DB42T1993.1-2023奶牛粪污中药物残留的测定_高效液相色谱法 第1部分：5种磺胺类药物.pdf

ICS 65.020.30 CCS B 42 DB42 湖北省地方标准 DB42/T 1993.12023 奶牛粪污中药物残留的测定 高效液相色谱法 第 1 部分：5 种磺胺类药物 Determination of drug residues in excrement and sewage of dairy cows HPLC method Part 1:5 sulfonamides 2023-03-28 发布 2023-05-28 实施 湖北省市场监督管理局 发 布 目次 前言.III 引言.V 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 原理.1 5 试剂和材料.1 6 仪器和设备.2 7 试样制备.2 8 测定步骤.2 9 结果计算和表述.3 10 检测方法灵敏度、准确度和精密度.3 附录 A（资料性）5 种磺胺类药物液相色谱图.5 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件是DB42/T 1993奶牛粪污中药物残留的测定 高效液相色谱法的第1部分，DB42/T 1993已经发布了以下部分：第1部分：5种磺胺类药物。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由武汉市农业科学院提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位：武汉市农业科学院、宜昌市夷陵区动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：吴利军、何斌、金尔光、陈夏冰、邓蓉蓉、余波、邵志勇、杨文海、陈洁、万平民、裴正才、周源、刘武、纪雯雯。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，电话：[phone]，邮箱：；对本文件的有关修改意见建议请反馈至武汉市农业科学院，电话：[phone]，邮箱：。引 言 奶牛粪污中的药物残留是制约其资源化利用的主要原因之一，由于奶牛粪污成分复杂、药物残留含量低，传统方法不能对其进行快速、准确的定量检测。因此编制合理的奶牛粪污中药物残留痕量检测技术标准，规范湖北省奶牛粪污中药物残留的检测技术，对加强奶牛粪污的安全处理与资源化利用，推动全省奶牛业持续健康发展具有重要意义。本文件拟由以下部分组成，具体如下：第 1 部分：5 种磺胺类药物。目的在于规范湖北省奶牛粪污中药物残留的检测技术，促进奶牛粪污的安全处理与资源化利用。第 2 部分：4 种四环素类药物。目的在于规范湖北省奶牛粪污中药物残留的检测技术，促进奶牛粪污的安全处理与资源化利用。第 3 部分：3 种酰氨醇类药物。目的在于规范湖北省奶牛粪污中药物残留的检测技术，促进奶牛粪污的安全处理与资源化利用。本文件是针对奶牛粪污中不同种类的药物残留，提出相应的针对性技术文件，之后涉及的其他种类的药物残留检测技术规范的文件，归为本文件的不同部分。奶牛粪污中药物残留的测定 高效液相色谱法 第 1 部分：5 种磺胺类药物 1 范围 本文件规定了奶牛粪污中5种磺胺类药物残留测定的原理、试剂材料、仪器设备、试样制备、测定步骤、结果计算和检测方法的灵敏度、准确度和精密度。本文件适用于奶牛粪污中5种磺胺类药物残留的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 25169 畜禽粪便监测技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。奶牛粪污 excrement and sewage of dairy cows 奶牛排泄的粪便、尿液的混合物。4 原理 试样中磺胺类药物残留，用乙腈提取，0.1mol/L盐酸溶液进行溶剂置换，正己烷除脂，MCX固相萃取柱净化，高效液相色谱-紫外法测定，外标法定量。5 试剂和材料 水：GB/T 6682 规定的一级水。乙腈：色谱纯。甲醇：色谱纯。盐酸：分析纯。氨水：分析纯 正己烷：分析纯。氯化钠：分析纯。乙酸：分析纯。2%氨水甲醇洗脱液：取氨水(5.5)2 mL，用甲醇(5.3)溶解并稀释至 100 mL。0.1 mol/L 盐酸溶液：取盐酸(5.4)0.83 mL，用水溶液并稀释至 100 mL。0.3%乙酸溶液：取乙酸(5.8)0.3 mL，用水溶解并稀释至 100 mL。0.3%乙酸-乙腈溶液：取 0.3%乙酸(5.11)85 mL，用乙腈(5.2)溶解并稀释至 100 mL。磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺喹噁啉对照品：纯度98%。100 mg/L 磺胺类药物单标储备液：分别精密称取 5 种磺胺类药物标准品(5.13)各 0.01000 g，用乙腈(5.2)溶解并稀释定容至 100 mL，配制成浓度为 100 mg/L 的磺胺类药物单标储备液。置于冰箱-20避光保存，保质期 6 个月。10 mg/L 磺胺类药物混合标准工作液：精密量取各单标储备液(5.14)10 mL，用乙腈(5.2)稀释并定容至 100 mL,配制成浓度为 10 mg/L 的磺胺类药物混合标准工作液，用时现配。MCX 固相萃取柱：60 mg/3 mL，或者性能相当者。滤膜：有机相，0.22 m 孔径。6 仪器和设备 高效液相色谱仪：配紫外检测器。超声波清洗机。天平：感量 0.00001 g 和 0.01 g。漩涡混合器。旋转蒸发仪。固相萃取装置。氮吹仪。离心管：50 mL。冷冻干燥器。离心机。7 试样制备 按照GB/T 25169要求采集适量奶牛粪污样品装入洁净容器，并于-20避光保存。8 测定步骤 提取 称取试样5.00 g于50 mL的离心管中，加水10 mL，乙腈10 mL，涡旋振荡5 min，超声15 min，加入3.0 g 氯化钠，涡旋振荡5 min，4500 r/min 离心5 min，取上清液于50 mL离心管中，再重复提取一次，合并上清液，35旋转蒸发近干，用5 mL 0.1 mol/L 盐酸溶液溶解残渣，加入6 mL正己烷去脂，取盐酸层，再重复提取一次，合并2次取得的盐酸层备用。净化 MCX固相萃取柱依次用3 mL水和3 mL甲醇进行活化，取步骤8.1制备的盐酸层以大约1 mL/min的速度通过活化的MCX固相萃取柱，待过完柱子后，依次用3 mL 0.1 mol/L 盐酸水溶液、3 mL水和3 mL甲醇冲洗 MCX固相萃取柱，吹干柱中残留液体，加入3 mL 2%氨水-甲醇（2:98，V/V）洗脱目标抗生素，将洗脱液于40下氮气吹干，用0.3%乙酸-乙腈混合溶液(85:15，V/V)定容至1 mL，过0.22 m滤膜，高效液相色谱分析。测定 8.3.1 液相色谱参考条件 8.3.1.1 色谱柱：C18柱(250 mm4.6 mm，5 m)，或者性能相当者。8.3.1.2 流动相：0.3%乙酸和乙腈，梯度洗脱，洗脱条件见表 1。8.3.1.3 流速：1.0 mL/min。8.3.1.4 柱温：30。8.3.1.5 检测波长：270 nm。8.3.1.6 进样体积：20 L。表1 梯度洗脱程序 时间(min)0.3%乙酸(%)乙腈(%)0 75 25 20 75 25 25 50 50 25.1 75 25 35 75 25 8.3.2 标准曲线的绘制 精密量取10 mg/L磺胺类药物混合标准工作液适量，用0.3%乙酸乙腈溶液稀释，配制成浓度为0、10、50、100、250、500、1000、2000、5000 ng/mL的系列混合标准溶液，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。8.3.3 测定 将混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱仪中，以工作溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，依据标准曲线计算浓度。标准溶液和试样溶液中磺胺类药物响应值应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A。空白试验 除不加试样外，按以上步骤同时进行空白试验。9 结果计算和表述 结果按式（1）计算：=10001000 (1)式中：X 试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（g/kg）；c 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V 试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m 试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。10 检测方法灵敏度、准确度和精密度 灵敏度 本方法奶牛粪污中5种磺胺类药物的检出限为20 g/kg，定量限均为50 g/kg。准确度 本方法奶牛粪污样品在50 g/kg500 g/kg浓度添加水平时的回收率为75%80%。精密度 本方法日内重复10次相对标准偏差15%，日间重复10次的相对标准偏差15%。A A 附录A （资料性）5 种磺胺类药物液相色谱图 图A.1 给出了5种磺胺类药物标准物质液相色谱图。图A.1 5 种磺胺类药物标准物质液相色谱图(1000ng/mL)图A.2 给出了空白样品中5种磺胺类药物液相色谱图。图A.2 空白样品中 5 种磺胺类药物液相色谱图 图A.3 给出了加标样品中5种磺胺类药物液相色谱图。图A.3 加标样品中 5 种磺胺类药物液相色谱图(100g/kg)