌粉还原为芳伯氨基，可鉴别。e. 紫外分光法、红外分光法、色谱法。（略）3、 有关物质的检查 方法：HPLC法。（避光操作）4、 含量测定a. 铈量法：在强酸条件下进行滴定，Ce4+自身可作指示剂。（4价为黄色，3价为无色）b. 紫外分光法、高效液相色谱法。（略）第十章 巴比妥及苯二氮杂卓类药物的分析第一节 苯巴比妥类药物的分析1、性质 用途：广泛用于镇静催眠。 结构：环状丙二酰脲（母核）、1，3-二酰亚胺（母核基团）。 典型药物：巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥、硫喷妥钠等。 理化性质：弱酸性、水解性、金属离子反应、香草醛反应、紫外吸收特性、显微结晶。*扩展 理化性质 口诀：银白铜钴紫硫蓝 a.弱酸性：二酰亚胺上氢受邻位羟基影响，发生质子转移（发生二级电离）；b.水解性：酰亚胺结构与碱液共沸，水解释放出NH3，可使红色石蕊试纸变蓝。（注：可用于鉴别异戊巴比妥和巴比妥）c.与金属离子反应（含丙二酰脲）： 银盐（在Na2CO3溶液中生成钠盐而溶解，再与硝酸银反应，先生成一银盐，硝酸银过量时生成二银盐。一银盐可溶解，二银盐不溶。） 铜盐（在吡啶溶液中生成烯醇式异构体，再与铜-吡啶试液反应，生成紫色配合物。鉴别含S巴比妥类药物：与铜盐反应显绿色）钴盐（碱性溶液中与钴盐反应，生成紫堇色配合物） 汞盐（与硝酸汞或氯化汞反应，生成白色沉淀，沉淀能在氨试液中溶解） d.香草醛反应：在浓硫酸存在下与香草醛发生缩合反应，生成棕红色产物。e.显微结晶：在显微镜下观察，巴比妥为长方形结晶，苯巴比妥开始结晶时球形，后为花瓣状。2、 鉴别实验1） 丙二酰脲反应a. 银盐反应：与碳酸钠、硝酸银反应，生成白色沉淀，沉淀振摇即溶解，硝酸银过量时沉淀不溶解。b. 铜盐反应：在吡啶溶液中溶解后，与铜吡啶试液反应，显紫色。（或生成紫色沉淀）2） 特征基团反应a. 硫元素：在NaOH溶液中与Pb离子反应，生成白色沉淀。b. 不饱和取代基：分子结构含有丙烯基，可与I2、Br2或KMnO4作用，发生加成反应，使其褪色。（注：可用于司可巴比妥的专属鉴别）C.芳环取代基： 硝化反应（与KNO3及H2SO4共热，生成黄色硝基化物）亚硝酸钠反应（苯巴比妥与硫酸-亚硝酸钠反应，生成橙黄色产物，ChP用于鉴别苯巴比妥和苯巴比妥片）甲醛-硫酸反应（苯巴比妥与甲醛-硫酸反应，生成玫瑰红色产物，用于鉴别巴比妥和无芳环取代的巴比妥类药物）*扩展 鉴别试验硫代巴比妥铅离子沉淀； 司可巴比妥高锰酸钾褪色；苯巴比妥硝化反应，显黄色；甲醛-硫酸反应，玫瑰红。 3、 特殊杂质的检查 项目：酸度（甲基橙指示剂）、乙醇溶液的澄清度、中性或碱性物质（提取重量法）、有关物质。4、 含量测定 方法：银量法、溴量法、紫外分光法、酸碱滴定法、提取重量法、HPLC法、GC法及电泳法。a. 银量法：ChP采用甲醇和3%无水Na2CO3溶剂系统，以银-玻璃电极电位法指示终点。b. 溴量法：用于司可巴比妥原料药及其胶囊的测定。（滴定比例1：1）c. 酸碱滴定法：包括水-乙醇混合溶剂滴定、胶束水溶液滴定、非水溶液滴定（指示剂为麝香草酚蓝）。d. 其他方法（略）第二节 苯并二氮杂卓类药物的分析1、 性质 用途：用于抗焦虑、抗惊厥。 结构：苯环、七元含氮杂环。 典型药物：地西泮、氟硝西泮、氯氮卓、三唑仑、奥沙西泮、劳拉西泮等。 理化性质：弱碱性（N杂环）、水解性（在强酸溶液中水解生成二苯甲酮衍生物）、紫外特性。（注：地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸，可用于专属鉴别。）2、 鉴别试验a. 生物碱沉淀反应：遇碘化铋钾试液显橙红色沉淀。b. 硫酸-荧光反应：地西泮 + 浓H2SO4 黄绿色 （或） + 稀H2SO4 黄色。 氯氮卓 + 浓H2SO4 黄色 （或） + 稀H2SO4 紫色。c. 氯化物的鉴别：略。d. 芳伯胺的反应：重氮化-偶合反应。（或亚硝酸钠反应）e. 其他：略。3、 特殊杂质与检查 方法：GC法或HPLC法。（注：三唑仑采用HPLC法1%溶液主成份自身对照法检查。）4、 含量测定1） 非水溶液滴定法（原料药的测定）a. 非水碱量法：pKa为810时，冰醋酸溶剂；pKa为1012时，冰醋酸与醋酐混合溶剂；pKa12时，醋酐溶剂。b. 非水酸量法：采用氢氧化四丁基铵为滴定液，以电位法指示终点。2） 紫外分光法a. 对照品比较法 b.吸收系数法（注：本类药物中，原料药仅奥沙西泮采用此法测定。）第十一章 吩噻嗪类抗精神病药物的分析1、 性质 用途：阻断多巴胺受体，治疗型精神分裂症（控制幻觉和妄想）。 结构：硫氮杂蒽（母核）、2位和10位取代基。 典型药物：盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪、奋乃静、氟奋乃静、盐酸氟奋乃静等。 理化性质：弱碱性（含N）、还原性（用于鉴别）、氧化性（避光）、金属离子配位（S2+）、紫外特性。2、 鉴别试验a. 生物碱沉淀反应：与三硝基苯酚反应，生成沉淀。b. 氧化显色反应：盐酸异丙嗪与硝酸反应生成红色沉淀，加热即溶解，溶液变为橙黄色。 盐酸氯丙嗪加硝酸显红黄，加FeCl3显红色。c. 与钯离子配位反应：葵氟奋乃静与氯化钯反应，生成红色沉淀。d. 卤素取代基的焰色反应：奋乃静在铜网上加热，火焰显绿色。e. 红外分光法：吩噻嗪类原料药均用红外分光法鉴别。f. 色谱法：GC法、HPLC法。（略）（注：鉴别a盐酸氯丙嗪、b氟奋乃静与c奋乃静：a含Cl，b含F，加入氢氧化钠后a溶c不溶。）（鉴别盐酸氯丙嗪和盐酸异丙嗪：加硫酸，显樱桃红色的为异丙嗪；加硝酸有红色沉淀的是异丙嗪。）3、 有关物质检查 氯丙嗪：HPLC法。（辛基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-三氟乙酸为流动相。） 奋乃静：HPLC法。（C18键合硅胶为填充剂，甲醇为流动相。）4、 含量测定 方法：酸碱滴定法、分光法、HPLC法、LC-MS联用法。（奋乃静：原料药用非水法，片剂用紫外法。）a. 非水溶液滴定法：冰醋酸-醋酐为溶剂，高氯酸溶液滴定。（加入醋酸汞可使反应进行完全。）b. 提取后分光法：用分光法测定时，通过提取以排除辅料的干扰。c. 钯离子比色法：略。d. HPLC法：采用反向RP-HPLC法和离子对色谱法分离，紫外检测器检测。第十二章 喹啉与青蒿素类抗疟药物的分析第一节 喹啉类药物的分析1、 性质 用途：抗疟药。 结构：喹啉。 典型药物：硫酸奎宁、磷酸哌奎、磷酸氯喹、磷酸伯氨喹等。 理化性质：碱性（生物碱）、旋光性、荧光特性（蓝色）、紫外特性。（注：磷酸哌奎和磷酸咯奈啶无手性碳，故无旋光性。）根据用药目的将抗疟药分为3类：用于控制症状磷酸氯喹，硫酸奎宁、青蒿素等； 用于控制复发和传播磷酸伯氨喹； 用于病因学预防乙胺嘧啶、磺胺类2、 鉴别试验a. 绿奎宁反应：奎宁经氯水氧化，氨水处理缩合，生成绿色的铵盐。b. 硫酸盐的鉴别反应：BaCl2生成白色沉淀；加醋酸铅生成白色沉淀，沉淀在氨试液中溶解。c. 氯化物的鉴别反应：AgNO3生成白色沉淀；加MnO2加热产生Cl2，使淀粉试纸变蓝。d. 磷酸盐的鉴别反应：加AgNO3生成黄色沉淀；加氯化铵镁生成白色沉淀；加钼酸铵与硝酸生成黄色沉淀。e. 荧光反应：硫酸奎宁和二盐酸奎宁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光。3、 纯度检查a. 硫酸奎宁的纯度检查：酸度、三氯甲烷-乙醇中不溶物质、其他金鸡纳碱。b. 磷酸咯奈啶的纯度检查：酸度、水中不溶物、氯化物、甲醛、四氢吡咯。4、 含量测定1） 硫酸奎宁的含量测定 硫酸奎宁：非水溶液滴定法。1mol硫酸奎宁消耗3mol高氯酸滴定液。（加入冰醋酸，发生一级电离） 硫酸奎宁片：非水溶液滴定法。1mol硫酸奎宁消耗4mol高氯酸滴定液。（未加冰醋酸，发生二级电离）第二节 青蒿素类药物的分析1、 性质 用途：类抗疟药。 结构：倍半萜内酯、过氧桥。 典型药物：青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚等。 理化性质：氧化性、旋光性（右旋）、水解性（内酯）、紫外特性。2、 鉴别试验a. 过氧桥的氧化反应：酸性条件下与KI试液反应，淀粉指示液显蓝紫色。b. 羟肟酸铁反应：在碱性条件下与羟胺作用生成羟肟酸，在烯酸中与高铁离子呈紫红色。c. 香草醛-硫酸反应：加入香草醛-硫酸试剂，显红色。3、 纯度检查 项目：有关物质（衍生物、结构类似物）。4、 含量测定 方法：青蒿素类原料药采用HPLC法测定，双氢青蒿素采用水解后UV法。第十三章 莨菪烷类抗胆碱药物的分析1、 性质 用途：生物碱类抗胆碱药。 结构：含氧桥环、苯环取代基。 典型药物：硫酸阿托品、氢溴酸后阿托品、硫酸莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪碱等 理化性质：水解性（酯键）、碱性（叔胺氮）、旋光性。（注：阿托品类药无旋光性，而东莨菪碱有旋光性，可用于鉴别。）2、 鉴别试验a. 托烷生物碱Vitali反应：酯键水解后，经发烟硝酸加热，再与KOH醇溶液和固体KOH作用，显深紫色。b. 硫酸-重铬酸钾反应：本类药物水解后，与硫酸-重铬酸钾加热反应，产生苦杏仁臭味。c. 生物碱显色/沉淀反应：常用沉淀剂如碘化铋钾、三硝基苯酚、磷钨酸等。d. 光谱法、色谱法。（略）e. 硫酸盐和溴化物的反应：莨菪烷类药物制品水溶液大多为硫酸盐和氢溴酸盐，因此鉴别。3、 特殊杂质与检查 项目：酸度（pH4.05.5）、易氧化物、其他生物碱。4、 含量测定1） 酸性染料比色法 基本原理：在适当pH水溶液中，碱性药物与H+结合成阳离子，而一些酸性染料可解离成阴离子；两种离子定量地结合，生成具有吸收光谱明显红移的有色离子对。 反应式原理：略。 酸性染料：溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、溴酚蓝等。 影响因素：水相的pH、酸性染料的种类及浓度、有机溶剂的选择、有机相的水分、酸性染料中有色杂质。2） 非水溶液滴定法 注：硫酸阿托品与高氯酸反应的化学计量比为1：1。（硫酸在冰醋酸中发生一级解离） 注：醋酸汞作用：消除氢氯酸盐的干扰。3） 高效液相色谱法 分析碱性物质阴离子对试剂戊烷/庚烷/十二烷磺酸钠。 分离酸性物质阳离子对试剂四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵。 常用扫尾剂：醋酸铵、三乙胺、二乙胺等。第十四章 维生素类药物的分析第一节 维生素A的分析1、 性质 结构：环己烯、共轭多烯醇侧链。 自然来源：海鱼肝脏提取的脂肪油，通称鱼肝油。 理化性质：溶解性（脂溶性）、不稳定性（易氧化）、紫外特性（共轭烯烃）。（注：维生素A1又称视黄醇；鱼肝油中维生素A主要为醋酸酯和棕榈酸酯。）（维生素按溶解度分为脂溶性A、D、E、K等；和水溶性B、C、烟酸、叶酸等。）2、 鉴别试验a. 三氯化锑反应：维生素A在无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中显蓝色，渐变为紫红色。（注：反应必须在无水、无醇条件下进行。）b. 紫外分光法、薄层色谱法。（略）3、 含量测定1） 紫外分光法（三点校正法） 方法：三点校正法。（目的：消除无关吸收的干扰） 原理：a.杂质的无关吸收在310340nm处几乎呈一条直线。 b.物质对光的吸收具有加和性。 测定法：直接滴定法（测定维A醋酸酯）、皂化法（测定维A醇）。 校正吸光度：A328（校正）=3.52（2A328-A316-A340） 维生素A醋酸酯的计算 （见P350）A为A328或A校正；D为稀释倍数；1900为换算因子；W为内容物称量；B为标示量。（注：若吸光度差值超过0.02时，计算A校正，若A校正与A的差值在-15%3%时，用A校正计算。）2） 高效液相色谱法 条件：硅胶为填充剂，正己烷-异丙醇为流动相，检测波长为325nm。3） 三氯化锑比色法（略）第二节 维生素B1的分析1、 性质 结构：氨基嘧啶环、噻唑环。（含S含N） 自然来源：广泛存在于米糠、麦麸、酵母中。 理化性质：溶解性（水溶性）、紫外特性。2、 鉴别试验a. 硫色素荧光反应：在碱性溶液中，被铁氰化钾氧化，与正丁醇中显蓝色荧光。b. 沉淀反应：嘧啶环和氨基具有生物碱的特征，可与生物碱沉淀剂反应。碘红汞钾黄钨白c. 氯化物鉴别反应：略。d. 硫元素反应：与NaOH共热，再与硝酸铅反应生成黑色沉淀。3、 含量测定a. 非水滴定法：1mol维生素B1消耗2mol高氯酸滴定液。（维生素B1具有2个碱性基团）b. 紫外分光法。（略）c. 硫色素荧光法。（略）第三节 维生素C的分析1、 性质 用途：抗坏血酸。 结构：烯二醇、内酯环。 理化性质：溶解性（水溶性）、酸性（一元酸）、旋光性、还原性、水解性、糖类性质、紫外特性。2、 鉴别试验a. 与硝酸银反应：烯二醇具有强还原性，可被硝酸银氧化，产生黑色金属银沉淀。b. 与二氯靛粉钠反应：2，6-二氯靛粉钠在酸性介质中为玫瑰红色，碱性介质中为蓝色。与维生素C作用后生成还原型无色的酚亚胺。c. 与其他氧化剂反应：氧化剂如亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜、磷钼酸等。d. 薄层色谱法：略。e. 糖类的反应：维C可在三氯醋酸存在下转化为糠醛，加入吡咯，加热至50呈现蓝色。3、 杂质检查 项目：溶液的澄清度与颜色检查、铁/铜离子的检查（原子吸收光度法）、草酸的检查（比浊法）。4、 含量测定a. 碘量法：略。（丙酮的目的：消除抗氧剂/掩蔽剂的干扰。）b. 二氯靛粉滴定法：略。c. 高效液相色谱法：固定相为C18键合硅胶，流动相为甲醇-偏磷酸溶液。第四节 维生素D的分析1、 性质 用途：抗佝偻病。 结构：开环麦角甾醇。 理化性质：溶解性（脂溶性）、不稳定性、旋光性（D2-6碳；D3-4碳）、紫外特性。2、 鉴别试验a. 醋酐-浓硫酸反应（红-紫-蓝-绿） b.三氯化锑反应（粉红色） c.三氯化铁反应（橙黄色）b. 薄层色谱法、HPLC法：鉴别维生素D2和D3。3、 杂质检查 注：ChP规定，维生素D2检查麦角甾醇，而维生素D3未要求。4、 含量测定 方法：正相高效液相色谱。第五节 维生素E的分析1、 性质 用途：生育酚。 结构：苯并二氢吡喃醇衍生物、苯环、酚羟基。 理化性质：溶解性（脂溶性）、水解性、还原性、紫外特性。（注：维生素E的天然品为右旋体，合成品为消旋体。）2、 鉴别试验a. 硝酸反应：在硝酸酸性条件下水解成生育酚，继续被硝酸氧化，显橙红色。b. 三氯化铁反应：在碱性条件下水解成生育酚，被Fe3+氧化后，与联吡啶反应，显红色。c. 紫外分光法、薄层色谱法：略。3、 杂质检查 项目：酸度、生育酚（硫酸铈滴定法，二苯胺试剂，亮黄色）、有关物质、残留溶剂（气相色谱法）。（注：维生素E中生育酚的检查是唯一用滴定法检查杂质的有机物。）4、 含量测定 方法：GC法（采用正三十二烷内标法，固定液为硅酮） HPLC法（固定相为C18，流动相为甲醇-水。）第十五章 甾体激素类药物的分析1、 性质 结构：环戊烷并多氢菲。 药理分类：肾上腺皮质激素、性激素（雄激素、雌激素、孕激素）。 骨架分类：雄甾烷、雌甾烷、孕甾烷。（根据C10、C13、C17位取代基的不同分类） 理化性质：溶解性（脂溶性）、旋光性、紫外吸收特性、 结构特征：肾上腺皮质激素A环有4-3-铜基，有紫外吸收；C17位有-醇酮基，具有还原性。 雄激素A环有4-3-铜基；C17位有羟基。 孕激素A环有4-3-铜基；C17位有甲酮基、羟基。 雌激素A环为苯环，C3位有酚羟基；C17位偶羟基、乙炔基。2、 鉴别试验a. 硫酸显色反应：氢化可的松在硫酸作用下，显棕黄色并有绿色荧光，加水稀释后显黄色，有絮状沉淀。b. C17-甲酮基反应：黄体酮与亚硝基铁氰化钠反应，生成蓝紫色产物。c. C17-醇酮基反应：加碱性酒石酸显砖红色沉淀；加氯化三苯四氮唑显红色；加氨制硝酸银显黑色沉淀。d. 炔基的沉淀反应：与硝酸银反应，生成白色的沉淀。e. 紫外分光法：含4-3-铜基的药物在240nm处有最大紫外吸收。 A环具有酚羟基的雌激素在280nm处有最大吸收。f. 红外分光法、色谱法：略。3、 特殊杂质与检查 项目：有关物质（甾体类似物，色谱法）、硒的检查（氧瓶燃烧法）、残留溶剂（GC法）、游离磷酸盐（磷钼酸比色法）。4、 含量测定a. HPLC法：C18为填充剂，三乙胺-甲醇-乙腈为流动相，检测波长为242nm。b. 四氮唑比色法：皮质激素（C17位醇酮基）在强碱溶液中将四氮唑盐还原成有色甲簪。c. 异烟肼比色法：甾体激素（C3酮基）在酸性条件下与羰基试剂（异烟肼）反应，生成黄色产物。d. Kober反应：雌激素与硫酸-乙醇反应，显红色，并在520nm附近有最大吸收。第十六章 抗生素类药物的分析第一节 概述1） 检查 项目包括：结晶性、溶液澄清度、酸碱度、毒性、热源、内毒素等。2） 含量测定 测定方法：微生物检定法（管碟法、浊度法）、HPLC法。第二节 -内酰胺类抗生素1、 性质 结构：-内酰胺环、6-氨基青霉烷酸。（母核，简称6-APA） 典型药物：青霉素类阿莫西林、青霉素钠、氨苄西林、普鲁卡因青霉素等。 头孢菌素类头孢他啶、头孢克洛、头孢拉定、头孢氨苄等。 理化性质：不稳定性（内酰环）、旋光性（青霉C3头孢C2）、酸性与溶解度、紫外特性（含苯环侧链）。（注：青霉素的碱金属盐水溶液遇酸析出白色沉淀。）（注：头孢菌素类有紫外特性，而青霉素类只有侧链含苯环时才有紫外特性。）*扩展 青霉素的